專利名稱：抑制血管生成的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抑制血管生成的方法和組合物。
背景技術(shù)：
血管生成是新的血管生長(zhǎng)進(jìn)入缺少足夠血液供應(yīng)的區(qū)域的過(guò)程。內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)是血管生成過(guò)程中的一個(gè)關(guān)鍵步驟。血管生成的開(kāi)始伴隨著填充血管內(nèi)腔的內(nèi)皮細(xì)胞周圍的基底膜受到侵蝕。由內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞釋放的酶觸發(fā)了對(duì)基底膜的侵蝕。然后內(nèi)皮細(xì)胞在受到生成血管的刺激物誘導(dǎo)時(shí)，穿過(guò)被侵蝕的基底膜而遷移。遷移的細(xì)胞形成了脫離母體血管的“新芽”。遷移的內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生增生，新芽融合形成毛細(xì)血管襻，從而形成了新的血管。
控制血管生成是一個(gè)被高度調(diào)節(jié)的過(guò)程，涉及許多生成血管的刺激物和抑制劑的作用。目前認(rèn)為，受控制的和不受控制的血管生成以類似的方式進(jìn)行。
在正常的生理?xiàng)l件下，人類和動(dòng)物僅僅在非常特定的嚴(yán)格環(huán)境下發(fā)生血管生成。例如，通常僅在傷口愈合，胎兒和胚胎發(fā)育，以及黃體、子宮內(nèi)膜和胎盤(pán)形成的過(guò)程中觀察到血管生成。
然而，不受控制的或不希望的血管生成則與多種疾病或病癥有關(guān)。例如，血管生成在腫瘤的形成和擴(kuò)展中，以及在患有某些眼病的病人的角膜和視網(wǎng)膜中起到關(guān)鍵作用。
證明血管生成在腫瘤生長(zhǎng)中的作用的證據(jù)廣泛存在。通常認(rèn)為腫瘤的生長(zhǎng)關(guān)鍵取決于血管生成這一過(guò)程。血管生成在腫瘤生長(zhǎng)的兩個(gè)階段起到關(guān)鍵作用。首先，需要血管生成使腫瘤塊生長(zhǎng)至超過(guò)幾個(gè)微米的尺寸。在沒(méi)有新的血管系統(tǒng)形成的情況下，腫瘤塊中的細(xì)胞將得不到足夠的血液供給，從而無(wú)法生長(zhǎng)到超過(guò)該小尺寸。然而，一旦開(kāi)始腫瘤的血管化，腫瘤塊就可能發(fā)生擴(kuò)大。
腫瘤的血管化也在次級(jí)腫瘤的生長(zhǎng)中起到重要作用。腫瘤的血管化使得腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血流中并在全身循環(huán)。在腫瘤細(xì)胞離開(kāi)初始位置而沉降在次級(jí)(轉(zhuǎn)移的)位置之后，進(jìn)一步的血管生成使次級(jí)腫瘤塊生長(zhǎng)和擴(kuò)張。因此，防止血管生成不僅可抑制腫瘤在初始位置的生長(zhǎng)，還能減少初始位置處的細(xì)胞損失，阻止可能的轉(zhuǎn)移瘤的形成。
除了形成腫瘤之外，還存在由血管生成所誘導(dǎo)的，或與不受控的或是不希望的血管生成有關(guān)的多種疾病和病癥，包括糖尿病性視網(wǎng)膜病，晶狀體后纖維增生，新生血管性青光眼，牛皮癬，血管纖維瘤，免疫性或非免疫性炎癥(包括風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)，動(dòng)脈硬化斑內(nèi)的毛細(xì)血管增生，血管瘤和Kaposi’s肉瘤。血管生成也能在患風(fēng)濕病的關(guān)節(jié)處發(fā)生，由于允許白細(xì)胞流入并隨后釋放出發(fā)炎的介質(zhì)，從而加速了關(guān)節(jié)損壞。
由血管生成介導(dǎo)的疾病的一個(gè)例子是眼部新血管疾病。這種疾病的特征是新的血管侵入眼部結(jié)構(gòu)如視網(wǎng)膜和角膜中。它是導(dǎo)致眼瞎的最常見(jiàn)原因，并與眼部的許多疾病有關(guān)。在與年齡相關(guān)的黃斑退化中，由于脈絡(luò)膜的毛細(xì)血管通過(guò)Bruch’s膜的缺陷向內(nèi)生長(zhǎng)以及視網(wǎng)膜色素上皮之下的維管組織發(fā)生增生，導(dǎo)致了有關(guān)的視覺(jué)問(wèn)題。
慢性炎癥可包括病理性血管生成。例如潰瘍性大腸炎和Crohn’s病的此類病狀表明隨著新的血管向內(nèi)生長(zhǎng)進(jìn)入發(fā)炎組織，發(fā)生了組織變化。在動(dòng)脈粥樣硬化癥中發(fā)現(xiàn)了與血管生成有關(guān)的其它病理學(xué)作用。在血管的內(nèi)腔內(nèi)部形成的斑已經(jīng)顯示了具有生成血管的刺激物活性。
生殖和傷口愈合中也涉及血管生成。在生殖中，血管生成是排卵，也是受精之后囊胚植入過(guò)程的重要步驟。防止血管生成可用于引起閉經(jīng)，阻止排卵，或防止囊胚的植入。在傷口愈合中，過(guò)度的修復(fù)或纖維組織形成可能是外科方法的有害副作用，過(guò)度的修復(fù)或纖維組織形成可由血管生成導(dǎo)致或惡化。粘連是外科手術(shù)的常見(jiàn)并發(fā)癥，帶來(lái)了例如小腸梗阻的一些問(wèn)題。
現(xiàn)行對(duì)涉及不受控的或不希望的血管生成的疾病進(jìn)行的治療是不充分的。因此，需要提供抑制不受控的或不希望的血管生成的新方法和組合物。
本發(fā)明涉及鑒定一類能抑制血管生成的藥劑。尤其是，本發(fā)明涉及抑制血管生成的方法，以及適合用來(lái)抑制血管生成的藥物組合物。
發(fā)明概要本發(fā)明提供了抑制生物系統(tǒng)中內(nèi)皮細(xì)胞增生的方法，該方法包括采用有效量的烷基取代的脂肪酸向生物系統(tǒng)進(jìn)行給藥的步驟，其中該烷基取代的脂肪酸能抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生，且該烷基取代的脂肪酸為具有下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代的脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
本發(fā)明也提供了抑制生物系統(tǒng)中的血管生成的方法，該方法包括采用有效量的烷基取代脂肪酸向生物系統(tǒng)進(jìn)行給藥的步驟，其中該烷基取代的脂肪酸能抑制血管生成，且該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
本發(fā)明還提供了一種減少向生物系統(tǒng)給藥的方法，使得對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增生的抑制達(dá)到所需的水平，該方法包括對(duì)生物系統(tǒng)施用有效量的烷基取代的脂肪酸，其中該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
本發(fā)明還提供了一種減少向生物系統(tǒng)施用抗血管生成劑的方法，使得對(duì)血管生成的抑制達(dá)到所需的水平，該方法包括對(duì)生物系統(tǒng)施用有效量的烷基取代的脂肪酸，其中該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了包括烷基取代的脂肪酸的藥物組合物，其中該烷基取代的脂肪酸能抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生和/或血管生成，且該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
本發(fā)明還提供了包括烷基取代的脂肪酸和免疫抑制劑的藥物組合物，其中該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
本發(fā)明起因于烷基取代的脂肪酸抑制人體臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)的增生而進(jìn)行的研究。特別是，令人驚奇地發(fā)現(xiàn)了烷基取代的脂肪酸16-甲基十七烷酸，15-甲基十七烷酸，15-甲基十六烷酸，14-甲基十六烷酸，14-甲基十五烷酸，13-甲基十五烷酸，13-甲基十四烷酸，12-甲基十四烷酸，12-甲基十三烷酸，11-甲基十三烷酸，11-甲基十二烷酸，和10-甲基十一烷酸能以劑量依賴性的方式抑制體內(nèi)的人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)的增生。此外，烷基取代的脂肪酸12-甲基十四烷酸，13-甲基十四烷酸，14-甲基十五烷酸，10-甲基十八烷酸，17-甲基十八烷酸和16-甲基十四烷酸在雞胚絨毛尿囊膜(CAM)試驗(yàn)中以劑量依賴型方式抑制血管生成。血管生成試驗(yàn)中這些烷基取代的脂肪酸的毒性低，表明這些烷基取代的脂肪酸具有重要的治療潛能。最后，烷基取代的脂肪酸12-甲基十四烷酸能抑制小鼠的角膜發(fā)生新血管化。
說(shuō)明書(shū)中將通篇采用的各個(gè)術(shù)語(yǔ)具有本領(lǐng)域普通技術(shù)的閱讀者所公知的含義。然而，為易于參考的緣故，將對(duì)這些術(shù)語(yǔ)中的一些進(jìn)行定義。
說(shuō)明書(shū)通篇采用的術(shù)語(yǔ)“烷基取代的脂肪酸”應(yīng)該被理解為指代可用下列通式描述的任何支鏈脂肪酸 其中R是具有1-6個(gè)碳原子的烷基。對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于烷基取代的不飽和的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
應(yīng)該理解的是，術(shù)語(yǔ)“烷基取代的脂肪酸”的范圍包括以上通式的化合物的羧酸鹽或任何衍生物，它們?cè)趯?duì)內(nèi)皮細(xì)胞增生的抑制和/或血管生成的抑制功能上與該化合物相當(dāng)。
應(yīng)該理解說(shuō)明書(shū)通篇采用的術(shù)語(yǔ)“血管生成”是指例如向組織或器官內(nèi)生成新的血管(“新血管化”)。
應(yīng)該理解說(shuō)明書(shū)通篇采用的術(shù)語(yǔ)“抑制”是指減少過(guò)程的發(fā)展，包括使過(guò)程開(kāi)始，繼續(xù)或終止。此類過(guò)程包括如內(nèi)皮細(xì)胞的增生或血管生成過(guò)程本身。
應(yīng)該理解說(shuō)明書(shū)通篇采用的術(shù)語(yǔ)“生物系統(tǒng)”是指任何多細(xì)胞的系統(tǒng)，包括細(xì)胞的孤立群到整個(gè)有機(jī)體。例如，生物系統(tǒng)可為組織培養(yǎng)物內(nèi)的細(xì)胞、組織或器官，或者是遭受不希望的或不可控的血管生成、或遭受與不可控的或不希望的血管生成有關(guān)的疾病或病癥的整個(gè)人這一受試對(duì)象。
應(yīng)該理解說(shuō)明書(shū)通篇采用的術(shù)語(yǔ)“抗血管生成抑制劑”是指具有抑制生物系統(tǒng)中血管生成能力的任何試劑。
應(yīng)該理解說(shuō)明書(shū)通篇采用的術(shù)語(yǔ)“免疫抑制劑”是指能改變免疫反應(yīng)和/或監(jiān)測(cè)，從而使免疫細(xì)胞對(duì)同種抗原、自身抗原、異種抗原或炎癥介質(zhì)的反應(yīng)減少的任何試劑。
應(yīng)該理解說(shuō)明書(shū)通篇采用的術(shù)語(yǔ)“免疫親和蛋白”是指結(jié)合到包括了環(huán)孢菌素A，雷帕霉素和FK506這一類免疫抑制劑上的受體。
附圖簡(jiǎn)述

圖1顯示了在用各種劑量的12-MTA處理過(guò)的絨毛尿囊膜上的血管生成程度。
圖2的上部畫(huà)面顯示了用25nmol或10nmol的17-MODA處理過(guò)的絨毛尿囊膜中血管生成的程度。下部的畫(huà)面顯示了用100nmol的10-MODA處理過(guò)的絨毛尿囊膜中的血管生成程度。
圖3的上部畫(huà)面顯示了用100nmol 14-MPDA處理過(guò)的絨毛尿囊膜中血管生成的程度。下部的畫(huà)面顯示了用100nmol 13-MTA處理過(guò)的絨毛尿囊膜中血管生成的程度。
圖4顯示了用100nmol 16-MTA處理過(guò)的絨毛尿囊膜中血管生成的程度。
圖5顯示了經(jīng)12-MTA處理7天和14天之后，被刮擦過(guò)并用銅綠假單胞菌處理而引起角膜新血管形成的小鼠角膜中的心血管形成的程度。
圖6顯示了角膜經(jīng)載體或12-MTA處理14天之后，再用銅綠假單胞菌刺激來(lái)引起角膜新血管形成的組織學(xué)檢驗(yàn)。
發(fā)明概述如上所述，本發(fā)明的一種技術(shù)方案是提供了抑制生物系統(tǒng)中內(nèi)皮細(xì)胞增生的方法，該方法包括采用有效量的烷基取代的脂肪酸向生物系統(tǒng)給藥的步驟，其中該烷基取代的脂肪酸能抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生，且該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
內(nèi)皮細(xì)胞是正在發(fā)生增生的任何內(nèi)皮細(xì)胞，包括對(duì)生物系統(tǒng)的一種或多種生成血管的刺激物發(fā)生反應(yīng)而進(jìn)行增生的內(nèi)皮細(xì)胞，或者是對(duì)生物系統(tǒng)的一種或多種生成血管的刺激物具有增生能力的內(nèi)皮細(xì)胞。優(yōu)選地，內(nèi)皮細(xì)胞增生與生物系統(tǒng)的血管生成有關(guān)。更優(yōu)選地，內(nèi)皮細(xì)胞增生與生物系統(tǒng)中不受控的或不希望的血管生成有關(guān)。
優(yōu)選地，內(nèi)皮細(xì)胞是人類或動(dòng)物的內(nèi)皮細(xì)胞。最優(yōu)選內(nèi)皮細(xì)胞是人類的內(nèi)皮細(xì)胞。
優(yōu)選地，內(nèi)皮細(xì)胞的增生與不受控或不希望的血管生成相關(guān)的人類或動(dòng)物疾病或病癥有關(guān)。更優(yōu)選地，內(nèi)皮細(xì)胞的增生與人類或動(dòng)物的下列疾病或病癥中的一種或多種有關(guān)與實(shí)體腫瘤有關(guān)的血管生成；血管纖維瘤；角膜新血管形成；視網(wǎng)膜/脈絡(luò)膜新血管形成；動(dòng)靜脈畸形；包括風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、狼瘡和其它結(jié)締組織疾病；Osler-Weber綜合癥；動(dòng)脈粥樣硬化斑；牛皮癬；化膿性肉芽腫；晶狀體后纖維增生；硬皮病；肉芽形成；血管瘤；沙眼；血友病性關(guān)節(jié)；血管粘連和肥厚性瘢痕；與慢性炎癥有關(guān)的疾病，包括結(jié)節(jié)病和發(fā)炎性腸病如Crohn’s病和潰瘍性淋巴管炎。更優(yōu)選地，血管生成與角膜新血管形成，視網(wǎng)膜新血管形成或脈絡(luò)膜新血管形成有關(guān)。最優(yōu)選地，血管生成與角膜新血管形成有關(guān)。
與角膜心血管形成有關(guān)的疾病包括糖尿病性視網(wǎng)膜病，早熟的視網(wǎng)膜病，角膜移植排斥反應(yīng)，新血管性青光眼和晶狀體后纖維增生，流行性角膜結(jié)膜炎，維生素A缺乏，過(guò)度佩戴隱形眼鏡，特應(yīng)性角膜炎，上角膜緣角膜炎，翼狀胬肉干燥性角膜炎，Sjogrens綜合癥，酒糟鼻，phylectenulosis，梅毒，分枝桿菌感染，脂質(zhì)變性，化學(xué)燒傷，細(xì)菌性潰瘍，真菌性潰瘍，單純皰疹感染，帶狀皰疹感染，原生動(dòng)物感染，Kaposi’s肉瘤，Mooren’s潰瘍，Terrien’s邊緣部退化，邊緣部角質(zhì)層分離，創(chuàng)傷，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)狼瘡，多動(dòng)脈炎，Wegener’s結(jié)節(jié)病，鞏膜炎，Stevens-Johnson病，類天皰瘡和輻射性角膜散光癥。
