專利名稱：脂縮肽脫酰方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及脂縮肽(lipodepsipeptides)，特別是假粘蛋白(pseudomycin)和丁香霉素天然產(chǎn)物的N-?；鶄?cè)鏈的脫?；蛷闹兄苽涞幕衔铩?br> 背景技術(shù)：
假粘蛋白和丁香霉素是從丁香假單孢菌(PseudomoHassyringae)(植物相關(guān)細(xì)菌)的液體培養(yǎng)基中分離出來的天然產(chǎn)物，并且已經(jīng)證明具有抗真菌活性。(即參見Harrison，L.等，“假粘蛋白，來自丁香假單孢菌的具有廣譜抗真菌活性的一族新的肽”，遺傳微生物學(xué)雜志(J.Gen.Microbiology)137(12)，2857-65(1991)和美國專利No.5576298和5837685)。與先前描述的來自丁香假單孢菌的抗真菌劑(例如丁香霉素，丁香假單孢菌毒素和syringostatins)不同，假粘蛋白A-C含有羥基天冬氨酸，天冬氨酸，絲氨酸，脫氫氨基丁酸，賴氨酸和二氨基丁酸。
假粘蛋白A，A’，B，B’，C，C’的肽部分相應(yīng)于L-Ser-D-Dab-L-Asp-L-Lys-L-Dab-L-aThr-Z-Dhb-L-Asp(3-OH)-L-Thr(4-Cl)，在N-末端Ser的OH基上有末端羧基封閉的大環(huán)。這些類似物區(qū)別在于N-酰基側(cè)鏈，即假粘蛋白A被3，4-二羥基十四烷?；鵑-?；?，假粘蛋白A’被3，4-二羥基十五烷?；鵑-?；僬车鞍譈被3-羥基十四烷?；鵑-?；?，假粘蛋白B’被3-羥基十二烷?；鵑-?；?，假粘蛋白C被3，4-二羥基十六烷酰基N-?；凹僬车鞍證’被3-羥基十六烷?；鵑-酰基化。(即參見Ballio，A.，等，“來自丁香假單孢菌的新的生物活性脂縮肽假粘蛋白”，F(xiàn)EBS Letters，355(1)，96-100，(1994)和Coiro，V.M.，等人，“利用來自NMR數(shù)據(jù)的幾何間距和分子力學(xué)通過計算機(jī)模擬測定丁香假單孢菌MSU 16H植物毒性脂縮肽假粘蛋白A的溶液構(gòu)象”，歐洲生物化學(xué)雜志(Eur.J.Biochem.)257(2)，449-456(1998))。
已知假粘蛋白和丁香霉素具有一些不利的生物學(xué)作用。例如靜脈內(nèi)施用假粘蛋白時發(fā)現(xiàn)了破壞靜脈內(nèi)皮，破壞組織，炎癥，和對宿主組織的局部毒性。因此，需要鑒定該類化合物中對治療真菌感染有用而沒有當(dāng)前發(fā)現(xiàn)的不利副作用的化合物。
發(fā)明概述本發(fā)明提供將脂縮肽天然產(chǎn)物的N-?；鶄?cè)鏈脫酰化產(chǎn)生相應(yīng)的環(huán)狀化合物的方法。假粘蛋白的脫酰作用產(chǎn)生下面結(jié)構(gòu)式I代表的假粘蛋白氨基環(huán)狀化合物。 該環(huán)狀化合物可用作制備相應(yīng)的天然產(chǎn)物的半合成衍生物的起始物。
該方法包括使假粘蛋白天然產(chǎn)物與選自ECB脫酰酶和多鏈絲霉素?；D(zhuǎn)移酶的脫酰酶反應(yīng)產(chǎn)生結(jié)構(gòu)式I代表的相應(yīng)的環(huán)狀化合物。游離胺可以重排產(chǎn)生下面結(jié)構(gòu)式II代表的具有一個游離羥基的環(huán)肽環(huán)狀化合物(也稱之為假粘蛋白羥基環(huán)狀化合物)。 化合物II又可以用作產(chǎn)生藥學(xué)活性的新的衍生物的起始物。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，上述方法被用來將丁香霉素化合物脫?