專利名稱：作為細(xì)胞周期蛋白依賴激酶抑制劑的吡唑并嘧啶的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可用作蛋白激酶抑制劑的吡唑并[1，5-a]嘧啶化合物、含有所述化合物的藥物組合物，以及用所述化合物和組合物治療疾病的治療方法，所述疾病例如是癌癥、炎癥、關(guān)節(jié)炎、病毒疾病、神經(jīng)變性疾病(如阿爾茨海默氏病)、心血管疾病和真菌病。本申請要求2002年9月4日提交的美國臨時(shí)專利申請系列號60/408,030的優(yōu)先權(quán)。
背景技術(shù)：
細(xì)胞周期蛋白依賴激酶(CDK)是絲氨酸/蘇氨酸蛋白質(zhì)激酶，其是細(xì)胞周期和細(xì)胞增殖背后的驅(qū)動力。各種CDK，例如CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK5、CDK6和CDK7、CDK8等，在細(xì)胞周期進(jìn)展中起到了不同的作用，其可分類為G1、S或G2M期酶。無控制的增殖是癌細(xì)胞的特點(diǎn)，并且在許多重要的實(shí)性腫瘤中CDK功能的錯(cuò)誤調(diào)解發(fā)生頻率很高。CDK2和CDK4具有特殊的重要性，因?yàn)樵诟魇礁鳂拥娜祟惏┌Y中它們的活性經(jīng)常被錯(cuò)誤調(diào)解。
在細(xì)胞周期的G1到S期的發(fā)展中一直需要CDK2活性，CDK2是G1校驗(yàn)點(diǎn)的關(guān)鍵成分。校驗(yàn)點(diǎn)用來保持細(xì)胞周期現(xiàn)象的固有順序，以及允許細(xì)胞對損傷或?qū)υ鲋承盘柶鸱磻?yīng)，而在癌細(xì)胞中正確的檢驗(yàn)點(diǎn)控制的喪失促進(jìn)了腫瘤形成。CDK2通道在腫瘤抑制基因功能(例如p52、RB和p27)和致癌基因活化(細(xì)胞周期蛋白E)的水平影響腫瘤形成。許多報(bào)到已經(jīng)證明，細(xì)胞周期蛋白E和CDK2的抑制劑p27兩種共活化劑分別在乳房癌、結(jié)腸癌、非小細(xì)胞肺癌、胃癌，前列腺癌、膀胱癌、非Hodgkin′s淋巴瘤、卵巢癌和其它癌癥中過度表達(dá)或表達(dá)不足(underexpressed)。它們改變的表達(dá)已表現(xiàn)出與增加的CDK2活動水平和不良的總體存活率有關(guān)。該觀察結(jié)果使得CDK2及其調(diào)節(jié)通道成為今年來引人注目的靶標(biāo)，在文獻(xiàn)中已經(jīng)報(bào)道了許多作為CDK抑制劑用于癌癥的有潛力的治療的5′-三磷酸腺苷(ATP)競爭性有機(jī)小分子和肽。US6,413,974，第1欄第23行-第15欄第10行充分描述了各種CDK和其與各種類型癌癥的關(guān)系。
CDK抑制劑是已知的。例如，flavopiridol(式I)是目前進(jìn)行人臨床試驗(yàn)的非選擇性CDK抑制劑，A.M.Sanderowicz等，J.Clin.Oncol.(1998)16，2986-2999。
式I其它已知的CDK抑制劑包括例如olomoucine(J.Vesely等，Eur.J.Biochem.，(1994)224，771-786)和roscovitine(I.Meijer等，Eur.J.Biochem.，(1997)243，527-536)。US6,107,305描述了一些作為CDK抑制劑的吡唑并[3，4-b]吡啶化合物。US6,107,305專利中的一種說明性的化合物具有式II 式IIK.S.Kim等，J.Med.Chem.45(2002)3905-3927和WO02/10162公開了一些作為CDK抑制劑的氨基噻唑化合物。
吡唑并嘧啶是已知的。例如WO92/18504、WO02/50079、WO95/35298、WO02/40485、EP94304104.6、EP0628559(相當(dāng)于US5,602,136、5,602,137和5,571,813)、US6,383,790、Chem.Pharm.Bull.，(1999)47928、J.Med.Chem.，(1977)20，296、J.Med.Chem.，(1976)19517和Chem.Pharm.Bull.，(1962)10620公開了各種吡唑并嘧啶。
需要新的化合物、配方、治療與CDK有關(guān)的疾病和紊亂的處理和療法。因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供用于治療或預(yù)防或改善這類疾病和紊亂的化合物。
發(fā)明概述在本發(fā)明的許多實(shí)施方案中，提供了新類型的作為細(xì)胞周期蛋白依賴激酶抑制劑的吡唑并[1，5-a]嘧啶化合物、這類化合物的制備方法、包括一種或多種這類化合物的藥物組合物、包括一種或多種這類化合物的藥物制劑的制備方法，以及用這類化合物或藥物組合物治療、預(yù)防、抑制或改善一種或多種與CDK有關(guān)的疾病的方法。
在一個(gè)方面，本申請公開了一種化合物或所述化合物的藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物，所述化合物具有式III所示的一般結(jié)構(gòu) 式III其中R是雜芳基，其中所述雜芳基可以是未取代的或任選獨(dú)立地被一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，所述的基團(tuán)可以相同或不同，各個(gè)基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素、烷基、芳基、環(huán)烷基、CF3、OCF3、CN、-OR5、-NR5R6、-C(R4R5)nOR5、-C(O2)R5、-C(O)R5、-C(O)NR5R6、-SR6、-S(O2)R7、-S(O2)NR5R6、-N(R5)S(O2)R7、-N(R5)C(O)R7和-N(R5)C(O)NR5R6；
R2是選自下述的基團(tuán)R9、烷基、炔基、芳基、雜芳基、CF3、雜環(huán)烷基、炔基烷基、環(huán)烷基、-C(O)OR4、被1-6個(gè)R9基團(tuán)取代的烷基，R9可以相同或不同，獨(dú)立地選自下列R9 和 其中，上述對R2的定義中所述的芳基可以是未取代的或任選被一個(gè)或多個(gè)部分取代，所述部分可以相同或不同，各個(gè)部分獨(dú)立地選自鹵素、CN、-OR5、SR5、-CH2OR5、-C(O)R5、-SO3H、-S(O2)R6、-S(O2)NR5R6、-NR5R6、-C(O)NR5R6、-CF3和-OCF3；R3選自下述基團(tuán)H、鹵素、-NR5R6、-C(O)OR4、-C(O)NR5R6、烷基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)烷基、雜芳基、 和 其中對于R3的各個(gè)所述的烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基和雜芳基烷基和結(jié)構(gòu)緊接著R3的上文所示的雜環(huán)基部分可以是取代的和任選被一個(gè)或多個(gè)部分獨(dú)立取代，所述的部分可以相同或不同，各個(gè)部分獨(dú)立地選自下述基團(tuán)鹵素、烷基、芳基、環(huán)烷基、CF3、CN、-OCF3、-(CR4R5)nOR5、-OR5、-NR5R6、-(CR4R5)nNR5R6、-C(O2)R5、-C(O)R5、-C(O)NR5R6、-SR6、-S(O2)R6、-S(O2)NR5R6、-N(R5)S(O2)R7、-N(R5)C(O)R7和-N(R5)C(O)NR5R6；
R4是H、鹵素或烷基；R5是H或烷基；R6選自下述基團(tuán)H、烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)烷基、雜芳基和雜芳基烷基，其中各個(gè)所述烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基和雜芳基烷基可以是未取代的或任選被一個(gè)或多個(gè)部分取代，所述部分可以相同或不同，各個(gè)部分獨(dú)立地選自鹵素、烷基、芳基、環(huán)烷基、CF3、OCF3、CN、-OR5、-NR5R10、-N(R5)Boc、-(CR4R5)nOR5、-C(O2)R5，-C(O)R5、-C(O)NR5R10、-SO3H、-SR10、-S(O2)R7、-S(O2)NR5R10、-N(R5)S(O2)R7、-N(R5)C(O)R7和-N(R5)C(O)NR5R10；R10選自下述基團(tuán)H、烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)烷基、雜芳基和雜芳基烷基，其中各個(gè)所述烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基和雜芳基烷基可以是未取代的或任選被一個(gè)或多個(gè)部分取代，所述部分可以相同或不同，各個(gè)部分獨(dú)立地選自鹵素、烷基、芳基、環(huán)烷基、CF3、OCF3、CN、-OR5、-NR4R5、-N(R5)Boc、-(CR4R5)nOR5、-C(O2)R5、-C(O)NR4R5、-C(O)R5、-SO3H、-SR5、-S(O2)R7、-S(O2)NR4R5、-N(R5)S(O2)R7、-N(R5)C(O)R7和-N(R5)C(O)NR4R5；或任選(i)在部分-NR5R10中的R5和R10、或(ii)在部分-NR5R6中的R5和R6中可以連接在一起形成環(huán)烷基或雜環(huán)基部分，每個(gè)所述環(huán)烷基或雜環(huán)基部分是未取代的或任選獨(dú)立地被一個(gè)或多個(gè)R9基取代；R7選自烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、芳烷基和雜芳基烷基，其中對于R7每個(gè)所述的烷基、環(huán)烷基、雜芳基烷基、芳基、雜芳基和芳烷基可以是未取代的或任選獨(dú)立地被一個(gè)或多個(gè)部分取代，所述部分可以相同或不同，各個(gè)部分獨(dú)立地選自鹵素、烷基、芳基、環(huán)烷基、CF3、OCF3、CN、-OR5、-NR5R10、-CH2OR5、-C(O2)R5、-C(O)NR5R10、-C(O)R5、-SR10、-S(O2)R10、-S(O2)NR5R10、-N(R5)S(O2)R10、-N(R6)C(O)R10和-N(R5)C(O)NR5R10；R8選自基團(tuán)R6、-C(O)NR5R10、-CH2OR4、-C(O)OR6、-C(O)R7和-S(O2)R7；R9選自鹵素、-CN、-NR5R6、-(CH2)nOR4、-C(O2)R6、-C(O)NR5R6、-OR6、-SR6、-S(O2)R7、-S(O2)NR5R6、-N(R5)S(O2)R7、-N(R5)C(O)R7和-N(R5)C(O)NR5R6；m是0-4；和n是1-4。
式III化合物可用作蛋白激酶抑制劑，并且可用于治療和預(yù)防增生性的疾病，例如癌癥、炎癥和關(guān)節(jié)炎。它們還可用于治療神經(jīng)變性疾病(諸如阿爾茨海默氏病)、心血管疾病、病毒病和真菌病。