與視網(wǎng)膜/脈絡(luò)膜新血管形成有關(guān)的疾病包括糖尿病性視網(wǎng)膜病，黃斑變性，鐮刀性細(xì)胞貧血癥，肉瘤，梅毒，彈性假黃色瘤，Paget’s病，靜脈阻塞，動(dòng)脈阻塞，頸動(dòng)脈梗阻性疾病，慢性葡萄膜炎/玻璃體炎，分枝桿菌感染，Lyme’s病，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，早熟視網(wǎng)膜病，Eales’病，Behcet’s病，導(dǎo)致視網(wǎng)膜病或脈絡(luò)膜炎的感染，推測(cè)的眼組織胞漿菌病，Best’s病，近視，視窩，Stargardt’s病，睫狀體平坦部炎，慢性視網(wǎng)膜剝離，高粘稠滯度綜合癥，弓形體病，創(chuàng)傷和激光手術(shù)后并發(fā)癥。其它的疾病包括但不限于與虹膜發(fā)生相關(guān)的疾病、以及由維管組織或纖維組織的異常增生導(dǎo)致的包括所有形式的增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的疾病。
生物系統(tǒng)是包括有增生能力的內(nèi)皮細(xì)胞的任何系統(tǒng)，或者包括正在發(fā)生增生的內(nèi)皮細(xì)胞的任何系統(tǒng)。優(yōu)選地，生物系統(tǒng)是人或動(dòng)物受試體，受試體中包括有增生能力的內(nèi)皮細(xì)胞或正在發(fā)生增生的內(nèi)皮細(xì)胞。更優(yōu)選地，生物系統(tǒng)是人或動(dòng)物受試體，其中所包括的內(nèi)皮細(xì)胞的增生與不希望的或不受控的血管生成引起的疾病或病癥有關(guān)。更優(yōu)選地，生物系統(tǒng)是患有涉及內(nèi)皮細(xì)胞增生的疾病或病癥的人類或動(dòng)物患者。最優(yōu)選地，生物系統(tǒng)是人類或動(dòng)物患者，其患有與內(nèi)皮細(xì)胞增生有關(guān)的下列疾病中的一種或多種與實(shí)體腫瘤有關(guān)的血管生成；血管纖維瘤；角膜新血管形成；視網(wǎng)膜/脈絡(luò)膜新血管形成；動(dòng)靜脈畸形；關(guān)節(jié)炎，包括風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；狼瘡和其它結(jié)締組織疾??；Osler-Weber綜合癥；動(dòng)脈粥樣硬化斑；牛皮癬；化膿性肉芽腫；晶狀體后纖維增生；硬皮?。蝗庋啃纬?；血管瘤；沙眼；血友病性關(guān)節(jié)；血管粘連和肥厚性瘢痕；與慢性炎癥有關(guān)的疾病，包括結(jié)節(jié)病和發(fā)炎性腸病如Crohn’s病和潰瘍性淋巴管炎。
根據(jù)本發(fā)明各種形式的烷基取代的脂肪酸為任何由下列化學(xué)通式表述的烷基取代的脂肪酸 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
優(yōu)選地，烷基取代的脂肪酸中的烷基(R)是甲基或乙基。更優(yōu)選地，烷基(R)是甲基。
優(yōu)選地，烷基取代的脂肪酸中的烷基(R)位于直接臨近于端甲基的第一個(gè)碳原子上，或位于離開(kāi)端甲基的第二個(gè)碳原子上。
優(yōu)選地，烷基取代的脂肪酸是飽和的烷基取代的脂肪酸。更優(yōu)選地，飽和的烷基取代的脂肪酸是十一烷酸，十二烷酸，十三烷酸，十四烷酸，十五烷酸，十六烷酸，十七烷酸，十八烷酸，十九烷酸或二十烷酸的衍生物。最優(yōu)選地，飽和的烷基取代的脂肪酸是十四烷酸的衍生物。
優(yōu)選地，飽和的烷基取代的脂肪酸是18-甲基十九烷酸，17-甲基十八烷酸，10-甲基十八烷酸，16-甲基十七烷酸，15-甲基十七烷酸，15-甲基十六烷酸，14-甲基十六烷酸，14-甲基十五烷酸，13-甲基十五烷酸，13-甲基十四烷酸，12-甲基十四烷酸，12-甲基十三烷酸，11-甲基十三烷酸，11-甲基十二烷酸，10-甲基十二烷酸，或這些烷基取代的脂肪酸的任何組合。
更優(yōu)選地，烷基取代的脂肪酸是16-甲基十七烷酸，15-甲基十七烷酸，15-甲基十六烷酸，14-甲基十六烷酸，14-甲基十五烷酸，13-甲基十五烷酸，13-甲基十四烷酸，12-甲基十四烷酸，12-甲基十三烷酸，11-甲基十三烷酸，11-甲基十二烷酸，10-甲基十一烷酸，或這些烷基取代的脂肪酸的任何組合。最優(yōu)選的烷基取代的脂肪酸是12-甲基十四烷酸。
因此，在優(yōu)選的方式中，本發(fā)明提供了抑制生物系統(tǒng)中內(nèi)皮細(xì)胞增生的方法，該方法包括采用有效量下列化合物向生物系統(tǒng)進(jìn)行給藥的步驟16-甲基十七烷酸，15-甲基十七烷酸，15-甲基十六烷酸，14-甲基十六烷酸，14-甲基十五烷酸，13-甲基十五烷酸，13-甲基十四烷酸，12-甲基十四烷酸，12-甲基十三烷酸，11-甲基十三烷酸，11-甲基十二烷酸，10-甲基十一烷酸，或這些烷基取代的脂肪酸的任何組合。
對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，優(yōu)選該不飽和的烷基取代的脂肪酸為十一碳烯酸，十二碳烯酸，十三碳烯酸，十四碳烯酸，十五碳烯酸，十六碳烯酸，十七碳烯酸，十八碳烯酸，十九碳烯酸或二十碳烯酸的衍生物。
只要烷基取代的脂肪酸的量和劑型能表現(xiàn)出藥學(xué)上有用的效果或治療效果，則烷基取代的脂肪酸的有效量給藥量不受特別限制。
在這一方面，根據(jù)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增生進(jìn)行抑制的程度、受試者的年齡和體重、給藥的頻率和其它活性試劑的存在情況，可適當(dāng)?shù)剡x擇有效量的烷基取代的脂肪酸。
優(yōu)選地，烷基取代的脂肪酸的有效給藥量會(huì)導(dǎo)致生物系統(tǒng)中所需作用位置處的化合物濃度范圍達(dá)到50nM到5mM之間。更優(yōu)選地，烷基取代的脂肪酸的有效給藥量會(huì)導(dǎo)致生物系統(tǒng)中所需作用位置處的化合物濃度范圍落在50nM到1mM之間。最優(yōu)選地，烷基取代的脂肪酸的有效給藥量會(huì)導(dǎo)致在生物系統(tǒng)中所需作用位置處的化合物濃度范圍落在25μM到500μM之間。
在采用烷基取代的脂肪酸進(jìn)行局部給藥的情況下，局部施用于所需位置的烷基取代的脂肪酸的有效量范圍為25nmol到200μmol之間。
采用烷基取代的脂肪酸給藥可在任何合適的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行，以產(chǎn)生抑制生物系統(tǒng)中內(nèi)皮細(xì)胞增生這一所需效果。在人體或動(dòng)物受試體中，烷基取代的脂肪酸可通過(guò)口服，腸胃外，局部或任何其它的合適手段進(jìn)行給藥，并相應(yīng)地必須考慮藥物的運(yùn)送時(shí)間。
考慮到將要給藥的烷基取代的脂肪酸的特定物理和化學(xué)性質(zhì)，采用本發(fā)明各種形式的烷基取代的脂肪酸進(jìn)行給藥也包括了采用一種或多種藥學(xué)上可接受的添加劑，包括藥學(xué)上可接受的鹽，氨基酸，多肽，聚合物，溶劑，緩沖劑，賦形劑和填充劑。
例如，烷基取代的脂肪酸可被制備成為各種下列形式的藥物制劑如水溶液，油狀制劑，脂肪狀的乳液，乳液，凝膠等等，且這些制劑可采用肌肉或皮下注射或注射到器官進(jìn)行給藥，或作為包埋制劑或作為通過(guò)鼻腔、直腸、子宮、陰道、肺部等的轉(zhuǎn)化粘液質(zhì)制劑進(jìn)行給藥。組合物的給藥形式可以為口服制劑(例子有固體制劑如片劑，膠囊，顆?；蚍勰灰后w制劑如糖漿，乳液或懸浮液)。含有烷基取代的脂肪酸的組合物也可包含防腐劑，穩(wěn)定劑，分散劑，pH控制劑或等滲劑。合適的防腐劑的例子有甘油，丙二醇，苯酚或苯甲醇。合適的穩(wěn)定劑的例子有右旋糖苷，白明膠，α-生育酚乙酸酯或α-硫代甘油。合適的分散劑的例子有聚氧化乙烯(20)，脫水山梨糖醇單油酸酯(Tween 80)，脫水山梨糖醇倍半油酸酯(Span 30)，聚氧化乙烯(160)，聚氧化丙烯(30)，乙二醇(Pluronic F68)或聚氧化乙烯氫化蓖麻油60。合適的pH控制劑包括鹽酸，氫氧化鈉等。合適的等滲壓劑包括葡萄糖，D-山梨糖醇或D-甘露醇。
考慮到特定的烷基取代的脂肪酸的物理和化學(xué)性質(zhì)，采用本發(fā)明各種形式的烷基取代的脂肪酸所進(jìn)行的給藥也可為組合物形式，該組合物含有藥學(xué)上可接受的載體，稀釋劑，賦形劑，懸浮劑，潤(rùn)滑劑，佐劑劑，媒介物，傳遞系統(tǒng)，乳化劑，崩解劑，吸收劑，防腐劑，表面活性劑，著色劑，調(diào)味劑或甜味劑。
對(duì)于這些目的，組合物的給藥方式可為口服，腸胃外給藥，通過(guò)植入儲(chǔ)器采用含有常規(guī)的無(wú)毒性的藥學(xué)上可接受的載體的劑量配方，通過(guò)吸入劑噴射，吸收，局部，直腸，鼻內(nèi)，口腔，陰道，心室內(nèi)給藥，或采用其它任何常規(guī)的劑型進(jìn)行給藥。本文中所用的術(shù)語(yǔ)腸胃外包括皮下，靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)，腹膜內(nèi)，鞘內(nèi)，心室內(nèi)，胸骨內(nèi)和顱內(nèi)注射或灌輸技術(shù)。
當(dāng)采用腸胃外給藥時(shí)，通常組合物為含有藥學(xué)上可接受載體的單位劑量的無(wú)菌注射形式(溶液，懸浮液或乳液)，優(yōu)選這種無(wú)菌注射形式與接受者的血液是等滲壓的。此類無(wú)菌注射形式包括無(wú)菌注射的水性或油質(zhì)的懸浮液。這些懸浮液可根據(jù)本領(lǐng)域公知的技術(shù)采用合適的分散或潤(rùn)濕劑和懸浮劑來(lái)制備。無(wú)菌注射的形式也可為存在于無(wú)毒的腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無(wú)菌注射溶液或懸浮液，例如為存在于1，3-丁二醇中的溶液。可接受的媒介物和溶劑有水，鹽水，Ringer’s溶液，右旋糖溶液，等滲壓的氯化鈉溶液以及Hanks’溶液。此外，通常采用無(wú)菌的不揮發(fā)性油作為溶劑或懸浮介質(zhì)。對(duì)于該目的，可采用任何刺激性小的不揮發(fā)性油包括合成的單-或二-甘油酯，玉米，棉子，花生和芝麻油。脂肪酸如油酸乙酯，豆蔻酸異丙基酯，以及油酸和其甘油酯衍生物，包括橄欖油和蓖麻油，特別是它們的聚氧乙烯化形式，都可用于制備注射劑。這些油狀溶液或懸浮液還可包含長(zhǎng)鏈醇稀釋劑或分散劑。
載體可包含小量的添加劑，如提高溶解性、等滲壓性和化學(xué)穩(wěn)定性的物質(zhì)，例如抗氧化劑、緩沖劑和防腐劑。
當(dāng)口服給藥時(shí)，通常采用本領(lǐng)域公知的常規(guī)設(shè)備和技術(shù)可將組合物制成單位劑量形式如片劑、扁囊劑、粉末、顆粒、小球、可咀嚼的錠劑、膠囊、液體、水懸浮液或溶劑，或類似的劑型。此類制劑典型地包括固體，半固體或液體載體。示例性的載體包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、礦物油、可可脂、可可油、藻酸鹽、黃芪膠、白明膠、糖漿、甲基纖維素、聚氧化乙烯脫水山梨糖醇單月桂酸酯、羥基苯甲酸甲基酯、羥基苯甲酸丙基酯、滑石、硬脂酸鎂等等。
通過(guò)使活性成分與一種或多種輔助成分一起經(jīng)過(guò)壓縮或模壓可制得片劑。通過(guò)在合適的機(jī)器中壓縮處于例如粉末或顆粒等自由流動(dòng)形式的活性成分即可制得壓縮片劑，其中的活性成分任選與粘結(jié)劑、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑、表面活性劑或分散劑相混合。通過(guò)在合適的機(jī)器中模壓粉末化的活性成分和用惰性液體稀釋劑潤(rùn)濕的合適載體的混合物，可制得模壓片劑。
以本發(fā)明各種形式的烷基取代的脂肪酸進(jìn)行的給藥也可利用控制釋放技術(shù)。烷基取代的脂肪酸也可作為緩釋藥物而給藥。為進(jìn)一步增加緩釋效果，組合物可與例如下列的其它成分一起制得植物油(如大豆油、芝麻油、茶油、蓖麻油、花生油、菜籽油)；中級(jí)脂肪酸三甘油酯；脂肪酸酯如油酸乙酯；聚硅氧烷衍生物；或者水溶性高分子量化合物如透明質(zhì)酸或其鹽(重均分子量ca.80,000到2,000,000)、羧甲基纖維素鈉(重均分子量ca.20,000到400,000)、羥丙基纖維素(在2％水溶液中的粘度為3到4,000cps)、動(dòng)脈粥樣膠原質(zhì)(atherocollagen)(重均分子量ca.300,000)、聚乙二醇(重均分子量ca.400到20,000)、氧化聚乙烯(重均分子量ca.100,000到9,000,000)、羥基丙基甲基纖維素(在1％水溶液中的粘度為4到100,000cSt)、甲基纖維素(在2％水溶液中的粘度為15到8,000cSt)、聚乙烯醇(粘度2到100cSt)，聚乙烯吡咯啉酮(重均分子量25,000到1,200,000)。
此外，烷基取代的脂肪酸可并入疏水性聚合物基質(zhì)中，在幾天的期間內(nèi)實(shí)現(xiàn)控制釋放。然后可將本發(fā)明的組合物澆注到固體植入片內(nèi)或外用片中，它能在長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)提供有效濃度的烷基取代的脂肪酸而無(wú)需頻繁地重復(fù)給藥。這種控制釋放膜是本領(lǐng)域公知的。通常用于該目的的其它聚合的例子包括非降解性醋酸乙烯-乙酸乙烯酯共聚物，可外用或內(nèi)用的可降解的乳酸-乙醇酸共聚物。某些水凝膠例如聚(羥乙基甲基丙烯酸)或聚(乙烯醇)也有用，但是和上述的其它聚合物釋放系統(tǒng)相比，這些水凝膠用在更短的釋放周期中。
載體可以是固體的生物可降解聚合物或生物可降解聚合物的混合物，這些物質(zhì)具有合適時(shí)間的釋放特征和釋放動(dòng)力學(xué)。組合物然后可以被澆注到固體植入片內(nèi)，用來(lái)在長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)提供有效濃度的烷基取代的脂肪酸而無(wú)需頻繁地重復(fù)給藥。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以采用公知的任何合適方式將烷基取代的脂肪酸并入可生物降解的聚合物或聚合物混合物中，形成具有生物可降解聚合物的均勻基質(zhì)，或可降烷基取代的脂肪酸以某種方式封入聚合物內(nèi)部，或可澆注進(jìn)入固體植入片內(nèi)。
還驚奇地發(fā)現(xiàn)了烷基取代的脂肪酸對(duì)人類靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的抑制能力在免疫抑制劑的存在下得到了提高。例如，在免疫親和蛋白結(jié)合的免疫抑制劑環(huán)孢菌素A和雷帕霉素的存在下，烷基取代的脂肪酸12-甲基十四烷酸對(duì)人類靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的抑制能力有所提高。
因此，采用本發(fā)明各種形式的烷基取代的脂肪酸進(jìn)行的給藥可進(jìn)一步包括采用免疫抑制劑進(jìn)行給藥。優(yōu)選地，免疫抑制劑是結(jié)合到免疫親和蛋白的試劑。更優(yōu)選地，免疫抑制劑是雷帕霉素。
在另一種優(yōu)選的方式中，本發(fā)明提供了一種抑制生物系統(tǒng)中的內(nèi)皮細(xì)胞增生的方法，該方法包括采用有效量的雷帕霉素和16-甲基十七烷酸，15-甲基十七烷酸，15-甲基十六烷酸，14-甲基十六烷酸，14-甲基十五烷酸，13-甲基十五烷酸，13-甲基十四烷酸，12-甲基十四烷酸，12-甲基十三烷酸，11-甲基十三烷酸，11-甲基十二烷酸，10-甲基十一烷酸，或這些烷基取代的脂肪酸的任何組合向生物系統(tǒng)進(jìn)行給藥。