；a(chǎn)生丁香霉素氨基環(huán)狀化合物。例如丁香霉素E的氨基環(huán)狀化合物具有下面的結(jié)構(gòu)式III。 和假粘蛋白氨基環(huán)狀化合物一樣，丁香霉素氨基環(huán)狀化合物可以重排生成下面的化合物IV(也稱之為丁香霉素羥基環(huán)狀化合物)。 盡管上面描述了化合物I，II，III和IV的特定手性形式，但是其它手性形式都在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。每一種化合物也以其藥學(xué)可接受鹽，水合物或溶劑合物存在。
定義本文所用術(shù)語“假粘蛋白”指具有下面結(jié)構(gòu)式的化合物 其中R是親脂部分。該親脂部分包括C9-C15烷基，C9-C15羥基烷基，C9-C15二羥基烷基，C9-C15鏈烯基，C9-C15羥基鏈烯基，或C9-C15二羥基鏈烯基。假粘蛋白化合物A，A’，B，B’，C，C’由上面式I代表，其中R如下定義。假粘蛋白A R＝3，4-二羥基十四烷?；僬车鞍譇’R＝3，4-二羥基十五烷?；僬车鞍譈 R＝3-羥基十四烷?；僬车鞍譈’R＝3-羥基十二烷?；僬车鞍證 R＝3，4-二羥基十六烷?；僬车鞍證’R＝3-羥基十六烷?；?br> 發(fā)明的詳細(xì)描述申請人發(fā)現(xiàn)了將廣譜脂縮肽天然產(chǎn)物的N-?；鶄?cè)鏈酶促脫酰化產(chǎn)生相應(yīng)的環(huán)狀化合物的方法。令人驚奇地，游離胺環(huán)狀化合物重排產(chǎn)生游離羥基衍生物，例如上面結(jié)構(gòu)式II和IV所示化合物。通過將化合物I或III暴露于pH≥6，分別可以將化合物I和III轉(zhuǎn)化為化合物II和IV。如果期望的產(chǎn)物是化合物I或III，則人們可以通過加入酸例如三氟乙酸而將從脫?；僬车鞍谆蛎擋；∠忝顾厣芍嘏女a(chǎn)物的速度降低。但是，加入酸可能會導(dǎo)致胺環(huán)狀化合物的產(chǎn)率降低。在較低的pH下，酶可以從反應(yīng)混合物中沉淀出，從而中止轉(zhuǎn)化。因此，反應(yīng)混合物的pH優(yōu)選不低于大約5.5。人們可以使其經(jīng)分子量膜(即截留分子量是10000-50000)通過從反應(yīng)中分離酶而防止酶沉淀。通過膜的流出液含有具有小于10000-5000分子量的化合物(例如化合物I-IV)，并且可能不包括較高分子量的酶。然后可以將流出液的pH調(diào)低以穩(wěn)定產(chǎn)物。
和酸脫酰化方法(例如室溫下在含水溶劑中的三氟乙酸)不一樣，本發(fā)明酶促方法可以用來將帶有或不帶有γ或δ羥基側(cè)鏈的假粘蛋白或丁香霉素類似物脫?；?。因此，起始天然產(chǎn)物的范圍擴(kuò)展得非常大。例如，使用本發(fā)明方法可以將假粘蛋白A，A’，B，B’，C或C’脫酰化。而酸脫?；椒ㄖ贿m用假粘蛋白A，A’和C。
合適的酶包括ECB脫酰酶和多鏈絲霉素?；D(zhuǎn)移酶(從Wako純化學(xué)品有限公司(Wako Pure Chemical Industries，Ltd.)可獲得粗產(chǎn)品和純化形式產(chǎn)品，如161-16081脂肪?；D(zhuǎn)移酶，純的，和164-16081脂肪?；D(zhuǎn)移酶，粗產(chǎn)品)?？梢詮莫q他游動放線菌(Actinoplanes utahensis)獲得ECB脫酰酶(例如參見LaVerne，D，等人，“通過猶他游動放線菌將棘白菌素B脫酰化”，抗生素雜志(J.ofAntibiotics)，42(3)，382-388(1989))?？梢酝ㄟ^在這里引作參考的美國專利No.5573936中描述的方法純化猶他游動放線菌ECB脫酰酶。人們也可以使用在變青鏈霉菌(Streptomyces lividans)中克隆并表達(dá)的酶。用PenG酰胺酶和鄰苯二甲酰酰胺酶將假粘蛋白A脫?；膰L試沒有成功。
