專利名稱：作為整合蛋白α的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及如式I所示的新的多肽衍生物，及其在生理上能被接受的鹽類和溶劑化物，環(huán)(Arg-X1-Asp-X2-X3-X4-X5-X6-R1) I其中X1是Ser，Gly或ThrX2是Leu，Ile，Nle，Val或PheX3是Asp，Glu，Lys或PheX4是Gly，Ala或SerX5是Leu，Ile，Nle，Val或PheX6是Arg，Har或LysR1表示空缺或一個(gè)或多個(gè)ω-氨基羧酸殘基，這個(gè)ω-氨基羧酸殘基長度為500～2500pm。
上述這些氨基酸還可以衍生化，包括具有旋光活性的D型和L型氨基酸殘基。
本發(fā)明是基于發(fā)現(xiàn)新的具有好的價(jià)值屬性化合物為目的，特別是它們可以用作醫(yī)藥的生產(chǎn)。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的化合物和它們的鹽類有很高價(jià)值的藥理屬性和好的耐受性。
根據(jù)本發(fā)明的多肽能夠用作整合蛋白αvβ6受體的有效抑制劑，因而能作為多種疾病和病理狀態(tài)的治療手段。
整合蛋白αvβ6的其它抑制劑在DE 19858857中被S.Kraft etal.在J.Biol.Chem.274，1979-85(1999).所描述。根據(jù)本發(fā)明的化合物被認(rèn)為是所提到申請中的一種。
整合蛋白屬于類型I——跨膜受體中的異源二倍體家族，這些跨膜受體在許多細(xì)胞—基質(zhì)或細(xì)胞—細(xì)胞的連接過程中起著重要作用(Tuckwell et al.，1996，Symp.Soc.Exp.Biol.47)。整合蛋白大致可以分為三類β1整合蛋白，胞外基質(zhì)的受體；β2整合蛋白，在白細(xì)胞中可被激活并在炎癥反應(yīng)中被引發(fā)；βv整合蛋白，影響在傷口愈合與其它病理過程中細(xì)胞的反應(yīng)(Marshall and Hart，1996，Semin.Cancer Biol.7，191)。
整合蛋白α5β1，αIIbβ3，α8β1，αvβ3，αvβ5，αvβ8，αvβ6都是與天然配體如纖連蛋白或玻連蛋白中的“精氨酸-甘氨酸-天門冬氨酸”(RGD)多肽序列結(jié)合，含有RGD序列的可溶性多肽能夠阻止這些整合蛋白與其相應(yīng)的天然配體的相互作用。αvβ6是相對較少見的整合蛋白(Busk et al.，1992 J.Biol.Chem.267(9)，5790)，它在上皮組織的修復(fù)反應(yīng)中含量增高，并優(yōu)先結(jié)合天然基質(zhì)分子纖連蛋白和肌腱蛋白(Wang et al.，1996，Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.15(5)，664)。αvβ6的生理和病理學(xué)功能還沒有被精確闡明，然而據(jù)猜測，這個(gè)整合蛋白在涉及上皮細(xì)胞生理反應(yīng)與病癥(如炎癥反應(yīng)、傷口愈合、腫瘤)中起著重要作用。因此αvβ6在傷口的角質(zhì)形成細(xì)胞中表達(dá)(Haapasalmi et al.，1996，J.Invest，Dermatol.106(1)，42)，以此可以斷定除了傷口愈合反應(yīng)和炎癥，皮膚的其它生理性事件例如牛皮癬也能被所述的整合蛋白的激動(dòng)劑或拮抗劑所影響。而且，αvβ6在呼吸道上皮細(xì)胞中也起作用(Weinacker et al.，1995，Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.12(5)，547)，因此這個(gè)整合蛋白合適的激動(dòng)劑/拮抗劑能夠用于呼吸道失調(diào)癥中，例如支氣管炎、哮喘、肺纖維化和呼吸道腫瘤。最后，已知αvβ6在腸道上皮組織中也起作用，因此整合蛋白合適的激動(dòng)劑/拮抗劑能用于胃/腸道的炎癥、腫瘤和胃/腸道傷口的治療上。
P.C.Brooks，R.A.Clark and D.A.Cheresh在Science264，569-71(1994)中描述了血管生成對血管整合蛋白與胞外基質(zhì)蛋白之間相互作用的依賴性。
針對先前所提到的天然高分子量配體和抗體在治療和診斷上的困難性，因而本發(fā)明目的是找到αvβ6潛在的、特異的和具有選擇性的低分子量配體，優(yōu)選多肽，它不僅能夠用于上述提及的治療領(lǐng)域，還可以作為診斷劑和試劑。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的多肽化合物及其鹽類作為可溶性分子對攜帶有所述受體的細(xì)胞發(fā)揮作用，或者，如果它們結(jié)合于表面，就是αvβ6調(diào)節(jié)細(xì)胞粘著中的人工配體。首要的是，它們作為αvβ6整合蛋白的抑制劑，尤其抑制這個(gè)受體與其它配體的結(jié)合，例如纖連蛋白的粘附，這個(gè)反應(yīng)可以被檢測出來，其方法可參見J.W.Smith et al.，1990，J.Biol.Chem.265，12267-12271。
更進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)了這種新物質(zhì)有很好的藥理活性和好的耐受性，可以用作藥劑。在下面將詳細(xì)的說明。
根據(jù)本發(fā)明的多肽化合物，如果運(yùn)用現(xiàn)有技術(shù)，加上合適的標(biāo)記物(如生物素基團(tuán))，就能用作體內(nèi)和體外的診斷試劑。這些診斷試劑是用作上皮系統(tǒng)的生理狀況的檢測和定位。
本發(fā)明還包括了與至少一種其它活性化合物的組合；和/或與其它活性化合物如細(xì)胞毒性化合物的綴合物；還有與用于X-射線治療和PET診斷的放射性標(biāo)記的綴合物；而且還包括融合蛋白，這些融合蛋白或者帶有標(biāo)記蛋白如GFP或抗體，或者帶有治療蛋白如IL-2。