在一種優(yōu)選的方式中，本發(fā)明提供了抑制生物系統(tǒng)中的內(nèi)皮細(xì)胞增生的方法，該方法包括采用有效量的環(huán)孢菌素A和16-甲基十七烷酸，15-甲基十七烷酸，15-甲基十六烷酸，14-甲基十六烷酸，14-甲基十五烷酸，13-甲基十五烷酸，13-甲基十四烷酸，12-甲基十四烷酸，12-甲基十三烷酸，11-甲基十三烷酸，11-甲基十二烷酸，10-甲基十一烷酸，或這些烷基取代的脂肪酸的任何組合向生物系統(tǒng)進(jìn)行給藥。
根據(jù)組合物中烷基取代的脂肪酸的含量、抑制內(nèi)皮增生的程度、患者的年齡和體重，以及給藥頻率，可適當(dāng)?shù)剡x擇有效量的免疫抑制劑。
在采用環(huán)孢菌素A進(jìn)行給藥的情況下，優(yōu)選該試劑的給藥使生物系統(tǒng)中所需作用位置處的化合物濃度在10nM到2μM。更優(yōu)選地，環(huán)孢菌素A的給藥使得生物系統(tǒng)中所需作用位置處的化合物濃度在10nM到100nM。
在采用雷帕霉素進(jìn)行給藥的情況下，優(yōu)選該試劑的給藥使生物系統(tǒng)中所需作用位置處的化合物濃度在0.1nM到30nM。更優(yōu)選地，雷帕霉素的給藥使得生物系統(tǒng)中所需的作用位置處化合物的濃度在0.1nM到10nM。
免疫抑制劑的給藥可在任何適當(dāng)?shù)臅r(shí)間進(jìn)行，與烷基取代的脂肪酸一起產(chǎn)生抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生這一效果。在人類或動(dòng)物受試體中，免疫抑制劑的給藥方式可為口服，腸胃外給藥，局部給藥，或通過(guò)任何其它合適的方式給藥，并相應(yīng)地必須考慮藥物的傳遞時(shí)間。免疫抑制劑的給藥與烷基取代的脂肪酸的給藥可在相同的時(shí)間下以相同的方式進(jìn)行?；蛘?，免疫抑制劑的給藥與烷基取代的脂肪酸的給藥分開(kāi)進(jìn)行，或在烷基取代的脂肪酸的給藥之前或之后的某一藥學(xué)上合適的時(shí)間進(jìn)行免疫抑制劑的給藥。
本發(fā)明各種形式的免疫抑制劑的給藥還可包括采用一種或多種藥學(xué)上可接受的添加劑，包括藥學(xué)上可接受的鹽，氨基酸，多肽，聚合物，溶劑，緩沖劑，賦形劑和填充劑。
可采用本領(lǐng)域公知的合適方法測(cè)定生物系統(tǒng)中對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增生的抑制情況，如細(xì)胞計(jì)數(shù)，3[H]胸腺嘧啶核苷結(jié)合，對(duì)細(xì)胞增生、新血管結(jié)構(gòu)的延遲出現(xiàn)、新血管結(jié)構(gòu)的減慢發(fā)展、新血管結(jié)構(gòu)的發(fā)生減少、血管生成依賴型疾病作用的嚴(yán)重性減慢或降低、血管生成生長(zhǎng)停止、或以前的血管生成生長(zhǎng)消退所進(jìn)行的免疫組織化學(xué)染色。
可通過(guò)用烷基取代的脂肪酸處理細(xì)胞并測(cè)定內(nèi)皮細(xì)胞增生的本領(lǐng)域公知的合適分析法，測(cè)定烷基取代的脂肪酸對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增生的抑制能力。例如，可在合適的培養(yǎng)基中對(duì)人類臍帶血管的內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，并通過(guò)例如氚化的胸腺嘧啶核苷吸收測(cè)定內(nèi)皮細(xì)胞增生。然后通過(guò)使內(nèi)皮細(xì)胞和試驗(yàn)脂肪酸相接觸，并測(cè)定在試驗(yàn)脂肪酸的特定濃度下發(fā)生的對(duì)增生的抑制程度，從而測(cè)得此類分析中烷基取代的脂肪酸(即試驗(yàn)的脂肪酸)對(duì)增生的抑制能力。
應(yīng)該理解的是，在測(cè)定試驗(yàn)脂肪酸對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增生的抑制能力時(shí)，應(yīng)采用與試驗(yàn)脂肪酸的特殊物理和化學(xué)性質(zhì)相適應(yīng)的濃度和形式來(lái)傳遞脂肪酸。
本發(fā)明還提供了抑制生物系統(tǒng)中血管生成的方法，該方法包括采用有效量的烷基取代脂肪酸向生物系統(tǒng)給藥的步驟，其中該烷基取代的脂肪酸能抑制血管生成，且該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
血管生成可以是發(fā)生在生物系統(tǒng)內(nèi)的任何血管生成。優(yōu)選地，血管生成發(fā)生在動(dòng)物或人體受試者中。最優(yōu)選地，血管生成發(fā)生于人身上。
優(yōu)選地，血管生成與不受控的或不希望的血管生成造成的或相關(guān)的人類或動(dòng)物的疾病或病癥有關(guān)。更優(yōu)選地，血管生成與人類或動(dòng)物的下列疾病或病癥中的一種或多種有關(guān)實(shí)體腫瘤的生長(zhǎng)；血管纖維瘤；角膜新血管形成；視網(wǎng)膜/脈絡(luò)膜新血管形成；動(dòng)靜脈畸形；關(guān)節(jié)炎包括風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、狼瘡和其它結(jié)締組織疾?。籓sler-Weber綜合癥；動(dòng)脈粥樣硬化斑；牛皮癬；化膿性肉芽腫；晶狀體后纖維增生；硬皮??；肉芽形成；血管瘤；沙眼；血友病性關(guān)節(jié)；血管粘連和肥厚性瘢痕；與慢性炎癥有關(guān)的疾病，包括結(jié)節(jié)病和發(fā)炎性腸病如Crohn’s病和潰瘍性淋巴管炎。更優(yōu)選地，血管生成與角膜新血管形成，視網(wǎng)膜新血管形成或脈絡(luò)膜新血管形成有關(guān)。最優(yōu)選地，血管生成與角膜新血管形成有關(guān)。
與角膜心血管形成有關(guān)的疾病包括糖尿病性視網(wǎng)膜病，早熟的視網(wǎng)膜病，角膜移植排斥反應(yīng)，新血管性青光眼和晶狀體后纖維增生，流行性角膜結(jié)膜炎，維生素A缺乏，過(guò)度佩戴隱形眼鏡，特應(yīng)性角膜炎，上角膜緣角膜炎，翼狀胬肉干燥性角膜炎，Sjogrens綜合癥，酒糟鼻，phylectenulosis，梅毒，分枝桿菌感染，脂質(zhì)變性，化學(xué)燒傷，細(xì)菌性潰瘍，真菌性潰瘍，單純皰疹感染，帶狀皰疹感染，原生動(dòng)物感染，Kaposi’s肉瘤，Mooren’s潰瘍，Terrien’s邊緣部退化，邊緣部角質(zhì)層分離，創(chuàng)傷，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)狼瘡，多動(dòng)脈炎，Wegener’s結(jié)節(jié)病，鞏膜炎，Stevens-Johnson病，類天皰瘡和輻射性角膜散光癥。
與視網(wǎng)膜/脈絡(luò)膜新血管形成有關(guān)的疾病包括糖尿病性視網(wǎng)膜病，黃斑變性，鐮刀形細(xì)胞貧血癥，肉瘤，梅毒，彈性假黃色瘤，Paget’s病，靜脈阻塞，動(dòng)脈阻塞，頸動(dòng)脈梗阻性疾病，慢性葡萄膜炎/玻璃體炎，分枝桿菌感染，Lyme’s病，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，早熟視網(wǎng)膜病，Eales’病，Behcet’s病，導(dǎo)致視網(wǎng)膜病或脈絡(luò)膜炎的感染，推測(cè)的眼組織胞漿菌病，Best’s病，近視，視窩，Stargardt’s病，睫狀體平坦部炎，慢性視網(wǎng)膜剝離，高粘稠滯度綜合癥，弓形體病，創(chuàng)傷和激光手術(shù)后并發(fā)癥。其它的疾病包括但不限于與虹膜發(fā)紅相關(guān)的疾病，以及由維管組織或纖維組織的異常增生導(dǎo)致的包括所有形式的增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的疾病。
生物系統(tǒng)是包括有增生能力的內(nèi)皮細(xì)胞的任何系統(tǒng)。優(yōu)選地，生物系統(tǒng)是發(fā)生血管生成的人類或動(dòng)物受試體。更優(yōu)選地，生物系統(tǒng)是由不希望的或不受控的血管生成引起的疾病或病癥有關(guān)的人類或動(dòng)物受試體。最優(yōu)選地，生物系統(tǒng)是人類或動(dòng)物受試體，其患有與不希望的或不受控的血管生成相關(guān)的下列疾病中的一種或多種與實(shí)體腫瘤有關(guān)的血管生成；血管纖維瘤；角膜新血管形成；視網(wǎng)膜/脈絡(luò)膜新血管形成；動(dòng)靜脈畸形；關(guān)節(jié)炎包括風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、狼瘡和其它結(jié)締組織疾病；Osler-Weber綜合癥；動(dòng)脈粥樣硬化斑；牛皮癬；化膿性肉芽腫；晶狀體后纖維增生；硬皮?。蝗庋啃纬?；血管瘤；沙眼；血友病性關(guān)節(jié)；血管粘連和肥厚性瘢痕；與慢性炎癥有關(guān)的疾病，包括結(jié)節(jié)病和發(fā)炎性腸病如Crohn’s病和潰瘍性淋巴管炎。
只要烷基取代的脂肪酸的量和形式通常表現(xiàn)出藥學(xué)上有用的效果或治療效果，則用于給藥的有效量的烷基取代的脂肪酸不受特別限制。
在這一方面，根據(jù)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增生進(jìn)行抑制的程度、患者的年齡和體重、給藥的頻率和其它活性試劑的存在情況，可適當(dāng)?shù)剡x擇有效量的烷基取代的脂肪酸。
優(yōu)選地，用于給藥的有效量的烷基取代的脂肪酸導(dǎo)致在生物系統(tǒng)的所需作用位置處的化合物濃度的范圍落在50nM到5mM之間。更優(yōu)選地，用于給藥的有效量的烷基取代的脂肪酸導(dǎo)致在生物系統(tǒng)中所需作用的位置處化合物濃度的范圍落在50nM到1mM之間。最優(yōu)選地，用于給藥的有效量的烷基取代的脂肪酸導(dǎo)致在生物系統(tǒng)的所需作用位置處的化合物濃度的范圍落在25μM到500μM之間。
在采用烷基取代的脂肪酸進(jìn)行局部給藥的情況下，局部施用于所需位置的烷基取代的脂肪酸的有效量范圍為25nmol到200μmol之間。
采用烷基取代的脂肪酸進(jìn)行給藥可在適于產(chǎn)生抑制生物系統(tǒng)中血管生成這一效果的任何時(shí)間內(nèi)進(jìn)行。在人體或動(dòng)物受試體中，烷基取代的脂肪酸可通過(guò)口服，腸胃外，局部或任何其它的合適手段進(jìn)行給藥，并相應(yīng)地必須考慮藥物的傳輸時(shí)間。
采用烷基取代的脂肪酸進(jìn)行給藥可進(jìn)一步包括免疫抑制劑的給藥。優(yōu)選地，免疫抑制劑是與免疫親和蛋白相結(jié)合的試劑。更優(yōu)選地，免疫抑制劑為環(huán)孢菌素A，雷帕霉素或FK506。最優(yōu)選地，免疫抑制劑為雷帕霉素。
在一種優(yōu)選的方式中，本發(fā)明提供了抑制生物系統(tǒng)中血管生成的方法，該方法包括采用有效量的雷帕霉素和12-甲基十四烷酸，13-甲基十四烷酸，14-甲基十五烷酸，17-甲基十八烷酸，16-甲基十七烷酸，10-甲基十二烷酸，或這些脂肪酸的任何組合向生物系統(tǒng)進(jìn)行給藥的步驟。
在另一種優(yōu)選的方式中，本發(fā)明提供了抑制生物系統(tǒng)中血管生成的方法，該方法包括采用有效量的環(huán)孢菌素A和12-甲基十四烷酸，13-甲基十四烷酸，14-甲基十五烷酸，17-甲基十八烷酸，16-甲基十七烷酸，10-甲基十二烷酸，或這些脂肪酸的任何組合向生物系統(tǒng)進(jìn)行給藥的步驟。
在這一方面，可根據(jù)含有免疫抑制劑和烷基取代的脂肪酸的組合物的量、抑制血管生成的程度、患者的年齡和體重、以及給藥頻率，來(lái)適當(dāng)選擇有效量的免疫抑制劑。
在采用環(huán)孢菌素A進(jìn)行給藥的情況下，優(yōu)選該試劑的給藥使生物系統(tǒng)中所需作用位置處的化合物濃度范圍為10nM到2μM。更優(yōu)選地，環(huán)孢菌素A的給藥使得生物系統(tǒng)中所需的作用位置處化合物的濃度的范圍為10nM到100nM。
在采用雷帕霉素進(jìn)行給藥的情況下，優(yōu)選該試劑的給藥使生物系統(tǒng)中所需的作用位置處化合物的濃度的范圍為0.1nM到30nM。更優(yōu)選地，雷帕霉素的給藥使得生物系統(tǒng)中所需的作用位置處化合物的濃度的范圍為0.1nM到10nM。
免疫抑制劑的給藥可在適于與烷基取代的脂肪酸一起產(chǎn)生抑制血管生成這一效果的任何時(shí)間內(nèi)進(jìn)行。在人類或動(dòng)物患者中，免疫抑制劑的給藥方式可為口服，腸胃外給藥，局部給藥，或通過(guò)任何其它合適的方式給藥，并相應(yīng)地必須考慮藥物的傳輸時(shí)間。免疫抑制劑的給藥與烷基取代的脂肪酸的給藥可在相同的時(shí)間、以相同的方式進(jìn)行?；蛘撸庖咭种苿┑慕o藥與烷基取代的脂肪酸的給藥分開(kāi)進(jìn)行，免疫抑制劑的給藥可以在烷基取代的脂肪酸的給藥之前或之后的藥學(xué)上合適的時(shí)間進(jìn)行。
本發(fā)明各種形式的免疫抑制劑的給藥還可包括采用一種或多種藥學(xué)上可接受的添加劑，包括藥學(xué)上可接受的鹽，氨基酸，多肽，聚合物，溶劑，緩沖劑，賦形劑和填充劑。
采用烷基取代的脂肪酸進(jìn)行給藥可進(jìn)一步包括抗血管生成試劑的給藥，該抗血管生成試劑包括涵蓋了人源化和嵌合抗體的抗-VEGF抗體，抗-VEGF適配體和反義寡核苷酸，血管生成抑制素，內(nèi)皮細(xì)胞抑制素，干擾素，白細(xì)胞介素1，白細(xì)胞介素12，視黃酸，以及金屬蛋白酶-1和-2的組織抑制劑。
可通過(guò)本領(lǐng)域公知的合適方法來(lái)測(cè)定生物系統(tǒng)中血管生成的抑制，例如新血管結(jié)構(gòu)的延遲出現(xiàn)、新血管結(jié)構(gòu)的減慢發(fā)展、新血管結(jié)構(gòu)的發(fā)生減少、血管生成依賴型疾病作用的嚴(yán)重性減慢或降低、血管生成生長(zhǎng)停止、或以前的血管生成生長(zhǎng)消退。
可通過(guò)本領(lǐng)域公知的測(cè)定血管生成的任何合適的分析法測(cè)定烷基取代的脂肪酸對(duì)血管生成的抑制能力。例如，可進(jìn)行雞胚絨毛尿囊膜(CAM)試驗(yàn)或角膜新血管形成模型。所測(cè)試的烷基取代的脂肪酸對(duì)血管生成的抑制能力可通過(guò)雞胚胎中血管生成的抑制程度或?qū)悄ば卵苄纬赡Ｐ椭醒苌傻囊种瞥潭葋?lái)測(cè)定。
例如，烷基取代的脂肪酸(即測(cè)試化合物)在雞胚絨毛尿囊膜中抑制血管生成的測(cè)試實(shí)驗(yàn)可以采用將雞胚絨毛尿囊膜與施用到甲基纖維素盤(pán)上的烷基取代的脂肪酸相接觸。在角膜新血管形成的模型中，包含烷基取代的脂肪酸的局部給藥組合物被施用到角膜上，角膜經(jīng)刮擦后用銅綠假單胞菌誘導(dǎo)新血管形成。
研究血管生成的另一種方法是將各種人造海綿體(如聚乙烯醇，白明膠)皮下移植到動(dòng)物中。可將被測(cè)試的烷基取代的脂肪酸直接注射到位于海綿體中央的那些海綿體中。通過(guò)組織學(xué)、形態(tài)測(cè)定學(xué)(血管密度)、生物化學(xué)(血紅蛋白含量)的方法，或采用放射性示蹤物測(cè)定海綿體中脈管系統(tǒng)中的血液流速，來(lái)測(cè)定海綿體的新血管形成。
