專利名稱：作為玻連蛋白抑制劑的1,4,5,6－四氫嘧啶衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及式(I)的(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯半富馬酸鹽及其制備方法。 該方法包括4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酸或其衍生物與(2S)-3-氨基-2-(萘-1-磺酰氨基)丙酸乙酯反應(yīng)。式I化合物是一種有價(jià)值的藥物，它可以用于例如治療或預(yù)防會(huì)因抑制玻連蛋白受體而受影響的疾病，特別是骨病，例如骨質(zhì)疏松。本發(fā)明還涉及用于制備式I化合物的化學(xué)中間體。
骨骼經(jīng)受著不斷進(jìn)行的動(dòng)態(tài)更新過(guò)程，這包括骨吸收和骨形成。在某些骨病如骨質(zhì)疏松中，骨吸收比骨形成占優(yōu)勢(shì)，從而導(dǎo)致骨質(zhì)量降低和脆性提高。骨吸收和骨形成是受專供此用的各類細(xì)胞控制的。骨吸收是基于破骨細(xì)胞導(dǎo)致的骨基質(zhì)的破壞?；罨钠乒羌?xì)胞附著在骨基質(zhì)的表面上并分泌出蛋白酶和酸，它們?cè)斐晒趋榔茐?。破骨?xì)胞對(duì)骨骼的附著，以及因此造成的骨吸收，是受破骨細(xì)胞的細(xì)胞表面上玻連蛋白受體αvβ3的控制。αvβ3在這種情形與骨基質(zhì)蛋白例如骨橋蛋白、骨涎蛋白和血小板反應(yīng)蛋白相結(jié)合。αvβ3的拮抗劑抑制了破骨細(xì)胞對(duì)骨的附著，從而抑制骨吸收，這已在例如以下文獻(xiàn)所述的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中得到證明Fischer等，內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinology)，132(1993)1411；Yamamoto等，內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinology)，139(1998)1411；或Miller等，生物有機(jī)和醫(yī)藥化學(xué)快報(bào)(Bioorg.Med.Chem.Letters)9(1999)1807。
玻連蛋白受體αvβ3是屬于整連蛋白受體超家族的一種膜糖蛋白，除了在破骨細(xì)胞上以外，還表達(dá)在其它細(xì)胞如內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌系統(tǒng)的細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞表面上，控制這些細(xì)胞參與的相互作用過(guò)程。因此，除了抑制骨吸收以外，αvβ3拮抗劑還能夠影響其它過(guò)程，例如腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移、動(dòng)脈硬化、血管形成或發(fā)炎，一般來(lái)說(shuō)，αvβ3拮抗劑適合治療和預(yù)防基于細(xì)胞-細(xì)胞或細(xì)胞-基質(zhì)相互作用過(guò)程中玻連蛋白受體與其配體之間相互作用的那些疾病，或者可以通過(guò)影響該相互作用而被防止、減輕或治愈的疾病。在以下文獻(xiàn)中評(píng)述了作為治療目標(biāo)的αvβ3和αvβ3拮抗劑的適應(yīng)癥Hillis等，臨床科學(xué)(Clinical Science)91(1996)639；Engleman等，醫(yī)藥化學(xué)年報(bào)(Ann.Rep.Med.Chem.)31(1996)191；或Samanen等，當(dāng)代藥物設(shè)計(jì)(Current pharm Design)3(1997)545。
例如，Yue等在藥理研究通訊(Pharmacol.Rev.Commun.)10(1998)9；或Coleman等在循環(huán)研究(Circulation Res.)84(1999)1268中表明，αvβ3拮抗劑抑制血管平滑肌細(xì)胞的遷移，并減少會(huì)導(dǎo)致動(dòng)脈硬化和血管成形術(shù)后再狹窄的新內(nèi)膜的形成。
還已證明，玻連蛋白受體αvβ3與多種癌癥的發(fā)展有關(guān)，而且αvβ3拮抗劑能在血管形成期間通過(guò)誘發(fā)血管細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡使腫瘤收縮，并能抑制腫瘤生長(zhǎng)和腫瘤轉(zhuǎn)移(例如見(jiàn)，Brooks等，細(xì)胞(cell)，79(1994)1157；Carron等，癌癥研究(CancerRes.)58(1998)1930；Yun等，癌癥研究(Cancer Res.)56(1996)1268；或上述的參考文獻(xiàn)).αvβ3拮抗劑與其它的已知抗腫瘤治療劑的結(jié)合已顯示出對(duì)腫瘤和轉(zhuǎn)移極其有效(見(jiàn)Lode等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院報(bào)(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)96(1999)1591)。
Friedlander等在科學(xué)(Since)270(1995)1550中描述了抑制bFGF-誘發(fā)的鼠眼中血管形成過(guò)程的αvβ3拮抗劑，這種性質(zhì)可用于治療視網(wǎng)膜病和牛皮癬。Storgard等在臨床研究雜志(J.Clin.Invest.)103(1999)47中描述了αvβ3拮抗劑在治療關(guān)節(jié)炎病中的應(yīng)用。
因此，對(duì)于玻連蛋白受體αvβ3或與其有關(guān)的相互作用施加影響，提供了對(duì)于仍然需要合適的藥物活性組分進(jìn)行治療和預(yù)防的各種疾病施加影響的可能性。
各種整連蛋白拮抗劑，包括αvβ3拮抗劑，已有介紹。作為例子，可以提到在EP-A-820991、歐洲專利申請(qǐng)99102916.6、WO-A-93/19046、WO-A-94/12181、WO-A-95/32710、WO-A-98/00395、WO-A-98/23451或WO-A-99/32457中所述的化合物。在國(guó)際專利申請(qǐng)PCT/EP 99/00242及其對(duì)應(yīng)申請(qǐng)中，介紹了一些磺酰胺衍生物，它們是特別強(qiáng)的αvβ3拮抗劑和骨吸收抑制劑。這些磺酰胺衍生物包括(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸及其酯。(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯在體內(nèi)水解成實(shí)際上拮抗αvβ3的(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸，顯示出特別有利的藥理型式。