尤其有活性的化合物是式I中的那些化合物，它們的八肽序列，環(huán)(Arg-X1-Asp-X2-X3-X4-X5-X6)被R1所擴(kuò)展，其中這些基團(tuán)X1，X2，X3，X4，X5和X6有指定的意思。以環(huán)(Arg-Gly-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg)[EMD 271588]作為一個(gè)例子，其環(huán)擴(kuò)展所帶來的影響如圖I所示。而Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2[EMD271293]則起著對照化合物的作用。一些如環(huán)(Arg-Gly-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-R1)所示的多肽，從R1處算起的距離(估算)、Q值(IC50[substance]/IC50[EMD 271293])和-logQ在下表中給出。
表I
從表I上可以看出圖表所表示的意思。
即使間隔區(qū)(spacer)R1長度約有500pm處也能得到尤其有活性的化合物。
式I中特別優(yōu)選的化合物是那些R1是一個(gè)或多個(gè)ω-氨基羧酸殘基，這個(gè)ω-氨基羧酸殘基長度為600～2500pm，非常優(yōu)選的間隔區(qū)長度是600～2000pm。
ω-氨基羧酸殘基可被理解為任何一種ω-氨基羧酸，其中優(yōu)選下面群體中的氨基酸，這個(gè)群體包括Ala，Asn，Asp，Arg，Cys，Gln，Glu，Hcy，His，Hse，Ile，Leu，Lys，Met，Pen，Phe，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr，Val和H2N-(CH2CH2O)m-(CH2)n-COOH，其中m，n在任一種情況下是彼此相互獨(dú)立的，可取0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11或12，只要保證m+n＞0；因此本發(fā)明優(yōu)先涉及據(jù)權(quán)利要求I的式I中多肽衍生物及其生理可接受的鹽。
在式I環(huán)(Arg-X1-Asp-X2-X3-X4-X5-X6-R1) I其中X1是Ser，Gly或ThrX2是Leu，Ile，Nle，Val或PheX3是Asp，Glu，Lys或PheX4是Gly，Ala或SerX5是Leu，Ile，Nle，Val或PheX6是Arg，Har或LysR1表示空缺或選自下述群體中的1-10個(gè)氨基酸，這個(gè)群體含有Ala，Asn，Asp，Arg，Cys，Gln，Glu，Hcy，His，Hse，Ile，Leu，Lys，Met，Pen，Phe，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr，Val和H2N-(CH2CH2O)m-(CH2)n-COOH，其中m，n在任一種情況下是彼此相互獨(dú)立的，可取0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11或12，只要保證m+n＞0；上述提到的氨基酸仍能衍變，包括D型和L型的光學(xué)活性的氨基酸殘基。
化合物及其鹽的一些優(yōu)選基團(tuán)能夠被下述子式IA到Ih所表述，而這些子式與式I相適應(yīng)，而那些在子式中沒有更詳細(xì)表明的基團(tuán)具有在式I中指示的意思，a) X1是Gly或Thr；b) X1是Gly或ThrX2是Leu；c) X1是Gly或ThrX2是LeuX3是Asp或D-Asp；d) X1是Gly或ThrX2是LeuX3是Asp或D-Asp
X4是Gly或Ala；e) X1是Gly或ThrX2是LeuX3是Asp或D-AspX4是Gly或AlaX5是Leu；f) X1是Gly或ThrX2是LeuX3是Asp或D-AspX4是Gly或Ala或SerX5是LeuX6是Arg；g) X1是Gly或ThrX2是LeuX3是Asp或D-AspX4是Gly或Ala或SerX5是LeuX6是ArgR1是選自下述群體中的1-10個(gè)氨基酸，這個(gè)群體含有Ala，Asn，Asp，Arg，Cys，Gln，Glu，Hcy，His，Hse，Ile，Leu，Lys，Met，Pen，Phe，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr，Val和H2N-(CH2CH2O)m-(CH2)n-COOH，其中m，n在任一種情況下是彼此相互獨(dú)立的，可取0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11或12，只要保證m+n＞0；h) X1是Gly或ThrX2是LeuX3是Asp或D-AspX4是Gly Ala或SerX5是LeuX6是Arg
R1選自Gly，β-Ala，Abu或Aha中的1-6個(gè)氨基酸。
本發(fā)明特別涉及選自下面群體中的多肽化合物，這個(gè)群體由下面環(huán)狀多肽及其它們的在生理上能被接受的鹽類組成。
環(huán)(Arg-Gly-Asp-Leu-Asp-Ala-Leu-Arg-Gly-Gly-Gly)，環(huán)(Arg-Gly-Asp-Leu-Asp-Gly-Leu-Arg-Gly-Gly-Gly)，環(huán)(Arg-Gly-Asp-Leu-D-Ala-Ala-Leu-Arg-Gly-Gly-Gly)，環(huán)(Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Gly-Gly-Gly)，環(huán)(Arg-Gly-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Abu-Abu)，環(huán)(Arg-Gly-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Aha-Aha)，環(huán)(Arg-Gly-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Aha)，環(huán)(Arg-Gly-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Aee)，環(huán)(Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Abu-Abu)，環(huán)(Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-β-Ala)，環(huán)(Arg-Gly-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-β-Ala)，上文和下面涉及的氨基酸殘基的縮寫詞代表了下述的氨基酸。