詳細(xì)說明在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明公開了結(jié)構(gòu)式III表示的吡唑并[1，5-a]嘧啶化合物或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物，其中各部分如上所述。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，2-吡啶基、4-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基-N-氧化物、3-吡啶基-N-氧化物、1，3-噻唑-2-基、嘧啶-5-基、吡嗪-3-基和噠嗪-3-基，其中每個(gè)所述的吡啶基、噻唑基、嘧啶基、吡嗪基和噠嗪基部分可以是未取代的或任選獨(dú)立地被一個(gè)或多個(gè)部分取代，所述的部分可相同或不同，各部分獨(dú)立地選自鹵素、烷基、芳基、CF3、OCF3、CN、-OR5、-NR5R6、-CH2OR5、-C(O2)R5、-C(O)NR5R6、-S(O2)NR5R6和-N(R5)S(O2)R7。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R2是鹵素、CF3、CN、低級烷基、環(huán)烷基、-OR6、-C(O)OR4、-CH2OR6、芳基或雜芳基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R3是H、鹵素、低級烷基、芳基、雜芳基、-C(O)OR4、環(huán)烷基、-NR5R6、雜環(huán)基烷基、環(huán)烷基烷基， 和 其中對于R3的所述烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基和環(huán)烷基是未取代的或任選獨(dú)立地被一個(gè)或多個(gè)部分取代，所述部分可以相同或不同，各個(gè)部分獨(dú)立地選自鹵素、CF3、OCF3、低級烷基、CN和OR5。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R4是H、鹵素和低級烷基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R5是H或低級烷基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，m是0-2。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，n是1-2。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R是2-吡啶基、4-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基-N-氧化物、3-吡啶基-N-氧化物、1，3-噻唑-2-基、嘧啶-5-基、吡嗪-3-基和噠嗪-3-基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，F(xiàn)、Cl、Br、CF3、CN、低級烷基、環(huán)烷基或-(CH2)nOR6。
在另一實(shí)施方案中，R3是H、低級烷基、環(huán)烷基、-C(O)OR4、芳基、雜芳基、環(huán)烷基烷基、 或 其中每個(gè)所述低級烷基、環(huán)烷基、雜芳基和芳基是未取代的或任選獨(dú)立地被一個(gè)或多個(gè)部分取代，所述部分可相同或不同，各部分獨(dú)立地選自鹵素、CF3、低級烷基、OMe和CN。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R3是 和 在另一個(gè)實(shí)施方案在，R3是
或 在另一個(gè)實(shí)施方案中，R4是H。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R5是H。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，m是0。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，n是1。
一組本發(fā)明的化合物列于表1。
表1


作為上文和本公開全文中所用的，下述術(shù)語除非另有說明，應(yīng)認(rèn)為具有下述含義″患者″包括人和動物。
″哺乳動物″指人和其它哺乳動物。
″烷基″指直鏈或支鏈的脂肪族烴基，在鏈中含有約1-20個(gè)碳原子。優(yōu)選烷基在鏈中包括約1-12個(gè)碳原子。更優(yōu)選烷基在鏈中含有約1-6個(gè)碳原子。支鏈指一個(gè)或多個(gè)低級烷基(如甲基、乙基或丙基)連接到直鏈烷基鏈?！宓图壨榛逯告溨芯哂屑s1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈基團(tuán)。術(shù)語″取代的烷基″指烷基可以被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，取代基可以是相同或不同的，各個(gè)取代基獨(dú)立地選自鹵素、烷基、芳基、環(huán)烷基、氰基、羥基、烷氧基、烷硫基、氨基、-NH(烷基)、-NH(環(huán)烷基)、-N(烷基)2、羧基和-C(O)O-烷基。適合的烷基的非限制性的例子包括甲基、乙基、正丙基、異丙基和叔丁基。
″炔基″指含至少一個(gè)碳-碳三鍵的脂肪族烴基，其可以是直鏈或支鏈的，在鏈中含有約2-15個(gè)碳原子。優(yōu)選炔基在鏈中含有約2-12個(gè)碳原子；更優(yōu)選在鏈中含有約2-4個(gè)碳原子。支鏈指一個(gè)或多個(gè)低級烷基(如甲基、乙基或丙基)連接到直鏈炔基鏈?！宓图壢不逯告溨芯哂屑s2-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈基團(tuán)。合適的炔基的非限制性例子包括乙炔基、丙炔基、2-丁炔基和3-甲基丁炔基。術(shù)語″取代的炔基″指炔基可以被一個(gè)或多個(gè)取代基取代，取代基可以是相同或不同的，各取代基獨(dú)立地選自烷基、芳基和環(huán)烷基。
″芳基″指包括約6-14個(gè)碳原子、優(yōu)選約6-10個(gè)碳原子的芳族單環(huán)或多環(huán)環(huán)系。芳基可任選被一個(gè)或多個(gè)″環(huán)系取代基″取代，環(huán)系取代基可以相同或不同并在本發(fā)明中定義。合適的芳基的非限制性例子包括苯基和萘基。
″雜芳基″指包括約5-14個(gè)環(huán)原子、優(yōu)選約5-10個(gè)環(huán)原子的芳族單環(huán)或多環(huán)環(huán)系，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)原子是除了碳以外的元素，例如氮、氧或硫，這些元素單獨(dú)存在或組合存在。優(yōu)選雜芳基包括約5-6個(gè)環(huán)原子?！咫s芳基″可任選被一個(gè)或多個(gè)″環(huán)系取代基″取代，環(huán)系取代基可以相同或不同并在本發(fā)明中定義。在雜芳基詞根前的前綴氮雜、氧雜或硫雜分別指至少有氮、氧或硫原子作為環(huán)原子存在。雜芳基的氮原子任選可被氧化成相應(yīng)的N-氧化物。合適的雜芳基的非限制性實(shí)例包括吡啶基、吡嗪基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基、異噁唑基、異噻唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、呋咱基、吡咯基、吡唑基、三唑基、1，2，4-噻二唑基、吡嗪基、噠嗪基、喹喔啉基、2，3-二氮雜萘基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、咪唑并[2，1-b]噻唑基、苯并呋喃基、吲哚基、氮雜吲哚基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、喹啉基、咪唑基、噻吩并吡啶基、喹唑啉基、噻吩并嘧啶基、吡咯并吡啶基、咪唑并吡啶基、異喹啉基、苯并氮雜吲哚基、1，2，4-三嗪基、苯并噻唑基等。
″芳烷基″或″芳基烷基″指芳基-烷基，其中芳基和烷基如前所述。優(yōu)選的芳烷基含有低級烷基。合適的芳烷基的非限定性實(shí)例包括芐基、2-苯乙基和萘甲基。與母體部分通過烷基結(jié)合。
″烷基芳基″烷基-芳基，其中芳基和烷基如前所述。優(yōu)選的烷基芳基含有低級烷基。合適的烷基芳基的非限定性實(shí)例是甲苯基。與母體部分通過芳基結(jié)合。
″環(huán)烷基″指非芳族單環(huán)或多環(huán)環(huán)系，包括約3-10個(gè)碳原子，優(yōu)選約5-10個(gè)碳原子。優(yōu)選的環(huán)烷基環(huán)包括約5-7個(gè)環(huán)原子。
環(huán)烷基可任選被一個(gè)或多個(gè)″環(huán)系取代基″取代，環(huán)系取代基可以相同或不同并定義如上。合適的單環(huán)環(huán)烷基的非限制實(shí)例包括環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基等。合適的多環(huán)環(huán)烷基的非限制性實(shí)例包括1-萘烷基、降冰片基、金剛烷基等。
″鹵素″指氟、氯、溴或碘。優(yōu)選氟、氯和溴。
″環(huán)系取代基″指連接到芳族或非芳香環(huán)系的取代基，其例如取代了環(huán)系上可提供的氫。環(huán)系取代基可以相同或不同，各自獨(dú)立地選自芳基、雜芳基、芳烷基、烷基芳基、雜芳烷基、烷基雜芳基、羥基、羥烷基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、酰基、芳?；?、鹵素、硝基、氰基、羧基、烷氧羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、烷基磺?；⒎蓟酋?、雜芳基磺?；?、烷硫基、芳基硫基、雜芳基硫基、芳烷硫基、雜芳烷硫基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、Y1Y2N-、Y1Y2N-烷基-、Y1Y2NC(O)-和Y1Y2NSO2-，其中Y1和Y2可以相同或不同，獨(dú)立地選自氫、烷基、芳基和芳烷基。
″雜環(huán)基″指包括約3-10個(gè)環(huán)原子、優(yōu)選約5-10個(gè)環(huán)原子的非芳族飽和單環(huán)或多環(huán)環(huán)系，其中在環(huán)系中的一個(gè)或多個(gè)原子是除了碳以外的其它元素，例如氮、氧或硫，這些元素單獨(dú)存在或組合存在。在環(huán)系中不存在相鄰的氧和/或硫原子。優(yōu)選的雜環(huán)基含有約5-6個(gè)環(huán)原子。在雜環(huán)基詞根前的前綴氮雜、氧雜或硫雜是指在存在至少一個(gè)氮、氧或硫原子作為環(huán)原子。在雜環(huán)基中的任何-NH可以是被保護(hù)的，例如作為N(Boc)、-N(CBz)、-N(Tos)基等；這類被保護(hù)的部分也認(rèn)為是本發(fā)明的一部分。雜環(huán)基可任選被一個(gè)或多個(gè)″環(huán)系取代基″取代，環(huán)系取代基可以相同或不同并在本發(fā)明中定義。雜環(huán)基的氮或硫原子可任選被氧化成相應(yīng)的N-氧化物、S-氧化物或S，S-二氧化物。合適的單環(huán)雜環(huán)基環(huán)的非限制性實(shí)例包括哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、嗎啉基、硫嗎啉基、噻唑烷基、1，4-二噁烷基、四氫呋喃基、四氫噻吩基等。
應(yīng)該注意到的是在本發(fā)明的含雜原子的環(huán)系中，在相鄰于N、O或S的碳原子上沒有羥基，并且在與另一個(gè)雜原子相鄰的碳原子上沒有N或S基團(tuán)。
因此，例如在下述環(huán)中 在標(biāo)記為2和5的碳原子上沒有-OH直接相連。