利用國(guó)際專利申請(qǐng)PCT/EP 99/00242中所述的制備方法，(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯以鹽酸鹽形式得到。但是，在國(guó)際專利申請(qǐng)PCT/EP 99/00242中通過(guò)濃縮游離的酯的鹽酸溶液并隨后冷凍干燥分離出的鹽酸鹽不能用結(jié)晶法或者至少沉淀法分離或純化。因此，(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯的鹽酸鹽幾乎不能在藥物中作為藥理活性物質(zhì)，因?yàn)榉ㄒ?guī)嚴(yán)格限定了藥物成分的純度，而且作為在制備、分離和純化藥物過(guò)程中的工業(yè)合成目標(biāo)產(chǎn)物，同樣必須遵守法規(guī)嚴(yán)格限定的條件和操作程序。(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯與各種其它酸的鹽也不能結(jié)晶或至少是沉淀，因此同樣不能以實(shí)際可行的、成本和勞動(dòng)力有效的方式以工業(yè)規(guī)模制備。本發(fā)明的目的是提供合適形式的(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯，它容易分離和純化，而且有可能容易達(dá)到所要求的純度并符合與工業(yè)合成有關(guān)的要求和蓋侖制劑的要求。
這一目的出乎意料地通過(guò)提供(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯的半富馬酸鹽得到實(shí)現(xiàn)，該鹽中含有摩爾比為2∶1(或近似2∶1)的(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯和富馬酸，即，它含有每摩爾(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯1/2(＝0.5)(或近似1/2)摩爾的富馬酸。因此，本發(fā)明的一個(gè)對(duì)象是式I的(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯半富馬酸鹽。 式I的特定的鹽具有有利的物理化學(xué)性質(zhì)例如沒(méi)有想到的不吸濕性和穩(wěn)定性。它容易用沉淀法分離，例如從合成過(guò)程中得到的反應(yīng)溶液中沉淀，而且如果希望純化，則可以在規(guī)定的條件下沉淀，例如從乙醇溶液中沉淀。該化合物因此滿足對(duì)藥物的立法和技術(shù)要求。
式I化合物可以按照制備酸加成鹽的常規(guī)步驟制備，游離的(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯可以象國(guó)際專利申請(qǐng)PCT/EP99/00242中所述作為原位生成的中間體得到，將其按每摩爾約0.5摩爾或適當(dāng)過(guò)量(例如0.55或0.60摩爾)的富馬酸在溶劑或稀釋劑中混合，或者可以由作為合成中間體得到的(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯的另一種鹽通過(guò)陰離子交換制備。式I化合物的制備方法優(yōu)選包括一種制備(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯的新的合成策略，隨后將其轉(zhuǎn)化成式I的半富馬酸鹽。這種新方法通過(guò)簡(jiǎn)單的匯集步驟以高產(chǎn)率得到所要的化合物，它將在下面介紹，是本發(fā)明的另一對(duì)象。
這種新方法可以制備式IV的(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯及其鹽，特別是式I的半富馬酸鹽，其特征在于式II的4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酸或其衍生物與式III的(2S)-3-氨基-2-(萘-1-磺酰氨基)丙酸乙酯，或這些化合物中任何一個(gè)或兩個(gè)的鹽之間進(jìn)行反應(yīng)的縮合步驟。這樣得到的式IV化合物隨后可以用酸，例如用制備式I化合物所用的富馬酸，轉(zhuǎn)化成酸加成鹽。 式II化合物中的基團(tuán)COX可以是羧基COOH或是羧酸的活性衍生物，例如羧酸酰鹵化物，如羧酸酰氯或羧酸酰溴；活性羧酸酯，如合適的芳基酯，例如苯酯、對(duì)硝基苯酯或五氟苯基酯；羧酸唑化物，如咪唑化物；或是在溶液中通常只作為中間體存在的基團(tuán)，如混合酸酐，例如由羧酸和氯甲酸異丁酯得到的混合碳酸酸酐，或活性酯，如1-羥基苯并三唑基酯或N-羥基丁二酰亞胺基酯。式I中的X因此可以是羥基或一個(gè)離去基團(tuán)，例如，羥基、氯、溴、未取代的或取代的苯基、異丁氧羰基氧基等。優(yōu)選X是羥基或氯，更優(yōu)選是氯。
可用于該反應(yīng)的式II和式III化合物的鹽可以是例如氫鹵酸鹽(如鹽酸鹽或氫溴酸鹽)，與其它無(wú)機(jī)酸如硫酸形成的鹽，或與有機(jī)羧酸或磺酸(如三氟乙酸或?qū)妆交撬?形成的鹽。使用式II化合物和/或式III化合物的鹽形式可能有利，因?yàn)樵谄湎绕谥苽渲惺且喳}的形式得到式II和/或式III化合物，避免了額外的步驟，而且/或者鹽在工業(yè)過(guò)程中更容易處理，以及/或者鹽比各自的游離化合物更穩(wěn)定。例如，如果在式III化合物的先期制備中乙酯基團(tuán)是由各自的羧酸通過(guò)在酸(如鹽酸或硫酸)存在下與乙醇酯化得到的，則式III化合物是以在胺部分與該酸的酸加鹽形式得到，另外，作為這樣一種鹽，式III化合物在貯存期間比游離胺更穩(wěn)定。類似地，其中X是氯的式II化合物可以在其先期制備中以胍部分的鹽酸鹽形式得到，作為這樣一種鹽，可能更穩(wěn)定和更易處理。優(yōu)選在與式II化合物的反應(yīng)中使用鹽形式，特別是鹽酸鹽形式的式III化合物。在X是氯或溴的情形，式II化合物也優(yōu)選以各自的氫鹵酸鹽的形式，例如以鹽酸鹽形式使用。在X是羥基的情形，式II化合物可以以含有帶負(fù)電的羧基和帶正電的胍基的內(nèi)鹽(或甜菜堿或兩性離子)形式存在，該類型的鹽也屬于本發(fā)明的范圍。
由式II和式III化合物得到式IV化合物的反應(yīng)是在本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的由胺和羧酸或其衍生物形成酰胺的常用條件下進(jìn)行的，這包括肽化學(xué)已知的方法和條件。這類反應(yīng)的細(xì)節(jié)可以在標(biāo)準(zhǔn)參考書(shū)中查到，例如Houben-Weyl，有機(jī)化學(xué)方法(Methoden der OrganischenChemie)，Georg Thieme Verlag，Stuttgart，1974；或J.March，高等有機(jī)化學(xué)(Advanced Organic Chemistry)，第三版，John Wiley& Sons，1985。