使用標(biāo)準(zhǔn)脫酰方法完成酶促脫酰這一點對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是公知的。例如，使用多鏈絲霉素?；D(zhuǎn)移酶的一般方法可以參見Yasuda，N，等人，農(nóng)業(yè)生物化學(xué)(Agric.Biol.Chem.)53，3245(1989)和Kimura，Y.，等人，農(nóng)業(yè)生物化學(xué)(Agric.Biol.Chem.)53，497(1989)。
脫?；椒ㄒ话阍诖蠹s20℃和大約60℃，優(yōu)選大約室溫(25℃)和大約40℃之間的溫度下進(jìn)行。更高溫度可能促進(jìn)重排產(chǎn)物(化合物II)的生成。在pH8.0和在大約50℃和大約60℃之間的溫度下酶是最佳活性的。盡管在更高pH和更高溫度下反應(yīng)更快，但是在更高pH下可能會發(fā)現(xiàn)更多的重排產(chǎn)物。因此，反應(yīng)的pH一般保持在大約5.5和大約8.0之間。反應(yīng)時間將隨著pH和溫度的不同而不同。但是，在高溫和高pH值下，用限定的酶濃度和飽和的底物濃度，反應(yīng)時間達(dá)10分鐘。因為假粘蛋白A在較高pH下不穩(wěn)定，所以假粘蛋白A的脫酰作用一般在較低pH(大約5.0和6.0之間)和溫度(大約25℃)下進(jìn)行。例如在含有0.05M KPO4和0.8M KCl的緩沖液中可以進(jìn)行假粘蛋白A的脫酰作用。底物的飽和水平一般在每毫升反應(yīng)大約0.5毫克和大約1毫克之間。
如上文所討論的，假粘蛋白是從丁香假單孢菌分離出來的天然產(chǎn)物，其已經(jīng)表征為含有內(nèi)酯鍵封閉的環(huán)肽部分并且包括非常見氨基酸4-氯蘇氨酸(ClThr)，3-羥基天冬氨酸(HOAsp)，2，3-脫氫-2-氨基丁酸(Dhb)和2，4-二氨基丁酸(Dab)的脂縮肽(lipodepsinonapeptides)。培養(yǎng)丁香假單孢菌各菌株產(chǎn)生不同的假粘蛋白類似物(A，A’，B，B’，C和C’)的方法在下文中作一般性描述，并且更詳細(xì)地描述于這里引作參考的2000年4月14日Hilton等人申請的PCT專利申請登記號No.PCT/US00/08728，發(fā)明名稱是“用丁香假單孢菌生產(chǎn)假粘蛋白”，這里引作參考的2000年4月14日Kulanthaivel等人申請的PCT專利申請登記號No.PCT/US00/08727，發(fā)明名稱是“假粘蛋白天然產(chǎn)物”，和各自這里引作參考的美國專利No.5576298和No.5837685之中。
生產(chǎn)一種或多種假粘蛋白的丁香假單孢菌的分離的菌株是本領(lǐng)域公知的。野生型菌株MSU174和通過轉(zhuǎn)座子誘變產(chǎn)生的該菌株的突變株MSU 16H描述于美國專利No.5576298和5837685中；HarriSon，L.等人，“假粘蛋白，來自丁香假單孢菌的具有廣譜抗真菌活性的一族新的肽家族”，遺傳微生物學(xué)雜志(J.Gen.Microbiology)137，2857-65(1991)；和Lamb等人，“熒光假單孢菌的轉(zhuǎn)座子誘變和標(biāo)記抗真菌劑生產(chǎn)對于防治荷蘭榆木病是必需的”，美國國家科學(xué)院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)84，6447-6451(1987)。