″炔基烷基″是指炔基-烷基-基團(tuán)，其中炔基和烷基如前所述。優(yōu)選的炔基烷基包括低級炔基和低級烷基。與母體部分通過烷基結(jié)合。合適的炔基烷基的非限制性實(shí)例包括炔丙基甲基。
″雜芳烷基″是指雜芳基-烷基-基團(tuán)，其中雜芳基和烷基如前所述。優(yōu)選的雜芳烷基含有低級烷基。合適的芳烷基的非限制性實(shí)例包括吡啶甲基和喹啉-3-基甲基。與母體部分通過烷基結(jié)合。
″羥烷基″是HO-烷基基團(tuán)，其中烷基如前定義。優(yōu)選的羥烷基含有低級烷基。合適的羥烷基的非限制性實(shí)例包括羥甲基和2-羥乙基。
″?；迨荋-C(O)-、烷基-C(O)-或環(huán)烷基-C(O)-，其中各個(gè)基團(tuán)如前所述。與母體部分通過羰基結(jié)合。優(yōu)選的酰基含低級烷基。合適的?；姆窍拗菩詫?shí)例包括甲?；?、乙?；捅；?br> ″芳?；迨欠蓟?C(O)-基團(tuán)，其中芳基如前所述。與母體部分通過羰基結(jié)合。合適基團(tuán)的非限制性實(shí)例包括苯甲?；?-萘酰。
″烷氧基″是烷基-O-基團(tuán)，其中烷基如前所述。合適的烷氧基的非限制性實(shí)例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基和正丁氧基。與母體部分通過醚氧基結(jié)合。
″芳氧基″是芳基-O-基團(tuán)，其中芳基如前所述。合適的芳氧基的非限制性實(shí)例包括苯氧基和萘氧基。與母體部分通過醚氧基結(jié)合。
″芳烷氧基″是芳烷基-O-基團(tuán)，其中芳烷基如前所述。適合的芳烷氧基的非限制性實(shí)例包括芐氧基和1-或2-萘甲氧基。與母體部分通過醚氧基結(jié)合。
″烷硫基″是烷基-S-基團(tuán)，其中烷基如前所述。合適的烷硫基的非限制性實(shí)例包括甲硫基和乙硫基。與母體部分通過硫結(jié)合。
″芳硫基″是芳基-S-基，其中芳基如前所述。合適的芳硫基的非限制性實(shí)例包括苯硫基和萘硫基。與母體部分通過硫結(jié)合。
″芳烷硫基″是芳烷基-S-基，其中芳烷基如前所述。合適的芳烷硫基的非限制性實(shí)例是苯甲硫基。與母體部分通過硫結(jié)合。
″烷氧羰基″是烷基-O-CO-基。合適的烷氧羰基的非限制性實(shí)例包括甲氧羰基和乙氧羰基。與母體部分通過羰基結(jié)合。
″芳氧基羰基″是芳基-O-C(O)-基。合適的芳氧基羰基的非限制性實(shí)例包括苯氧基羰基和萘氧基羰基。與母體部分通過羰基結(jié)合。
″芳烷氧基羰基″是芳烷基-O-C(O)-基。合適的芳烷氧基羰基的非限制性實(shí)例是芐基氧代羰基。與母體部分通過羰基結(jié)合。
″烷基磺?；迨峭榛?S(O2)-基。優(yōu)選的基團(tuán)是那些其中烷基是低級烷基的。與母體部分通過磺?；Y(jié)合。
″芳基磺酰基″是芳基-S(O2)-基。與母體部分通過磺?；Y(jié)合。
術(shù)語″取代的″是指在指定原子上的一個(gè)或多個(gè)氫被選擇的指定基團(tuán)代替，條件是不超過指定的原子在現(xiàn)有狀況下的正常價(jià)態(tài)，并且取代得到的是穩(wěn)定化合物。取代基和/或變量的組合只有當(dāng)這種組合產(chǎn)生穩(wěn)定化合物時(shí)才被允許?！宸€(wěn)定化合物″或″穩(wěn)定結(jié)構(gòu)″是指化合物足夠穩(wěn)定存留，能夠從反應(yīng)混合物分離得到可利用的純度，并且配入有效的治療劑。
術(shù)語″任選取代的″是指指定的基團(tuán)、根或部分任選取代。
還應(yīng)注意，在本發(fā)明的正文、反應(yīng)流程、實(shí)施例和表格中，任何不飽和原子價(jià)的雜原子被認(rèn)為帶有氫原子以滿足原子價(jià)。
當(dāng)化合物在的官能團(tuán)被稱為是″被保護(hù)的″，這是指該基團(tuán)是被修飾的形式，以阻止當(dāng)化合物進(jìn)行反應(yīng)時(shí)在被保護(hù)的位點(diǎn)發(fā)生不希望的副反應(yīng)。合適的保護(hù)基是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠確定的，可參考標(biāo)準(zhǔn)教科書，例如T.W.Greene等人，Protective Groups in organicSynthesis(1991)，Wiley，New York。
當(dāng)任何變量(例如芳基、雜環(huán)、R2等)在任何部分或在式III或其它式中出現(xiàn)一次以上時(shí)，每次出現(xiàn)時(shí)其定義獨(dú)立于其在其它位置上出現(xiàn)時(shí)的定義。
這里使用的術(shù)語″組合物″包括一種含有特定量的指定成分的產(chǎn)品以及任何直接或間接地從特定量的指定成分的組合物得到的產(chǎn)品。
本發(fā)明化合物的前體藥物和溶劑化物也包括在此。在本發(fā)明中使用的術(shù)語″前體藥物″表示一種化合物，其為藥物前體，通過給患者給藥，其通過代謝過程或化學(xué)過程進(jìn)行化學(xué)轉(zhuǎn)化，生成式III化合物或其鹽和/或溶劑化物。在T.Higuchi和V.Stella的Pro-drugs as NovelDelivery Systems(1987)14of the A.C.S.Symposium Series和Edward B.Roche，ed.，American Pharmaceutical Associationand Pergamon Press中提供了前體藥物的詳述，這兩篇文獻(xiàn)引用在此作為參考。
″溶劑化物″是本發(fā)明化合物和一個(gè)或多個(gè)溶劑分子的物理的結(jié)合。這種物理結(jié)合涉及不同程度的離子和共價(jià)鍵合，包括氫鍵合。在一些的情況下，能夠分離溶劑化物，例如，當(dāng)一個(gè)或多個(gè)溶劑分子被引入到結(jié)晶固體的晶格中時(shí)。
″溶劑化物″包括溶液-相和可分離的溶劑化物。合適的溶劑化物的非限制性實(shí)例包括乙醇化物、甲醇化物等。
″水合物″是其中溶劑分子是H2O的溶劑化物。
″有效量″或″治療有效量″是指有效抑制CDK并因此生產(chǎn)需要的治療、改善、抑制或預(yù)防作用的本發(fā)明化合物或組合物的量。
式III化合物可形成鹽，其也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。認(rèn)為在此提及的式III化合物包括其鹽，除非另有陳述。在此使用的術(shù)語″鹽″表示與無機(jī)酸和/或有機(jī)酸形成的酸的鹽和與無機(jī)堿和/或有機(jī)堿形成的堿的鹽。另外，當(dāng)式III化合物包括堿性部分(例如、但不局限于吡啶或咪唑)和酸性部分(例如、但不局限于羧酸)時(shí)，可形成兩性離子(″內(nèi)鹽″)，其包括在在此使用的術(shù)語″鹽″范圍內(nèi)。優(yōu)選藥學(xué)可接受的(即、無毒的、生理學(xué)可接受的)鹽，盡管其它鹽也是有用的。式III化合物的鹽可以例如通過式I化合物與一定量(例如等量)的酸或堿在介質(zhì)(諸如鹽可在其中沉淀的介質(zhì))中反應(yīng)形成，或在含水介質(zhì)中反應(yīng)形成然后冷凍干燥。例如在下述文獻(xiàn)中討論了通常認(rèn)為適用于從堿性(或酸性)藥物化合物形成藥學(xué)有用的鹽的酸(和堿)S.Berge等人，Journalof Pharmaceutical Sciences(1977)66(1)1-19；P.Gould，International J.of Pharmaceutics(1986)33201-217；Anderson等人，The Practice of Medicinal Chemistry(1996)，AcademicPress，New York；在The Orange Book(Food & Drug Administration，Washington，D.C.在其網(wǎng)站上)；和P.Heinrich Stahl，CamilleG.Wermuth(Eds.)，Handbook of Pharmaceutical SaltsProperties，Selection，and Use，(2002)Int′I.Union of Pureand Applied Chemistry，pp.330-331。這些公開引入在此作為參考。
典型的酸加成鹽包括乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、抗壞血酸、天冬氨酸、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽、十二烷基磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲烷磺酸鹽、硫酸二甲酯、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、乙二酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽礦物、磺酸鹽(如那些在此提及的)、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽(亦稱甲苯磺酸鹽)、十一烷酸鹽等。
典型的堿的鹽包括銨鹽、堿金屬鹽(如鈉、鋰和鉀鹽)、堿土金屬鹽(如鈣和鎂鹽)、鋁鹽、鋅鹽，與有機(jī)堿(例如有機(jī)胺，如苯查生、二乙基胺、二環(huán)己基胺、hydrabamines(與N，N-二(脫氫松香基)乙二胺形成)、N-甲基-D-葡糖胺、N-甲基-D-葡糖酰胺、叔丁胺、哌嗪、苯基環(huán)己基胺、膽堿、氨基丁三醇)形成的鹽，以及與氨基酸(如精氨酸、賴氨酸等)形成的鹽。
堿性含氮基團(tuán)可以用試劑季化，所述試劑諸如低級鹵代烴(例如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物)、硫酸二烷基酯(例如硫酸二甲基酯、硫酸二乙基酯、硫酸二丁基酯和硫酸二戊基酯)、長鏈鹵化物(例如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基鹵化物(例如芐基溴和苯乙基溴)等。
所有這類酸的鹽和堿的鹽確定為在本發(fā)明范圍內(nèi)的藥學(xué)可接受的鹽，并且對于本發(fā)明來說認(rèn)為所有的酸的鹽和堿的鹽與相應(yīng)的游離態(tài)化合物相當(dāng)。
式III化合物及其鹽、溶劑化物和前體藥物可以其互變異構(gòu)形式(例如作為酰胺或亞氨醚)存在。所有這類互變異構(gòu)形式在此也認(rèn)為是本發(fā)明的一部分。
本發(fā)明化合物(包括化合物的鹽、溶劑化物和前體藥物以及前體藥物的鹽和溶劑化物)的所有立體異構(gòu)體(例如幾何異構(gòu)體、旋光異構(gòu)體等)，諸如那些由于在各種取代基上的不對稱碳原子而可能存在的立體異構(gòu)體，包括對映異構(gòu)體(其甚至可以在沒有不對稱碳的情況下存在)、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體和非對映體也被認(rèn)為是在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明化合物的單獨(dú)的立體異構(gòu)體例如可以基本上不含其它異構(gòu)體，或可以是混合的，例如作為外消旋物或與所有其它立體異構(gòu)體混合，或與其它選擇的立體異構(gòu)體混合。本發(fā)明的手性中心可具有S或R構(gòu)型，其根據(jù)IUPAC1974標(biāo)準(zhǔn)定義。術(shù)語″鹽″、″溶劑化物″、″前體藥物″等的使用同樣適用于對映異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、外消旋物的鹽、溶劑化物和前體藥物或本發(fā)明化合物的前體藥物。