當(dāng)在反應(yīng)中使用其中COX是COOH的式II化合物時(shí)，常將其用羧酸的常用活化劑原位活化，例如用碳化二亞胺，如N，N’-二環(huán)己基碳化二亞胺或N，N’-二異丙基碳化二亞胺，脲鎓鹽，如四氟硼酸O-((氰基(乙氧羰基)亞甲基)氨基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓鹽(TOTU)或六氟磷酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓(HATU)；或丙基膦酸酐。活化也可以進(jìn)行到形成作為原位中間體的一種上述的式II化合物，例如通過(guò)與1，1’-羰基二咪唑反應(yīng)形成的咪唑化物，或通過(guò)與氯甲酸烷基酯反應(yīng)形成的混合碳酸酐，或通過(guò)與氯化劑(如亞硫酰二氯或草酰氯)反應(yīng)形成的?；u化物，如酰氯?；罨磻?yīng)可以在標(biāo)準(zhǔn)條件下進(jìn)行。例如，用氯甲酸烷基酯、碳化二亞胺或脲鎓鹽活化常常在惰性非質(zhì)子溶劑中，例如在烴類或鹵化烴類(如甲苯或二氯甲烷)、醚類(如四氫呋喃、二噁烷或二甲氧基乙烷)、酯類(如乙酸乙酯)、酰胺(如N，N-二甲基甲酰胺或N-甲基吡咯烷酮)、腈類(如乙腈)或這些溶劑的混合物中于約-10℃至約室溫的溫度下進(jìn)行?；罨聂人犭S后與式III化合物反應(yīng)，通常反應(yīng)溫度為約-10℃至約室溫?；罨半S后的與式III化合物的反應(yīng)通常在堿存在下進(jìn)行，例如叔胺，如三乙胺、N，N-二異丙基乙胺或N-甲基嗎啉。在使用式III化合物的鹽的情形，該堿還釋放出式III的游離胺，并確保最終存在式IV的游離化合物。當(dāng)其中COX是羧酸酯的式II化合物與式III化合物或其鹽反應(yīng)時(shí)，也可以使用所述的堿和溶劑，例如所述的烴、醚、酰胺或腈，這樣的反應(yīng)通常在約0℃至約80℃的溫度進(jìn)行。
當(dāng)使用其中X是氯或溴(特別是氯)的式II化合物時(shí)，除了例如烴或氯化烴(如甲苯、氯仿或二氯甲烷)、醚(如四氫呋喃、二噁烷或二甲氧基乙烷)、酯(如乙酸乙酯)、酰胺(如N，N-二甲基甲酰胺或N-甲基吡咯烷酮)、腈(如乙腈)或這些溶劑的混合物之外，反應(yīng)也可以在水或者一種或多種上述溶劑與水的混合物中進(jìn)行，特別優(yōu)選在水和與水基本上不混溶的有機(jī)溶劑組成的兩相體系中進(jìn)行，例如在烴或氯化烴(如二氯甲烷)與水的混合物或在酯(如乙酸乙酯)與水的混合物中進(jìn)行。
為了得到游離的式IV化合物，其中X是氯或溴的式II化合物通常與式III化合物在足量的堿存在下反應(yīng)，該堿清除掉反應(yīng)中產(chǎn)生的鹵化氫，并且在使用式III化合物的鹽的情形還釋放出游離胺。除了叔胺如三乙胺或吡啶之外，也可以有利地使用無(wú)機(jī)堿，例如碳酸氫鹽(如碳酸氫鈉或碳酸氫鉀)、碳酸鹽(如碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銫、碳酸鎂或碳酸鈣)或氫氧化物(如氫氧化鈉、氫氧化鉀或氫氧化鈣)，或這些堿的混合物。特別是當(dāng)反應(yīng)是在水存在下進(jìn)行時(shí)，優(yōu)選使用無(wú)機(jī)堿。某些堿和向反應(yīng)混合物中引入堿的某些方式特別有利，這取決于其中X是氯或溴的式II化合物與式III化合物的反應(yīng)的預(yù)定的技術(shù)細(xì)節(jié)。例如，在兩相體系中使用碳酸氫鹽的情形，在反應(yīng)開(kāi)始時(shí)加入全部的堿可能較好，而在使用氫氧化物的情形，則最好是在反應(yīng)過(guò)程中逐漸加堿。也可能優(yōu)選以這樣的方式加堿，即，在其中X是氯或溴的式II化合物與式III化合物反應(yīng)期間一直保持一定的pH范圍，例如pH為約5-10，特別是約7-9。
其中X是氯或溴的式II化合物與式III化合物的反應(yīng)通常在約0-40℃，優(yōu)選在約10-30℃，特別是在約室溫下進(jìn)行。
通常，取決于反應(yīng)的具體方式，式II和式III化合物的摩爾比一般為約1.1∶1至約1∶1.1，優(yōu)選為約1∶1。式II化合物可以先加入，特別是在使用要先進(jìn)行活化的其中X為羥基的式II化合物時(shí)，隨后將式III化合物以一份或幾份或以連續(xù)方式加入。與此一樣，可以先加入式III化合物，式II化合物可以以一份或幾份或連續(xù)加入，或者也可以將兩個(gè)組分同時(shí)計(jì)量加入反應(yīng)器中。式II和式III化合物可以以溶液、懸浮液或固體形式使用。取決于反應(yīng)的具體情況，式II和式III化合物的反應(yīng)經(jīng)常在反應(yīng)組分混合后不久完成，反應(yīng)混合物通常需要連續(xù)攪拌不超過(guò)幾小時(shí)，例如0.5-8小時(shí)。
反應(yīng)混合物的后處理取決于反應(yīng)進(jìn)行的具體方式。一般，用常規(guī)的處理步驟進(jìn)行后處理，例如，加水和/或有機(jī)溶劑，調(diào)節(jié)pH，分離各相，進(jìn)行萃取，洗滌，干燥，過(guò)濾，蒸發(fā)等。如果式I化合物的反應(yīng)是在水不溶性有機(jī)溶劑內(nèi)進(jìn)行，則后處理優(yōu)選包括加水形成兩相體系，任選地調(diào)節(jié)至略呈堿性的pH，分離各相，任選地萃取水相，將有機(jī)相干燥和任選地濃縮或蒸發(fā)。在反應(yīng)于水-與水不混溶的溶劑的混合物中進(jìn)行的情形，優(yōu)選以相應(yīng)的方式進(jìn)行后處理。如果反應(yīng)是在與水混溶的有機(jī)溶劑中進(jìn)行，后處理的進(jìn)行優(yōu)選是先在減壓下除去溶劑，然后加入與水不混溶的溶劑和水以形成兩相體系并象上述一樣進(jìn)行。在所有這些優(yōu)選的后處理步驟中，式IV的游離化合物都以在有機(jī)溶劑中的溶液形式得到，如果在蒸發(fā)步驟中完全除掉了溶劑，則以蒸發(fā)殘留物形式得到，隨后可將其溶在所要的有機(jī)溶劑中。
為了制備所要的式IV化合物的酸加成鹽，將得到的式IV化合物的溶液與所需之酸結(jié)合。該酸可以以純形式、溶液或懸浮液形式使用，可以將酸加到式IV化合物的溶液中，也可以將式IV化合物的溶液加到酸中。優(yōu)選的酸量取決于形成鹽的具體情況。如果要制備1∶1酸加成鹽，通常使用摩爾比為約1∶1或者由約1.3∶1至1∶1、或者約1.1∶1至1∶1的過(guò)量的酸，其中酸的摩爾量可以方便地以起始物式II或式III化合物的摩爾量為基礎(chǔ)。如果要制備含有每摩爾酸2摩爾式I化合物的2∶1酸加成鹽，則酸通常以約0.5∶1(即，每1摩爾式IV化合物0.5摩爾酸)的摩爾比或以約0.65∶1至0.5∶1或約0.55∶1至0.5∶1的摩爾過(guò)剩量使用。如果形成的鹽不能自溶液中結(jié)晶或沉淀，則利用蒸發(fā)或冷凍干燥來(lái)分離，如果需要，再將產(chǎn)物進(jìn)行純化。如果鹽結(jié)晶或者可以沉淀，則最好是選擇成鹽過(guò)程于其中進(jìn)行的溶劑、該溶劑的量以及溫度，使得產(chǎn)物的結(jié)晶或沉淀是從透明的溶液出發(fā)。