也已經(jīng)開(kāi)發(fā)出許多動(dòng)物腫瘤模型來(lái)測(cè)試試驗(yàn)化合物的抗血管生成活性。在許多情況下，腫瘤細(xì)胞進(jìn)行皮下移植，在規(guī)則的時(shí)間間隔處測(cè)定腫瘤的尺寸。通常采用的腫瘤細(xì)胞包括C6大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤，B16BL6黑素瘤，LLC以及Walker256癌瘤。
應(yīng)該理解的是，在測(cè)定試驗(yàn)脂肪酸對(duì)血管生成的抑制能力的過(guò)程中，采用與試驗(yàn)脂肪酸的特定物理和化學(xué)性質(zhì)相適應(yīng)的濃度和形式傳遞試驗(yàn)脂肪酸。
在一種優(yōu)選的方式中，本發(fā)明還提供了抑制角膜的新血管形成的方法，該方法包括采用有效量的烷基取代的脂肪酸向角膜給藥的步驟，其中該烷基取代的脂肪酸能抑制角膜的新血管形成，且該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
角膜的新血管形成的例子包括與佩戴隱形眼鏡、角膜受傷、燒傷、角膜的細(xì)菌性感染、病毒性感染、原生動(dòng)物感染、免疫性疾病以及變性疾病有關(guān)的新血管形成，其中角膜的細(xì)菌性感染例如為由衣原體、葡萄球菌或假單胞菌屬(如銅綠假單胞菌)引起的感染，病毒性感染例如為單純皰疹和帶狀皰疹引起的感染。
可通過(guò)本領(lǐng)域公知的合適方法用烷基取代的脂肪酸進(jìn)行給藥，包括向角膜進(jìn)行局部給藥。例如，可將烷基取代的脂肪酸制成處于未防腐的石蠟和羊毛脂眼藥膏基質(zhì)中的乳液，以及局部施用到角膜上的組合物。在這種情況下，局部施用的有效量烷基取代的脂肪酸的優(yōu)選范圍在25nmol到200μmol之間。
在另一種優(yōu)選的方式中，本發(fā)明提供了抑制角膜的新血管形成的方法，該方法包括采用有效量的12-甲基十四烷酸，13-甲基十四烷酸，14-甲基十五烷酸，17-甲基十八烷酸，16-甲基十七烷酸，10-甲基十二烷酸，或這些脂肪酸的任何組合向角膜進(jìn)行給藥的步驟。
本發(fā)明還提供了減少對(duì)生物系統(tǒng)給藥劑量的方法，使得對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增生的抑制達(dá)到所需水平，該方法包括采用有效量的烷基取代的脂肪酸向生物系統(tǒng)進(jìn)行給藥的步驟，其中該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
在這一方面，也令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，通過(guò)采用烷基取代的脂肪酸進(jìn)行給藥，可以減少向生物系統(tǒng)給藥以抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生的其它試劑的用量。例如，在12-甲基十四烷酸的存在下，按照所需水平抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生所需要的環(huán)孢菌素A或雷帕霉素的用量減少了。
內(nèi)皮細(xì)胞是任何內(nèi)皮細(xì)胞，包括對(duì)一種或多種生成血管的刺激發(fā)生反應(yīng)而進(jìn)行增生的內(nèi)皮細(xì)胞，或者是對(duì)一種或多種生成血管的刺激發(fā)生反應(yīng)而具有增生能力的內(nèi)皮細(xì)胞。優(yōu)選地，內(nèi)皮細(xì)胞是人類或動(dòng)物的內(nèi)皮細(xì)胞。最優(yōu)選內(nèi)皮細(xì)胞是人類的內(nèi)皮細(xì)胞。
優(yōu)選地，內(nèi)皮細(xì)胞的增生與不受控或不希望的血管生成相關(guān)的人類或動(dòng)物疾病或病癥有關(guān)。更優(yōu)選地，內(nèi)皮細(xì)胞的增生與人類或動(dòng)物的下列疾病或病癥中的一種或多種有關(guān)與實(shí)體腫瘤有關(guān)的血管生成；血管纖維瘤；角膜新血管形成；視網(wǎng)膜/脈絡(luò)膜新血管形成；動(dòng)靜脈畸形；關(guān)節(jié)炎，包括風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，狼瘡和其它結(jié)締組織疾??；Osler-Weber綜合癥；動(dòng)脈粥樣硬化斑；牛皮癬；化膿性肉芽腫；晶狀體后纖維增生；硬皮??；肉芽形成；血管瘤；沙眼；血友病性關(guān)節(jié)；血管粘連和肥厚性瘢痕；與慢性炎癥有關(guān)的疾病，包括結(jié)節(jié)病和發(fā)炎性腸病如Crohn’s病和潰瘍性淋巴管炎。更優(yōu)選地，血管生成與角膜新血管形成，視網(wǎng)膜新血管形成或脈絡(luò)膜新血管形成有關(guān)。最優(yōu)選地，血管生成與角膜新血管形成有關(guān)。
生物系統(tǒng)是包括有增生能力的內(nèi)皮細(xì)胞的任何系統(tǒng)，或者是包括正在增生的內(nèi)皮細(xì)胞的任何系統(tǒng)。優(yōu)選地，生物系統(tǒng)是其中的內(nèi)皮細(xì)胞具有增生能力、或內(nèi)皮細(xì)胞正在發(fā)生增生的人類或動(dòng)物受試體。更優(yōu)選地，生物系統(tǒng)是人類或動(dòng)物受試體，其中的內(nèi)皮細(xì)胞增生和不希望的或不受控的血管生成引起的疾病或病癥有關(guān)。更優(yōu)選地，生物系統(tǒng)是患有涉及內(nèi)皮細(xì)胞增生的疾病或病癥的人類或動(dòng)物受試體。最優(yōu)選地，生物系統(tǒng)是人類或動(dòng)物受試體，其患有與內(nèi)皮細(xì)胞增生有關(guān)的下列疾病中的一種或多種與實(shí)體腫瘤有關(guān)的血管生成；血管纖維瘤；角膜新血管形成；視網(wǎng)膜/脈絡(luò)膜新血管形成；動(dòng)靜脈畸形；關(guān)節(jié)炎，包括風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、狼瘡和其它結(jié)締組織疾??；Osler-Weber綜合癥；動(dòng)脈粥樣硬化斑；牛皮癬；化膿性肉芽腫；晶狀體后纖維增生；硬皮?。蝗庋啃纬?；血管瘤；沙眼；血友病性關(guān)節(jié)；血管粘連和肥厚性瘢痕；與慢性炎癥有關(guān)的疾病，包括結(jié)節(jié)病和發(fā)炎性腸病如Crohn’s病和潰瘍性淋巴管炎。
只要烷基取代的脂肪酸的量和形式通常能達(dá)到藥學(xué)上有用的效果，能減少對(duì)生物系統(tǒng)中內(nèi)皮細(xì)胞增生進(jìn)行所需水平的抑制而必須的試劑的用量，則烷基取代的脂肪酸的有效給藥量不受特別限制。
優(yōu)選地，用于給藥的有效量的烷基取代的脂肪酸導(dǎo)致在生物系統(tǒng)中所需作用的位置處化合物濃度的范圍落在50nM到5mM之間。更優(yōu)選地，用于給藥的有效量的烷基取代的脂肪酸導(dǎo)致在生物系統(tǒng)中所需作用的位置處化合物濃度的范圍落在50nM到1mM之間。最優(yōu)選地，用于給藥的有效量的烷基取代的脂肪酸導(dǎo)致在生物系統(tǒng)中所需作用的位置處化合物濃度的范圍落在25μM到500μM之間。
烷基取代的脂肪酸的給藥可在任何適當(dāng)?shù)臅r(shí)間內(nèi)進(jìn)行，用來(lái)降低在生物系統(tǒng)上抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生至所需水平所必需的試劑的用量。。在人和動(dòng)物受試體中，烷基取代的脂肪酸可以口服給藥，腸胃外給藥，局部給藥，或通過(guò)任何其它合適的方式給藥，因此需要考慮藥物的傳輸時(shí)間。
能抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生的試劑包括雷帕霉素，環(huán)孢菌素A，RTNP-470(煙曲霉素衍生物)，異三十烷胺(squalamine)，combretastatin，內(nèi)皮細(xì)胞抑制素(endostatin)，青霉胺，法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，L-778，123(Merck)，SCH66336(Schering-Plough)，以及R115777(Janssen)。優(yōu)選的試劑為雷帕霉素或環(huán)孢菌素A。最優(yōu)選的試劑為雷帕霉素。
例如，1nM雷帕霉素在24小時(shí)后對(duì)體外HUVECs的增生的抑制率接近80％。只要也存在100μM的12-甲基十四烷酸的情況下，采用僅為0.1nM雷帕霉素對(duì)這些細(xì)胞也能達(dá)到相同水平的增生抑制率(87％)。因此烷基取代的脂肪酸的存在減少了對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增生進(jìn)行所需水平的抑制而必須的用量。
在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了減少雷帕霉素或環(huán)孢菌素A向生物系統(tǒng)給藥的用量，而能對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增生進(jìn)行所需水平的抑制的方法，該方法包括采用有效量的16-甲基十七烷酸、15-甲基十七烷酸、15-甲基十六烷酸、14-甲基十六烷酸、14-甲基十五烷酸、13-甲基十五烷酸、13-甲基十四烷酸、12-甲基十四烷酸、12-甲基十三烷酸、11-甲基十三烷酸、11-甲基十二烷酸、10-甲基十一烷酸，或這些脂肪酸的任何組合向生物系統(tǒng)進(jìn)行給藥的步驟。
在這一方面，達(dá)到對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增生的所需抑制水平而必須的試劑的用量可以采用本發(fā)明公知的方法經(jīng)驗(yàn)性地確定，且該用量將取決于對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增生的所需抑制水平、受試體的年齡和體重，以及給藥頻率。
在采用雷帕霉素進(jìn)行給藥的情況下，優(yōu)選該試劑的給藥使生物系統(tǒng)中所需的作用位置處化合物的濃度的范圍為0.1nM到30nM。更優(yōu)選地，雷帕霉素的給藥使得生物系統(tǒng)中所需的作用位置處化合物的濃度的范圍為0.1nM到10nM。
為了抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增生達(dá)到所需的水平，所必需的藥劑可以采用合適的形式給藥，并且在合適的時(shí)間下對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增生的抑制達(dá)到所需的水平。
烷基取代的脂肪酸的給藥方式可為口服，腸胃外給藥，局部給藥，或通過(guò)任何其它合適的方式給藥，并相應(yīng)地必須考慮藥物的傳遞時(shí)間。烷基取代的脂肪酸的給藥與能抑制生物系統(tǒng)中內(nèi)皮細(xì)胞增生的試劑的給藥可在相同的時(shí)間下、以相同的方式進(jìn)行?；蛘?，烷基取代的脂肪酸的給藥與能抑制生物系統(tǒng)中內(nèi)皮細(xì)胞增生的試劑的給藥分開(kāi)進(jìn)行，在該試劑的給藥之前或之后的藥學(xué)上合適的時(shí)間進(jìn)行烷基取代的脂肪酸給藥。
本發(fā)明還提供了一種減少抗血管生成試劑用量的方法，在向生物系統(tǒng)給藥后能對(duì)血管生成進(jìn)行所需水平的抑制，該方法包括向生物系統(tǒng)施用有效量的烷基取代的脂肪酸，其中該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
血管生成可以是生物系統(tǒng)中任何血管生成。優(yōu)選地，血管生成發(fā)生于動(dòng)物或人類受試體中。最優(yōu)選地，血管生成發(fā)生于人類受試體中。
優(yōu)選地，血管生成與由不受控或不希望的血管生成造成的，或與不受控或不希望的血管生成相關(guān)的人類或動(dòng)物的疾病或病癥有關(guān)。更優(yōu)選地，血管生成與人類或動(dòng)物的下列疾病或病癥中的一種或多種有關(guān)實(shí)體腫瘤的生長(zhǎng)；血管纖維瘤；角膜新血管形成；視網(wǎng)膜/脈絡(luò)膜新血管形成；動(dòng)靜脈畸形；關(guān)節(jié)炎，包括風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、狼瘡和其它結(jié)締組織疾??；Osler-Weber綜合癥；動(dòng)脈粥樣硬化斑；牛皮癬；化膿性肉芽腫；晶狀體后纖維增生；硬皮??；肉芽形成；血管瘤；沙眼；血友病性關(guān)節(jié)；血管粘連和肥厚性瘢痕；與慢性炎癥有關(guān)的疾病，包括結(jié)節(jié)病和發(fā)炎性腸病如Crohn’s病和潰瘍性淋巴管炎。更優(yōu)選地，血管生成與角膜新血管形成，視網(wǎng)膜新血管形成或脈絡(luò)膜新血管形成有關(guān)。最優(yōu)選地，血管生成與角膜新血管形成有關(guān)。
生物系統(tǒng)可以是其中血管生成正在發(fā)生或者血管生成可能發(fā)生的任何生物系統(tǒng)。優(yōu)選地，生物系統(tǒng)是其中血管生成正在發(fā)生的人類或動(dòng)物受試體。更優(yōu)選地，生物系統(tǒng)是人類或動(dòng)物受試體，它們的血管生成與由不希望的血管生成造成的疾病或病癥有關(guān)。最優(yōu)選地，生物系統(tǒng)是人類或動(dòng)物受試體，它們患有與不希望的或不可控的血管生成有關(guān)的下列疾病或病癥中的一種或多種與實(shí)體腫瘤有關(guān)的血管生成；血管纖維瘤；角膜新血管形成；視網(wǎng)膜/脈絡(luò)膜新血管形成；動(dòng)靜脈畸形；關(guān)節(jié)炎，包括風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、狼瘡和其它結(jié)締組織疾??；Osler-Weber綜合癥；動(dòng)脈粥樣硬化斑；牛皮癬；化膿性肉芽腫；晶狀體后纖維增生；硬皮?。蝗庋啃纬桑谎芰?；沙眼；血友病性關(guān)節(jié)；血管粘連和肥厚性瘢痕；與慢性炎癥有關(guān)的疾病，包括結(jié)節(jié)病和發(fā)炎性腸病如Crohn’s病和潰瘍性淋巴管炎。
只要烷基取代的脂肪酸的量和形式通常表現(xiàn)出藥學(xué)上有用的效果，能減少生物系統(tǒng)中抑制血管生成至所需水平所必須的試劑的用量，則用于給藥的有效量的烷基取代的脂肪酸不受特別限制。
優(yōu)選地，用于給藥的有效量的烷基取代的脂肪酸導(dǎo)致在生物系統(tǒng)中所需作用位置處的化合物濃度的范圍落在50nM到5mM之間。更優(yōu)選地，用于給藥的有效量的烷基取代的脂肪酸導(dǎo)致在生物系統(tǒng)中所需作用的位置處化合物濃度的范圍落在50nM到1mM之間。最優(yōu)選地，用于給藥的有效量的烷基取代的脂肪酸導(dǎo)致在生物系統(tǒng)中所需作用的位置處化合物濃度的范圍落在25μM到500μM之間。
烷基取代的脂肪酸的給藥可在任何合適的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行，用來(lái)產(chǎn)生減少在生物系統(tǒng)中抑制血管生成至所需水平而必須的試劑用量。在人類或動(dòng)物受試體中，烷基取代的脂肪酸可為口服，腸胃外給藥，局部給藥或通過(guò)任何其它的合適手段給藥，并相應(yīng)地必須考慮藥物的傳遞時(shí)間。
抗血管生成試劑的例子包括涵蓋了人源化和嵌合抗體的抗-VEGF抗體，抗-VEGF適配體和反義寡核苷酸，血管生成抑制素，內(nèi)皮細(xì)胞抑制素，干擾素，白細(xì)胞介素1，白細(xì)胞介素12，視黃酸，以及金屬蛋白酶-1和-2的組織抑制劑。