根據(jù)本發(fā)明的化合物具有藥理學(xué)的特性；特別地，式III化合物可以是蛋白質(zhì)激酶的抑制劑，例如細(xì)胞周期蛋白依賴的激酶(CDKs)，例如CDC2(CDK1)、CDK2和CDK4、CDK4、CDK5、CDK6、CDK7和CDK8。式III的新化合物預(yù)期用于增生性疾病(如癌癥)、自身免疫疾病、病毒疾病、真菌病、神經(jīng)病/神經(jīng)變性病癥、關(guān)節(jié)炎、炎癥、抗增生(例如眼的視網(wǎng)膜病)、神經(jīng)元疾病、脫發(fā)和心血管疾病的治療。這些疾病和病癥的許多列于早先引用的US6,413,974中，該公開在此引用。
更具體地說，式III化合物可用于治療各種癌癥，包括(但不局限于)如下所述的惡性腫瘤，包括膀胱癌、乳房癌、結(jié)腸癌、腎癌、肝癌、肺癌(包括小細(xì)胞肺癌)、食管癌、膽囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、子宮頸癌、甲狀腺癌、前列腺癌和皮膚癌(包括鱗狀細(xì)胞癌)；淋巴系統(tǒng)的造血腫瘤，包括白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病、急性成淋巴細(xì)胞白血病、B細(xì)胞淋巴癌、T細(xì)胞淋巴癌、霍奇金淋巴癌、非霍奇金淋巴癌、毛細(xì)胞淋巴癌和Burkett氏淋巴癌；骨髓系統(tǒng)的造血腫瘤，包括急性和慢性骨髓白血病、脊髓發(fā)育不良綜合征和早幼粒細(xì)胞性白血病；間質(zhì)成因的腫瘤，包括纖維肉瘤和橫紋肌肉瘤；和中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤，包括星形細(xì)胞瘤在內(nèi)、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和神經(jīng)鞘瘤；及其他腫瘤，包括黑瘤、精原細(xì)胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、xenoderomapigmentosum、keratoctanthoma、甲狀腺濾囊癌和卡波氏肉瘤。
由于CDK通常在細(xì)胞增殖的調(diào)整中的關(guān)鍵作用，可起可逆的細(xì)胞生長抑制劑作用的抑制劑可用于治療任何特征為異常細(xì)胞增殖的疾病過程，例如良性前列腺增生、家族性腺瘤病、息肉病、神經(jīng)纖維瘤病、動脈粥樣硬化、肺纖維化、關(guān)節(jié)炎、牛皮癬、血管球性腎炎、血管成形術(shù)或血管手術(shù)后再狹窄、肥厚性瘢痕形成、炎癥性腸病、移植排斥反應(yīng)、內(nèi)毒素性休克和真菌感染。
式III化合物同時(shí)可用于治療阿爾茨海默氏病，因?yàn)镃DK5與T蛋白質(zhì)有關(guān)的最新發(fā)現(xiàn)有所暗示(J.Biochem，(1995)117，741-749)。
式III的化合物可引起或抑制細(xì)胞程序死亡。該細(xì)胞程序死亡應(yīng)答在各種人類疾病中是異常的。式III化合物作為細(xì)胞程序死亡的調(diào)節(jié)劑可用于治療癌癥(包括但不局限于那些上文所提及的)、病毒感染(包括但不局限于皰疹病毒、痘病毒、埃-巴二氏病毒、辛德畢斯病毒和腺病毒)、在HIV-感染的個(gè)體中預(yù)防的AIDS發(fā)展、自身免疫疾病(包括但不局限于系統(tǒng)性狼瘡、紅斑狼瘡、自身免疫調(diào)節(jié)的血管球性腎炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬、炎癥性腸病和自身免疫糖尿病)、神經(jīng)變性的病癥(包括但不局限于阿爾茨海默氏病、與AIDS相關(guān)的癡呆、帕金森氏癥、肌萎縮性側(cè)索硬化、色素性視網(wǎng)膜炎、脊髓性肌萎縮和小腦衰退)、脊髓發(fā)育不良綜合征、成形性貧血(plastic anemia)、與心肌梗死、中風(fēng)和再灌注損傷有關(guān)的缺血性損傷、心律不齊、動脈粥樣硬化、毒物引起的或與酒精相關(guān)的肝臟疾病、血液學(xué)的疾病(包括但不局限于慢性貧血和成形性貧血)、肌與骨骼系統(tǒng)的退行性疾病(包括但不局限于骨質(zhì)疏松癥和關(guān)節(jié)炎)、乙酰水楊酸-敏感的鼻竇炎、囊性纖維化、多發(fā)性硬化、腎疾病和癌癥疼痛。
式III化合物作為CDK的抑制劑可調(diào)節(jié)細(xì)胞RNA的水平和DNA合成體系。因此，這些藥劑可用于治療病毒感染(包括但不限于HIV、人乳頭狀瘤病毒、皰疹病毒、痘病毒、埃-巴二氏病毒、辛德畢斯病毒和腺病毒)。
式III化合物還用于癌癥的化學(xué)預(yù)防?；瘜W(xué)預(yù)防的定義是通過阻斷引發(fā)突變的過程或通過阻斷已經(jīng)遭受損傷的前惡性細(xì)胞的發(fā)展或者抑制腫瘤惡化抑制入侵的癌癥的發(fā)展。
式III化合物還可以用于抑制腫瘤的血管生成和轉(zhuǎn)移。
式III化合物還可作為其它蛋白質(zhì)激酶的抑制劑，例如蛋白激酶C、her2、raf1、MEK1、MAP激酶、EGF受體、PDGF受體、IGF受體、P13激酶、weel激酶、Src、AbI，并且因此在治療與其它蛋白質(zhì)激酶有關(guān)的疾病中有效。
本發(fā)明的另一個(gè)方面是治療具有與CDKs有關(guān)的疾病或病癥的哺乳動物的方法，通過給所述哺乳動物施加治療有效量的至少一種式III化合物或所述化合物的藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物。
優(yōu)選的劑量大約是0.001-500mg式III化合物/kg體重/天。特別優(yōu)選的劑量大約是0.01-25mg式III化合物或所述化合物的藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物/kg體重/天。
本發(fā)明化合物還可用于與一種或多種抗癌治療(諸如放射治療)和/或一種或多種抗癌癥藥劑并用(一起或順序地給藥)，抗癌癥藥劑選自細(xì)胞生長抑制劑、細(xì)胞毒素劑(非限制性地例如DNA相互干擾的劑(例如順氯氨鉑或阿霉素))；紫杉烷(例如taxotere、紫杉酚)；拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑(比如鬼臼亞乙苷)；局部異構(gòu)酶I抑制劑(如伊立替康(或CPT-11)、肯托斯塔(camptostar)或托普泰肯(topotecan)；微管蛋白互相影響劑(例如紫杉醇、多塞坦(docetaxel)或艾譜塞酮(epothilones)；激素劑(比如三苯氧胺)；thymidilate合酶抑制劑(比如5-氟尿嘧啶)；抗代謝產(chǎn)物(比如methoxtrexate)；烷基化劑(如替莫唑胺(TEMODARTM，得自Schering-Plough Corporation，Kenilworth，New Jersey)、環(huán)磷酰胺)；法呢基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶抑制劑(例如SARASARTM(4-[2-[4-[(11R)-3，10-二溴-8-氯-6，11-二氫-5H-苯并[5，6]環(huán)庚并[1，2-b]吡啶-11-基-]-1-哌啶基]-2-氧基乙基1-哌啶羧酰胺，或SCH66336(得自Schering-Plough Corporation，Kenilworth，New Jersey)、tipifarnib(Zarnestra或得自Janssen Pharmaceuticals的R115777)、L778，123(法呢基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶抑制劑，得自Merck &Company，Whitehouse Station，New Jersey)、BMS214662(法呢基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶抑制劑，得自Bristol-Myers SquibbPharmaceuticals，Princeton，New Jersey)；信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑(例如Iressa(得自Astra Zeneca Pharmaceutical，England)、塔希瓦(Tarceva)(EGFR激酶抑制劑)、對EGFR的抗體(例如C225)、GLEEVECTM(C-abl激酶抑制劑，得自Novartis Pharmaceuticals，EastHanover，New Jersey)；干擾素，例如內(nèi)含子(得自Schering-PloughCorporation)、Peg-內(nèi)含子(得自Schering-Plough Corporation)；激素療法組合；aromatase組合；ara-C、阿霉素、環(huán)磷酰胺和吉西他濱。
其它抗癌劑(亦稱為抗腫瘤劑)非限制性地包括尿嘧啶氮芥、鹽酸氮芥、異環(huán)磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥、雙溴丙酰哌嗪、曲他胺、三亞乙基硫代磷酰胺、白消安、亞硝脲氮芥、環(huán)己亞硝脲、鏈脲霉素、氮烯唑胺、5-氟脫氧尿苷、阿糖胞苷、6-巰基嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、磷酸氟耷拉濱、奧沙利鉑、雷可瓦寧(leucovirin)、奧沙利鉑(ELOXATINTM，得自Sanofi-Synthelabo Pharmaeuticals，F(xiàn)rance)、噴司他丁、長春花堿、長春新堿、長春堿酰胺、爭光霉素、放線菌素、柔紅菌素、阿霉素、表阿霉素、伊達(dá)比星、光神霉素、脫氧柯福霉素、絲裂霉素-攝氏度、左旋天冬酰胺酶、表鬼臼毒噻吩糖苷17α-乙炔雌二醇、己烯雌酚、睪丸激素、強(qiáng)的松、氟烴甲基睪丸素、甲雄烷酮丙酸鹽、睪內(nèi)酯、甲地孕酮醋酸酯、甲基強(qiáng)的松龍、甲睪酮、強(qiáng)的松龍、氟羥脫氫皮醇、氯三芳乙烯、羥孕酮、氨魯米特、雌氮芥、6α-甲-17-羥孕酮醋酸酯、亮丙瑞林、氟他胺、托瑞米芬、戈舍瑞林、順氯氨鉑、卡鉑、羥基脲、安丫啶、普魯芐肼、米托坦、米托蒽醌、左旋四咪唑、納瓦賓(navelbene)、胺斯塔唑(anastrazole)、雷塔唑(letrazole)、卡配烯塔賓(capecitabine)、雷羅色分(reloxafine)、屈洛昔芬或六甲三聚氰胺。
如果作為固定的劑量配制，這樣的組合產(chǎn)品使用在此描述的劑量范圍內(nèi)的本發(fā)明化合物和另一種在其劑量范圍內(nèi)的藥學(xué)的活性劑或治療劑。例如，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)CDC2抑制劑歐樂姆辛(olomucine)與已知的細(xì)胞毒素劑在誘導(dǎo)細(xì)胞程序死亡中起協(xié)同作用(J.Cell Sci.，(1995)108，2897)。