如果要制備式IV化合物的半富馬酸鹽，即式I化合物，優(yōu)選以起始物式II式III化合物的摩爾量為基礎(chǔ)，將約0.5摩爾富馬酸加到得到的式IV化合物的溶液中，例如若是使用二氯甲烷進(jìn)行式II和III化合物的反應(yīng)和/或萃取后處理，則直接加到式IV化合物在該溶劑中的干燥和部分蒸發(fā)過(guò)的溶液中。在將富馬酸和式IV化合物混合后，優(yōu)選先將混合物加熱形成透明的溶液，例如在使用二氯甲烷的情形約30-40℃，該溶液在冷卻時(shí)開(kāi)始沉淀出或者可以沉淀出式I化合物。為了沉淀完全，可以將懸浮液冷卻到例如約-10℃至約5℃，或者由約-5℃至約0℃，并且/或者可以加入另一種只能略溶解該鹽的溶劑。然后利用過(guò)濾或離心分離出式I的固體半富馬酸鹽，洗滌，需要時(shí)進(jìn)行干燥和/或純化。產(chǎn)物是以高產(chǎn)率和高純度得到。
以上反應(yīng)中使用的式II和式III起始化合物可以按照下述得到。式III的(2S)-3-氨基-2-(萘-1-磺酰氨基)丙酸乙酯或其鹽的制備可以由式V的(S)-天冬酰胺(＝(L)-天冬酰胺)出發(fā)，后者容易以光學(xué)純的形式得到。在式V化合物中，氨基先在標(biāo)準(zhǔn)條件下用萘-1-磺酸的活性衍生物，例如用式VI的萘-1-磺酰氯磺酰化，這經(jīng)常在約0℃至約室溫的溫度下于堿存在下進(jìn)行。此反應(yīng)可以方便地在例如有機(jī)溶劑和水的混合物(如四氫呋喃和水或者二甲氧基乙烷和水的混合物)中進(jìn)行，使用堿金屬氫氧化物(如氫氧化鈉)作為堿，保持pH在堿性范圍，例如約12。使用的各組分的摩爾比通常為約1∶1。 得到的式VII琥珀酰胺酸衍生物中的氨基甲?；S后可以用Hofmann降解法，即，利用氯或溴在含水堿金屬氫氧化物(如氫氧化鈉或氫氧化鉀)中的溶液的作用，或作為該溶液活性成分的堿金屬次鹵酸鹽的作用，轉(zhuǎn)化成氨基，形成式VIII的3-氨基丙酸衍生物。Hofmann降解進(jìn)行的細(xì)節(jié)優(yōu)選基本上如后面實(shí)施例部分中所述，使用溴和氫氧化鈉，按照Amato等在有機(jī)化學(xué)雜志(J.Org.Chem.)63(1998)9533中所述方法。式VIII產(chǎn)物可以通過(guò)酸化至pH約6.5-7方便地從含水反應(yīng)混合物中分離，在該pH下此內(nèi)鹽沉淀。
由式VIII化合物形成式II化合物或其鹽的酯化反應(yīng)可以在標(biāo)準(zhǔn)條件下進(jìn)行，例如在酸催化劑(如氣態(tài)氯化氫或硫酸)存在下與乙醇在由約20℃至乙醇沸點(diǎn)的溫度下反應(yīng)。優(yōu)選在此酸性酯化過(guò)程中使用多于1當(dāng)量的酸，以便使形成的式VIII氨基酯以容易分離且具有較高貯存穩(wěn)定性的酸加成鹽形式存在。酯化反應(yīng)的進(jìn)行優(yōu)選是向式VII化合物在乙醇中的懸浮液中通入氯化氫氣，并分離出鹽酸鹽形式的式VIII化合物。
式II的4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲?；?乙基)苯甲酸或其衍生物或它們的鹽的制備可以由市售的式IX 4-甲酰苯甲酸出發(fā)。在如Hu等于生物有機(jī)與醫(yī)藥化學(xué)(Bioorg.Med.Chem.)5(1997)1873中所述的標(biāo)準(zhǔn)條件下，式IX的酸首先轉(zhuǎn)化成合適的酯，例如用芐基鹵(如芐基溴)轉(zhuǎn)化成式X的已知的芐基酯。為了實(shí)現(xiàn)這一O-烷基化，通常使酸和芐基鹵在溶劑或稀釋劑(例如在酰胺如N，N-二甲基甲酰胺)中于堿(如碳酸鉀)存在下在室溫或高溫下反應(yīng)。式X的芐基酯可以不經(jīng)進(jìn)一步純化，以粗品形式直接用于隨后的步驟。
然后使式X的酯與丙二酸在Knoerenagel反應(yīng)的條件下縮合，得到式XI的肉桂酸衍生物。當(dāng)在典型的Knoerenagel縮合反應(yīng)條件下，于吡啶中在哌啶存在下加熱回流進(jìn)行反應(yīng)時(shí)，式XI化合物的產(chǎn)率高于95％(以式IX的甲酰苯甲酸為基礎(chǔ))。 為了順利地與式XII的2-氨基嘧啶反應(yīng)生成4-(2-(嘧啶-2-基氨基甲酰)乙烯基)苯甲酸芐酯(式XIII)，宜先將式XII化合物中的羧酸部分活化或轉(zhuǎn)化成活性更強(qiáng)的羧酸衍生物。以上關(guān)于其中X是羥基的式II羧酸的活化的說(shuō)明相應(yīng)地適用于式XI化合物的活化。一種優(yōu)選的方式是，將式XI化合物用氯化劑，例如亞硫酰二氯或草酰氯，在標(biāo)準(zhǔn)條件下轉(zhuǎn)化成酰基鹵，特別是酰基氯，即，轉(zhuǎn)化成其中COOH被COCL代替的式XI化合物。式XI的酸可以與例如過(guò)量的亞硫酰二氯反應(yīng)，如果需要，在一種惰性溶劑如烴或鹵化烴(如甲苯)中反應(yīng)，直到不再放出二氧化硫和氯化氫為止。在除掉溶劑和/或多余的亞硫酰二氯之后，該酰氯粗品(或代替酰氯使用的式XI化合物的另一種活性衍生物)隨后與2-氨基嘧啶在用于形成酰胺的常規(guī)條件下反應(yīng)。以上關(guān)于式II與式III化合物的反應(yīng)的說(shuō)明相應(yīng)地適用于此反應(yīng)。此反應(yīng)通常在堿存在下，本情形下特別是一種叔胺，如三乙胺或者最好是吡啶，在惰性溶劑或稀釋劑中，例如在烴或鹵化烴(如二氯甲烷)或者醚或酯中進(jìn)行，反應(yīng)溫度為約-10℃至約20℃。
隨后，將得到的式XIII化合物中CH＝CH-CO-N部分內(nèi)的碳碳雙鍵還原成單鍵，雜芳族嘧啶-2-基部分還原成1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基部分，芐基酯基團(tuán)裂解，以得到式XIV的4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲?；?乙基)苯甲酸。這三個(gè)轉(zhuǎn)化可以在一個(gè)反應(yīng)步驟內(nèi)同時(shí)完成，即，利用催化加氫。因此，在本發(fā)明的合成策略中優(yōu)選經(jīng)由式X、XI和XIII的芐基酯化合物進(jìn)行，并利用催化加氫完成由式XIII化合物向式XIV化合物的轉(zhuǎn)化，包括酯裂解。
式XIII化合物或其鹽催化加氫形成式XIV化合物優(yōu)選在常用的貴金屬催化劑，例如鈀、銠或鉑催化劑，特別是鈀/碳存在下進(jìn)行。催化劑的數(shù)量取決于反應(yīng)的具體情況和所要求的反應(yīng)速度，可以是例如0.5-5mol％(以式XIII化合物為基礎(chǔ))。作為溶劑或稀釋劑，可以使用一種或多種溶劑，例如乙酸、(C1-C4)醇(如甲醇、乙醇或異丙醇，特別是異丙醇)、醚類(如四氫呋喃或二噁烷)或者水，例如乙酸與水、異丙醇和二噁烷等溶劑中的一種的混合物，特別是乙酸和水的混合物。式XIII化合物的加氫優(yōu)選在羧酸(如乙酸)存在下于酸性pH下進(jìn)行，乙酸也可以起溶劑作用，或者在無(wú)機(jī)酸如鹽酸或硫酸存在下進(jìn)行。優(yōu)選使用弱酸，如乙酸。氫氣壓力的選擇取決于可利用的技術(shù)設(shè)備，可以是約1巴，或最高達(dá)約2巴或約5巴，或者更高。加氫反應(yīng)經(jīng)常在約20-60℃的溫度下進(jìn)行。在除去催化劑后，用常規(guī)方法分離出式XIV產(chǎn)物(它也是其中X是羥基的式II化合物)。如果在強(qiáng)酸(如鹽酸或硫酸)存在下進(jìn)行加氫，則優(yōu)選將產(chǎn)物完全轉(zhuǎn)化成式XIV化合物的各自的酸加成鹽，或者將該酸中和，產(chǎn)物完全轉(zhuǎn)化成游離的式XIV化合物(可以是內(nèi)鹽)。