在這一方面，達(dá)到抑制血管生成至所需水平而必須的抗血管生成試劑的用量可以采用本發(fā)明公知的經(jīng)驗(yàn)性方法確定，且該用量將取決于對(duì)血管生成的所需抑制水平，受試體的年齡和體重，以及給藥頻率。
抗血管生成試劑可采用合適的形式和合適的時(shí)間給藥，將血管生成抑制到所需水平。
烷基取代的脂肪酸的給藥方式可為口服，腸胃外給藥，局部給藥，或通過(guò)任何其它合適的方式給藥，并相應(yīng)地必須考慮藥物的傳遞時(shí)間。烷基取代的脂肪酸的給藥與抗血管生成試劑的給藥可在相同的時(shí)間下以相同的方式進(jìn)行?；蛘?，烷基取代的脂肪酸的給藥與抗血管生成試劑的給藥分開(kāi)進(jìn)行，在該試劑的給藥之前或之后的某一藥學(xué)上合適的時(shí)間進(jìn)行烷基取代的脂肪酸的給藥。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了包括烷基取代的脂肪酸的藥物組合物，其中該烷基取代的脂肪酸能抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生和/或血管生成，且該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽
其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
優(yōu)選地，本發(fā)明的烷基取代的脂肪酸為18-甲基十九烷酸，17-甲基十八烷酸，10-甲基十八烷酸，16-甲基十七烷酸，15-甲基十七烷酸，15-甲基十六烷酸，14-甲基十六烷酸，14-甲基十五烷酸，13-甲基十五烷酸，13-甲基十四烷酸，12-甲基十四烷酸，12-甲基十三烷酸，11-甲基十三烷酸，11-甲基十二烷酸，10-甲基十二烷酸，或這些烷基取代的脂肪酸的任何組合。
只要在采用組合物向受試體給藥時(shí)，烷基取代的脂肪酸的量通常能表現(xiàn)出藥學(xué)上治療的或有用的效果，則藥物組合物中所采用的烷基取代的脂肪酸的量不受特別限制。
根據(jù)對(duì)血管生成或內(nèi)皮細(xì)胞增生進(jìn)行抑制的程度、患者的年齡和體重、以及給藥頻率，可適當(dāng)?shù)剡x擇藥物組合物中有效量的烷基取代的脂肪酸。
優(yōu)選地，當(dāng)采用組合物向受試體給藥時(shí)，藥物組合物中烷基取代的脂肪酸的用量需要滿足在所需作用的位置處，化合物濃度的范圍落在50nM到5mM之間。更優(yōu)選地，藥物組合物中烷基取代的脂肪酸的用量需要滿足在所需作用的位置處，化合物濃度的范圍落在50nM到1mM之間。最優(yōu)選地，藥物組合物中烷基取代的脂肪酸的用量需要滿足在所需作用的位置處，化合物濃度的范圍落在25μM到500μM之間。
在采用烷基取代的脂肪酸進(jìn)行局部給藥的情況下，局部施用于所需位置的烷基取代的脂肪酸的有效量范圍為25nmol到200μmol之間。
考慮到烷基取代的脂肪酸的特定物理和化學(xué)性質(zhì)，藥物組合物也可包括采用一種或多種藥學(xué)上可接受的添加劑，包括藥學(xué)上可接受的鹽，氨基酸，多肽，聚合物，溶劑，緩沖劑，賦形劑和填充劑。
例如，烷基取代的脂肪酸可被制備成為各種下列形式的藥物制劑如水溶液，油狀制劑，脂肪狀的乳液，乳液，凝膠等等，且這些制劑可采用肌肉或皮下注射或注射到器官而進(jìn)行給藥，或作為通過(guò)鼻腔、直腸、子宮、陰道、肺部等的轉(zhuǎn)化粘液質(zhì)制劑進(jìn)行給藥。組合物的給藥形式可以為口服制劑(例子有固體制劑如片劑，膠囊，顆粒或粉末；液體制劑如糖漿，乳液或懸浮液)。含有烷基取代的脂肪酸的組合物也可包含防腐劑，穩(wěn)定劑，分散劑，pH控制劑或等滲劑。合適的防腐劑的例子有甘油，丙二醇，苯酚或苯甲醇。合適的穩(wěn)定劑的例子有右旋糖苷，白明膠，α-生育酚乙酸酯或α-硫代甘油。合適的分散劑的例子有聚氧化乙烯(20)，脫水山梨糖醇單油酸酯(Tween 80)，脫水山梨糖醇倍半油酸酯(Span 30)，聚氧化乙烯(160)，聚氧化丙烯(30)，乙二醇(PluronicF68)或聚氧化乙烯氫化蓖麻油60。合適的pH控制劑包括鹽酸，氫氧化鈉等。合適的等滲壓劑包括葡萄糖，D-山梨糖醇和D-甘露醇。
當(dāng)口服給藥時(shí)，采用本領(lǐng)域公知的常規(guī)設(shè)備和技術(shù)可通常將組合物制成單位劑量形式如片劑、扁囊劑、粉末、顆粒、小球、可咀嚼的錠劑、膠囊、液體、水懸浮液或溶液，或類似的劑型。此類制劑典型地包括固體，半固體或液體載體。示例性的載體包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、礦物油、可可脂、可可油、藻酸鹽、黃芪膠、白明膠、糖漿、甲基纖維素、聚氧化乙烯脫水山梨糖醇單月桂酸酯、羥基苯甲酸甲基酯、羥基苯甲酸丙基酯、滑石、硬脂酸鎂等等。
通過(guò)使活性成分與一種或多種輔助成分一起經(jīng)過(guò)壓縮或模壓可制得片劑。通過(guò)在合適的機(jī)器中壓縮處于例如粉末或顆粒等自由流動(dòng)形式的活性成分即可制得壓縮片劑，其中的活性成分任選與粘結(jié)劑、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑、表面活性劑或分散劑相混合。通過(guò)在合適的機(jī)器中模壓粉末化的活性成分和用惰性液體稀釋劑潤(rùn)濕的合適載體的混合物，可制得模壓片劑。
以本發(fā)明各種形式的烷基取代的脂肪酸進(jìn)行的給藥也可利用控制釋放技術(shù)。烷基取代的脂肪酸也可作為緩釋藥物而給藥。為進(jìn)一步增加緩釋效果，組合物可與例如下列的其它成分一起制得植物油(如大豆油、芝麻油、茶油、蓖麻油、花生油、菜籽油)；中級(jí)脂肪酸三甘油酯；脂肪酸酯如油酸乙酯；聚硅氧烷衍生物；或者水溶性高分子量化合物如透明質(zhì)酸或其鹽(重均分子量ca.80,000到2,000,000)、羧甲基纖維素鈉(重均分子量ca.20,000到400,000)、羥丙基纖維素(在2％水溶液中的粘度為3到4,000cps)、動(dòng)脈粥樣膠原質(zhì)(atherocollagen)(重均分子量ca.300,000)、聚乙二醇(重均分子量ca.400到20,000)、氧化聚乙烯(重均分子量ca.100,000到9,000,000)、羥基丙基甲基纖維素(在1％水溶液中的粘度為4到100,000 cSt)、甲基纖維素(在2％水溶液中的粘度為15到8,000cSt)、聚乙烯醇(粘度2到100cSt)，聚乙烯吡咯啉酮(重均分子量25,000到1,200,000)。
或者，烷基取代的脂肪酸可并入疏水性聚合物基質(zhì)中，在幾天的時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)控制釋放。然后可將本發(fā)明的組合物澆注到固體植入片內(nèi)或外部施用的貼片，它們適于在更長(zhǎng)的時(shí)間段內(nèi)提供有效濃度的烷基取代的脂肪酸而無(wú)需頻繁地重復(fù)定量給藥。此類控制釋放的膜是本領(lǐng)域公知的。其它通常用于這一目的的聚合物的例子包括不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯共聚物，可外用或內(nèi)用的可降解乳酸-羥基乙酸共聚物。也可采用某些水凝膠如聚(羥乙基甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇)，但與例如上述的其它聚合物釋放系統(tǒng)相比，它們的釋放周期更短。
載體可為固體的生物可降解聚合物或生物可降解聚合物的混合物，它們具有合適的時(shí)間釋放特性和釋放動(dòng)力學(xué)。然后將組合物澆注入固體植入片內(nèi)，該固體植入片適于在延長(zhǎng)的時(shí)間段內(nèi)提供有效濃度的烷基取代的脂肪酸而無(wú)需頻繁地重復(fù)定量給藥?？梢员绢I(lǐng)域技術(shù)人員公知的任何合適方式將烷基取代的脂肪酸并入生物可降解聚合物或聚合物混合物中，或可將烷基取代的脂肪酸以某種方式封入聚合物內(nèi)部，或可澆注進(jìn)入固體植入片內(nèi)。
在另一種方式中，本發(fā)明提供了烷基取代的脂肪酸在制備用于抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生和/或抑制血管生成的藥物中的應(yīng)用，該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
該藥物組合物可進(jìn)一步包括免疫抑制劑。優(yōu)選地，免疫抑制劑是與免疫親和蛋白結(jié)合的試劑。更優(yōu)選地，免疫抑制劑是環(huán)孢菌素A，雷帕霉素或FK506。最優(yōu)選地，免疫抑制劑是雷帕霉素。
因此，在一種優(yōu)選的方式中，本發(fā)明也提供了包括烷基取代的脂肪酸和免疫抑制劑的藥物組合物，該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
根據(jù)包含有烷基取代的脂肪酸和免疫抑制劑的藥物組合物的用量、對(duì)血管生成的抑制程度、患者的年齡和體重、以及給藥頻率，可適當(dāng)?shù)剡x擇組合物中免疫抑制劑的劑量。
在采用含有環(huán)孢菌素A的藥物組合物的情況下，優(yōu)選當(dāng)向患者給藥時(shí)，組合物中的該試劑使得在作用位置處該試劑的濃度范圍為10nM到2μM之間。更優(yōu)選地，當(dāng)向患者給藥時(shí)，組合物中的該試劑使得在作用位置處該試劑的濃度范圍為10nM到100nM之間。
在采用含有雷帕霉素的藥物組合物的情況下，優(yōu)選當(dāng)向患者給藥時(shí)，組合物中的該試劑使得在作用位置處該試劑的濃度范圍為0.1nM到30nM之間。更優(yōu)選地，當(dāng)向患者給藥時(shí)，組合物中的該試劑使得在作用位置處該試劑的濃度范圍為0.1nM到10nM之間。
為促進(jìn)免疫抑制劑的給藥，組合物也可包括采用一種或多種藥學(xué)上可接受的添加劑，所述的添加劑包括藥學(xué)上可接受的鹽，氨基酸，多肽，聚合物，溶劑，緩沖劑，賦形劑和填充劑，或其它添加劑以促進(jìn)烷基取代的脂肪酸或免疫抑制劑的控制釋放、或促進(jìn)受試體內(nèi)傳遞烷基取代的脂肪酸或免疫抑制劑。
在一種優(yōu)選的方式中，本發(fā)明提供了包括烷基取代的脂肪酸的藥物組合物，其中該烷基取代的脂肪酸能抑制角膜新血管形成，且該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
優(yōu)選地，本發(fā)明的烷基取代的脂肪酸為18-甲基十九烷酸，17-甲基十八烷酸，10-甲基十八烷酸，16-甲基十七烷酸，15-甲基十七烷酸，15-甲基十六烷酸，14-甲基十六烷酸，14-甲基十五烷酸，13-甲基十五烷酸，13-甲基十四烷酸，12-甲基十四烷酸，12-甲基十三烷酸，11-甲基十三烷酸，11-甲基十二烷酸，10-甲基十二烷酸，或這些烷基取代的脂肪酸的任何組合。
在另一種方式中，本發(fā)明提供了烷基取代的脂肪酸和免疫抑制劑在制備用于抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生和/或抑制血管生成的藥物中的應(yīng)用，該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
優(yōu)選的實(shí)施方式現(xiàn)在將參見(jiàn)體現(xiàn)本發(fā)明上述一般原則的實(shí)驗(yàn)展開(kāi)描述。然而，應(yīng)該理解以下的描述并非用于限制以上說(shuō)明書(shū)中的一般性。
實(shí)施例1制備12-甲基十四烷酸(12-MTA)和其它烷基取代的脂肪酸從Sigma Chemicals獲得12-甲基十四烷酸和其它烷基取代的脂肪酸由于12-甲基十四烷酸水溶性差，因此將該化合物溶于95％的乙醇中，存儲(chǔ)濃度為100mM。在95％的乙醇中進(jìn)行進(jìn)一步的稀釋，并在培養(yǎng)介質(zhì)中稀釋至25μM到800μM的實(shí)驗(yàn)工作濃度，最終的乙醇濃度小于0.8％。在培養(yǎng)介質(zhì)中未加入試劑的對(duì)照樣品中乙醇含量低于0.8％。
以相似的方式制備其它烷基取代的脂肪酸。
實(shí)施例2HUVEC增生試驗(yàn)以2.5-5×104細(xì)胞/孔的密度將人體臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)植入96孔組織培養(yǎng)板中，并用試劑的各種稀釋液進(jìn)行處理。在37℃的5％CO2大氣條件下，在含有20％FCS，青霉素/鏈霉素的PRMI介質(zhì)中培養(yǎng)細(xì)胞。孵育24至48小時(shí)后，用1μCi的氚化胸腺嘧啶核苷沖擊(pulse)細(xì)胞6小時(shí)。被沖擊的細(xì)胞被胰蛋白酶化，從而從孔中分離出來(lái)，然后用TOMTEC細(xì)胞收集器收集細(xì)胞至玻璃纖維過(guò)濾器上，干燥并浸入閃爍液中，并通過(guò)Wallac Microbeta閃爍計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)。結(jié)果報(bào)道為cpm+/-SD。
實(shí)施例312-MTA對(duì)HUVEC增生的作用氚化胸腺嘧啶核苷吸收試驗(yàn)表明隨著12-MTA劑量的增加，HUVEC增生受到抑制(表1)。抑制表示為沒(méi)有加入試劑的對(duì)照細(xì)胞的百分比。
在濃度為800μM時(shí)，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行的顯微鏡觀察表明出現(xiàn)了凋亡的細(xì)胞。然而，在濃度為50到400μM時(shí)，細(xì)胞表現(xiàn)出良好的存活性，但胸腺嘧啶核苷整合到DNA中受到了抑制，這說(shuō)明12-MTA抑制了HUVECS的增生。抑制率的范圍為從800μM的12-MTA時(shí)的99％到50μM的12-MTA時(shí)的13％。
表112-MTA抑制HUVEC增生的劑量反應(yīng)
實(shí)施例4與其它試劑相比，12-MTA對(duì)HUVEC增生的抑制作用采用對(duì)HUVEC增生的抑制來(lái)比較12-MTA與具有抗血管生成性質(zhì)的環(huán)孢菌素A和雷帕霉素的效果。環(huán)孢菌素A的濃度(10nM和100nM)和雷帕霉素的濃度(0.1nM和1nM)是基于以前的實(shí)驗(yàn)室研究中公知的抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生的濃度。三個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)中的代表數(shù)據(jù)列于表2中。
表212-MTA與環(huán)孢菌素A和雷帕霉素的組合對(duì)HUVEC增生的協(xié)同抑制作用
表2表明采用0.1nM和1nM的雷帕霉素對(duì)HUVEC的抑制率分別達(dá)到73％和78％。然而，環(huán)孢菌素A則在濃度為10nM和100nM處對(duì)HUVEC增生具有刺激作用。
將次優(yōu)抑制濃度的12-MTA和環(huán)孢菌素A或雷帕霉素組合使用并加到HUVEC培養(yǎng)物中達(dá)24小時(shí)，然后測(cè)定細(xì)胞增生情況。如表2所示，100μM12-MTA分別與10nM和100nM的環(huán)孢菌素A聯(lián)合時(shí)，觀察到了協(xié)同的抑制效果。然而，由于單獨(dú)采用雷帕霉素就具有強(qiáng)抑制作用，因此該實(shí)驗(yàn)中僅僅觀察到采用12-MTA的加成作用。
這些數(shù)據(jù)也說(shuō)明了，如果存在12-甲基十四烷酸的情況下，24小時(shí)后對(duì)體外HUVECs進(jìn)行必要抑制的環(huán)孢菌素A或雷帕霉素環(huán)孢菌素A的水平可能會(huì)降低。因此，烷基取代的脂肪酸的存在，能減少對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增生進(jìn)行所需水平的抑制而必需的這些試劑的用量。