當(dāng)組合配方不合宜時(shí)，還可將式III化合物與已知的抗癌劑或細(xì)胞毒素劑順序給藥。本發(fā)明在給藥順序方面不受限制；式III化合物可在已知抗癌劑或者細(xì)胞毒素劑給藥之前或之后給藥。例如，依賴細(xì)胞周期蛋白的蛋白激酶的抑制劑flavopiridol的細(xì)胞毒素活性受抗癌劑給藥順序的影響。Cancer Research，(1997)57，3375。這樣的技術(shù)在所屬技術(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員和主治醫(yī)師的技能范圍之內(nèi)。
因此，在一方面，本發(fā)明包括組合物，其含有適量的至少一種式III化合物或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物和適量的一種或多種上述抗癌治療劑和抗癌劑，其中化合物/治療劑的量產(chǎn)生需要的治療作用。
本發(fā)明化合物的藥理學(xué)的特性可通過許多藥理學(xué)的分析證實(shí)。已經(jīng)用根據(jù)本發(fā)明的化合物和它們的鹽進(jìn)行了在下文描述的舉例說明的藥理學(xué)分析。
本發(fā)明還涉及藥學(xué)的組合物，其含有至少一種式III化合物或所述化合物的藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物和至少一種藥學(xué)可接受的載體。
為了從本發(fā)明所述的化合物制備藥物組合物，惰性的藥學(xué)可接受的載體可以是固體或液體。固體形式的制劑包括粉末、片劑、可分散顆粒、膠囊、扁囊劑和栓劑。粉末和片劑可由約5-95％的活性成分組成。合適的固體載體是本領(lǐng)域已知的，例如碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石、糖或乳糖。片劑、粉末、扁囊劑和膠囊可用作適合口服的固體劑型。藥學(xué)可接受的載體和各種組合物的制備方法的實(shí)例可參見A.Gennaro(ed.)，Remington′s Pharmaceutical Sciences，18thEdition，(1990)Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania。
液態(tài)制劑包括溶液、懸浮液和乳狀液。可提及的例子是水或水-丙二醇溶液，用于胃腸外的注射；或添加甜味劑和乳濁劑，用于口服溶液、懸浮液和乳狀液。液態(tài)制劑還可包括用于鼻內(nèi)給藥的溶液。
適用于吸入的氣霧劑制劑包括溶液和粉末形式的固體，其可與藥學(xué)可接受的載體結(jié)合，如一種惰性壓縮氣體，例如氮。
還包括固態(tài)制劑，其可在使用前不久轉(zhuǎn)化為用于口服和腸胃外給藥的液態(tài)制劑。這類液體形式包括溶液、懸浮液和乳狀液。
本發(fā)明的化合物還可經(jīng)眼部給藥。
透皮組合物可采用霜劑、洗液、氣霧劑和/或乳狀液，并可包括本領(lǐng)域常規(guī)用于這個(gè)目的的基片或儲器型透皮貼片。
本發(fā)明的化合物還可在皮下提供。
優(yōu)選所述化合物口服給藥。
優(yōu)選所述藥物制劑是單位劑型。在這種形式中，制劑被再分成適當(dāng)尺寸的單位劑，其含有合適量的所述活性組分，例如實(shí)現(xiàn)所需用途的有效量。
在制劑的單位劑量中，根據(jù)特定的應(yīng)用，活性化合物的量可以在約1mg到約100mg之間變化或調(diào)解，優(yōu)選約1mg到約50mg，更優(yōu)選從約1mg到約25mg。
實(shí)際使用的劑量可根據(jù)病人的需求和所治療的狀況的嚴(yán)重程度改變。
對于特定的情況，正確的給藥方案發(fā)確定在本領(lǐng)域技術(shù)人員的技能范圍之內(nèi)。為了方便起見，總?cè)談┝靠梢愿鶕?jù)需要在一天種分批給藥。
本發(fā)明化合物和/或其藥學(xué)可接受的鹽的給藥量和頻率應(yīng)根據(jù)處理病人的臨床醫(yī)生的判斷調(diào)整，考慮的因素諸如是病人的年齡、狀況和體重以及被治療癥狀的嚴(yán)重程度。一般推薦的口服日給藥方案可以是約1mg/天到約500mg/天，優(yōu)選1mg/天到200mg/天，分為2-4個(gè)等分的藥量。
本發(fā)明的另一個(gè)方面是一種試劑盒，其包括治療有效量的至少一種式III化合物和所述化合物的藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物和藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。
本發(fā)明的另一方面是一種試劑盒，其含有適量的至少一種式III化合物或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物和適量的至少一種上述抗癌治療劑和/或抗癌癥劑，其中兩種或多種成分的量產(chǎn)生需要的治療作用。
在此公開的本發(fā)明通過以下制備和實(shí)施例舉例說明，其不應(yīng)該被視為是對公開范圍的限制。
供選擇的機(jī)械途徑和類似結(jié)構(gòu)對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。
當(dāng)出現(xiàn)核磁共振數(shù)據(jù)時(shí)，1H譜用Varian VXR-200(200MHz，1H)、Varian Gemini-300(300MHz)或者XL-400(400MHz)得到，并記為ppm，向前場來自Me4Si，帶有質(zhì)子數(shù)、峰裂數(shù)和附帶標(biāo)明赫茲的偶合恒量。當(dāng)出現(xiàn)LC/MS數(shù)據(jù)時(shí)，分析采用下列設(shè)備和條件進(jìn)行AppliedBiosystems API-100質(zhì)譜儀和Shimadzu SCL-10ALC柱Altech鉑C18，3微米，33mm×7mm ID；梯度流速0分鐘-10％CH3CN、5分鐘-95％CH3CN、7分鐘-95％CH3CN、7.5分鐘-10％CH3CN、9分鐘-停止。得到停留時(shí)間和觀察的母體離子。
以下溶劑和試劑可通過它們在括號中的縮寫表示薄層色譜法TLC二氯甲烷CH2Cl2乙酸乙酯AcOEt或EtOAc甲醇MeOH三氟乙酸乙酯TFA三乙胺Et3N或TEA丁氧基羰基n-Boc或Boc核磁共振譜NMR液相色譜質(zhì)譜LCMS高分辯質(zhì)譜HRMS毫升mL毫摩爾mmol微升μl克g毫克mg室溫或rt(室溫)約25攝氏度。
實(shí)施例通常本發(fā)明的化合物可通過如下反應(yīng)流程1中所述的一般路線制備。
反應(yīng)流程1 起始的腈用叔丁醇鉀和甲酸乙酯處理得到中間體烯醇2，其用肼處理得到所需的取代的3-氨基吡咯。如反應(yīng)流程3所示，化合物3和適當(dāng)官能化的酮酸酯5縮合生成吡啶酮6。用于該一般流程路線的酮酸酯或者可從市場購得，或者可如反應(yīng)流程2所述制備。
反應(yīng)流程2 或 反應(yīng)流程3 氯化物9可通過用POCl3處理吡啶酮8制備。當(dāng)R2是H，化合物9在該位置的取代可通過親電的的鹵化、?；透鞣N其它親電子芳香族取代。
N7-氨基官能度的引入可如反應(yīng)流程3所示，通過與合適的胺反應(yīng)取代化合物9的氯實(shí)現(xiàn)。
當(dāng)在化合物6中R3＝OEt時(shí)，二氯化物12可容易地如反應(yīng)流程4所述制備。7-氯化物的選擇性取代得到化合物13，其可容易的轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物14。
反應(yīng)流程4
制備實(shí)施例制備實(shí)施例1 步驟A 按照德國專利DE19834047A1第19頁所述的方法進(jìn)行。向KOtBu(6.17g，0.055mol)在無水THF(40ml)中的溶液中滴加環(huán)丙基乙腈(2.0g，0.025mol)和甲酸乙酯(4.07g，0.055mol)在無水THF(4ml)中的溶液。立即形成沉淀。該混合物攪拌12小時(shí)。在真空下濃縮，殘余物與Et2O(50ml)一起攪拌。將得到的殘余物輕輕倒出，用Et2O(2×50ml)洗滌，然后在真空下從殘余物中除去Et2O。殘余物溶于冷H2O(20ml)，用12N的HCl將pH調(diào)節(jié)到4-5?；旌衔镉肅H2Cl2(2×50ml)萃取。合并有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，在真空下濃縮，得到作為棕黃液體的醛。
步驟B
來自制備實(shí)施例1、步驟A的產(chǎn)物(2.12g，0.0195mol)、NH2NH2-H2O(1.95g、0.039mol)和1.8g(0.029mol)的冰冷的CH3CO2H(1.8g，0.029mol)溶于EtOH(10ml)?；亓?小時(shí)然后在真空下濃縮。殘余物在CH2Cl2(150ml)中淤漿化，用1N的NaOH將pH調(diào)解到9。有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，在真空下濃縮，得到作為蠟狀橙色固體的產(chǎn)物。
制備實(shí)施例2-4采用基本上與上述制備實(shí)施例1相同的方法，只是替換表2中第2欄的腈，制備表2中第3欄的化合物。
表2 制備實(shí)施例4 反應(yīng)如K.O.Olsen，J.Org.Chem.，(1987)52，4531-4536中所述進(jìn)行。因此，向在-65攝氏度到-70攝氏度的二異丙基酰胺鋰在THF中的溶液中，在攪拌下滴加新鮮蒸餾的乙酸乙酯。得到的溶液攪拌30分鐘，加入作為在THF中的溶液的酰氯。反應(yīng)混合物在-65攝氏度到-70攝氏度攪拌30分鐘，然后通過加入1N的HCl溶液終止反應(yīng)。將得到的二相混合物升溫至室溫。得到的混合物用EtOAc(100ml)稀釋，收集有機(jī)層。水層用EtOAc(100ml)萃取。合并有機(jī)層，用鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)，然后在真空中濃縮得到粗β-酮酸酯，其用于隨后的縮合。
制備實(shí)施例5-10采用基本上與上述制備實(shí)施例4相同的方法，只是替換表3中第2欄的酰氯，制備表3中第3欄的β-酮酸酯。
表3 制備實(shí)施例11
向在THF中的酸的溶液加入Et3N，隨后在-20攝氏度至-30攝氏度加入氯甲酸異丁酯。在混合物在-20攝氏度至-30攝氏度攪拌30分鐘后，在氬氣下濾出鹽酸三乙胺，將濾液在-65攝氏度至-70攝氏度加入到LDA-EtOAc反應(yīng)混合物(按照方法A制備)中。加入1N的HCl后，進(jìn)行反應(yīng)混合物的常規(guī)處理，蒸發(fā)溶劑，分離粗β-酮酸酯。該粗原料用于隨后的縮合。
制備實(shí)施例12和13采用基本上與制備實(shí)施例11相同的條件，只是替換表4第2欄的羧酸制備表4第3欄的化合物。
表4 制備實(shí)施例14
3-氨基吡咯(2.0g，24.07mmol)和苯甲?；宜嵋阴?4.58ml，1.1當(dāng)量)在AcOH(15ml)中的溶液加熱回流3小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫然后在真空中濃縮。得到的固體用EtOAc稀釋，過濾得到白色固體(2.04g，40％產(chǎn)率)。
制備實(shí)施例15-32.15采用基本上與制備實(shí)施例14相同的方法，只是替換表5第2欄所示的氨基吡唑和表5第3欄所示的酯制備表5第4欄所示的化合物表5


制備實(shí)施例33 苯酰乙酸乙酯(1.76ml，1.1當(dāng)量)和3-氨基-4-氰基吡唑(1.0g，9.25mmol)在AcOH(5.0ml)和H2O(10ml)中回流加熱72小時(shí)。得到的溶液冷卻至室溫，在真空中濃縮，用EtOAc稀釋。過濾得到的沉淀，用EtOAc洗滌，在真空中干燥(0.47g，21％產(chǎn)率)。