Abu 4-氨基丁酸Aee H2N-(CH2CH2O)2-CH2COOHAha 6-氨基己酸Aib α-氨基異丁酸Ala 丙氨酸Asn 天門冬酰胺Asp 天門冬氨酸Arg 精氨酸Bgl Cα-叔丁基氨酸Cys 半胱氨酸Dab 2，4-二氨基丁酸Dap 2，3-二氨基丙酸Gln 谷氨酰胺Glp 焦谷氨酸Glu 谷氨酸Gly 甘氨酸Har 高精氨酸
Hcy高半胱氨酸His組氨酸Homo-Phe高苯丙氨酸Hse高絲氨酸Ile異亮氨酸Leu亮氨酸Lys賴氨酸Met甲硫氨酸Nal萘-2-基丙氫酸Nle正亮氨酸Orn鳥氨酸Pen青霉胺Phe苯丙氨酸Phg苯基甘氨酸4-Hal-Phe 4-鹵代苯丙氨酸Pro脯氨酸Ser絲氨酸Thr蘇氨酸TIS三異丙基硅烷Trp色氨酸Tyr酪氨酸Val纈氨酸另外，隨后的縮寫詞代表了下面的意思。
Ac乙?；鵅OC 叔丁氧羰基BSA 牛血清白蛋白CBZ或Z芐氧羰基DCCl 二環(huán)乙基碳二亞胺DCM二氯甲烷DIEA 二異丙基乙胺DMF甲基甲酰胺EDClN-乙基-N，N’-(二甲胺基丙基)-碳二亞胺
Et乙基FCA 羧酸熒光素FITC 異硫氰酸熒光素Fmoc 9-芴甲氧羰酸FTH 硫脲熒光素HOBt 1-羥基苯并三唑Me甲基MBHA 4-甲基二苯甲基胺4-methylbenzhydrylamineMtr 4-甲氧基-2，3，6-三甲苯磺?；鵋ONSu N-氫氧基丁二酰亞胺OBut 叔丁酯Oct 辛?；鵒me 甲酯Oet 乙酯Pbf 2，2，4，6，7-五甲基苯并二氫呋喃-5-磺酰基Pmc 2，2，5，7，8-五甲基苯并二氫吡喃-6-磺?；鵓OA 苯氧乙?；鵖al 水楊酰TBS++ 二價(jià)Tris緩沖鹽溶液TBSA TBS+BSATBTU 四氟硼酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3-四甲基脲鎓TFA 三氟乙酸Trt 三苯甲基如果上文所提到的氨基酸能夠出現(xiàn)一種或多種對映異構(gòu)體，那么它們所有這些構(gòu)型和它們的混合物(如DL構(gòu)型)都被包括在上文和下面中。另外，能夠給這些氨基酸提供本質(zhì)上已知的合適的保護(hù)基團(tuán)。
本發(fā)明還涉及水合物和溶劑化物，例如這些化合物中的醇化物。
所謂的前體藥物衍生物包括在據(jù)本發(fā)明的化合物中，這些衍生物是通過修飾而成的，而用于修飾的基團(tuán)有烷基、?；⑻腔蚬央模鼈冊隗w內(nèi)會(huì)迅速斷裂釋放出根據(jù)本發(fā)明的活性化合物。這些還包括了據(jù)本發(fā)明的化合物中生物可降解的多聚高分子衍生物，這在Int.J.Pharm.115，61-67(1996)中作了介紹。
所述的氨基酸和氨基酸殘基例如NH功能團(tuán)和末端酰基功能團(tuán)也能夠衍變，優(yōu)選N-甲基、N-乙基、N-苯基或Ca-甲基的衍生物；另外優(yōu)選的衍生物是那些Asp和Glu，尤其是側(cè)鏈羰基上甲基、乙基、苯基、丁基、叔丁基、新戊基或苯酯基的衍生物；此外，精氨酸衍生物能夠在-NH-(C＝NH)-NH2基團(tuán)上被乙?；?、苯?；?、甲氧羰基或乙氧羰基所取代。
據(jù)本發(fā)明的化合物以多肽的形式通過α-氨基和α-羰基(頭-尾相連)將彼此連接在一起，那些環(huán)狀化合物也包括例如在功能性側(cè)鏈如SH基存在下通過下述方式連接側(cè)-側(cè) 例如S-S(二硫鍵)頭-側(cè)側(cè)-尾此外，附加在據(jù)本發(fā)明的化合物中的衍生物是那些包括據(jù)本發(fā)明的實(shí)際多肽和標(biāo)記化合物，而這些化合物使之很容易就能檢測這些多肽，這種衍生物的例子包括有放射性標(biāo)記、生物素標(biāo)記或熒光標(biāo)記的多肽。
熒光染色的基團(tuán)優(yōu)選7-己酰氧基香豆素-3-基，熒光素-5-(和/或6-)基，2’，7’-二氯熒光素-5-(和/或6-)基，二氫四甲基-rosamin-基，四甲基羅丹明-5-(和6-)基，4，4-二氟-5，7-二甲基-4-硼-3a，4a-二氮-s-indacene-3乙基或4，4-二氟-5，7-二苯基-4-硼-3a，4a-二氮-s-indacene-3乙基。
適宜的功能性熒光染色基團(tuán)能作為制備據(jù)本發(fā)明的式I化合物的試劑，這在“Handbook of Fluorescent probes and ResearchChemicals，5thEdition，1992-1994，by R.P.Haughland，Molecular Probes，Inc.”中有描述。
本發(fā)明不僅包括了所述的多肽，而且還包括了混合物和制劑，這些制劑除了包括據(jù)本發(fā)明的這些化合物外，還包括了其它有藥物活性的物質(zhì)或能夠通過期望的方式來影響據(jù)本發(fā)明的多肽一級(jí)藥理學(xué)反應(yīng)的佐劑。
據(jù)本發(fā)明的化合物和制備它們的起始物質(zhì)通過在本質(zhì)上已經(jīng)很清楚和經(jīng)常運(yùn)用的方法分別去制備。這些方法在著作(如in thestandard works such as Houbenweyl，Methoden der orfanischenChemie(Methods of Organic Chemistry)，Georg-Thieme Verlag，Stuttgart)中有所描述。即是在已知并適合所述反應(yīng)的條件下進(jìn)行。這些方法還可以用于本身已知的各種變體上。
據(jù)本發(fā)明的化合物優(yōu)選用固相合成法制備和接下來的分離和純化。Jinczyk und Meienhofer(Peptides，Proc.8thAm.Pept.Symmp.Eds.V.Hruby and D.H.Rich，Pierce Comp.III，pp.73-77，1983，或Angew.Chem.104，1992，375)中有所描述或參見Merrified(J.Am.Chem.Soc.94，1972，3102)。