實(shí)施例5其它烷基取代的脂肪酸對(duì)HUVEC增生的作用氚化的胸腺密啶核苷吸收試驗(yàn)表明HUVEC增生也受到濃度為400μM的下列烷基取代的脂肪酸的抑制16-甲基十七烷酸，15-甲基十七烷酸，15-甲基十六烷酸，14-甲基十六烷酸，14-甲基十五烷酸，13-甲基十五烷酸，13-甲基十四烷酸，12-甲基十四烷酸，12-甲基十三烷酸，11-烷基十三烷酸，11-甲基十二烷酸，以及10-甲基十二烷酸。
數(shù)據(jù)列于表3中。抑制率表示為沒(méi)有加入試劑的對(duì)照細(xì)胞的百分比。
表3采用濃度為400μM的各種烷基取代的脂肪酸對(duì)HUVEC增生的抑制百分比
實(shí)施例6對(duì)血管生成的雞胚絨毛尿囊膜(CAM)試驗(yàn)將受精的雞蛋(HiChick Breeding Co，Kapunda，South Australia)在38℃下孵育3天。在第3天胚胎從蛋中破裂而出，并被置于塑料管制成的杯子中，塑料膜延伸至頂部，形成用于懸浮蛋的吊床。在加入蛋之前向每個(gè)杯子中加入含有青霉素和鏈霉素的2ml DMEM。頂部的皮氏培養(yǎng)皿保持無(wú)菌狀態(tài)。在潮濕的37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育。
在第4天，胚絨毛尿囊膜(CAM)開(kāi)始生長(zhǎng)，采用圖像分析軟件(VideoPro 32，Leading Edge Pty Ltd，South Australia)在×5處拍攝每一個(gè)胚胎以測(cè)定CAM面積。
根據(jù)CAM面積對(duì)胚胎進(jìn)行分組，每組中包括一個(gè)用于比較的對(duì)照胚胎。由于在CAM生長(zhǎng)的這些早期發(fā)育階段的變化是劇烈的，因此分組很關(guān)鍵。第4天尺寸上相對(duì)較小的差異轉(zhuǎn)化為第5天CAM中的較大差異。在甲基纖維素盤(pán)中進(jìn)行處理，該盤(pán)已在真空中干燥過(guò)夜。將甲基纖維素盤(pán)放在CAM的頂部，且甲基纖維素盤(pán)在處理開(kāi)始時(shí)至少比CAM面積大3到4倍，這意味著處理覆蓋了整個(gè)CAM的表面。
第5天，將脫脂奶和對(duì)照介質(zhì)一起注射入CAM中。拍攝不同放大程度的圖片，最大的放大率為×63。從×5圖片進(jìn)行定量測(cè)定。采用圖像分析(Video Pro 32，Leading Edge Pty Ltd，South Australia)測(cè)定CAM面積以及靜脈和動(dòng)脈的長(zhǎng)度。采用總長(zhǎng)度/CAM面積計(jì)算相對(duì)血管長(zhǎng)度。采用SigmaStat和OneWay ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，顯著性水平為p＜0.05。
實(shí)施例7CAM試驗(yàn)中12-MTA對(duì)血管生成的作用將用量范圍為25nmol到500nmol的12-MTA施用到CAM上。對(duì)于每一用量的12-MTA，采用六個(gè)不同的胚胎。秋水仙堿作為抑制血管生成的陽(yáng)性對(duì)照物。由于12-MTA溶于乙醇中，因此陰性對(duì)照物(載體)為乙醇溶液。
圖1顯示了用500nmol 12-MTA進(jìn)行的處理導(dǎo)致了從主要血管伸出的分支毛細(xì)血管的數(shù)量發(fā)生了減少。此外，經(jīng)過(guò)處理的血管面積也縮小了。采用100nmol的用量，也觀察到血管面積發(fā)生類似的減少。這些結(jié)果也表明12-MTA對(duì)胚胎無(wú)細(xì)胞毒性。
CAM試驗(yàn)中12-MTA對(duì)血管生成的抑制作用的定量測(cè)定結(jié)果如表4所示。
表4CAM試驗(yàn)中12-MTA對(duì)血管生成的抑制作用
(對(duì)照物的％；n＝6平均值±SEM)可以看出，即使是12-MTA的最低劑量也抑制了靜脈長(zhǎng)度、動(dòng)脈長(zhǎng)度、總的血管長(zhǎng)度和靜脈直徑。抑制的程度隨著12-MTA的劑量增加而增加。
實(shí)施例8CAM試驗(yàn)中10-甲基十二烷酸(10-MODA)對(duì)血管生成的作用將不同用量的10-MODA施用到CAM上。每一用量的10-MODA采用5個(gè)不同的胚胎，用乙醇溶液處理陰性對(duì)照物。
圖2顯示了用濃度為100nmol的10-MODA進(jìn)行的處理，導(dǎo)致了從主要血管上伸出的分支毛細(xì)血管的數(shù)量發(fā)生了減少。此外，經(jīng)過(guò)處理的血管面積也縮小了。這些結(jié)果也表明10-MODA對(duì)胚胎無(wú)細(xì)胞毒性。
CAM試驗(yàn)中10-MODA對(duì)血管生成的抑制作用的定量測(cè)定結(jié)果如表5所示。
表5CAM試驗(yàn)中10-MODA對(duì)血管生成的抑制作用
(對(duì)照物的％；n＝5平均值±SEM)可以看出，即使是10-MODA的最低劑量也抑制了靜脈長(zhǎng)度、動(dòng)脈長(zhǎng)度、總的血管長(zhǎng)度和靜脈直徑。抑制的程度隨著10-MODA的劑量增加而增加。
實(shí)施例9CAM試驗(yàn)中13-甲基十四烷酸(13-MTA)對(duì)血管生成的作用將不同用量的13-MTA施用到CAM上。每一用量的13-MTA采用5個(gè)不同的胚胎，用乙醇溶液處理陰性對(duì)照物(載體)。
圖3底下的圖顯示了用濃度為100nmol的13-MTA進(jìn)行的處理，導(dǎo)致了從主要血管上伸出的分支毛細(xì)血管的數(shù)量發(fā)生了減少。此外，經(jīng)過(guò)處理的血管面積也縮小了。這些結(jié)果也表明13-MTA對(duì)胚胎無(wú)細(xì)胞毒性。
CAM試驗(yàn)中13-MTA對(duì)血管生成的抑制作用的定量測(cè)定結(jié)果如表6所示。
表6CAM試驗(yàn)中13-MTA對(duì)血管生成的抑制作用
(對(duì)照物的％；n＝5平均值±SEM)可以看出，即使是13-MTA的最低劑量也抑制了靜脈長(zhǎng)度、動(dòng)脈長(zhǎng)度、總的血管長(zhǎng)度和靜脈直徑。抑制的程度隨著13-MTA的劑量增加而增加。
實(shí)施例10CAM試驗(yàn)中14-甲基十五烷酸(14-MPDA)對(duì)血管生成的作用將不同用量的14-MPDA施用到CAM上。每一用量的14-MPDA采用5個(gè)不同的胚胎，用乙醇溶液處理陰性對(duì)照物(載體)。
圖3上面的圖形顯示了用濃度為100nmol的14-MPDA進(jìn)行的處理導(dǎo)致了從主要血管上伸出的分支毛細(xì)血管的數(shù)量發(fā)生了減少。此外，經(jīng)過(guò)處理的血管面積也縮小了。這些結(jié)果也表明14-MPDA對(duì)胚胎無(wú)細(xì)胞毒性。
CAM試驗(yàn)中14-MPDA對(duì)血管生成的抑制作用的定量測(cè)定結(jié)果如表7所示。
表7CAM試驗(yàn)中14-MPDA對(duì)血管生成的抑制作用
(對(duì)照物的％；n＝5平均值±SEM)可以看出，即使是14-MPDA的最低劑量也抑制了靜脈長(zhǎng)度、動(dòng)脈長(zhǎng)度、總的血管長(zhǎng)度和靜脈直徑。抑制的程度隨著14-MPDA的劑量增加而增加。
實(shí)施例11CAM試驗(yàn)中17-甲基十八烷酸(17-MODA)對(duì)血管生成的作用將不同用量的17-MODA施用到CAM上。每一用量的17-MODA采用6個(gè)不同的胚胎，用乙醇溶液處理陰性對(duì)照物(載體)。
圖4顯示了用濃度為100nmol的17-MODA進(jìn)行的處理，導(dǎo)致了從主要血管上伸出的分支毛細(xì)血管的數(shù)量發(fā)生了減少。此外，經(jīng)過(guò)處理的血管面積也縮小了。這些結(jié)果也表明17-MODA對(duì)胚胎無(wú)細(xì)胞毒性。
CAM試驗(yàn)中17-MODA對(duì)血管生成的抑制作用的定量測(cè)定結(jié)果如表8所示。
表8CAM試驗(yàn)中17-MODA對(duì)血管生成的抑制作用
(對(duì)照物的％；n＝6平均值±SEM)可以看出，即使是17-MODA的最低劑量也抑制了靜脈長(zhǎng)度、動(dòng)脈長(zhǎng)度、總的血管長(zhǎng)度和靜脈直徑。抑制的程度隨著17-MODA的劑量增加而增加。
實(shí)施例12抑制大鼠角膜血管形成模型中的血管生成(i)材料和方法與大多數(shù)粘膜表面所不同的是，正常的角膜并不包含血管。為減少小鼠角膜中的新血管形成，基本上按照Cole，N.，Willcox，M.D.P.，F(xiàn)leiszig，S.M.J.，Stapleton，F(xiàn).，Bao，S.，Tout，S.，Husband，A.J.(1998)“Different strains of pseudomonas aeruginaso isolated from ocularinfections or inflammation display distinct corneal pathologies in an animalmodel.”Curr.Eye Res.，17730-735中描述的方法對(duì)角膜進(jìn)行刮擦處理，并用銅綠假單胞菌進(jìn)行感染。
簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，將在-70℃下儲(chǔ)存在30％甘油中的銅綠假單胞菌6294的儲(chǔ)存培養(yǎng)物接種到10mL的胰蛋白胨黃豆肉湯中(Oxoid Ltd，Sydney，Australia)。按照前述的方法(Cole等(1998)Curr.Eye Res.，17730-735)制備培養(yǎng)物，并使培養(yǎng)物懸浮于磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中至濃度為4×108cfu(菌落形成單位)/ml。采用濁度法調(diào)節(jié)細(xì)菌的濃度，用活菌計(jì)數(shù)回過(guò)頭來(lái)確認(rèn)劑量。
用阿佛丁(125mg/kg，腹膜內(nèi)給藥)麻醉6-8星期大的純系BALB/c小鼠，用無(wú)菌的27型針切開(kāi)眼部的角膜表面。采用移液管將5μL菌株6294的細(xì)菌懸浮液(2.0×106cfu)直接移到左眼的受傷角膜上。將每只動(dòng)物的右眼作為對(duì)照物，右眼進(jìn)行刮擦處理但未受到感染。每個(gè)處理組至少采用8只小鼠。
將濃度為200μmol/10μL的12-MTA制備成為用于局部施用的的乳液，放置在未防腐的石蠟和羊毛脂眼藥膏基質(zhì)(Polyvisc，Alcon，Belguim)中。將動(dòng)物分為3個(gè)處理組第1組不受到處理，對(duì)第2組的處理是分別將10μL載體局部施用到被感染和被刮擦的對(duì)照眼睛的角膜上，第3組采用如上所述的10μL12-MTA對(duì)被感染和被刮擦的對(duì)照眼睛進(jìn)行處理。在感染之后的第四天開(kāi)始處理，每?jī)商焯幚硪淮?，直至感染后?4天時(shí)結(jié)束實(shí)驗(yàn)。
采用隱蔽的觀察器在進(jìn)行細(xì)菌感染之前，剛進(jìn)行細(xì)菌感染之后，以及在感染之后的7天和14天對(duì)小鼠進(jìn)行檢查。如上所述對(duì)動(dòng)物進(jìn)行麻醉來(lái)進(jìn)行檢查，采用FS2光狹縫燈生物顯微鏡(Topcon Corporation，Tokyo，Japen)在白光下用48X放大倍率檢查角膜。在感染后的第7天和14天時(shí)，進(jìn)行白光檢查之后，用1％的鈉熒光素滲透，并在UV光下觀察角膜。檢測(cè)角膜損傷的嚴(yán)重性級(jí)別，并檢測(cè)血管侵入角膜中央的程度。
采用無(wú)參數(shù)的Kruskal-Wallis和Mann Whitney U分析，確定檢測(cè)的顯著性。
為進(jìn)行角膜的組織學(xué)檢測(cè)，在感染后的第14天殺死小鼠。立即摘除眼睛，將眼睛固定在中性緩沖福爾馬林中并埋入石蠟中。切出5μM部分，用蘇木精和曙紅染色以用于組織學(xué)檢測(cè)。
(ii)結(jié)果圖5顯示了感染后第7天和第14天的所有三個(gè)處理組中，小鼠的典型例子的顯微照片。在第7天時(shí)，在第1組和第2組中觀察到角膜直徑的血管形成接近50％。與第1組和第2組相比，第3組顯示出血管形成減少。類似地，在第14天，在第1組和第2組中觀察到角膜直徑的血管形成接近100％。與第1組和第2組相比，第3組顯示出血管形成減少。
在處理后的第7天，未受到處理的組(第1組)中有7/7小鼠(100％)，而在僅受到載體處理的組(第2組)中有5/8的小鼠(63％)顯示出被感染的眼睛發(fā)生了血管形成。然而，受到12-MTA處理的組(第3組)中僅有4/10小鼠(40％)表現(xiàn)出血管形成。在處理后的第14天，未受到處理的組(第1組)中有6/7小鼠(86％)，而在僅受到載體處理的組(第2組)中有6/8的小鼠(75％)顯示出被感染的眼睛發(fā)生了血管形成。然而，受到12-MTA處理的組(第3組)中僅有5/10小鼠(50％)表現(xiàn)出血管形成。這些數(shù)據(jù)歸納于表9中。所有組中受到刮擦的對(duì)照眼睛在任何時(shí)間點(diǎn)都未顯示出有所不同，這表明12-MTA在此劑量率下并不影響角膜。
表9用銅綠假單胞菌6294感染后7天和14天時(shí)，受感染的眼睛中顯示血管形成的動(dòng)物的百分比
角膜受傷嚴(yán)重性評(píng)級(jí)也表明12-MTA抑制了角膜新血管形成。在第2組中，眼部反應(yīng)在組內(nèi)是一致的，中值得分為2.5，范圍為1-4，25％的動(dòng)物顯示出持久性上皮缺陷。在第3組中，眼部反應(yīng)從輕微(50％)到嚴(yán)重(10％)，中值得分為2.1(范圍為從0.5-4)，20％的動(dòng)物遭受持久的上皮缺陷。在感染后的第14天，第1組中眼部反應(yīng)從輕微(14％)到嚴(yán)重(70％)，中值得分為3.3(范圍為1-4)。在第2組中，眼部反應(yīng)從輕微到中度(63％)再到嚴(yán)重(37％)，中值得分為3.3(范圍為1-4)。在第3組中，眼部反應(yīng)從輕微(60％)到嚴(yán)重(20％)，中值得分為1.65(范圍為0-4)。沒(méi)有任何一組中的動(dòng)物在這一時(shí)間遭受持久的上皮缺陷。
圖6展示了在感染后用載體或12-MTA處理角膜14天的角膜組織學(xué)檢測(cè)(放大400X的顯微照片)。箭頭表示角膜基質(zhì)中的血管。
角膜的組織學(xué)檢測(cè)表明第1組和第2組中全身性的血管形成貫穿于整個(gè)基質(zhì)中。然而，同時(shí)在第3組中觀察到血管形成減少。最后，應(yīng)該理解對(duì)本發(fā)明的方法和組合物所作的各種修飾和變化對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員都是顯而易見(jiàn)的，并不偏離本發(fā)明的范圍和精神。盡管在具體的優(yōu)選實(shí)施方式方面已經(jīng)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，應(yīng)該理解所要求保護(hù)的本發(fā)明并不應(yīng)該被不正當(dāng)?shù)叵抻谶@些具體實(shí)施方式