為了制備其中X是氯或溴的式II化合物，利用常規(guī)的氯化劑，例如亞硫酰二氯、草酰氯或草酰溴，將式XIV化合物轉(zhuǎn)化成羧酸酰鹵。優(yōu)選通過(guò)與過(guò)量的亞硫酰二氯(例如每摩爾式XIV化合物1.2至2摩爾亞硫酰二氯)反應(yīng)，將式XIV化合物轉(zhuǎn)化成?；?，即，其中X是氯的式II化合物。過(guò)量的亞硫酰二氯也可以作為溶劑或稀釋劑使用，或者可以加入一種惰性溶劑或稀釋劑，例如烴類或氯化烴，如甲苯或二氯甲烷，在反應(yīng)完成后將其與過(guò)剩的亞硫酰二氯一起除去。反應(yīng)通常在從約40℃至約100℃的高溫下進(jìn)行。在式XIV化合物轉(zhuǎn)化成?；u期間形成的鹵化氫被分子中的堿性胍部分結(jié)合，形成鹵化氫加成鹽。該?；u優(yōu)選以其固態(tài)的鹵化氫鹽形式分離，它們可以直接用于上面說(shuō)明的與式III化合物的反應(yīng)。
總之，上述的由式II和式III化合物制備式I化合物的方法，與上述的制備式II和式III的起始化合物的方法一起，以簡(jiǎn)單的方式和異常高的總產(chǎn)率由容易得到的起始物得到式I化合物。在構(gòu)筑式I(或式IV)分子的各種有效策略之中，本發(fā)明方法中的將小的構(gòu)筑單元組裝成一定的中間體而后結(jié)合得到最終目標(biāo)化合物的獨(dú)特方式，被證實(shí)特別成功。至少，本發(fā)明方法的產(chǎn)率比按照國(guó)際專利申請(qǐng)PCT/EP99/00242的方法制備式IV中間體化合物可以得到的式I化合物的產(chǎn)率要高得多，而且本發(fā)明方法比起國(guó)際專利申請(qǐng)PCT/EP 99/00242的方法更簡(jiǎn)單和更易在工業(yè)規(guī)模上應(yīng)用。本發(fā)明方法的優(yōu)點(diǎn)在很大程度上是由于使用了關(guān)鍵的II和XIV中間體，即，基于使用4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酸及其衍生物，以及由于它們的合適制備方法，特別是通過(guò)對(duì)其式XIII前體加氫制備式XIV化合物的簡(jiǎn)單方法，它一步實(shí)現(xiàn)了去除苯甲酸芐基保護(hù)基團(tuán)以及將肉桂酸雙鍵還原為嘧啶環(huán)。
本發(fā)明的對(duì)象還有式II和式XIV化合物，它們是有價(jià)值的中間體，可用于制備藥理活性化合物如式I的半富馬酸鹽，或式IV的化合物其它鹽，或含4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰部分的其它化合物。本發(fā)明的對(duì)象特別是式XV化合物及其鹽， 其中Y是羥基、氯或溴。式XV化合物的鹽的實(shí)例是鹽酸鹽或溴氫酸鹽，它們特別可能在Y是氯或溴的情形存在。其中Y是羥基而且胍基部分不是酸加成鹽的式XV化合物也被本發(fā)明轉(zhuǎn)化成內(nèi)鹽(或甜菜堿)。優(yōu)選的式XV化合物是其中Y為羥基或氯的那些化合物及其鹽，即，4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酸和4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氯及它們的鹽，在其中的Y是氯的式XV化合物的情形，特別是鹽酸鹽。本發(fā)明的其它對(duì)象是上述的通過(guò)對(duì)4-(2-(嘧啶-2-基氨基甲酰)乙烯基)苯甲酸芐酯或其鹽加氫制備4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酸或其鹽的異常簡(jiǎn)單而高效的方法，以及作為該方法起始物的式XIII的4-(2-(嘧啶-2-基氨基甲酰)乙烯基)苯甲酸芐酯或其鹽。
式I化合物是有價(jià)值的藥理活性化合物，它適合治療和預(yù)防骨病、腫瘤病、心血管病或炎癥。式I化合物可以作為治療或預(yù)防藥物對(duì)動(dòng)物，優(yōu)選對(duì)哺乳動(dòng)物，特別是對(duì)人施用。可以施用它本身，或它與其它藥理活性化合物的混合物，或者以能夠腸內(nèi)或非腸內(nèi)施用的藥物組合物形式給藥，組合物中含有有效劑量的式I化合物作為活性成分。
本發(fā)明因此還涉及用作藥物的式I化合物，式I化合物在制備用于治療和預(yù)防上面或后面所述疾病(例如治療和預(yù)防骨病)的藥物中的應(yīng)用，以及式I化合物用于治療和預(yù)防這些疾病和這類治療及預(yù)防的方法。本發(fā)明還涉及藥物組合物(或藥物制劑)，其中含有有效劑量的式I化合物及常用的可藥用載體，即，一種或多種可藥用的載體物質(zhì)和/或添加物。
這些藥物可以口服，例如以丸劑、片劑、涂層片劑、包衣片劑、粒劑、硬和軟明膠膠囊、溶液劑、糖漿劑、乳劑、混懸劑或氣霧混合物的形式口服。但是也可以經(jīng)直腸(例如以栓劑形式)或腸道外(例如靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下)以注射液或輸注液、微膠囊、植入物或藥棒的形式給藥，或者經(jīng)皮或局部給藥，例如以軟膏劑、溶液、乳液或酊劑形式給藥，或者以其它方式，例如以氣溶膠或鼻內(nèi)噴霧劑形式給藥。
本發(fā)明的藥物組合物是以本身已知而且本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的方式制備，將式I化合物與一種或多種可藥用的惰性無(wú)機(jī)和/或有機(jī)載體物質(zhì)(或賦形劑)及/或添加劑混合，需要時(shí)加上一種或多種藥學(xué)活性化合物，形成可用于人類或獸用醫(yī)藥的合適的給藥形式和劑型。為制備丸劑、片劑、包衣片劑和硬明膠膠囊，可以使用例如乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸及其鹽。用于軟明膠膠囊和栓劑的載體物質(zhì)是例如脂肪、蠟、半固態(tài)和液態(tài)的多元醇、天然油或硬化油等。用于制備溶液劑(例如注射液)或乳劑或糖漿劑的合適的載體物質(zhì)是例如水、醇、甘油、多元醇、蔗糖、轉(zhuǎn)化糖、葡萄糖、植物油等。適合用于微膠囊、植入劑或藥棒的載體物質(zhì)是例如羥基乙酸和乳酸的共聚物。藥物組合物通常含約0.5-90％重量的式I化合物。藥物組合物中式I活性組分的量通常為約0.2-500mg，優(yōu)選為約1-200mg，但是取決于藥物組合物的類型也可以更高。
除了式I活性組分和載體之外，藥物組合物可以含有添加劑(或輔助物質(zhì))，例如，填料、崩解劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、潤(rùn)濕劑、穩(wěn)定劑、乳化劑、防腐劑、甜味劑、著色劑、矯味劑、芳香劑、增稠劑、稀釋劑、緩沖劑、溶劑、增溶劑、儲(chǔ)存劑、用于改變滲透壓的鹽、涂布劑或抗氧化劑。另外，除了式I化合物，還可以含有一種或多種其它有治療或預(yù)防作用的成分。