制備實(shí)施例33.10 按照美國專利3,907,799的方法進(jìn)行。將鈉(2.3g，2當(dāng)量)分批加入到EtOH(150ml)。當(dāng)鈉完全被溶解時(shí)，加入3-氨基吡咯(4.2g，0.05mol)和丙二酸二乙酯(8.7g，1.1當(dāng)量)，得到的溶液回流加熱3小時(shí)。得到的懸浮液冷卻至室溫，然后過濾。濾餅用EtOH(100ml)洗滌，然后溶于水(250ml)。得到的溶液在冰浴中冷卻，用濃鹽酸將pH調(diào)節(jié)到1-2。過濾得到的懸浮液，用水(100ml)洗滌，在真空下干燥，得到白色固體(4.75g，63％產(chǎn)率)。
制備實(shí)施例33.11-33.12采用基本上與制備實(shí)施例33.10相同的方法，只是替換表5.1第2欄所示的化合物制備制備表5.1第3欄所示的化合物。
表5.1 制備實(shí)施例34
在制備實(shí)施例14中制備的化合物(1.0g，4.73mmol)在POCl3(5ml)和吡啶(0.25ml)中的溶液在室溫?cái)嚢?天。得到的淤漿用Et2O稀釋，過濾，固體殘?jiān)肊t2O洗滌。合并的Et2O洗液冷卻至0攝氏度，用冰處理。當(dāng)劇烈的反應(yīng)停止時(shí)，得到的混合物用水稀釋，分離，水層用Et2O萃取。合并的有機(jī)物用水和飽和NaCl洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾，濃縮得到淺黃固體(0.86g，79％產(chǎn)率)。LCMSMH+＝230。
制備實(shí)施例35-53.15采列于基本上與制備實(shí)施例34所述相同的方法，只是替換表6第2欄所示的化合物制備表6第3欄所示的化合物表6


制備實(shí)施例53.16 POCl3(62ml)在氮?dú)庀潞投妆桨?11.4g，2.8當(dāng)量)以及制備實(shí)施例33.10制備的化合物(4.75g，0.032mol)被冷卻至5攝氏度。反應(yīng)混合物升溫至60攝氏度并攪拌過夜。該反應(yīng)混合物被冷卻至30攝氏度，在減壓下蒸餾出POCl3。殘余物溶于CH2Cl2(300ml)，然后傾倒在冰上。在攪拌15分鐘后，用固體NaHCO3將混合物的pH調(diào)節(jié)到7-8。分離各層，有機(jī)層用水(3×200ml)洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾，然后濃縮。粗產(chǎn)物用急驟色譜法提純，使用50∶50 CH2Cl2己烷溶液作為洗脫液洗脫二甲基苯胺。然后將洗脫液改變?yōu)?5∶25的CH2Cl2己烷，洗脫所需的產(chǎn)物(4.58g，77％產(chǎn)率)。MSMH+＝188。
制備實(shí)施例53.17-53.18采用列于基本上與制備實(shí)施例53.16所述相同的方法，只是替換表6.10中第2欄的化合物制備表6.10第3欄所示的化合物。
表6.10 制備實(shí)施例54 在制備實(shí)施例34中制備的化合物(0.10g，0.435mmol)在CH3CN(3ml)中的溶液用N-溴代丁二酰亞胺(″NBS″)(0.085g，1.1等量)處理。該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，在減壓下濃縮。粗產(chǎn)物用急驟色譜法提純，使用EtOAc在己烷中20％的溶液作為洗脫液(0.13g，100％產(chǎn)率)。
LCMSMH+＝308。
制備實(shí)施例55-68.15
采用基本上與制備實(shí)施例54所述相同的方法，只是替換表7中第2欄所示的化合物制備表7第3欄所示的化合物。
表7

制備實(shí)施例69 在制備實(shí)施例35中制備的化合物(0.3g，1.2mmol)在CH3CN(15ml)中的溶液用NCS(0.18g，1.1當(dāng)量)處理，得到的溶液回流加熱4小時(shí)。加入另外的NCS(0.032g，0.2當(dāng)量)，得到的溶液回流攪拌過夜。反應(yīng)混合物被冷卻至室溫，在真空中濃縮，殘余物用急驟色譜法提純，EtOAc在己烷中的20％的溶液作為洗脫液(0.28g，83％產(chǎn)率)。LCMSMH+＝282.
制備實(shí)施例70采用基本上與制備實(shí)施例69所述相同的方法，只是替換表8中第2欄所示的化合物制備表8第3欄所示的化合物。
表8 制備實(shí)施例71 向制備實(shí)施例34制備的化合物(1.0g，4.35mmol)在DMF(6ml)中的溶液加入POCl3(1.24ml，3.05當(dāng)量)，得到混合物在室溫下攪拌過夜。反應(yīng)混合物被冷卻到0攝氏度，通過加入冰將過量的POCl3急冷。得到的溶液用1N的NaOH中和，用水稀釋，然后用CH2Cl2萃取。合并的有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過濾然后在真空中濃縮。粗產(chǎn)物用急驟色譜法提純，用MeOH在CH2Cl2中的5％的溶液作為洗脫液(0.95g，85％產(chǎn)率)。LCMSMH+＝258.
制備實(shí)施例72 向制備實(shí)施例71制備的產(chǎn)品(0.25g，0.97mmol)在THF中的溶液加入NaBH4(0.041g，1.1當(dāng)量)，得到的溶液在室溫下攪拌過夜。反應(yīng)混合物通過加入水急冷，用CH2Cl2萃取。合并的有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過濾，并且在減壓下濃縮。粗產(chǎn)物用急驟色譜法提純，用60∶40的己烷∶EtOAc混合物作為洗脫液(0.17g，69％產(chǎn)率)。LCMSMH+＝260.
制備實(shí)施例73 在制備實(shí)施例72中制備的化合物(0.12g，0.462mmol)、硫酸二甲酯(0.088ml，2.0當(dāng)量)、50％NaOH(0.26ml)和催化的Bu4NBr在CH2Cl2(4ml)中的溶液在室溫下攪拌過夜。反應(yīng)混合物用水稀釋，然后用CH2Cl2萃取。合并的有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過濾，并且在減壓下濃縮。粗產(chǎn)物用急驟色譜法提純，使用EtOAc在己烷中20％的溶液作為洗脫液(0.062g，48％產(chǎn)率)。
制備實(shí)施例74 在制備實(shí)施例35中制備的化合物(0.3g，1.2mmol)、K2CO3(0.33g，2當(dāng)量)和4-氨基吡啶(1.1當(dāng)量)在5mlCH3CN中反應(yīng)2天，然后在減壓下濃縮。殘余物在H2O和CH2Cl2之間分配。有機(jī)層用硫酸鈉干燥，過濾然后濃縮。粗產(chǎn)物用急驟色譜法提純，用5％在CH2Cl2中的(10％NH4OH在MeOH中)溶液作為洗脫液，得到所需產(chǎn)物。
制備實(shí)施例75
制備實(shí)施例74制備的化合物(0.91毫mol)、BOC2O(0.22g，1.1當(dāng)量)和DMAP(0.13g，1.1當(dāng)量)在二噁烷(10ml)中在室溫下反應(yīng)3天。加入另外的BOC2O(0.10g，0.5當(dāng)量)，攪拌4小時(shí)。然后在真空下濃縮，用飽和的NaHCO3(15ml)稀釋，然后用CH2Cl2(2×100ml)萃取。合并的有機(jī)層用硫酸鈉干燥，過濾，并且在減壓下濃縮。粗產(chǎn)物用急驟色譜法提純，用5％在CH2Cl2中的(10％NH4OH在MeOH中)溶液作為洗脫液，得到所需產(chǎn)物。
制備實(shí)施例76 采用基本上與制備實(shí)施例54所述的相同的方法，只是替換制備實(shí)施例75中制備的化合物得到上述產(chǎn)物。
制備實(shí)施例77
制備實(shí)施例76制備的產(chǎn)物(0.3mmol)、苯基硼酸(0.073g，2.0當(dāng)量)、K3PO4(0.19g，3.0當(dāng)量)和Pd(PPh3)4(0.017g，5mol％)在回流的DME(16ml)和H2O(4ml)中反應(yīng)7小時(shí)。得到的溶液冷卻至室溫，用水(10ml)稀釋，用CH2Cl2(3×50ml)萃取。合并的有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過濾，然后濃縮。粗產(chǎn)物用急驟色譜法提純，用2.5％在CH2Cl2中的(10％NH4OH在MeOH中)溶液作為洗脫液，獲得所需產(chǎn)物。
制備實(shí)施例78 向在制備實(shí)施例53.15中制備的化合物(0.25g，1.3mmol)在二噁烷(5ml)中的溶液加入iPr2NEt(0.47ml，2.0當(dāng)量)和3-氨基甲基吡啶(0.15ml，1.1當(dāng)量)。得到的溶液在室溫?cái)嚢?2小時(shí)。反應(yīng)混合物用水稀釋，然后用EtOAc萃取。合并的有機(jī)物用水和飽和的NaCl洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾，然后在真空中濃縮。粗產(chǎn)物用急驟色譜法提純。
制備實(shí)施例79-81采列于基本上與制備實(shí)施例78所述相同的方法，只是替換表8.10第2欄所示的化合物制備表8.10第3欄所示的化合物。
表8.10 制備實(shí)施例82 采用基本上與制備實(shí)施例75所述的相同的方法，只是替換制備實(shí)施例80中制備的化合物得到上述化合物。
實(shí)施例1
來自制備實(shí)施例54的產(chǎn)物(0.875mmol)、4-氨基吡啶(0.12g，1.3當(dāng)量)和K2CO3(0.24g，2當(dāng)量)在CH3CN(5ml)中按制備實(shí)施例74所述反應(yīng)，得到所述產(chǎn)物。
實(shí)施例2-46.18采用基本上與實(shí)施例1所述相同的方法，只是使用表9第2和3欄所示的反應(yīng)物，可得到第4欄所示的產(chǎn)物。
表9









實(shí)施例47 在0攝氏度，將TFA(0.5ml)加入到制備實(shí)施例76所制備的化合物(0.16mmol)在CH2Cl2(2.0ml)中的溶液中，該溶液攪拌2.5小時(shí)。將其在4攝氏度儲存過夜，然后加入另外的TFA(0.5ml)。將其攪拌4小時(shí)然后在真空中濃縮。用1N的NaOH中和，用CH2Cl2萃取。合并的有機(jī)層用硫酸鈉干燥，過濾，并且在減壓下濃縮。粗產(chǎn)物用急驟色譜法提純，用2.5％在CH2Cl2中的(10％NH4OH在MeOH中)溶液作為洗脫液，得到所需產(chǎn)物。
實(shí)施例48
步驟A將環(huán)戊基胺(1.2當(dāng)量)在室溫下滴加到5-氯代加成物在二噁烷/DIPEA(2.5/1.0)中的溶液中。得到的溶液回流攪拌16小時(shí)，冷卻至室溫，然后在減壓下濃縮。該粗料用制備薄層色譜法(8×1000μM)提純。
步驟B在室溫將TFA(5當(dāng)量)滴加到實(shí)施例48步驟A制備的化合物在CH2Cl2中的溶液中。得到的溶液在室溫?cái)嚢?8小時(shí)，然后減壓濃縮。粗料再溶解在CH2Cl2中，有機(jī)層順序用飽和NaHCO3水溶液(2×2ml)和鹽水(1×2ml)洗滌。干燥有機(jī)層(硫酸鈉)，過濾，然后在減壓下濃縮。該粗料用制備薄層色譜法(8×1000μM)提純。
實(shí)施例49-58采用基本上與實(shí)施例48所述相同的方法，只是替換表10第2欄的氯化物制備表10第3欄所示的化合物。