據(jù)本發(fā)明的多肽能在固相(手工或自動(dòng)合成儀)上制備，通過Fmoc策略運(yùn)用酸不穩(wěn)定的側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)和RP-HPLC的純化方法。峰均質(zhì)性能通過RP-HPLC檢測，而物質(zhì)的鑒定則可用FAB-MS。
另外，這些多肽能通過通常的氨基酸和多肽合成方法制備，例如從Novabiochem-1999 Catalog & Peptide Synthesis Handbook ofCalbichem-Novabiochem GmbH，D-65796 Bad Soden；從許多標(biāo)準(zhǔn)的工作和已公布的專利申請上，這些方法早已被熟知。
接下來可利用逐步耦聯(lián)和片斷縮合，使用不同的N-端、C-端和側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)，而它們是優(yōu)選用于正交清除的，可以使用不同縮合劑保證耦聯(lián)步驟得以實(shí)施，這些縮合劑有碳二亞胺、碳二亞胺咪唑、脲鎓類如TBTU，混合酸酐法，?；u或活性酯法?；钚怎タ梢栽谠环奖愕匦纬?，例如通過添加HOBt或N-羥基丁二酰亞胺。
含有側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)的線性前體分子的環(huán)化同樣可以用這樣的縮合反應(yīng)來實(shí)施。例如在DE 43 10 643或在Houben-Weyl，1.c.，Volume 15/II，1到806頁(1974)有描述。
不同的樹脂和鎓功能團(tuán)能應(yīng)用于固相多肽的合成中，樹脂可以聚苯乙烯或聚丙烯酰胺為基礎(chǔ)；而鎓功能團(tuán)如王氏樹脂(Wang)，O-三氯苯甲基能用于肽酸的制備，而aminoxanthenoxy 用于肽酰胺的制備。
生物素或熒光標(biāo)記多肽/蛋白也同樣可以用標(biāo)準(zhǔn)的方法進(jìn)行制備。(如E.A.Bayer and M.Wilchek，Methods of BiochemicalAanlysis Vol.26，The Use of the Avidin-Biotin Complex as aTool in Molecular Biology；和Handbook of Fluorescent Probesand Research Chemicals，6 Editiion，1996，by R.P.Haugland，Molecular Probes，Inc.；或者見WO 97/14716)。
當(dāng)然據(jù)本發(fā)明的多肽也能通過溶劑解而從它們的功能性衍生物上解離下來，特別是通過水解作用或氫解作用。優(yōu)選的用于溶劑解或氫解的起始物質(zhì)是那些取代了一個(gè)或多個(gè)游離氨基和/或羥基而含有相應(yīng)被保護(hù)的氨基和/或羥基，尤其是那些取代了與N原子相連的H原子而帶上一個(gè)氨基保護(hù)基團(tuán)或者取代了羥基上的H原子而帶上了一個(gè)羥基保護(hù)基團(tuán)。同樣，可以通過一個(gè)保護(hù)基團(tuán)如酯來取代羧酸“CO-OH”的羥基功能團(tuán)，從而保護(hù)了羧酸。
通常都知道，氨基保護(hù)基團(tuán)是指那些能通過化學(xué)反應(yīng)恰當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)(或封閉)某一氨基，而且這些基團(tuán)可以在分子內(nèi)的其它位置經(jīng)過特定的化學(xué)反應(yīng)而被輕易的除去。羥基保護(hù)基團(tuán)是同樣的意思，即是指那些能通過化學(xué)反應(yīng)恰當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)某一羧基，而且這些基團(tuán)可以在分子內(nèi)的其它位置經(jīng)過特定的化學(xué)反應(yīng)而被輕易的除去。這些化合物從它們功能性衍生物上解離下來依靠于保護(hù)基團(tuán)，例如利用各種強(qiáng)酸，很方便的應(yīng)用TFA或高氯酸，也可利用其它的無機(jī)強(qiáng)酸，如鹽酸或硫酸；有機(jī)強(qiáng)羧酸如三氯乙酸(TCA)或磺酸如苯或?qū)妆交撬?。氫解可以除去的保護(hù)基團(tuán)(如CBZ或苯基)例如能在一種催化劑(如在惰性金屬催化劑如鈀，方便的支持劑如碳)存在下，用氫進(jìn)行處理而除掉。
N端和側(cè)位氨基典型的保護(hù)基團(tuán)是芐氧羰基(Z)、叔丁基羰基(BOC)、Fmoc、而那些C端或Asp/Glu側(cè)鏈的保護(hù)基團(tuán)是O-prim-烷基(如OMe或OEt)、O-叔烷基(如OBut)或O芐基。例如Z，BOC，NO2，Mtr，Pmc或Pdf對Arg的胍基是適合的。醇基能用苯基、三烷基或三苯甲基來保護(hù)。
用在二氯甲烷中的三氟乙酸(TFA)或在15～30°的dioxane中用約3～5N HCl，BOC，OBut和Mtr能優(yōu)先除去，而在15～30°的二甲基甲酰胺(DMF)中用約5～50％的二甲基胺、二乙基胺或哌啶能優(yōu)選的除去FMOC基團(tuán)。
三苯甲基能用來保護(hù)組氨酸、天門冬酰胺、谷氨酰胺和半胱氨酸。去除反應(yīng)依據(jù)最終產(chǎn)物的不同而進(jìn)行實(shí)施。用三氟乙酸(TFA)/10％苯硫酚，三苯甲基能從上述所有氨基酸上除去，而當(dāng)用三氟乙酸(TFA)/茴香醚或三氟乙酸(TFA)/硫代茴香醚，只有His，Asn和Gln上的三苯甲基被除去，而Cys側(cè)鏈上的保留下來。
氫解可去除的保護(hù)基團(tuán)(如CBZ或苯基)例如能在一種催化劑(如在惰性金屬催化劑如鈀，方便的支持劑如碳)存在下，用氫進(jìn)行處理而除掉。其中合適的溶劑是上面所提到的，特別是醇類如甲醇、乙醇或者酰胺類如DMF。作為一種常規(guī)，氫解在約0～100°、約1～200bar下進(jìn)行，優(yōu)選20～30°、1～10bar。例如CBZ基團(tuán)的氫解能在甲醇溶液中的5～10％ Pd/C上很容易的進(jìn)行，或者應(yīng)用甲酸銨(代替氫)在20～30°的甲醇/DMF中的Pd/C上進(jìn)行。