式I化合物在體內(nèi)是一種玻連蛋白受體的拮抗劑并抑制細(xì)胞附著。例如，它能夠抑制破骨細(xì)胞與骨表面的結(jié)合，從而抑制破骨細(xì)胞造成的骨吸收。在例如下述試驗(yàn)中可以顯示出式I化合物的作用。因?yàn)榫哂胁＿B蛋白受體拮抗活性，所以式I化合物一般適用于治療和預(yù)防以細(xì)胞-細(xì)胞相互作用過(guò)程或細(xì)胞-基質(zhì)相互作用過(guò)程中玻連蛋白受體與其配體的相互作用為基礎(chǔ)的疾病，或是會(huì)因此類相互作用被抑制而受影響的疾病，或者需要抑制此類相互作用實(shí)現(xiàn)其預(yù)防、緩解或治愈的疾病。正如在開(kāi)始時(shí)所解釋的，這種相互作用在例如骨吸收、血管生成或血管平滑肌系統(tǒng)的細(xì)胞增生中起一定作用。因此，式I化合物適合用于防止、緩解或治療至少部分地由不良程度的骨吸收、血管生成或血管平滑肌系統(tǒng)細(xì)胞增生引起的疾病。
式I化合物可用于治療和預(yù)防的骨病特別包括骨質(zhì)疏松、血鈣過(guò)多、由于轉(zhuǎn)移引起的骨質(zhì)稀少、牙病、甲狀旁腺機(jī)能亢進(jìn)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和佩吉特病中的關(guān)節(jié)周圍糜爛。此外，式I化合物可用于減輕、避免或治療由于糖皮質(zhì)激素、類固醇或皮質(zhì)類固醇療法或性激素缺乏引起的骨骼疾病。所有這些疾病的特征均是由于骨形成和骨破壞之間的不平衡造成的骨損失，而且它們會(huì)因?yàn)橐种破乒羌?xì)胞造成的骨吸收而受到有利的影響。式I化合物也適合作為骨吸收抑制劑，與常規(guī)的骨質(zhì)疏松療法相結(jié)合，例如服用雙膦酸酯、雌激素、雌激素/黃體酮(激素替代療法或HRT)、雌激素激動(dòng)劑/拮抗劑(選擇性雌激素受體調(diào)制劑或SERM)、降鈣素、維生素D類似物、甲狀旁腺素、生長(zhǎng)激素、促泌素或氟化鈉(參見(jiàn)Jardine等，醫(yī)藥化學(xué)年報(bào)(Annual Reports inMedicinal Chemistry)31(1996)211)，治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松。服用式I化合物和上面列出的對(duì)治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松有效的其它活性組分可以同時(shí)進(jìn)行或以任何次序順序進(jìn)行，一起服用或分開(kāi)服用。為了用于這種結(jié)合治療或預(yù)防，式I化合物和例如上面列出的一種或多種其它活性組分可以一起存在于單個(gè)的藥物組合物中，例如片劑、膠囊或粒劑中，也可以存在于兩種或多種分離的藥物組合物中，組合物內(nèi)可以裝在單個(gè)包裝中或者兩個(gè)或多個(gè)分離的包裝中。式I化合物在這樣的結(jié)合治療或預(yù)防中的應(yīng)用和它們?cè)谥圃煊糜谶@樣一種結(jié)合治療或預(yù)防中的藥物中的應(yīng)用也是本發(fā)明的對(duì)象。本發(fā)明還涉及藥物組合物，其中含有有效數(shù)量的式I化合物和至少另一種如上面列出的在治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松方面、或在抑制骨吸收方面有效的活性組分，以及一種常見(jiàn)的可藥用載體。對(duì)于藥物組合物的上述說(shuō)明相應(yīng)地適用于這種結(jié)合的藥物組合物。
除了作為由破骨細(xì)胞造成的骨吸收的抑制劑之外，式I化合物可以用來(lái)作為腫瘤生長(zhǎng)和腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制劑，作為消炎劑，用于治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，用于治療牛皮癬，用于治療或預(yù)防心血管病，如動(dòng)脈硬化或再狹窄，用于治療或預(yù)防腎病或視網(wǎng)膜病，如糖尿病視網(wǎng)膜病。作為腫瘤生長(zhǎng)或腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制劑，式I化合物還適合與常規(guī)的癌癥療法結(jié)合使用。常規(guī)的癌癥療法的實(shí)例可見(jiàn)Bertino(編者)的癌癥大全(Encyclopedia of Cancer)，Academic Press，1997，該書(shū)在本文引用作為參考。以上關(guān)于式I化合物與常規(guī)的骨質(zhì)疏松療法結(jié)合使用的所有陳述，例如可能的用藥方式和結(jié)合的藥物組合物，都相應(yīng)地適用于式I化合物與常規(guī)的癌癥療法的結(jié)合使用。
在使用式I化合物時(shí)，其劑量可以在很寬的范圍內(nèi)變化，通常要適合于各個(gè)病例的具體情況。例如，它取決于疾病的本質(zhì)和嚴(yán)重程度，及要治療的個(gè)體的一般狀況，也與要治療的是急性或慢性病癥或是否進(jìn)行預(yù)防有關(guān)。在口服用藥的情形，為了對(duì)體重約75kg的成年人獲得有效的結(jié)果，日劑量一般為約0.01-100mg/kg，優(yōu)選為約0.1-50mg/kg，特別是約0.1-5mg/kg(每種情形均為每kg體重的mg數(shù))。在靜脈內(nèi)給藥的情形，日劑量一般為約0.01-100mg/kg，優(yōu)選為約0.05-10mg/kg(每種情形均為每kg體重的mg數(shù))。日劑量可以分成幾份(例如2、3或4份)給藥，特別是在服藥量較大的情形。通常，根據(jù)具體情況，可能需要上調(diào)或下調(diào)所述的日劑量。
式I化合物還可用于診斷，或者在需要阻斷玻連蛋白受體或者影響細(xì)胞-細(xì)胞或細(xì)胞-基質(zhì)相互作用的藥理或生化研究中作為輔劑使用。
b)4-芐氧羰基肉桂酸245g(2.4mol)丙二酸溶于360ml吡啶中(放熱，溫度升至約50℃)，然后加入503g粗品4-甲?；郊姿崞S酯(步驟a產(chǎn)物)和20ml吡啶，將該混合物加熱回流，直到不再產(chǎn)生二氧化碳(約7小時(shí))。將混合物冷卻至室溫，加入2升水，在10℃和攪拌下用約600ml濃鹽酸將混合物酸化至pH1.8使產(chǎn)物沉淀。濾出沉淀的產(chǎn)物，用水洗，在50℃減壓干燥。步驟a)和b)的總產(chǎn)率529.1g(97％)。MS(Cl)283.2(M+H)+1H-NMR(DMSO-D6)δ(ppm)＝12.58(s，broad，1H)；8.02(d，2H)；7.85(d，2H)；7.65(d，1H)；7.55-7.30(m，5H)；6.70(d，1H)；5.38(s，2H)2)4-(2-嘧啶-2-基氨基甲酰)乙烯基)苯甲酸芐酯將282.3g(1mol)4-芐氧羰基肉桂酸懸浮在2升甲苯中，加入108ml(1.48mol)亞硫酰二氯。將該混合物反應(yīng)約7小時(shí)，直到不再產(chǎn)生二氧化硫并得到透明的?；热芤?。