適合生產(chǎn)一種或多種假粘蛋白的丁香假單孢菌菌株可以從環(huán)境的來源包括植物(例如大麥植物，柑橘植物和丁香植物)以及象土壤，水，空氣和灰塵這樣的來源分離到。優(yōu)選的菌株從植物分離。從環(huán)境來源分離到的丁香假單孢菌菌株可以稱之為野生型。本文使用的“野生型”指在丁香假單孢菌的正常種群中天然存在的優(yōu)勢基因型(例如自然中發(fā)現(xiàn)的而不是實驗室制備的丁香假單孢菌菌株或分離物)。象大多數(shù)生物一樣，使用的產(chǎn)生假粘蛋白的培養(yǎng)物(丁香假單孢菌菌株例如MSU174，MSU 16H，MSU206，25-B1，7H9-1)的特征不同。因此，通過本領(lǐng)域公知的方法可以獲得這些菌株的子代(例如重組體，突變株和變種)。
丁香假單孢菌的突變株也適合生產(chǎn)一種或多種假粘蛋白。本文使用的“突變株”指菌株表型中突發(fā)的可遺傳的變化，其可以自發(fā)發(fā)生或者通過已知的誘變劑誘導(dǎo)，例如照射(例如紫外照射或X-射線)，化學(xué)誘變劑(例如甲磺酸乙酯(EMS)，二環(huán)氧辛烷，N-甲基-N-硝基-N’-亞硝基鳥嘌呤(NTG)，和亞硝酸)，點特異性誘變，和轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的誘變，通過用有效產(chǎn)生超量生產(chǎn)一種或多種假粘蛋白即超過其它假粘蛋白過量生產(chǎn)一種假粘蛋白(例如假粘蛋白B)或者在有利的生長條件下生產(chǎn)一種或多種假粘蛋白的突變株的誘變劑的量處理細(xì)菌可以產(chǎn)生丁香假單孢菌的生產(chǎn)假粘蛋白的突變株。盡管要使用的誘變劑的類型和量可以不同，但是優(yōu)選的方法是將NTG系列稀釋至1-100微克/毫升范圍的水平。優(yōu)選的突變株是過量生產(chǎn)假粘蛋白B并且在基本確定成分培養(yǎng)基中生長的那些突變株。
可以針對丁香假單孢菌的環(huán)境分離物，突變株，和其它期望的菌株選擇期望性狀的生長習(xí)性，生長培養(yǎng)基營養(yǎng)源，碳源，生長條件，氨基酸要求等等。優(yōu)選地，對丁香假單孢菌的生產(chǎn)假粘蛋白的菌株選擇在基本確定成分培養(yǎng)基例如N21培養(yǎng)基中生長和/或以高于大約10微克/毫升的水平生產(chǎn)一種或多種假粘蛋白。優(yōu)選的菌株表現(xiàn)出當(dāng)在包括三種或更少氨基酸和任選地或者一種脂質(zhì)，馬鈴薯產(chǎn)物或者其組合的培養(yǎng)基上生長時生產(chǎn)一種或多種假粘蛋白的特性。
使用本領(lǐng)域公知的方法通過轉(zhuǎn)化丁香假單孢菌菌株可以產(chǎn)生重組體菌株。通過使用重組DNA技術(shù)，可以將丁香假單孢菌菌株轉(zhuǎn)化以表達(dá)除了這些菌株產(chǎn)生的抗生素以外的各種基因產(chǎn)物。例如，人們可以修飾菌株以導(dǎo)入內(nèi)源假粘蛋白生物合成基因的多個拷貝以實現(xiàn)更大的假粘蛋白產(chǎn)率。