。確實(shí)，對(duì)實(shí)施本發(fā)明的所述模式進(jìn)行的各種修飾對(duì)血管生物學(xué)領(lǐng)域、制藥學(xué)領(lǐng)域或相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的，這些修飾都應(yīng)包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.抑制生物系統(tǒng)中內(nèi)皮細(xì)胞增生的方法，該方法包括采用有效量的烷基取代的脂肪酸向生物系統(tǒng)給藥的步驟，其中該烷基取代的脂肪酸能抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生，且該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代的脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中R位于與端甲基直接相鄰的第一個(gè)碳原子上，或R位于離開(kāi)端甲基的第二個(gè)碳原子上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中R為甲基或乙基基團(tuán)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1到3任意之一的方法，其中該烷基取代的脂肪酸為飽和的烷基取代的脂肪酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中該飽和的烷基取代的脂肪酸衍生于十一烷酸，十二烷酸，十三烷酸，十四烷酸，十五烷酸，十六烷酸，十七烷酸，十八烷酸，十九烷酸或二十烷酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中該烷基取代的脂肪酸是18-甲基十九烷酸，17-甲基十八烷酸，10-甲基十八烷酸，16-甲基十七烷酸，15-甲基十七烷酸，15-甲基十六烷酸，14-甲基十六烷酸，14-甲基十五烷酸，13-甲基十五烷酸，13-甲基十四烷酸，12-甲基十四烷酸，12-甲基十三烷酸，11-甲基十三烷酸，11-甲基十二烷酸，10-甲基十二烷酸，或這些烷基取代的脂肪酸的任何組合。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中該烷基取代的脂肪酸是16-甲基十七烷酸，15-甲基十七烷酸，15-甲基十六烷酸，14-甲基十六烷酸，14-甲基十五烷酸，13-甲基十五烷酸，13-甲基十四烷酸，12-甲基十四烷酸，12-甲基十三烷酸，11-甲基十三烷酸，11-甲基十二烷酸，10-甲基十一烷酸，或這些烷基取代的脂肪酸的任何組合。
8.根據(jù)權(quán)利要求1到3任意之一的方法，其中該烷基取代的脂肪酸為不飽和的烷基取代的脂肪酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中該不飽和的烷基取代的脂肪酸衍生于十一碳烯酸，十二碳烯酸，十三碳烯酸，十四碳烯酸，十五碳烯酸，十六碳烯酸，十七碳烯酸，十八碳烯酸，十九碳烯酸或二十碳烯酸。
10.根據(jù)權(quán)利要求1到9任意之一的方法，其中該內(nèi)皮細(xì)胞是人類或動(dòng)物的內(nèi)皮細(xì)胞。
11.根據(jù)權(quán)利要求1到10任意之一的方法，其中該內(nèi)皮細(xì)胞的增生與生物系統(tǒng)中的血管生成有關(guān)。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中該生物系統(tǒng)中的血管生成是不受控或不希望的血管生成。
13.根據(jù)權(quán)利要求11或12的方法，其中該血管生成與實(shí)體腫瘤的形成或擴(kuò)張、血管纖維瘤、角膜新血管形成、視網(wǎng)膜/脈絡(luò)膜新血管形成、動(dòng)靜脈畸形、關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、狼瘡、結(jié)締組織疾病、Osler-Weber綜合癥、動(dòng)脈粥樣硬化斑、牛皮癬、化膿性肉芽腫、晶狀體后纖維增生、硬皮病、肉芽形成、血管瘤、沙眼、血友病性關(guān)節(jié)、血管粘連、肥厚性瘢痕、與慢性炎癥有關(guān)的疾病、結(jié)節(jié)病、發(fā)炎性腸病、Crohn’s病或潰瘍性淋巴管炎有關(guān)。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中該血管生成與角膜新血管形成、視網(wǎng)膜新血管形成或脈絡(luò)膜新血管形成有關(guān)。
15.根據(jù)權(quán)利要求1到14任意之一的方法，其中，向生物系統(tǒng)的所需作用位置處施用有效量的烷基取代的脂肪酸導(dǎo)致在所需的作用位置處烷基取代的脂肪酸的濃度范圍為50nM到5mM。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中向生物系統(tǒng)中所需作用位置處給藥的有效量的烷基取代的脂肪酸導(dǎo)致在所需的作用位置處烷基取代的脂肪酸的濃度范圍為50nM到1mM。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中向生物系統(tǒng)的所需作用位置處施用有效量的烷基取代的脂肪酸導(dǎo)致在所需的作用位置處烷基取代的脂肪酸的濃度范圍為25μM到500μM。
18.根據(jù)權(quán)利要求1到17任意之一的方法，其中該方法進(jìn)一步包括采用有效量的免疫抑制劑給藥。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的方法，其中該免疫抑制劑是與免疫親和蛋白相結(jié)合的化合物。
20.根據(jù)權(quán)利要求18或19的方法，其中該免疫抑制劑是環(huán)孢菌素A，雷帕霉素或FK506。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的方法，其中向生物系統(tǒng)的所需作用位置處施用有效量的環(huán)孢菌素A導(dǎo)致在所需的作用位置處環(huán)孢菌素A的濃度范圍為10nM到2μM。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的方法，其中向生物系統(tǒng)的所需作用位置處施用有效量的環(huán)孢菌素A導(dǎo)致在所需的作用位置處環(huán)孢菌素A的濃度范圍為10nM到100nM。
23.根據(jù)權(quán)利要求20的方法，其中向生物系統(tǒng)的所需作用位置處施用有效量的雷帕霉素來(lái)抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增生，則導(dǎo)致在所需的作用位置處雷帕霉素的濃度范圍為0.1nM到30nM。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的方法，其中向生物系統(tǒng)中所需作用位置施用有效量的雷帕霉素導(dǎo)致在所需的作用位置處雷帕霉素的濃度范圍為0.1nM到10nM。
25.根據(jù)權(quán)利要求1到24任意之一的方法，其中被實(shí)驗(yàn)的該生物系統(tǒng)為人或動(dòng)物。
26.抑制生物系統(tǒng)中血管生成的方法，該方法包括采用有效量的烷基取代的脂肪酸向生物系統(tǒng)給藥的步驟，其中該烷基取代的脂肪酸能抑制血管生成，且該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+Y介于2和46之間。
27.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中R位于與端甲基直接相鄰的第一個(gè)碳原子上，或R位于離開(kāi)端甲基的第二個(gè)碳原子上。
28.根據(jù)權(quán)利要求26或27的方法，其中R為甲基或乙基基團(tuán)。
29.根據(jù)權(quán)利要求26到28任意之一的方法，其中該烷基取代的脂肪酸為飽和的烷基取代的脂肪酸。
30.根據(jù)權(quán)利要求29的方法，其中該飽和的烷基取代的脂肪酸衍生于十一烷酸，十二烷酸，十三烷酸，十四烷酸，十五烷酸，十六烷酸，十七烷酸，十八烷酸，十九烷酸或二十烷酸。
31.根據(jù)權(quán)利要求30的方法，其中該烷基取代的脂肪酸是18-甲基十九烷酸，17-甲基十八烷酸，10-甲基十八烷酸，16-甲基十七烷酸，15-甲基十七烷酸，15-甲基十六烷酸，14-甲基十六烷酸，14-甲基十五烷酸，13-甲基十五烷酸，13-甲基十四烷酸，12-甲基十四烷酸，12-甲基十三烷酸，11-甲基十三烷酸，11-甲基十二烷酸，10-甲基十二烷酸，或這些烷基取代的脂肪酸的任何組合。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其中該烷基取代的脂肪酸是12-甲基十四烷酸，13-甲基十四烷酸，14-甲基十五烷酸，17-甲基十八烷酸，16-甲基十七烷酸，10-甲基十二烷酸，或這些烷基取代的脂肪酸的任何組合。
33.根據(jù)權(quán)利要求26到28任意之一的方法，其中該烷基取代的脂肪酸為不飽和的烷基取代的脂肪酸。
34.根據(jù)權(quán)利要求33的方法，其中該不飽和的烷基取代的脂肪酸衍生于十一碳烯酸，十二碳烯酸，十三碳烯酸，十四碳烯酸，十五碳烯酸，十六碳烯酸，十七碳烯酸，十八碳烯酸，十九碳烯酸或二十碳烯酸。
35.根據(jù)權(quán)利要求26到34任意之一的方法，其中該生物系統(tǒng)是人類或動(dòng)物受試體。
36.根據(jù)權(quán)利要求26到35任意之一的方法，其中該生物系統(tǒng)中的血管生成是不受控或不希望的血管生成。
37.根據(jù)權(quán)利要求26到36任意之一的方法，其中該血管生成與實(shí)體腫瘤的形成或擴(kuò)張、血管纖維瘤、角膜新血管形成、視網(wǎng)膜/脈絡(luò)膜新血管形成、動(dòng)靜脈畸形、關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、狼瘡、結(jié)締組織疾病、Osler-Weber綜合癥、動(dòng)脈粥樣硬化斑、牛皮癬、化膿性肉芽腫、晶狀體后纖維增生、硬皮病、肉芽形成、血管瘤、沙眼、血友病性關(guān)節(jié)、血管粘連、肥厚性瘢痕、與慢性炎癥有關(guān)的疾病、結(jié)節(jié)病、發(fā)炎性腸病、Crohn’s病或潰瘍性淋巴管炎有關(guān)。
38.根據(jù)權(quán)利要求37的方法，其中該血管生成與角膜新血管形成、視網(wǎng)膜新血管形成或脈絡(luò)膜新血管形成有關(guān)。
39.根據(jù)權(quán)利要求26到38任意之一的方法，其中向生物系統(tǒng)的所需作用位置處施用有效量的烷基取代的脂肪酸導(dǎo)致在所需的作用位置處烷基取代的脂肪酸的濃度范圍為50nM到5mM。
40.根據(jù)權(quán)利要求39的方法，其中向生物系統(tǒng)的所需作用位置處施用有效量的烷基取代的脂肪酸導(dǎo)致在所需的作用位置處烷基取代的脂肪酸的濃度范圍為50nM到1mM。
41.根據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中向生物系統(tǒng)的所需作用位置處施用有效量的烷基取代的脂肪酸導(dǎo)致在所需的作用位置處烷基取代的脂肪酸的濃度范圍為25μM到500μM。
42.根據(jù)權(quán)利要求26到41任意之一的方法，其中該方法進(jìn)一步包括采用有效量的免疫抑制劑進(jìn)行給藥。
43.根據(jù)權(quán)利要求42的方法，其中該免疫抑制劑是與免疫親和蛋白相結(jié)合的化合物。
44.根據(jù)權(quán)利要求42或43的方法，其中該免疫抑制劑是環(huán)孢菌素A，雷帕霉素或FK506。
45.根據(jù)權(quán)利要求44的方法，其中向生物系統(tǒng)的所需作用位置處施用有效量的環(huán)孢菌素A導(dǎo)致在所需的作用位置處環(huán)孢菌素A的濃度范圍為10nM到2μM。
46.根據(jù)權(quán)利要求45的方法，其中向生物系統(tǒng)的所需作用位置處施用有效量的環(huán)孢菌素A導(dǎo)致在所需的作用位置處環(huán)孢菌素A的濃度范圍為10nM到100nM。
47.根據(jù)權(quán)利要求44的方法，其中向生物系統(tǒng)的所需作用位置處施用有效量的雷帕霉素來(lái)抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生，則導(dǎo)致在所需的作用位置處雷帕霉素的濃度范圍為0.1nM到30nM。
48.根據(jù)權(quán)利要求47的方法，其中向生物系統(tǒng)的所需作用位置處施用有效量的雷帕霉素導(dǎo)致在所需的作用位置處雷帕霉素的濃度范圍為0.1nM到10nM。
49.抑制角膜的新血管形成的方法，該方法包括采用有效量的烷基取代的脂肪酸向角膜給藥的步驟，其中該烷基取代的脂肪酸能抑制角膜中發(fā)生新血管形成，且該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
50.減少對(duì)生物系統(tǒng)的給藥量而能對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增生進(jìn)行所需水平的抑制的方法，該方法包括采用有效量的烷基取代的脂肪酸向生物系統(tǒng)給藥的步驟，該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
51.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中R位于與端甲基直接相鄰的第一個(gè)碳原子上，或R位于離開(kāi)端甲基的第二個(gè)碳原子上。
52.根據(jù)權(quán)利要求50或51的方法，其中R為甲基或乙基基團(tuán)。
53.根據(jù)權(quán)利要求50到52任意之一的方法，其中該烷基取代的脂肪酸為飽和的烷基取代的脂肪酸。
54.根據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中該飽和的烷基取代的脂肪酸衍生于十一烷酸，十二烷酸，十三烷酸，十四烷酸，十五烷酸，十六烷酸，十七烷酸，十八烷酸，十九烷酸或二十烷酸。
55.根據(jù)權(quán)利要求54的方法，其中該烷基取代的脂肪酸是18-甲基十九烷酸，17-甲基十八烷酸，10-甲基十八烷酸，16-甲基十七烷酸，15-甲基十七烷酸，15-甲基十六烷酸，14-甲基十六烷酸，14-甲基十五烷酸，13-甲基十五烷酸，13-甲基十四烷酸，12-甲基十四烷酸，12-甲基十三烷酸，11-甲基十三烷酸，11-甲基十二烷酸，10-甲基十二烷酸，或這些烷基取代的脂肪酸的任何組合。
56.根據(jù)權(quán)利要求55的方法，其中該烷基取代的脂肪酸是16-甲基十七烷酸，15-甲基十七烷酸，15-甲基十六烷酸，14-甲基十六烷酸，14-甲基十五烷酸，13-甲基十五烷酸，13-甲基十四烷酸，12-甲基十四烷酸，12-甲基十三烷酸，11-甲基十三烷酸，11-甲基十二烷酸，10-甲基十一烷酸，或這些烷基取代的脂肪酸的任何組合。
57.根據(jù)權(quán)利要求50到52任意之一的方法，其中該烷基取代的脂肪酸為不飽和的烷基取代的脂肪酸。
58.根據(jù)權(quán)利要求57的方法，其中該不飽和的烷基取代的脂肪酸衍生于十一碳烯酸，十二碳烯酸，十三碳烯酸，十四碳烯酸，十五碳烯酸，十六碳烯酸，十七碳烯酸，十八碳烯酸，十九碳烯酸或二十碳烯酸。
59.根據(jù)權(quán)利要求50到58任意之一的方法，其中該試劑是雷帕霉素，環(huán)孢菌素A，RTNP-470，異三十烷胺，combretastatin，內(nèi)皮細(xì)胞抑制素，青霉胺，法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，L-778123，SCH66336，或這些試劑的任意組合。
60.根據(jù)權(quán)利要求59的方法，其中向生物系統(tǒng)的所需作用位置施用的雷帕霉素的濃度導(dǎo)致在所需的作用位置處雷帕霉素的濃度范圍為0.1nM到30nM。
61.根據(jù)權(quán)利要求60的方法，其中向生物系統(tǒng)的所需作用位置施用的雷帕霉素的濃度導(dǎo)致在所需的作用位置處雷帕霉素的濃度范圍為0.1nM到10nM。