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓蒸發(fā)溶劑，殘余物溶在1升二氯甲烷中，在一小時(shí)內(nèi)逐滴加到95.2g(1mol)2-氨基嘧啶和81ml(1mol)吡啶在2升二氯甲烷中的0-5℃溶液中室溫下攪拌反應(yīng)混合物1小時(shí)，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓蒸發(fā)。殘余物溶在2.5升熱乙醇中，然后加1.5升水，將混合物慢慢冷卻至0-5℃，產(chǎn)物沉淀。將產(chǎn)物濾出，用水洗，在60℃下減壓干燥。產(chǎn)量317.1g(88％)。MS(ES)360.2(M+H)+1H-NMR(DMSO-D6)δ(ppm)＝10.85(s，broad，1H)；8.72(s，1H)；8.68(s，1H)；8.02(d，2H)；7.85(d，2H)；7.65(d，1H)；7.55-7.18(m，7H)；5.38(s，2H)3)4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酸305g(0.85mol)4-(2-(嘧啶-2-基氨基甲酰)乙烯基)苯甲酸芐酯在20升的Buchi高壓釜中于8升20％乙酸水溶液中，在40℃和25g10％鈀/碳存在下，于2巴的氫氣壓力下加氫。6小時(shí)后吸收了65.76升氫，此時(shí)結(jié)束反應(yīng)。放置過(guò)夜后將混合物溫?zé)嶂?0℃，濾出催化劑。高壓釜用3升20％乙酸水溶液在70℃洗。催化劑用1.5升20％乙酸水溶液在70℃洗。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓蒸發(fā)濾液，殘余物借助加熱溶在1升水中。在冷卻至室溫時(shí)產(chǎn)物沉出。將混合物冷卻到0-5℃，濾出產(chǎn)物，用冷水洗，在50℃減壓干燥。產(chǎn)量212g(90.6％)。MS(ES)276.1(M+H)+1H-NMR(三氟乙酸)δ(ppm)＝11.55(s)；8.15(d，2H)；7.40(d，2H)；3.62(dd，4H)；3.18(dd，2H)；2.95(dd，2H)；2.15(m，2H)4)4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氯鹽酸鹽110.2g(0.4mol)4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲?；?乙基)苯甲酸懸浮在1.5升甲苯中，然后加入35ml亞硫酰二氯，將混合物在70℃加熱2小時(shí)。接著再加入16ml亞硫酰二氯，繼續(xù)加熱，直到二氧化硫不再生成。將此幾乎透明的溶液蒸發(fā)至干，得到139.5g黃色粉末狀標(biāo)題化合物粗品。此產(chǎn)物直接用于下一反應(yīng)。MS(FAB)294.1((M+H)+游離堿)1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)＝13.05(s，broad，1H)；9.35(s，broad，2H)；8.05(d，2H)；7.40(d，2H)；3.50(m，4H)；3.10(dd，2H)；2.95(dd，2H)；2.05(m，2H)5)(2S)-3-氨基甲酰-2-(萘-1-磺酰氨基)丙酸132.12g(1mol)(S)-天冬酰胺溶在800ml水和500ml 2N氫氧化鈉的混合物中，加入500ml四氫呋喃，將混合物冷卻至0℃，在用2N NaOH保持pH為12.0-12.5的條件下于1小時(shí)內(nèi)加入226.7g(1mol)萘-1-磺酰氯在500ml四氫呋喃中的溶液。將混合物在0℃攪拌1小時(shí)，同時(shí)保持pH為12.5。然后將混合物溫?zé)嶂潦覝?，再攪?小時(shí)，在室溫下放置過(guò)夜。用濃鹽酸將pH調(diào)至7左右，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓除去四氫呋喃。將剩余的水溶液冷卻至0℃，在攪拌下加入濃鹽酸酸化至pH1.8。在0℃攪拌30分鐘后濾出沉淀，用水洗，在40℃真空干燥。產(chǎn)量240g(75％)。MS(ES)323.1(M+H)+1H-NMR(DMSO-D6)δ(ppm)＝12.50(s，1H)；8.65(d，1H)；8.35(d，1 H)；8.20(d，1H)；8.17(d，1H)；8.09(d，1H)；7.80-7.60(m，3H)；7.28(s，1H)；6.82(s，1H)；4.15(m，1H)；2.45(dd，1H)；2.23(dd，1H)6)(2S)-3-氨基-2-(萘-1-磺酰氨基)丙酸在攪拌和0℃下，于45分鐘內(nèi)向148g(4.1mol)氫氧化鈉在940ml水中的溶液加入26ml(0.5mol)溴。然后分別地，將129g(0.4mol)(2S)-3-氨基甲酰-2-(萘-1-磺酰氨基)琥珀酸溶在400ml 2N氫氧化鈉中，再加入16 g氫氧化鈉。將此溶液冷卻至5℃，在激烈攪拌下加到先前制備的次溴酸鈉溶液中，同時(shí)保持反應(yīng)混合物的溫度低于10℃。將該混合物在10℃再攪拌15分，然后在30分鐘內(nèi)溫?zé)嶂?5℃。停止加熱，該放熱反應(yīng)進(jìn)行約1小時(shí)，峰溫為約50℃。當(dāng)放熱反應(yīng)停止時(shí)，在20分鐘內(nèi)將混合物加熱至70℃，在該溫度保持10分鐘。然后將反應(yīng)混合物冷卻至40℃，在此溫度用330ml濃鹽酸酸化至pH6.8，由此使產(chǎn)物沉淀。在室溫下放置過(guò)夜后，將混合物冷卻到10℃，濾出產(chǎn)物，用水洗并真空干燥。產(chǎn)量97.7g(83％)。MS(FAB)295.0(M+H)+1H-NMR(DMSO-D6)δ(ppm)＝8.58(d，1H)；8.25(d，2H)；8.09(d，1H)；7.90(s，Verybroad，3H)；7.80-7.60(m，3H)；3.35(s，very broad，2H)；3.18(m，1H)；3.05(dd，1H)；2.82(dd，1H)7)(2S)-3-氨基-2-(萘-1-磺酰氨基)丙酸乙酯鹽酸鹽147.2g(0.5mol)(2S)-3-氨基-2-(萘-1-磺酰氨基)丙酸懸浮在1升乙醇中，向此混合物中通入氯化氫氣約2小時(shí)，因此溫度升至約35℃，得到一透明溶液。然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)該混合物。將殘余物溶于熱乙醇中，加入二異丙醚，直到產(chǎn)物開(kāi)始沉淀。令產(chǎn)物在室溫下結(jié)晶過(guò)夜。濾出標(biāo)題鹽酸鹽，用二異丙基醚洗，真空干燥。產(chǎn)量148g(83％)。MS(ES)323.2((M+H)+游離堿)1H-NMR(DMSO-D6)δ(ppm)＝8.95(s，broad，1H)；8.63(d，1H)；8.40-8.20(m，3H)；8.13(d，1H)；8.09(d，1H)；7.80-7.60(m，3H)；4.12(m，1H)；3.50-3.36(m，2H)；3.08(dd，1H)；2.92(dd，1H)；0.55(t，3H)8)(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰基)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯半富馬酸鹽25.1g(0.07mol)(2S)-3-氨基-2-(萘-1-磺酰氨基)丙酸乙酯鹽酸鹽通過(guò)加入在30ml水中的17.7g(0.21mol)碳酸氫鈉溶解在100ml二氯甲烷中。