表10

實(shí)施例59 在室溫將TMSI(4當(dāng)量)滴加到實(shí)施例46.14制備的化合物在無水乙腈中的溶液。在10分鐘后，在真空中除去所述乙腈。得到的黃色泡沫用2N鹽酸溶液(7ml)處理，然后立即用Et2O(5x)洗滌。水溶液的pH用50％的NaOH(水溶液)調(diào)節(jié)到10，通過用NaCl飽和所述的溶液分離產(chǎn)物，然后用CH2Cl2(5X)萃取，得到所需產(chǎn)物。
實(shí)施例60-62采列于基本上與實(shí)施例58所述相同的方法，只是替換表11第2欄所示的化合物制備表11第3欄所示的化合物。
表11 分析對本發(fā)明化合物的分析進(jìn)行如下。
桿狀病毒建構(gòu)細(xì)胞周期蛋白E克隆到pVL1393(Pharmingen，La Jolla，California)中，使用PCR，在末端的氨基端外加5組氨酸殘基，使得在鎳樹脂上純化。表達(dá)的蛋白質(zhì)大約是45kDa。將CDK2克隆進(jìn)pVL1393，使用PCR，在末端的羧基端外加凝血素抗原決定基標(biāo)記(YDVPDYAS)。表達(dá)蛋白質(zhì)大約為34kDa大小。
酶產(chǎn)生將表達(dá)細(xì)胞周期蛋白E和CDK2的重組體桿狀病毒以相等的復(fù)合感染(MOI＝5)同時(shí)感染進(jìn)入SF9細(xì)胞48小時(shí)。通過離心法在1000RPM采收細(xì)胞10分鐘，然后在冰上在5倍于顆粒體積的溶胞緩沖劑中將顆粒裂解30分鐘，溶胞緩沖劑含有50mM Tris pH8.0、150mM NaCl、1％NP40、1mM DTT和蛋白酶抑制劑(Roche DiagnosticsgmbH，Mannheim，Germany)。溶菌產(chǎn)物在15000RPM離心沉降10分鐘，保留上層清液。5ml的鎳珠(用于1升SF9細(xì)胞)在溶胞緩沖劑(QiagengmbH，Germany)中洗滌3次。將咪唑加入到所述桿狀病毒上層清液中，達(dá)到20mM的最后濃度，然后在4攝氏度和鎳珠一起培養(yǎng)45分鐘。用含有250mM咪唑的溶胞緩沖劑洗脫蛋白質(zhì)。在2升激酶緩沖劑中分解洗脫液過夜，激酶緩沖劑包括50mM Tris pH8.0、1mM DTT、10mM MgCl2、100μM原釩酸鈉和20％甘油。在-70攝氏度儲存等分的酶。
體外激酶分析細(xì)胞周期蛋白E/CDK2激酶分析在低蛋白結(jié)合96-穴板(CorningInc，Corning，New York)中進(jìn)行。在激酶緩沖劑中將酶稀釋至50μg/ml的最終濃度，所述激酶緩沖劑含有50mM Tris pH8.0、10mMMgCl2、1mM DTT和0.1mM原釩酸鈉。
用于這些反應(yīng)的基質(zhì)是從組蛋白H1(來自Amersham，UK)的生物素?；碾摹Ｋ龌|(zhì)在冰上解凍，在激酶緩沖劑中稀釋至2μM。將化合物在10％二甲亞砜中稀釋至需要的濃度。對于各個(gè)激酶反應(yīng)，將20μl的50μg/ml酶溶液(1μg的酶)和20μl的2μM基質(zhì)溶液混合，然后與在各用于測試的穴中的10μl的稀釋的化合物合并。通過加入50ul的2μM ATP和0.1μCi的33P-ATP(來自Amersham，UK)使激酶反應(yīng)開始。所述反應(yīng)在室溫進(jìn)行1小時(shí)。通過加入200μl的終止緩沖液15分鐘停止反應(yīng)，所述終止緩沖液包括0.1％Triton X-100、1mM ATP、5mM EDTA和5mg/ml streptavidine涂覆的SPA微球(來自Amersham，UK)。然后用Filtermate通用的采集裝置(Packard/Perkin Elmer Life Sciences)將SPA微球捕獲到96-穴GF/B濾板(Packard/Perkin Elmer LifeSciences)上。用2M NaCl洗滌所述微球兩次，然后用含有1％磷酸的2M NaCl洗滌微球兩次，消除非特異性的信號。然后用TopCount 96穴液體閃爍計(jì)數(shù)器(購自Packard/Perkin Elmer Life Sciences)測量放射性信號。
IC50的確定
根據(jù)產(chǎn)生的抑制數(shù)據(jù)繪制劑量反應(yīng)曲線，每個(gè)劑量反應(yīng)曲線一式兩分，來源于抑制化合物的系列稀釋液的8個(gè)點(diǎn)。化合物的濃度相對于％激酶活性標(biāo)在圖上，用處理的樣品的CPM除以未處理樣品的CPM計(jì)算。為了得到IC50值，所述劑量反應(yīng)曲線然后被擬合到標(biāo)準(zhǔn)樣品S形曲線，用非線性回歸分析得出IC50值。
雖然本發(fā)明結(jié)合前述具體實(shí)施方案進(jìn)行了描述，但是本發(fā)明的許多備選方案、改進(jìn)和其它變化對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言是顯而易見的。所有這樣的備選方案、改進(jìn)和變化也被認(rèn)為落入本發(fā)明的精神和范圍中。
權(quán)利要求
1.下述結(jié)構(gòu)式所示的化合物 其中R是雜芳基，其中所述雜芳基可以是未取代的或任選獨(dú)立地被一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，所述的基團(tuán)可以相同或不同，各個(gè)基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素、烷基、芳基、環(huán)烷基、CF3、OCF3、CN、-OR5、-NR5R6、-C(R4R5)nOR5、-C(O2)R5、-C(O)R5、-C(O)NR5R6、-SR6、-S(O2)R7、-S(O2)NR5R6、-N(R5)S(O2)R7、-N(R5)C(O)R7和-N(R5)C(O)NR5R6；R2是選自下述的基團(tuán)R9、烷基、炔基、芳基、雜芳基、CF3、雜環(huán)烷基、炔基烷基、環(huán)烷基、-C(O)OR4、被1-6個(gè)R9基團(tuán)取代的烷基，R9可以相同或不同，獨(dú)立地選自下列R9 其中，上述對R2的定義中所述的芳基可以是未取代的或任選被一個(gè)或多個(gè)部分取代，所述部分可以相同或不同，各個(gè)部分獨(dú)立地選自鹵素、CN、-OR5、SR5、-CH2OR5、-C(O)R5、-SO3H、-S(O2)R6、-S(O2)NR5R6、-NR5R6、-C(O)NR5R6、-CF3和-OCF3；R3選自下述基團(tuán)H、鹵素、-NR5R6、-C(O)OR4、-C(O)NR5R6、烷基、炔基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)烷基、雜芳基、 和 其中對于R3的各個(gè)所述的烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基和雜芳基烷基和結(jié)構(gòu)緊接著R3的上文所示的雜環(huán)基部分可以是取代的或任選被一個(gè)或多個(gè)部分獨(dú)立取代，所述的部分可以相同或不同，各個(gè)部分獨(dú)立地選自下述基團(tuán)鹵素、烷基、芳基、環(huán)烷基、CF3、CN、-OCF3、-(CR4R5)nOR5、-OR5、-NR5R6、-(CR4R5)nNR5R6、-C(O2)R5、-C(O)R5、-C(O)NR5R6、-SR6、-S(O2)R6、-S(O2)NR5R6、-N(R5)S(O2)R7、-N(R5)C(O)R7和-N(R5)C(O)NR5R6；R4是H、鹵素或烷基；R5是H或烷基；R6選自下述基團(tuán)H、烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)烷基、雜芳基和雜芳基烷基，其中各個(gè)所述烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基和雜芳基烷基可以是未取代的或任選被一個(gè)或多個(gè)部分取代，所述部分可以相同或不同，各個(gè)部分獨(dú)立地選自鹵素、烷基、芳基、環(huán)烷基、CF3、OCF3、CN、-OR5、-NR5R10、-N(R5)Boc、-(CR4R5)nOR5、-C(O2)R5，-C(O)R5、-C(O)NR5R10、-SO3H、-SR10、-S(O2)R7、-S(O2)NR5R10、-N(R5)S(O2)R7、-N(R5)C(O)R7和-N(R5)C(O)NR5R10；R10選自下述基團(tuán)H、烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)烷基烷基、雜芳基和雜芳基烷基，其中各個(gè)所述烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基和雜芳基烷基可以是未取代的或任選被一個(gè)或多個(gè)部分取代，所述部分可以相同或不同，各個(gè)部分獨(dú)立地選自鹵素、烷基、芳基、環(huán)烷基、CF3、OCF3、CN、-OR5、-NR4R5、-N(R5)Boc、-(CR4R5)nOR5、-C(O2)R5、-C(O)NR4R5、-C(O)R5、-SO3H、-SR5、-S(O2)R7、-S(O2)NR4R5、-N(R5)S(O2)R7、-N(R5)C(O)R7和-N(R5)C(O)NR4R5；或任選(i)在部分-NR5R10中的R5和R10、或(ii)在部分-NR5R6中的R5和R6中可以連接在一起形成環(huán)烷基或雜環(huán)基部分，每個(gè)所述環(huán)烷基或雜環(huán)基部分是未取代的或任選獨(dú)立地被一個(gè)或多個(gè)R9基取代；R7選自烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基、芳烷基和雜芳基烷基，其中對于R7每個(gè)所述的烷基、環(huán)烷基、雜芳基烷基、芳基、雜芳基和芳烷基可以是未取代的或任選獨(dú)立地被一個(gè)或多個(gè)部分取代，所述部分可以相同或不同，各個(gè)部分獨(dú)立地選自鹵素、烷基、芳基、環(huán)烷基、CF3、OCF3、CN、-OR5、-NR5R10、-CH2OR5、-C(O2)R5、-C(O)NR5R10、-C(O)R5、-SR10、-S(O2)R10、-S(O2)NR5R10、-N(R5)S(O2)R10、-N(R5)C(O)R10和-N(R5)C(O)NR5R10；R8選自基團(tuán)R6、-C(O)NR5R10、-CH2OR4、-C(O)OR6、-C(O)R7和-S(O2)R7；R9選自鹵素、-CN、-NR5R6、-(CH2)nOR4、-C(O2)R6、-C(O)NR5R6、-OR6、-SR6、-S(O2)R7、-S(O2)NR5R6、-N(R5)S(O2)R7、-N(R5)C(O)R7和-N(R5)C(O)NR5R6；m是0-4；和n是1-4。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R選自2-吡啶基、4-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基-N-氧化物、3-吡啶基-N-氧化物、1，3-噻唑-2-基、嘧啶-5-基、吡嗪-3-基和噠嗪-3-基，其中每個(gè)所述的吡啶基、噻唑基、嘧啶基、吡嗪基和噠嗪基部分可以是未取代的或任選獨(dú)立地被一個(gè)或多個(gè)部分取代，所述的部分可相同或不同，各部分獨(dú)立地選自鹵素、烷基、芳基、CF3、OCF3、CN、-OR5、-NR5R6、-CH2OR5、-C(O2)R5、-C(O)NR5R6、-S(O2)NR5R6和-N(R5)S(O2)R7；R2是鹵素、CF3、CN、低級烷基、環(huán)烷基、-OR6、-C(O)OR4、-(CH2)nOR6、芳基或雜芳基；R3是H、鹵素、低級烷基、芳基、雜芳基、-C(O)OR4、環(huán)烷基、-NR5R6、雜環(huán)基烷基、環(huán)烷基烷基、 和 其中對于R3的所述烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基和環(huán)烷基是未取代的或任選獨(dú)立地被一個(gè)或多個(gè)部分取代，所述部分可以相同或不同，各個(gè)部分獨(dú)立地選自鹵素、CF3、OCF3、低級烷基、CN和OR5；R4是H或低級烷基；R5是H或低級烷基；m是0-2；和n是1或2。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中R選自2-吡啶基、4-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基-N-氧化物、3-吡啶基-N-氧化物、1，3-噻唑-2-基、嘧啶-5-基。