62.根據(jù)權(quán)利要求50到61任意之一的方法，其中該內(nèi)皮細(xì)胞是人類或動(dòng)物的內(nèi)皮細(xì)胞。
63.根據(jù)權(quán)利要求50到63任意之一的方法，其中該內(nèi)皮細(xì)胞增生與生物系統(tǒng)中的血管生成有關(guān)。
64.根據(jù)權(quán)利要求63的方法，其中該生物系統(tǒng)中的血管生成是不受控或不希望的血管生成。
65.根據(jù)權(quán)利要求63或64的方法，其中該血管生成與實(shí)體腫瘤的形成或擴(kuò)張、血管纖維瘤、角膜新血管形成、視網(wǎng)膜/脈絡(luò)膜新血管形成、動(dòng)靜脈畸形、關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、狼瘡、結(jié)締組織疾病、Osler-Weber綜合癥、動(dòng)脈粥樣硬化斑、牛皮癬、化膿性肉芽腫、晶狀體后纖維增生、硬皮病、肉芽形成、血管瘤、沙眼、血友病性關(guān)節(jié)、血管粘連、肥厚性瘢痕、與慢性炎癥有關(guān)的疾病、結(jié)節(jié)病、發(fā)炎性腸病、Crohn’s病或潰瘍性淋巴管炎有關(guān)。
66.根據(jù)權(quán)利要求50到65任意之一的方法，其中向生物系統(tǒng)的所需作用位置施用的有效量的烷基取代的脂肪酸導(dǎo)致在所需的作用位置處烷基取代的脂肪酸的濃度范圍為50nM到5mM。
67.根據(jù)權(quán)利要求66的方法，其中向生物系統(tǒng)的所需作用位置施用的有效量的烷基取代的脂肪酸導(dǎo)致在所需的作用位置處烷基取代的脂肪酸的濃度范圍為50nM到1mM。
68.根據(jù)權(quán)利要求67的方法，其中向生物系統(tǒng)的所需作用位置施用的有效量的烷基取代的脂肪酸導(dǎo)致在所需的作用位置處烷基取代的脂肪酸的濃度范圍為25μM到500μM。
69.根據(jù)權(quán)利要求50到68任意之一的方法，其中該生物系統(tǒng)是人類或動(dòng)物患者。
70.減少向生物系統(tǒng)施用抗血管生成試劑的用量而能對(duì)血管生成進(jìn)行所需水平的抑制的方法，該方法包括采用有效量的烷基取代的脂肪酸向生物系統(tǒng)給藥的步驟，該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
71.根據(jù)權(quán)利要求70的方法，其中R位于與端甲基直接相鄰的第一個(gè)碳原子上，或R位于離開(kāi)端甲基的第二個(gè)碳原子上。
72.根據(jù)權(quán)利要求70或71的方法，其中R為甲基或乙基基團(tuán)。
73.根據(jù)權(quán)利要求70到72任意之一的方法，其中該烷基取代的脂肪酸為飽和的烷基取代的脂肪酸。
74.根據(jù)權(quán)利要求73的方法，其中該飽和的烷基取代的脂肪酸衍生于十一烷酸，十二烷酸，十三烷酸，十四烷酸，十五烷酸，十六烷酸，十七烷酸，十八烷酸，十九烷酸或二十烷酸。
75.根據(jù)權(quán)利要求74的方法，其中該烷基取代的脂肪酸是18-甲基十九烷酸，17-甲基十八烷酸，10-甲基十八烷酸，16-甲基十七烷酸，15-甲基十七烷酸，15-甲基十六烷酸，14-甲基十六烷酸，14-甲基十五烷酸，13-甲基十五烷酸，13-甲基十四烷酸，12-甲基十四烷酸，12-甲基十三烷酸，11-甲基十三烷酸，11-甲基十二烷酸，10-甲基十二烷酸，或這些烷基取代的脂肪酸的任何組合。
76.根據(jù)權(quán)利要求75的方法，其中該烷基取代的脂肪酸是12-甲基十四烷酸，13-甲基十四烷酸，14-甲基十五烷酸，17-甲基十八烷酸，16-甲基十七烷酸，10-甲基十二烷酸，或這些烷基取代的脂肪酸的任何組合。
77.根據(jù)權(quán)利要求70到72任意之一的方法，其中該烷基取代的脂肪酸為不飽和的烷基取代的脂肪酸。
78.根據(jù)權(quán)利要求77的方法，其中該不飽和的烷基取代的脂肪酸衍生于十一碳烯酸，十二碳烯酸，十三碳烯酸，十四碳烯酸，十五碳烯酸，十六碳烯酸，十七碳烯酸，十八碳烯酸，十九碳烯酸或二十碳烯酸。
79.根據(jù)權(quán)利要求70到78任意之一的方法，其中該生物系統(tǒng)是人類或動(dòng)物受試體。
80.根據(jù)權(quán)利要求70到79任意之一的方法，其中該生物系統(tǒng)中的血管生成是不受控或不希望的血管生成。
81.根據(jù)權(quán)利要求80的方法，其中該血管生成與實(shí)體腫瘤的形成或擴(kuò)張、血管纖維瘤、角膜新血管形成、視網(wǎng)膜/脈絡(luò)膜新血管形成、動(dòng)靜脈畸形、關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、狼瘡、結(jié)締組織疾病、Osler-Weber綜合癥、動(dòng)脈粥樣硬化斑、牛皮癬、化膿性肉芽腫、晶狀體后纖維增生、硬皮病、肉芽形成、血管瘤、沙眼、血友病性關(guān)節(jié)、血管粘連、肥厚性瘢痕、與慢性炎癥有關(guān)的疾病、結(jié)節(jié)病、發(fā)炎性腸病、Crohn’s病或潰瘍性淋巴管炎有關(guān)。
82.根據(jù)權(quán)利要求70到81任意之一的方法，其中向生物系統(tǒng)的所需作用位置處施用有效量的烷基取代的脂肪酸導(dǎo)致在所需的作用位置處烷基取代的脂肪酸的濃度范圍為50nM到5mM。
83.根據(jù)權(quán)利要求82的方法，其中向生物系統(tǒng)的所需作用位置處施用有效量的烷基取代的脂肪酸導(dǎo)致在所需的作用位置處烷基取代的脂肪酸的濃度范圍為50nM到1mM。
84.根據(jù)權(quán)利要求83的方法，其中向生物系統(tǒng)的所需作用位置處施用有效量的烷基取代的脂肪酸導(dǎo)致在所需的作用位置處烷基取代的脂肪酸的濃度范圍為25μM到500μM。
85.一種藥物組合物，包括烷基取代的脂肪酸，其中該烷基取代的脂肪酸能抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生和/或血管生成，且該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
86.根據(jù)權(quán)利要求85的藥物組合物，其中R位于與端甲基直接相鄰的第一個(gè)碳原子上，或R位于離開(kāi)端甲基的第二個(gè)碳原子上。
87.根據(jù)權(quán)利要求85或86的藥物組合物，其中R為甲基或乙基基團(tuán)。
88.根據(jù)權(quán)利要求85到87任意之一的方法，其中該烷基取代的脂肪酸為飽和的烷基取代的脂肪酸。
89.根據(jù)權(quán)利要求88的藥物組合物，其中該飽和的烷基取代的脂肪酸衍生于十一烷酸，十二烷酸，十三烷酸，十四烷酸，十五烷酸，十六烷酸，十七烷酸，十八烷酸，十九烷酸或二十烷酸。
90.根據(jù)權(quán)利要求89的藥物組合物，其中該烷基取代的脂肪酸是18-甲基十九烷酸，17-甲基十八烷酸，10-甲基十八烷酸，16-甲基十七烷酸，15-甲基十七烷酸，15-甲基十六烷酸，14-甲基十六烷酸，14-甲基十五烷酸，13-甲基十五烷酸，13-甲基十四烷酸，12-甲基十四烷酸，12-甲基十三烷酸，11-甲基十三烷酸，11-甲基十二烷酸，10-甲基十二烷酸，或這些烷基取代的脂肪酸的任何組合。
91.根據(jù)權(quán)利要求90的藥物組合物，其中該烷基取代的脂肪酸是16-甲基十七烷酸，15-甲基十七烷酸，15-甲基十六烷酸，14-甲基十六烷酸，14-甲基十五烷酸，13-甲基十五烷酸，13-甲基十四烷酸，12-甲基十四烷酸，12-甲基十三烷酸，11-甲基十三烷酸，11-甲基十二烷酸，10-甲基十一烷酸，或這些烷基取代的脂肪酸的任何組合。
92.根據(jù)權(quán)利要求85到87任意之一的藥物組合物，其中該烷基取代的脂肪酸為不飽和的烷基取代的脂肪酸。
93.根據(jù)權(quán)利要求92的藥物組合物，其中該不飽和的烷基取代的脂肪酸衍生于十一碳烯酸，十二碳烯酸，十三碳烯酸，十四碳烯酸，十五碳烯酸，十六碳烯酸，十七碳烯酸，十八碳烯酸，十九碳烯酸或二十碳烯酸。
94.根據(jù)權(quán)利要求85到93任意之一的藥物組合物，其中，向生物系統(tǒng)給藥時(shí)，該藥物組合物所包含的烷基取代的脂肪酸的量會(huì)導(dǎo)致在生物系統(tǒng)的所需作用位置處烷基取代的脂肪酸的濃度范圍為50nM到5mM。
95.根據(jù)權(quán)利要求94的藥物組合物，其中，向生物系統(tǒng)給藥時(shí)，該藥物組合物所包含的烷基取代的脂肪酸的量會(huì)導(dǎo)致在生物系統(tǒng)的所需作用位置處烷基取代的脂肪酸的濃度范圍為50nM到1mM。
96.根據(jù)權(quán)利要求95的藥物組合物，其中，向生物系統(tǒng)給藥時(shí)，該藥物組合物所包含的烷基取代的脂肪酸的量會(huì)導(dǎo)致在生物系統(tǒng)的所需作用位置處烷基取代的脂肪酸的濃度范圍為25μM到500μM。
97.根據(jù)權(quán)利要求85到96任意之一的藥物組合物，其中該組合物進(jìn)一步包括免疫抑制劑。
98.根據(jù)權(quán)利要求97的藥物組合物，其中該免疫抑制劑是與免疫親和蛋白相結(jié)合的化合物。
99.根據(jù)權(quán)利要求97或98的藥物組合物，其中該免疫抑制劑是環(huán)孢菌素A，雷帕霉素或FK506。
100.根據(jù)權(quán)利要求99的藥物組合物，其中，向生物系統(tǒng)給藥時(shí)，該組合物所包含的環(huán)孢菌素A的量會(huì)導(dǎo)致在生物系統(tǒng)的所需作用位置處環(huán)孢菌素A的濃度范圍為10nM到2μM。
101.根據(jù)權(quán)利要求100的藥物組合物，其中，向生物系統(tǒng)給藥時(shí)，該組合物所包含的環(huán)孢菌素A的量會(huì)導(dǎo)致在生物系統(tǒng)的所需作用位置處環(huán)孢菌素A的濃度范圍為10nM到100nM。
102.根據(jù)權(quán)利要求99的藥物組合物，其中，向生物系統(tǒng)給藥時(shí)，該組合物所包含的雷帕霉素的量會(huì)導(dǎo)致在生物系統(tǒng)中所需作用位置處雷帕霉素的濃度范圍為0.1nM到30nM。
103.根據(jù)權(quán)利要求102的藥物組合物，其中，向生物系統(tǒng)給藥時(shí)，該組合物所包括的雷帕霉素的量會(huì)導(dǎo)致在生物系統(tǒng)中所需作用位置處雷帕霉素的濃度范圍為0.1nM到10nM。
104.藥物組合物，包括烷基取代的脂肪酸，其中該烷基取代的脂肪酸能抑制角膜新血管形成，且該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
105.一種藥物組合物，包括烷基取代的脂肪酸和免疫抑制劑，其中該烷基取代的脂肪酸為下列化學(xué)通式的化合物或其鹽 其中，R為具有1-6個(gè)碳原子的烷基；對(duì)于飽和的烷基取代脂肪酸，x等于或大于0，y等于或大于0，且x+y介于0和46之間；以及對(duì)于不飽和的烷基取代的脂肪酸，x或y等于或大于2，(CH2)x和/或(CH2)y中的至少一個(gè)CH2-CH2基團(tuán)被CH＝CH基團(tuán)或C≡C基團(tuán)所替代，且x+y介于2和46之間。
106.根據(jù)權(quán)利要求105的藥物組合物，其中R位于與端甲基直接相鄰的第一個(gè)碳原子上，或R位于離開(kāi)端甲基的第二個(gè)碳原子上。
107.根據(jù)權(quán)利要求105或106的藥物組合物，其中R為甲基或乙基基團(tuán)。
108.根據(jù)權(quán)利要求105到107任意之一的藥物組合物，其中該烷基取代的脂肪酸為飽和的烷基取代的脂肪酸。
109.根據(jù)權(quán)利要求108的藥物組合物，其中該飽和的烷基取代的脂肪酸衍生于十一烷酸，十二烷酸，十三烷酸，十四烷酸，十五烷酸，十六烷酸，十七烷酸，十八烷酸，十九烷酸或二十烷酸。
110.根據(jù)權(quán)利要求109的藥物組合物，其中該烷基取代的脂肪酸是18-甲基十九烷酸，17-甲基十八烷酸，10-甲基十八烷酸，16-甲基十七烷酸，15-甲基十七烷酸，15-甲基十六烷酸，14-甲基十六烷酸，14-甲基十五烷酸，13-甲基十五烷酸，13-甲基十四烷酸，12-甲基十四烷酸，12-甲基十三烷酸，11-甲基十三烷酸，11-甲基十二烷酸，10-甲基十二烷酸，或這些烷基取代的脂肪酸的任何組合。
111.根據(jù)權(quán)利要求110的藥物組合物，其中該烷基取代的脂肪酸是16-甲基十七烷酸，15-甲基十七烷酸，15-甲基十六烷酸，14-甲基十六烷酸，14-甲基十五烷酸，13-甲基十五烷酸，13-甲基十四烷酸，12-甲基十四烷酸，12-甲基十三烷酸，11-甲基十三烷酸，11-甲基十二烷酸，10-甲基十一烷酸，或這些烷基取代的脂肪酸的任何組合。
112.根據(jù)權(quán)利要求105到107任意之一的藥物組合物，其中該烷基取代的脂肪酸為不飽和的烷基取代的脂肪酸。
113.根據(jù)權(quán)利要求112的藥物組合物，其中該不飽和的烷基取代的脂肪酸衍生于十一碳烯酸，十二碳烯酸，十三碳烯酸，十四碳烯酸，十五碳烯酸，十六碳烯酸，十七碳烯酸，十八碳烯酸，十九碳烯酸或二十碳烯酸。
114.根據(jù)權(quán)利要求105到113任意之一的藥物組合物，其中該藥物組合物所包含的烷基取代的脂肪酸的量在向生物系統(tǒng)給藥時(shí)，導(dǎo)致在生物系統(tǒng)中所需作用位置處烷基取代的脂肪酸的濃度范圍為50nM到5mM。
115.根據(jù)權(quán)利要求114的藥物組合物，其中該藥物組合物所包含的烷基取代的脂肪酸的量在向生物系統(tǒng)給藥時(shí)，導(dǎo)致在生物系統(tǒng)中所需作用位置處烷基取代的脂肪酸的濃度范圍為50nM到1mM。
116.根據(jù)權(quán)利要求115的藥物組合物，其中該藥物組合物所包括的烷基取代的脂肪酸的量在向生物系統(tǒng)給藥時(shí)導(dǎo)致在生物系統(tǒng)中所需作用位置處烷基取代的脂肪酸的濃度范圍為25μM到500μM。
117.根據(jù)權(quán)利要求105到116任意之一的藥物組合物，其中該免疫抑制劑是環(huán)孢菌素A，雷帕霉素或FK506。
118.根據(jù)權(quán)利要求117的藥物組合物，其中該組合物所包括的環(huán)孢菌素A的量在向生物系統(tǒng)給藥時(shí)，導(dǎo)致在生物系統(tǒng)中所需作用位置處環(huán)孢菌素A的濃度范圍為10nM到2μM。
119.根據(jù)權(quán)利要求118的藥物組合物，其中該組合物所包括的環(huán)孢菌素A的量在向生物系統(tǒng)給藥時(shí)，導(dǎo)致在生物系統(tǒng)中所需作用位置處環(huán)孢菌素A的濃度范圍為10nM到100nM。
120.根據(jù)權(quán)利要求117的藥物組合物，其中該組合物所包括的雷帕霉素的量在向生物系統(tǒng)給藥時(shí)，導(dǎo)致在生物系統(tǒng)中所需作用位置處雷帕霉素的濃度范圍為0.1nM到30nM。
121.根據(jù)權(quán)利要求120的藥物組合物，其中該組合物所包括的雷帕霉素的量在向生物系統(tǒng)給藥時(shí)，導(dǎo)致在生物系統(tǒng)中所需作用位置處雷帕霉素的濃度范圍為0.1nM到10nM。
全文摘要
本發(fā)明涉及抑制生物系統(tǒng)中內(nèi)皮細(xì)胞增生的方法。該方法包括采用有效量的烷基取代的脂肪酸向生物系統(tǒng)給藥的步驟，其中該烷基取代的脂肪酸能抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生。
文檔編號(hào)A61K31/445GK1658860SQ03813058
公開(kāi)日2005年8月24日 申請(qǐng)日期2003年5月2日 優(yōu)先權(quán)日2002年5月3日
發(fā)明者拉維·克里希南 申請(qǐng)人:伊麗莎白女王醫(yī)院研究基金會(huì)公司