為了從野生型丁香假單孢菌或丁香假單孢菌突變株生產(chǎn)一種或多種假粘蛋白，在包括有效量的三種或更少氨基酸，優(yōu)選谷氨酸，甘氨酸，組氨酸或其組合的含水營養(yǎng)培養(yǎng)基中振蕩下培養(yǎng)微生物?；蛘邔⒏拾彼崤c一種或多種馬鈴薯產(chǎn)物和脂質(zhì)混合。在對丁香假單孢菌的生長和生產(chǎn)期望的一種或多種假粘蛋白有效的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。有效條件包括大約22℃至大約27℃的溫度和大約36小時至大約96小時的培養(yǎng)時間。在培養(yǎng)丁香假單孢菌期間控制培養(yǎng)基中氧的濃度對于產(chǎn)生假粘蛋白是有利的。優(yōu)選地，氧的水平保持在大約5％至50％飽和，更優(yōu)選大約30％飽和。通入空氣，純氧氣或含有氧氣的氣體混合物可以調(diào)節(jié)培養(yǎng)基中氧的濃度。
培養(yǎng)丁香假單孢菌期間控制培養(yǎng)基的pH也是有利的。在堿性pH下假粘蛋白不穩(wěn)定，如果培養(yǎng)基的pH高于大約6保持超過大約12小時則發(fā)生明顯降解。優(yōu)選地，培養(yǎng)基的pH保持在6和4之間。當(dāng)分批培養(yǎng)時，丁香假單孢菌可以產(chǎn)生一種或多種假粘蛋白。然而葡萄糖和任選地酸或堿(例如羥銨)的分批補(bǔ)料或者半連續(xù)進(jìn)料來控制pH提高生產(chǎn)率。通過利用其中葡萄糖和羥銨自動進(jìn)料的連續(xù)培養(yǎng)方法能進(jìn)一步提高假粘蛋白生產(chǎn)率。
丁香假單孢菌的選擇能影響產(chǎn)生的一種或多種假粘蛋白的量和分布。例如，MSU 16H和67 H1菌株各自優(yōu)勢產(chǎn)生假粘蛋白A，但是也產(chǎn)生假粘蛋白B和C，一般比例為4∶2∶1。與MSU 16H菌株生產(chǎn)的假粘蛋白水平相比，67 H1菌株一般產(chǎn)生高大約3-5倍的假粘蛋白水平。與MSU 16H和67 H1菌株相比，25-B1菌株產(chǎn)生更多的假粘蛋白B和更少的假粘蛋白C。不同的是7H9-1菌株優(yōu)勢產(chǎn)生假粘蛋白B并且比其它菌株生產(chǎn)更大量的假粘蛋白B。例如，該菌株能生產(chǎn)的假粘蛋白B至少超過假粘蛋白A或C的10倍。
如上文討論的，這里描述的方法也用于將丁香霉素化合物脫?；??？梢苑謩e從丁香假單孢菌丁香變種(Pseudomonas syringae pv.syringae)菌株B301D，PS268，和SY12的培養(yǎng)物產(chǎn)生丁香霉素E，丁香霉素B，和丁香霉素A。也可以從丁香假單孢菌丁香變種分離丁香霉素A1和G。根據(jù)Zhang，L.，和J.Y.Takemoto，“丁香假單孢菌植物毒素丁香霉素對Rhodotorula pilimanae的質(zhì)膜功能的影響”，植物病理學(xué)(Phytopathol.)77(2)297-303(1987)的描述在馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液中培養(yǎng)B301D和PS268菌株。在補(bǔ)加有100M對苯二酚葡糖苷(Sigma Chemical Co.，A4256；St.Louis，Mo.)和0.1％果糖(SRMAF)(19，23)的丁香霉素基本培養(yǎng)基中培養(yǎng)SY12菌株。如先前Bidwai，A.P.，和J.Y.Takemoto，“細(xì)菌植物毒素，丁香霉素，誘導(dǎo)紅蘿卜質(zhì)膜多肽的蛋白質(zhì)激酶-介導(dǎo)的磷酸化作用”，美國國家科學(xué)院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)84，6755-6759(1987)所述通過高效液相色譜純化SR-E，ST-B和SS-A。含有35％脫氧膽酸鈉(Sigma ChemicalCo.，AP528；St.Louis，Mo.)和酮康唑(Sigma Chemical Co.，K-1003；St.Louis，Mo.)的溶解的AmB被用作試驗標(biāo)準(zhǔn)物。在這里引作參考的美國專利No.5830855中可以看到有關(guān)三種環(huán)脂縮肽丁香霉素E，丁香假單胞菌素B和Syringostatin A的產(chǎn)生和分離的詳細(xì)描述。