4.權(quán)利要求2的化合物，其中R2是F、Cl、Br、CF3、CN、低級烷基、環(huán)烷基或-(CH2)nOR6。
5.權(quán)利要求2的化合物，其中R3是H、低級烷基、環(huán)烷基、-C(O)OR4、芳基、雜芳基、環(huán)烷基烷基、 或 其中每個(gè)所述低級烷基、芳基、環(huán)烷基、雜芳基和上述R3中所示的雜環(huán)基部分是未取代的或任選獨(dú)立地被一個(gè)或多個(gè)部分取代，所述部分可相同或不同，各部分獨(dú)立地選自鹵素、CF3、低級烷基、-OCH3、-CH2OH、-CH2CH2OH和CN。
6.權(quán)利要求2的化合物，其中R4是H。
7.權(quán)利要求2的化合物，其中R5是H。
8.權(quán)利要求2的化合物，其中m是0。
9.權(quán)利要求2的化合物，其中n是1。
10.權(quán)利要求2的化合物，其中R是2-吡啶基。
11.權(quán)利要求2的化合物，其中R是3-吡啶基。
12.權(quán)利要求2的化合物，其中R是4-吡啶基。
13.權(quán)利要求2的化合物，其中R是4-吡啶基的N-氧化物。
14.權(quán)利要求4的化合物，其中所述的R2是Br。
15.權(quán)利要求4的化合物，其中所述的R2是Cl。
16.權(quán)利要求4的化合物，其中R2異丙基或乙基。
17.權(quán)利要求4的化合物，其中R2是-CH2OH或-CH2OCH3。
18.權(quán)利要求4的化合物，其中R2是環(huán)丙基。
19.權(quán)利要求4的化合物，其中R2是CN。
20.權(quán)利要求2的化合物，其中R3是低級烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、芳基、-NR5R6、 或
21.權(quán)利要求20的化合物，其中R3是異丙基。
22.權(quán)利要求21的化合物，其中R3是
23.權(quán)利要求20的化合物，其中R3是未取代的苯基或被取代一個(gè)或多個(gè)選自F、Br、Cl、OMe、CH3和CF3的部分取代的苯基。
24.權(quán)利要求20的化合物，其中R3是環(huán)己基甲基。
25.選自下述的化合物，或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物，
26.下式的化合物，或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物，
27.抑制一種或多種細(xì)胞周期蛋白依賴的激酶的方法，包括將治療有效量的至少一種權(quán)利要求1的化合物施用需要所述抑制的病人。
28.治療一種或多種與細(xì)胞周期蛋白依賴的激酶有關(guān)的疾病的方法，包括將治療有效量的至少一種權(quán)利要求1的化合物施用需要所述治療的病人。
29.根據(jù)權(quán)利要求28的方法，其中所述細(xì)胞周期蛋白依賴的激酶是CDK2。
30.根據(jù)權(quán)利要求28的方法，其中所述疾病選自下述膀胱癌、乳房癌、結(jié)腸癌、腎癌、肝癌、肺癌、小細(xì)胞肺癌、食管癌、膽囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、子宮頸癌、甲狀腺癌、前列腺癌和皮膚癌、鱗狀細(xì)胞癌；白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病、急性成淋巴細(xì)胞白血病、B細(xì)胞淋巴癌、T細(xì)胞淋巴癌、霍奇金淋巴癌、非霍奇金淋巴癌、毛細(xì)胞淋巴癌、Burkett氏淋巴癌；急性和慢性骨髓白血病、脊髓發(fā)育不良綜合征和早幼粒細(xì)胞性白血??；纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤；星形細(xì)胞瘤，成神經(jīng)細(xì)胞瘤，神經(jīng)膠質(zhì)瘤和神經(jīng)鞘瘤；黑瘤、精原細(xì)胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、外生性色素頸瘤、keratoctanthoma、甲狀腺濾囊癌和卡波氏肉瘤。
31.治療一種或多種與細(xì)胞周期蛋白依賴的激酶有關(guān)的疾病，包括給予需要這樣的治療的哺乳動物適量的第一化合物，其是權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽或溶劑化物；和適量的至少一種第二化合物，所述的第二化合物是抗癌劑；其中第一化合物和所述第二化合物產(chǎn)生需要的治療作用。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，進(jìn)一步包括放射治療。
33.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中所述抗癌劑選自細(xì)胞生長抑制劑、順氯氨鉑、阿霉素、泰素帝、紫杉酚、鬼臼亞乙苷、伊立替康(或CPT-11)、肯托斯塔(camptostar)、托普泰肯(topotecan)、紫杉醇、多塞坦(docetaxel)、艾譜塞酮(epothilones)、三苯氧胺、5-氟尿嘧啶、胺甲喋呤(methoxtrexate)、5-氟尿嘧啶、替莫唑胺、環(huán)磷酰胺、(4-[2-[4-[(11R)-3，10-二溴-8-氯-6，11-二氫-5H-苯并[5，6]環(huán)庚并[1，2-b]吡啶-11-基-]-1-哌啶基]-2-氧基乙基1-哌啶羧酰胺、替普法尼(tipifarnib)、L778，123(法呢基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶抑制劑)、BMS 214662(法呢基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶抑制劑)、愛利沙(Iressa)、塔希瓦(Tarceva)、對EGFR的抗體、Gleevec、內(nèi)含子、ara-C、阿霉素、環(huán)磷酰胺、吉西他濱、尿嘧啶氮芥、鹽酸氮芥、異環(huán)磷酰胺、柔紅霉素、阿霉素、表柔比星、伊達(dá)比星、光神霉素、脫氧柯福霉素、絲裂霉素-C、左旋天冬酰胺酶、表鬼臼毒噻吩糖苷17α-乙炔雌二醇、己烯雌酚、睪丸激素、強(qiáng)的松、氟烴甲基睪丸素、甲雄烷酮丙酸鹽、睪內(nèi)酯、甲地孕酮乙酸鹽、甲基強(qiáng)的松龍、甲基睪甾酮、6α-甲-17-羥孕酮醋酸酯、亮丙瑞林、氟他胺、托瑞米芬、戈舍瑞林、順氯氨鉑、卡鉑、羥基脲、安吖啶、普魯芐肼、米托坦、米托蒽醌、左旋四咪唑、納瓦賓(Navelbene)、胺斯塔唑(Anastrazole)、雷塔唑(Letrazole)、卡配烯塔賓(Capecitabine)、雷羅色分(Reloxafine)、屈洛昔芬或六甲三聚氰胺。
34.一種藥物組合物，其含有與至少一種藥學(xué)可接受的載體結(jié)合的治療有效量的至少一種權(quán)利要求1的化合物。
35.權(quán)利要求34的藥物組合物，還含有一種或多種選自下述的抗癌劑細(xì)胞生長抑制劑、順氯氨鉑、阿霉素、泰索帝、紫杉酚、鬼臼亞乙苷、CPT-11、伊拉替康(irinotecan)、肯托斯塔(camptostar)、托普泰肯(topotecan)、紫杉醇、多塞坦(docetaxel)、艾譜塞酮(epothilones)、三苯氧胺、5-氟尿嘧啶、胺甲喋呤(methoxtrexate)、5-氟尿嘧啶、替莫唑胺、環(huán)磷酰胺、(4-[2-[4-[(11R)-3，10-二溴-8-氯-6，11-二氫-5H-苯并[5，6]環(huán)庚并[1，2-b]吡啶-11-基-]-1-哌啶基]-2-氧基乙基1-哌啶羧酰胺、Zarnestra替普法尼(tipifarnib)、L778，123(法呢基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶抑制劑)、BMS 214662(法呢基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶抑制劑)、愛利沙(Iressa)、塔希瓦(Tarceva)、對EGFR的抗體、Gleevec、內(nèi)含子、ara-C、阿霉素、環(huán)磷酰胺、吉西他濱、尿嘧啶氮芥、鹽酸氮芥、異環(huán)磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥、溴丙哌嗪、曲他胺、三亞乙基硫代磷酰胺、白消安、亞硝脲氮芥、環(huán)己亞硝脲、鏈脲霉素、氮烯唑胺、5-氟脫氧尿苷、阿糖胞苷、6-巰基嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、磷酸氟達(dá)拉濱、噴司他丁、長春花堿、長春新堿、長春堿酰胺、爭光霉素、放線菌素、柔紅菌素、阿霉素、表阿霉素、伊達(dá)比星、光神霉素、脫氧柯福霉素、絲裂霉素-攝氏度、左旋左旋天冬酰胺酶、表鬼臼毒噻吩糖苷17α-乙炔雌二醇、己烯雌酚、睪丸激素、強(qiáng)的松、氟烴甲基睪丸素、甲雄烷酮丙酸鹽、睪內(nèi)酯、甲地孕酮醋酸酯、甲基強(qiáng)的松龍、甲睪酮、強(qiáng)的松龍、氟羥脫氫皮醇、氯三芳乙烯、羥孕酮、氨魯米特、雌氮芥、6(α-甲-17-羥孕酮醋酸酯、亮丙瑞林、氟他胺、托瑞米芬、戈舍瑞林、順氯氨鉑、卡鉑、羥基脲、安丫啶、普魯芐肼、米托坦、米托蒽醌、左旋四咪唑、納瓦賓(navelbene)、胺斯塔唑(anastrazole)、雷塔唑(letrazole)、卡配烯塔賓(capecitabine)、雷羅色分(reloxafine)、屈洛昔芬或六甲三聚氰胺。
36.權(quán)利要求1的化合物，其為分離和提純的形式。
全文摘要
在本發(fā)明的許多實(shí)施方案中，提供了新類型的作為細(xì)胞周期蛋白依賴激酶抑制劑的吡唑并[1，5－a]嘧啶化合物、這類化合物的制備方法、包括一種或多種這類化合物的藥物組合物、包括一種或多種這類化合物的藥物制劑的制備方法，以及用這類化合物或藥物組合物治療、預(yù)防、抑制或改善一種或多種與CDK有關(guān)的疾病的方法。
文檔編號A61P35/00GK1738821SQ03824448
公開日2006年2月22日 申請日期2003年9月3日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月4日
發(fā)明者T·J·古茲, K·帕魯奇, M·P·德懷爾, R·J·多爾, V·M·吉里亞瓦拉布漢, L·W·迪拉德, V·D·特蘭, Z·M·何, R·A·詹姆斯, 樸涵宋 申請人:先靈公司, 法馬科皮亞藥物研發(fā)公司