如早已所述，根據(jù)本發(fā)明的多肽包括它們生理上可被接受的鹽類，這些鹽類也同樣可以用標(biāo)準(zhǔn)的方法進(jìn)行制備。因此，根據(jù)本發(fā)明的化合物的一個(gè)堿基能轉(zhuǎn)變成為結(jié)合酸的加成鹽，例如在惰性溶劑中混合等量的堿和酸進(jìn)行反應(yīng)，這些溶劑如甲醇及其接下來的汽化。適合這個(gè)反應(yīng)的酸類尤其是那些能產(chǎn)生在生理上可被接受的鹽類的無機(jī)酸可以被應(yīng)用，例如硫酸、硝酸、氫鹵酸如鹽酸或氫溴酸、磷酸如[正]磷酸、氨基磺酸；還可以是有機(jī)酸，特別是脂肪酸、脂環(huán)酸、araliphatic、芳香酸或雜環(huán)單或多元羧酸、磺酸或硫酸，如甲酸、乙酸、丙酸、新戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、丁二酸、庚二酸、反丁烯二酸、順丁烯二酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、葡糖酸、抗壞血酸、煙酸、異煙酸、甲基或乙基磺酸、乙基二磺酸、2-羥基乙基磺酸、苯磺酸、對甲苯亞磺酸、萘單和萘雙磺酸、十二烷基硫酸。生理上不可被接受酸的鹽類，如苦味酸鹽能用于根據(jù)本發(fā)明的化合物的分離和/或純化，另一方面，根據(jù)本發(fā)明的化合物的酸類能通過和一種堿反應(yīng)而轉(zhuǎn)變成生理上可被接受的金屬鹽或胺鹽。既然如此，可能的鹽類特別是鈉、鉀、鎂、鈣和胺鹽，此外還有取代胺鹽，如二甲基、二乙基或二異丙基銨鹽，單乙醇、二乙醇或二乙醇異丙基銨鹽，環(huán)己基或二環(huán)己基銨鹽、二芐基1，2-乙二銨鹽，另外還有與精氨酸或賴氨酸形成的鹽類。
如上所述，據(jù)本發(fā)明的多肽化合物能夠用作人藥和獸藥中的藥物活性物質(zhì)，特別是在涉及上皮細(xì)胞功能失調(diào)的預(yù)防和/或治療上。在此文尤其要強(qiáng)調(diào)的是皮膚、呼吸道組織、胃和腸部位功能失調(diào)、炎癥或傷口愈合過程。例如中風(fēng)、心絞痛、腫瘤、溶骨性疾病如骨質(zhì)疏松癥、病理性血管生成癥如炎癥纖維化、特別是肺的纖維化，opthalmological，糖尿病性視網(wǎng)膜病，視網(wǎng)膜黃斑變性，近視，眼網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞真菌病，風(fēng)濕病樣的關(guān)節(jié)炎，骨關(guān)節(jié)炎，風(fēng)疹性青光眼，潰瘍性結(jié)膜炎，節(jié)段性回腸炎，動(dòng)脈粥樣硬化，牛皮癬，在急性腎功能失調(diào)、腎炎、微生物感染和腦脊髓多發(fā)性硬化中血管成形述后的再狹窄。
本發(fā)明相應(yīng)的涉及上文和下面定義式中的多肽化合物和權(quán)利要求所包括它們生理上可被接受作為藥劑、診斷劑和試劑的鹽類。
本發(fā)明尤其涉及了作為抑制劑的合適藥劑，這些抑制劑能控制那些直接或間接地基于表達(dá)αvβ6整合蛋白受體的功能失調(diào)癥。因此特別是在生理性血管生成失調(diào)癥，血栓形成，心肌梗塞，冠狀心臟疾病，動(dòng)脈硬化，腫瘤，骨質(zhì)疏松癥，炎癥、感染和影響傷口愈合過程。
還涉及合適的藥學(xué)制劑，它們至少包含式I中的一種藥劑，如果可能的話，和載體和/或賦形劑。
另外，本發(fā)明還涉及權(quán)利要求書和說明書的多肽化合物的應(yīng)用和/或其生理上可被接受的鹽類在生產(chǎn)用于控制那些直接或間接地基于表達(dá)αvβ6整合蛋白受體的功能失調(diào)癥藥物中的應(yīng)用，尤其是在生理性血管生成失調(diào)癥，血栓形成，心肌梗塞，冠狀心臟疾病，動(dòng)脈硬化，腫瘤，骨質(zhì)疏松癥，炎癥、感染和影響傷口愈合過程。據(jù)本發(fā)明的藥物或包含它們的藥物組合物能用作人藥和獸藥?？捎玫妮d體是那些無機(jī)或有機(jī)物質(zhì)，這些物質(zhì)適于在腸道或非腸道中給藥，或局部應(yīng)用或通過吸入噴霧的形式給藥而不與其它新物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。這些物質(zhì)例如水、植物油、苯甲醇、烷撐二醇、聚乙二醇、乙二醇三醋酸酯、明膠、碳水化物如乳糖或淀粉、硬脂酸鎂、滑石粉、凡士林。尤其是片劑、丸劑、外包片劑、膠囊、粉劑、粒劑、糖漿劑、用于口服的汁或滴劑、腸道給藥的栓劑、溶液、特別是油性或水溶性溶液，另外，混懸液、乳劑或植入片被用作腸胃外給藥，軟膏、乳膏和粉劑被用于局部。此新穎的化合物還可以被冷凍而且得到的凍粉還可以被利用，例如用于注射試劑的生產(chǎn)。這些指定的制劑能夠被固定化和/或包含有賦形劑如潤滑劑、防腐劑、穩(wěn)定劑和/或濕潤劑、乳化劑、影響滲透壓的鹽類、緩沖劑、著色劑、調(diào)味料和/或更具活性的物質(zhì)如一種或多種維他命。
作為一種噴霧吸入給藥，這些噴霧劑可以以溶解或使其懸浮在推進(jìn)劑或推進(jìn)劑混合物(如CO2或氟氯碳?xì)浠衔?的方式包含活性物質(zhì)。既然這樣，這些活性物質(zhì)很方便的以微粒體的形式使用，其中可以添加一種或多種生理上能被接受的溶劑化物如乙醇?？晌肴芤耗茉谕ǔ５奈肫鞯闹葡陆o藥。
通常，據(jù)本發(fā)明的物質(zhì)可以其它已知、商業(yè)上可得的多肽的類似方式(參見US-A-4 472 305)進(jìn)行施藥，特別是劑量在0.05～500mg。更優(yōu)選0.5～100mg每劑量單位。優(yōu)選的每天劑量約為0.01～20mg每公斤體重。然而，每個(gè)病人的特定劑量受各種因素影響，如特定藥物的藥效、年齡、體重、整體健康狀況、性別、節(jié)食、服藥時(shí)間和給藥途徑，排泄速率、診斷所涉及對特定病癥的藥物間復(fù)合反應(yīng)和病癥的嚴(yán)重性。優(yōu)選非腸道給藥。
此外，據(jù)式I的新化合物能用于分析生物學(xué)和分子生物學(xué)。
據(jù)式I的新化合物，其中X是一種熒光染色基團(tuán)，通過-CONH-，-COO-，-NH-C(＝S)-NH-，-NH-C(＝O)-NH-，-SO2NH-或-NHCO-相連，它們能用作熒光活化細(xì)胞分選技術(shù)(FACS)和熒光顯微鏡中的診斷標(biāo)記。
標(biāo)記化合物應(yīng)用在熒光顯微鏡中的例子可參見Y.-L.Wang angD.L.Taylor，F(xiàn)luorescence Microscopy of Living Cells inCulture，parts A+B，Academic Press，Inc.1989。