在激烈攪拌下于30分鐘內(nèi)分批加入23.2g(0.07mol)4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氯鹽酸鹽。將反應(yīng)混合物再攪拌1小時(shí)，然后分離各層。有機(jī)層用碳酸氫鹽溶液和水萃取，然后用硫酸鈉干燥。濾除硫酸鈉，用二氯甲烷洗。將濾液濃縮至約100ml，向得到的(2S)-2(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯的二氯甲烷溶液加入4.1g(0.035mol)富馬酸。將該混合物加熱回流，直到形成透明的溶液。冷卻時(shí)標(biāo)題半富馬酸鹽開(kāi)始沉淀。加入300ml乙酸乙酯使沉淀完全。過(guò)濾收集產(chǎn)物，用乙酸乙酯洗并且干燥。產(chǎn)量35.5g(79.5％)。熔點(diǎn)201℃。MS(FAB)580.3((M+H)+游離堿)1H-NMR(DMSO-D6)δ(ppm)＝9.73(s，broad，1H)；8.8(s，very broad，1H)；8.63(d，1H)；8.33(t，1H)；8.16(d，1H)；8.09(d，1H)；8.01(d，1H)；7.72-7.50(m，5H)；7.24(d，2H)；6.50(s，1H)；4.08(t，1H)；3.68-3.45(m，4H)；3.34(q，2H)；3.27(t，4H)；2.88(dd，2H)；2.59(dd，2H)；1.79(m，2H)；0.79(t，3H)9)藥理試驗(yàn)在骨吸收的TPTX鼠模型中PTH誘發(fā)的血鈣過(guò)多在這一體內(nèi)試驗(yàn)?zāi)Ｐ椭校ㄟ^(guò)輸注甲狀旁腺素(PTH)，在切除了甲狀腺甲狀旁腺的(TPTX)鼠中誘發(fā)受激骨吸收。骨吸收的變化通過(guò)測(cè)定血清鈣濃度來(lái)監(jiān)視，后者與骨吸收的程度直接有關(guān)。
重150-200g的雄性Sparague Dawley鼠(OFA-IFFA CREDO，F(xiàn)rance)由供應(yīng)商切除甲狀腺甲狀旁腺。允許鼠自由接近含7g Ca/kg的標(biāo)準(zhǔn)商品丸狀食物(UAR)和Volvic水。通過(guò)手術(shù)后8天測(cè)定禁食過(guò)夜的動(dòng)物的血清鈣濃度試驗(yàn)甲狀腺甲狀旁腺切除術(shù)的成功。若血清鈣含量＜80mg/l，則鼠被看作是TPTX鼠。
為了用PTH處理，將鼠PTH(1-34)(Bachem)溶于含2％Cys-HCl的0.15M氯化鈉溶液中，并借助微型滲透泵(ALZET 2001 D)以200pmol/kg/h輸送。微型泵是在氯胺酮(75mg/kg)和乙酰丙嗪(2.5mg/kg)麻醉下插入禁食過(guò)夜的TPTX鼠的腹膜內(nèi)腔中。在對(duì)照組中，TPTX鼠接受充滿PTH的載液的微型泵。
為確定式I化合物的影響，PTH處理過(guò)的TPTX鼠在開(kāi)始輸注PTH后的0和3小時(shí)經(jīng)口服用2次10mg/kg的該化合物(化合物組)。按同樣的方式，PTH處理的TPTX鼠施用載液(PTH組)，未用PTH處理的TPTX組施用載液(對(duì)照組)。實(shí)驗(yàn)共進(jìn)行6小時(shí)。在治療方案結(jié)束時(shí)，斷頭后收集全血。將血樣在3000rpm離心15分(CR 422 Jouan)以得到血清。
采用比色法(Ciba-Corning)，用IEMS Labsystems微型板讀數(shù)器在540nm測(cè)定血清總鈣濃度(＝血鈣濃度)。分析各組間血鈣濃度平均值的差別以得到方差并用Dunnett試驗(yàn)分析。按下式將試驗(yàn)化合物的活性計(jì)算成效量％ 按10mg/kg口服兩次式I化合物觀察到的效果％為-45％。這一體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果表明，式I化合物是高度有效的骨吸收抑制劑。
權(quán)利要求
1.式I的(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯半富馬酸鹽。
2.含有權(quán)利要求1的式I化合物和一種可藥用載體的藥物組合物。
3.制備式IV的(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯或其鹽的方法，包括使式II的4-(2-(1，4，5，6-四羥基嘧啶-2-基氨甲酰)乙基)苯甲酸或其式II中X為羥基或離去基團(tuán)的衍生物與式III的(2S)-3-氨基-2-(萘-1-磺酰氨基)丙酸乙酯反應(yīng)，或鹽或這些化合物中任何一個(gè)或兩個(gè)的鹽反應(yīng)。
4.權(quán)利要求3的方法，其特征在于X是Cl。
5.權(quán)利要求3和/或4的方法，其特征在于，在式II和式III化合物反應(yīng)后，使用一種酸并得到式IV化合物與該酸的酸加成鹽。
6.權(quán)利要求3至5中一項(xiàng)或多項(xiàng)的方法，其特征在于，制備了(2S)-2-(萘-1-磺酰氨基)-3-(4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯半富馬酸鹽。
7.式XV化合物或其鹽， 其中Y是羥基、氯或溴。
8.權(quán)利要求7的式XV化合物，該化合物是4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酸或4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氯，或是這些化合物任一種的鹽。
9.式XIII的4-(2-(嘧啶-2-基氨基甲酰)乙烯基)苯甲酸芐酯或其鹽。
10.一種制備4-(2-(1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基甲酰)乙基)苯甲酸或其鹽的方法，包括將4-(2-(嘧啶-2-基氨基甲酰)乙烯基)苯甲酸芐酯或其鹽氫化。
全文摘要
本發(fā)明涉及式I的(2S)－2－(萘－1－磺酰氨基)－3－(4－(2－(1,4,5,6－四氫嘧啶－2－基氨基甲酰)乙基)苯甲酰氨基)丙酸乙酯半富馬酸鹽及其制備方法,該方法包括使4－(2－(1,4,5,6－四氫嘧啶－2－基氨基甲酰)乙基)苯甲酸或其衍生物與(2S)－3－氨基－2－(萘－1－磺酰氨基)丙酸乙酯反應(yīng)。式I化合物是一種有價(jià)值的藥物,可用于例如治療或預(yù)防會(huì)因抑制玻連蛋白受體而受影響的疾病,特別是骨病,例如骨質(zhì)疏松。本發(fā)明還涉及可用于制備式(I)化合物的化學(xué)中間體。
文檔編號(hào)A61P3/10GK1361767SQ00810416
公開(kāi)日2002年7月31日 申請(qǐng)日期2000年7月8日 優(yōu)先權(quán)日1999年7月21日
發(fā)明者G·布雷珀?duì)? A·佩曼, T·沃曼恩 申請(qǐng)人:艾文蒂斯藥品德國(guó)股份有限公司