假粘蛋白或丁香霉素環(huán)狀化合物或相應(yīng)的重排化合物(化合物II和IV)可以被分離并且以其本身或者以其藥學(xué)可接受鹽或溶劑合物形式使用。術(shù)語“藥學(xué)可接受鹽”指從無機(jī)酸和有機(jī)酸衍生的與無毒酸加成鹽。合適的鹽衍生物包括鹵化物，硫氰酸鹽，硫酸鹽，硫酸氫鹽，亞硫酸鹽，亞硫酸氫鹽，芳基磺酸鹽，烷基磺酸鹽，膦酸鹽，磷酸一氫鹽，磷酸二氫鹽，偏磷酸鹽，焦磷酸鹽，鏈烷酸鹽，環(huán)烷基鏈烷酸鹽，芳基鏈烷酸鹽，己二酸鹽，藻酸鹽，天冬氨酸鹽，苯甲酸鹽，富馬酸鹽，葡庚酸鹽，甘油磷酸鹽，乳酸鹽，馬來酸鹽，煙酸鹽，草酸鹽，棕櫚酸鹽，果膠酯酸鹽，苦味酸鹽，新戊酸鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽，檸檬酸鹽，樟腦酸鹽，樟腦磺酸鹽，二葡糖酸鹽，三氟乙酸鹽等等。
術(shù)語“溶劑化物”指包括一個或多個溶質(zhì)分子(即假粘蛋白和丁香霉素化合物)和一個或多個藥學(xué)溶劑分子例如水，乙醇等等的聚集體。當(dāng)溶劑是水時，聚集體稱之為水合物。通常通過在加熱下將環(huán)狀化合物或重排化合物(化合物II或IV)溶解于合適的溶劑中并且緩慢冷卻產(chǎn)生非晶形或結(jié)晶溶劑合物形式而產(chǎn)生溶劑化物。
實施例生物樣品從美國典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type CultureCollection)，Parklawn Drive，Rockville，MD，USA公開獲得丁香假單孢菌MSU 16H，保藏號No.ATCC 67028。丁香假單孢菌菌株25-B1，7H9-1和67 H1于2000年3月23日保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心，登記的保藏號如下25-B1保藏號No.PTA-16227H9-1保藏號No.PTA-1 62367 H1保藏號No.PTA-1621化合物縮寫實施例中使用下面的縮寫代表各所列出的材料ACN-乙腈TFA-三氟乙酸DMF-二甲基甲酰胺實施例1該實施例舉例描述使用ECB脫酰酶對假粘蛋白A的脫酰作用。
在含有0.05M磷酸鉀和0.8M氯化鉀的緩沖水溶液900微升中加入假粘蛋白A(50微克)和純化的ECB脫酰酶(50微升)。pH保持6.0至8.0。溫度從25℃提高到40℃。通過HPLC監(jiān)測反應(yīng)(Waters C18μBondapak 3.9X300毫米柱，235nm，1％乙腈/0.2％三氟乙酸(4分鐘)至60％乙腈/0.2％三氟乙酸(16分鐘))。發(fā)現(xiàn)假粘蛋白胺環(huán)狀化合物(化合物I)和重排的假粘蛋白羥基環(huán)狀化合物(化合物II)。
在電霧化電離質(zhì)譜(ESIMS)中化合物I和II都表現(xiàn)出相同的M+H離子(m/z981.3)，相應(yīng)于分子式C37H61CIN12O17(參見下面表I)。1H和TOCSY(全相關(guān)光譜學(xué))NMR光譜的詳細(xì)分析能排布水解產(chǎn)物的所有的質(zhì)子，這支持結(jié)構(gòu)I和II。I的絲氨酸殘基的β-質(zhì)子的1H NMR化學(xué)位移(4.83和4.46ppm)與在假粘蛋白A，B和C中發(fā)現(xiàn)的那些一致，表明肽大環(huán)是完整的。