據(jù)本發(fā)明的新化合物也能夠作為整合蛋白的配體用來制備純化的整合蛋白的親和層析拄。親和素衍化的支持物復(fù)合體如瓊脂糖和此新化合物能夠用已知的方法進(jìn)行制備(例如E.A.Bayer and M.Wilchek，Methods of Biochemical Analysis Vol 26，The Use ofthe Avidin-Biotin Complex as a Tool in Molecular Biology)。這兒合適的多聚支持物是那些多聚固相物質(zhì)，它們具有優(yōu)先親水性和目前已知多肽化學(xué)性質(zhì)，例如交連多糖如纖維素、瓊脂糖凝膠或Sephadex，丙烯酰胺，基于聚乙二醇或Tentakel Polymers的多聚物。
最后本發(fā)明還包括了編碼多肽區(qū)的重組DNA序列，這個(gè)多肽區(qū)含有據(jù)本發(fā)明的多肽的結(jié)構(gòu)基元。
這種類型的DNA能夠以微粒體的形式轉(zhuǎn)進(jìn)細(xì)胞內(nèi)，參見Ch.Andree et al.Proc.Natl.Acad.Sci.91，12188-12192(1994)，或這個(gè)轉(zhuǎn)移能夠被其它的賦形劑如脂質(zhì)體所提高(A.I.Aronsohn andJ.A.Hughes J.Drug Tragrting，5，163-169(1997))。
這種類型的DNA的轉(zhuǎn)移通過桿狀病毒能夠相應(yīng)的用在酵母中，或者在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中生產(chǎn)據(jù)本發(fā)明的多肽物質(zhì)。
如果動(dòng)物或人體感染了這種類型的重組DNA，本發(fā)明的多肽能在這些被感染的細(xì)胞中最終形成并能夠迅速地結(jié)合于如腫瘤細(xì)胞的αvβ6整合蛋白受體上，并阻斷它。相應(yīng)的重組DNA能通過已知和常規(guī)的技術(shù)進(jìn)行制備，然而也能夠以包含有病毒外殼蛋白編碼序列片斷的病毒DNA形式存在。通過以重組優(yōu)選非致病的這種類型病毒感染寄主組織，那些表達(dá)整合蛋白αvβ6的寄主細(xì)胞能被優(yōu)先受到攻擊(尋靶)。
合適的病毒如腺病毒已經(jīng)許多次被用作向哺乳動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)移外源基因的載體。一系列特性確保它們成為基因治療的良好候選者?？蓞⒁奡.J.Watkins et al.Gene Therapy 4，1004-1012(1997)；(或另見J.Engelhardr et al.Hum.Gene Ther.4，759-769(1993))。
從(A.Fasbender et al.J.Clin.Invest.102，184-193(1998))中可以看出，通過病毒和非病毒載體進(jìn)行基因治療中的一個(gè)共同問題是基因轉(zhuǎn)移效率的限制性。通過在腺病毒的外殼蛋白上外加上述αvβ6整合蛋白的配體序列，提高了轉(zhuǎn)移效率，如已成功地提高了膽囊纖維化跨膜蛋白質(zhì)電導(dǎo)調(diào)節(jié)劑(CFTR)cDNA的轉(zhuǎn)移效率。
同T.Tanaka et al.(Cancer Research 58，3362-3369(1998))的工作相似，只是代替了血管抑制素的DNA，據(jù)本發(fā)明的序列的DNA也能通過逆轉(zhuǎn)錄病毒或腺病毒載體應(yīng)用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染中。
據(jù)本發(fā)明的多肽還能夠用于用以細(xì)胞培養(yǎng)物的傳染的含有脂/多肽/DNA的脂質(zhì)體復(fù)合物和用在人體基因治療含有脂/DNA(無多肽)的脂質(zhì)體復(fù)合物中。含有脂/多肽/DNA的脂質(zhì)復(fù)合體的制備參見HartS.L.et al.1998Lipid-mediated Enhancement of Transfectionby a Non-Viral Integrin-Trargeting Vector.Human Gene Therapy9，575-585。
脂/多肽/DNA的脂質(zhì)復(fù)合體的制備可利用下述的貯存液1μg/μl脂轉(zhuǎn)染試劑(DOTMA(N-[1-(2，3-二油氧)丙基]-N，N，N-三甲基氯化銨)和DOPE(二油基磷酯酰乙醇胺)的等量混合物)，10μg/ml質(zhì)粒DNA和100 μg/ml多肽。為此，DNA和多肽都是溶解在細(xì)胞培養(yǎng)基中。
這個(gè)脂質(zhì)復(fù)合體是通過混合特定重量比(例如脂∶多肽∶DNA＝0.75∶1∶4)的這三種而制備的。用于人類基因治療的脂質(zhì)體DNA復(fù)合物已經(jīng)有所描述，見(Caplen N.J.et al.1995Liposome-mediatedCFTR gene transfer to the nasal epithelium of patients withcystic fibrosis，Nature Medicine 1，39-46)。
因此，本發(fā)明還涉及利用基因釋放系統(tǒng)中相應(yīng)修飾過的重組DNA，優(yōu)選是病毒DNA，用于控制那些基于直接或間接地表達(dá)αvβ6整合蛋白受體的各種疾病。因此尤其是病理性血管生成失調(diào)癥、血栓形成、心肌梗塞、冠狀心臟失調(diào)癥、動(dòng)脈硬化、腫瘤、骨質(zhì)疏松癥、炎癥、感染和影響傷口愈合的過程。
上文和下面的所有溫度都是指攝氏度。
HPLC分析(保留時(shí)間Rt)通過下述系統(tǒng)實(shí)施5um LichroSpher 60 RP-Select B(250-4)拄，在水/0.3％三氟乙酸中50分鐘0～80％的2-丙醇的濃度梯度，以1ml/min的流速和在215nm進(jìn)行檢測。
質(zhì)譜(MS)EI(電子碰撞電離)M+FAB(快原子轟擊)(M+H)+
環(huán)(Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Abu-Abu) [EMD272914]2.7gFmoc-Abu-OH(Bachem B-1910)懸浮在150ml二氯甲烷中，加10mlDMF直到它們完全溶解至清亮。加入5.6ml二異丙基乙胺，此溶液澆注12.0g O-氯三苯甲基聚苯乙烯樹脂(1.14mmol/g，Bachem D-196512)，并在室溫進(jìn)行搖動(dòng)。
5小時(shí)后，樹脂通過抽吸濾干，并分別用300ml的DCM/MeOH/DIEA＝17/2/1，DCM，DMF，DCM和MeOH清洗。除去各種溶劑后，得到了14.55g的Fmoc氨基樹脂。平均，三份Fmoc測定表明能負(fù)載(loading)541umol/g的Fmoc-Avu-O-oClTrt-樹脂。
0.7g Fmoc-Abu-O-oClTrt-聚苯乙烯樹脂連續(xù)兩次經(jīng)受了在商業(yè)合成儀中4.1ml的DMF中溶有0.30gTBTU，0.315ml乙基二異丙胺和Fmoc氨基酸的雙偶聯(lián)技術(shù)中的偶聯(lián)步驟，其典型的程序可參見(Milligen 9050 Pep SynthesizerTM合成儀和手冊，1987)，每種條件下都是30min。洗脫在DMF中持續(xù)10分鐘，裂解在哌啶/DMF(1∶4體積比)中，5分鐘，N-端乙?；?蓋帽)用乙酰酐/哌啶/DMF(2∶3∶15體積比)，15分鐘。
首先是氨基酸Fmoc-Arg(Pmc)，接著Fmoc-Leu，接著Fmoc-Ala，接著Fmoc-D-Asp(Obut)，接著Fmoc-Leu，接著Fmoc-Asp(OBut)，接著Fmoc-Arg(Pmc)，最后是Fmoc-Abu。從Fmoc-Abu-Arg(Pmc)-Thr(But)-Asp(OBut)-Leu-D-Asp(OBut)-Ala-Leu-Arg(Pmc)-Abu-O-oClTrt-聚苯乙烯樹脂上去掉Fmoc保護(hù)基團(tuán)后，用DMF和異丙醇洗，室溫真空干燥后就得到了0.9g的Abu-Arg(Pmc)-Thr(But)-Asp(Obut)-Leu-D-Asp(OBut)-Ala-Leu-Arg(Pmc)-Abu-O-oClTrt-聚苯乙烯樹脂。
在室溫下用20ml三氟乙醇/二氯甲烷/醋酸(2∶6∶2體積比)處理這個(gè)肽基樹脂2小時(shí)，過濾，真空濃縮，研磨得到了0.19g的側(cè)鏈被保護(hù)的多肽Abu-Arg(Pmc)-Thr(But)-Asp(OBut)-Leu-D-Asp(OBut)-Ala-Leu-Arg(Pmc)-Abu-OH。
在30分鐘內(nèi)滴加此產(chǎn)物的DMF溶液(100mg多肽/15mlDMF)到已經(jīng)攪拌好的50mlDMF/100mg多肽的TBTU/HOBt/DIPEA(10∶10∶11當(dāng)量)的調(diào)和溶液中，進(jìn)一步攪拌1小時(shí)，就得到了環(huán)化物。經(jīng)過用水濃縮和析出，得到了0.15g的粗制的環(huán)狀多肽，環(huán)[Arg(Pmc)-Thr(But)-Asp(OBut)-Leu-D-Asp(OBut)-Ala-Leu-Arg(Pmc)-Abu-Abu]。室溫用三氟乙酸/水/TIS(94∶3∶3體積比)處理2小時(shí)，真空濃縮和在二乙酯醚研磨得到了85mg的環(huán)[Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Abu-Abu]沉淀物。
在0.3％的三氟乙酸用4％到24％的2-丙醇梯度溶液通過RP-HPLC(Lichrosorb RP 18(250-25，7um，Merck KGaA))以10ml/min的流速持續(xù)一個(gè)小時(shí)來純化此產(chǎn)物，流出物的評(píng)估應(yīng)用紫外流通式光度計(jì)在215和254nm處進(jìn)行，得到51mg的產(chǎn)物，F(xiàn)AB 1067；Rt19.0。
下面的物質(zhì)式通過相似的方法制備的
氨基酸的命名原則是參考了Eur.J.Biochem.138，9-37(1984)小寫字母表示D型氨基酸n.d.表示不確定
Q值＝被測多肽的IC50值/標(biāo)準(zhǔn)多肽的IC50值通過重復(fù)實(shí)驗(yàn)來計(jì)算Q值。
所述實(shí)驗(yàn)的結(jié)果總結(jié)在下面的表1中表1αvβ6/纖連蛋白受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)的結(jié)果
下面的例子涉及藥劑制備實(shí)施例A注射劑小瓶100g的環(huán)(Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Abu-Abu)和5g的磷酸氫二鈉溶解在3升的雙蒸水中，用2N的鹽酸調(diào)節(jié)pH值至6.5，無菌過濾，分裝到注射用的小瓶中，無菌條件下凍干和封口。每個(gè)小瓶含有5mg的活性化合物。
實(shí)施例B栓劑20g的環(huán)(Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Abu-Abu)混合物與100g的大豆卵磷脂和1400g的椰子油融合，澆注模子至其冷卻。每個(gè)栓包含20mg的活性化合物實(shí)施例C溶液一種溶液由1g環(huán)(Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Abu-Abu)和9.38g NaH2PO4·2H2O，28.48g NaH2PO4·12H2O和0.1g潔而滅溶解在940ml的雙蒸水中，調(diào)節(jié)pH值至6.8，補(bǔ)足至1升，并輻射滅菌。這種溶液能用作眼藥水。
實(shí)施例D軟膏500mg的環(huán)(Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Abu-Abu)和99.5g凡士林在無菌條件下混和。
實(shí)施例E片劑1kg的環(huán)(Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Abu-Abu)，4kg乳糖，1.2kg馬鈴薯淀粉，0.2kg滑石粉和0.1kg硬脂酸鎂的混合物通過常規(guī)的方法壓縮成片劑，利用這種方法，每片含有10mg活性化合物。