此外，正如所預(yù)期的，TOCSY譜沒有證明典型的酰胺質(zhì)子作為絲氨酸自旋體系的一部分。另一方面，在II中，絲氨酸β-質(zhì)子大大移向高磁場位移(3.78和3.74ppm)，提示這些質(zhì)子不具有內(nèi)酯官能度。這一點以及在TOCSY譜中，除了α質(zhì)子以外，β-質(zhì)子與酰胺質(zhì)子相關(guān)，處于8.04ppm，表明大環(huán)內(nèi)酯重排為II所示的肽核心。
表IH2O+CD3CN中I和II的1H NMR數(shù)據(jù)a
表I(續(xù))
a相對于溶劑信號(1.94ppm)報道的化學(xué)位移。
b排布可以內(nèi)部變化。
使用上述相同的一般方法可以將具有N-?；钠渌僬车鞍谆蚨∠忝顾鼗衔锩擋；?。
權(quán)利要求
1.將假粘蛋白天然產(chǎn)物的N-酰基側(cè)鏈脫?；姆椒ǎㄊ辜僬车鞍滋烊划a(chǎn)物與選自ECB脫酰酶和多鏈絲霉素?；D(zhuǎn)移酶的脫酰酶反應(yīng)產(chǎn)生假粘蛋白環(huán)狀化合物的步驟。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述假粘蛋白環(huán)狀化合物用結(jié)構(gòu)式I或II代表 或者是其藥學(xué)可接受鹽，水合物或溶劑化物。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述假粘蛋白天然產(chǎn)物選自假粘蛋白A，A’，B，B’，C和C’。
4.通過權(quán)利要求1，2或3的方法制備的具有下面結(jié)構(gòu)的化合物 或者其藥學(xué)可接受鹽，水合物或溶劑化物。
5.具有下面結(jié)構(gòu)的化合物 或者其藥學(xué)可接受鹽，水合物或溶劑化物。
6.通過使假粘蛋白天然產(chǎn)物與選自ECB脫酰酶和多鏈絲霉素?；D(zhuǎn)移酶的脫酰酶反應(yīng)制備的假粘蛋白環(huán)狀化合物。
7.權(quán)利要求6的假粘蛋白環(huán)狀化合物，其中所述假粘蛋白天然產(chǎn)物選自假粘蛋白A，A’，B，B’，C和C’。
8.將丁香霉素天然產(chǎn)物的N-?；鶄?cè)鏈脫?；姆椒?，包括使丁香霉素天然產(chǎn)物與選自ECB脫酰酶和多鏈絲霉素酰基轉(zhuǎn)移酶的脫酰酶反應(yīng)產(chǎn)生丁香霉素環(huán)狀化合物的步驟。
9.權(quán)利要求7的方法，其中所述丁香霉素環(huán)狀化合物用結(jié)構(gòu)式III或IV代表 或者是其藥學(xué)可接受鹽，水合物或溶劑化物。
10.通過使丁香霉素天然產(chǎn)物與選自ECB脫酰酶和多鏈絲霉素酰基轉(zhuǎn)移酶的脫酰酶反應(yīng)制備的丁香霉素環(huán)狀化合物。
11.具有下面結(jié)構(gòu)的化合物 或者其藥學(xué)可接受鹽，水合物或溶劑化物。
12.具有下面結(jié)構(gòu)的化合物 或者其藥學(xué)可接受鹽，水合物或溶劑化物。
全文摘要
本發(fā)明描述了將脂縮肽脫?；a(chǎn)生相應(yīng)的環(huán)狀化合物的方法。也描述了從該方法制備的產(chǎn)物(例如結(jié)構(gòu)式(I)或(II)代表的假粘蛋白環(huán)狀化合物)。
文檔編號A61P31/00GK1361791SQ00810417
公開日2002年7月31日 申請日期2000年6月8日 優(yōu)先權(quán)日1999年7月15日
發(fā)明者A·J·克羅伊茨曼, P·庫蘭海維爾, M·J·羅德里格茨 申請人:伊萊利利公司