實(shí)施例F包被片劑與實(shí)施例E相似，片劑被壓制隨后用常規(guī)的方法包上一層蔗糖、馬鈴薯淀粉、滑石粉、黃茋膠和色劑。
實(shí)施例G膠囊用常規(guī)的方法將2kg的環(huán)(Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Abu-Abu)分配到硬明膠膠囊中使每個(gè)膠囊中含有20mg的活性化合物。
實(shí)施例H安瓿1kg的環(huán)(Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Abu-Abu)溶解在60升雙蒸水中，無菌過濾，分裝到安瓿中，無菌凍干和封口。每安瓿含有10mg的活性化合物。
實(shí)施例I吸入式噴霧劑14g的環(huán)(Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Abu-Abu)溶解在10升NaCl等滲溶液中，并把它分裝到商業(yè)上可得的霧劑容器中，這個(gè)霧劑容器要有一個(gè)泵的裝置。一次的噴霧量(約為0.1ml)大約相當(dāng)于0.14mg的劑量。
權(quán)利要求
1.式I的多肽衍生物和它們在生理上能被接受的鹽和溶劑化物環(huán)(Arg-X1-Asp-X2-X3-X4-X5-X6-R1) I其中X1是Ser，Gly或ThrX2是Leu，IIe，Nle，Val或PheX3是Asp，Glu，Lys或PheX4是Gly，Ala或SerX5是Leu，Ile，Nle，Val或PheX6是Arg，Har或LysR1表示空缺或一個(gè)或多個(gè)ω-氨基羧酸殘基，這個(gè)ω-氨基羧酸殘基長度為500～2500pm，上述這些氨基酸還可以衍生化，包括具有旋光活性的D型和L型氨基酸殘基。
2.據(jù)權(quán)利要求1的式I的多肽衍生物和它們在生理上能被接受的鹽類環(huán)(Arg-X1-Asp-X2-X3-X4-X5-X6-R1) I其中X1是Ser，Gly或ThrX2是Leu，Ile，Nle，Val或PheX3是Asp，Glu，Lys或PheX4是Gly，Ala或SerX5是Leu，Ile，Nle，Val或PheX6是Arg，Har或LysR1表示空缺或選自下述群體中的1-10個(gè)氨基酸，這個(gè)群體含有Ala，Asn，Asp，Arg，Cys，Gln，Glu，Hcy，His，Hse，Ile，Leu，Lys，Met，Pen，Phe，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr，Val和H2N-(CH2CH2O)m-(CH2)m-COOH，其中m，n在任一種情況下是彼此相互獨(dú)立的，可取0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11或12，前提是m+n＞0；上述提到的氨基酸仍能衍生化，包括D型和L型的光學(xué)活性的氨基酸殘基。
3.據(jù)權(quán)利要求1和權(quán)利要求2的選自下面群體中的多肽化合物和它們在生理上能被接受的鹽和溶劑化物這個(gè)群體含有環(huán)(Arg-Gly-Asp-Leu-Asp-Ala-Leu-Arg-Gly-Gly-Gly)，環(huán)(Arg-Gly-Asp-Leu-Asp-Gly-Leu-Arg-Gly-Gly-Gly)，環(huán)(Arg-Gly-Asp-Leu-D-Ala-Ala-Leu-Arg-Gly-Gly-Gly)，環(huán)(Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Gly-Gly-Gly)，環(huán)(Arg-Gly-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Abu-Abu)，環(huán)(Arg-Gly-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Aha-Aha)，環(huán)(Arg-Gly-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Aha)，環(huán)(Arg-Gly-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Aee)，環(huán)(Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-Abu-Abu)，環(huán)(Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-β-Ala)，環(huán)(Arg-Gly-Asp-Leu-D-Asp-Ala-Leu-Arg-β-Ala)，
4.能用作藥劑的權(quán)利要求1和權(quán)利要求2的式I的多肽化合物和權(quán)利要求3的化合物，和它們在生理上能被接受的鹽類和溶劑化物。
5.據(jù)權(quán)利要求4的藥劑，其用作一種抑制劑用來控制基于αvβ6整合蛋白受體的表達(dá)和病理學(xué)功能的病癥。
6.據(jù)權(quán)利要求5的藥劑用來控制血栓形成，心肌梗塞，冠狀心臟疾病，動(dòng)脈硬化，腫瘤，骨質(zhì)疏松癥，纖維化，炎癥，感染，牛皮癬和影響傷口愈合過程。
7.藥物制劑，至少含有據(jù)權(quán)利要求5和6之一的一種藥劑；如果恰當(dāng)?shù)脑?，和載體和/或賦形劑；如果恰當(dāng)?shù)脑挘推渌钚曰衔铩?br> 8.權(quán)利要求1到3的多肽化合物和/或它們在生理上可被接受的鹽類在生產(chǎn)用來控制基于αvβ6整合蛋白受體的表達(dá)和病理學(xué)功能的病癥的一種藥劑中的用途。
9.權(quán)利要求8的用途，其中生產(chǎn)一種藥劑用于控制血栓形成，心肌梗塞，冠狀心臟疾病，動(dòng)脈硬化，腫瘤，骨質(zhì)疏松癥，纖維化，炎癥，感染，牛皮癬和影響傷口愈合過程。
全文摘要
本發(fā)明涉及式I的新的肽衍生物:環(huán)(Arg－X
文檔編號(hào)A61P17/02GK1361792SQ00810415
公開日2002年7月31日 申請日期2000年7月3日 優(yōu)先權(quán)日1999年7月15日
發(fā)明者A·約恩茨克, B·蒂芬巴赫, S·古德曼, U·格羅斯, G·茨辛斯基 申請人:默克專利股份公司