壓滅菌20 min。
[0031]g、種子培養(yǎng)1:取冰箱4°C保藏的酵母菌種在超凈臺放置到室溫，無菌操作接種到酵母菌培養(yǎng)基，放置到搖床培養(yǎng)，溫度控制28 0C，轉(zhuǎn)速160轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)時間3天;獲得酵母菌菌種。
[0032]種子培養(yǎng)2:取冰箱4°C保藏的乳酸片球菌菌種在超凈臺放置到室溫，無菌操作接種到乳酸片球菌培養(yǎng)基，放置到搖床培養(yǎng)，溫度控制37 0C，轉(zhuǎn)速140轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)時間2天；獲得乳酸片球菌菌種。
[0033]h、發(fā)酵:將步驟g培養(yǎng)好的酵母菌種取20mL接種到發(fā)酵培養(yǎng)基(3000mL三角瓶中)，無菌攪拌均勻，用6層無菌紗布包扎三角瓶，28°C真菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)2天。
[0034]1、將步驟h所得物升溫到50°C保溫3小時，確保將酵母菌殺死，防止和乳酸菌競爭。降低溫度到35°C將步驟g乳酸片球菌菌種20mL接入三角瓶，攪拌均勻后35°C培養(yǎng)I天后將瓶口密封，繼續(xù)35 °C培養(yǎng)2天。
[0035]j、將步驟i所得物升溫到55°C保持3小時，殺死乳酸片球菌。
[0036]k、將步驟j所得物降溫到室溫后，無菌操作分裝成Icm粗，5厘米長柱狀飼料，4°C冰箱保存。
[0037]選定三組蜂巢(每組6個新蜂巢，每個蜂巢均含80頭工蜂)在草莓溫室做實驗對比，第一組只自主采集草莓花粉，第二組自主采集花粉并在蜂巢直接輔助喂食花粉(荷花粉和茶花粉各50%)，第三組自主采集草莓花粉并在蜂巢輔助喂食本發(fā)明所得花粉飼料。
[0038]實驗發(fā)現(xiàn)，第一組蜂巢15天后平均工蜂個數(shù)達到100頭/蜂巢，一個月后達到高點150頭/蜂巢。第二組蜂巢15天后平均工蜂個數(shù)達到150頭/蜂巢，一個月后達到高點210頭/蜂巢。第三組蜂巢15天后平均工蜂個數(shù)達到160頭/蜂巢，比第一組提高60%，比第二組提高
6.7%;—個月后達到高點240頭/蜂巢，比第一組提高60%，比第二組提高14.3%。說明喂食飼料后，可以顯著提高工蜂的生命力和蜂王的繁殖力。
[0039]實驗進一步發(fā)現(xiàn)，在同樣的環(huán)境條件下，第一組和第三組工蜂出巢采集花粉時間明顯優(yōu)于第二組，第一組平均每天5.0小時/蜂，第二組平均每天3.8小時/蜂，第三組平均每天4.8小時/蜂。經(jīng)分析，第二組工蜂出巢時間短，說明在蜂巢中直接給熊蜂添加花粉，使熊蜂出巢采集自然花粉的動力缺失，反而影響了熊蜂授粉的功能。花粉可為熊蜂提供重要的能量和蛋白，第一組因沒有輔料補充，工蜂需要頻繁工作采集夠每日的必須量，過量工作和蛋白量不足也是第一組工蜂生命周期短的一個原因。與花粉飼料相比熊蜂更喜好采食花粉，然而在花粉量不足時花粉飼料可為熊蜂提供必需的蛋白營養(yǎng)，同時一些中藥成本的加入，提高了第三組工蜂的抗病能力，使第三組蜂巢工蜂數(shù)量比第二組多14.3%。雖然第三組不如第一組出巢時間長，但第一組工蜂壽命短，蜂群總數(shù)小，在花粉供應不足的情況下過度采粉，減少了工蜂的壽命并抑制蜂王產(chǎn)量，說明給蜂巢補充食物非常有必要。
[0040]實驗同時發(fā)現(xiàn)，在花源較多時，第三組輔助喂食花粉飼料的熊蜂活躍度(出巢頻率)明顯高于前兩組，第一組單個熊蜂每小時平均5.0次出入蜂巢，第二組每小時平均4.5次出入蜂巢，第三組每小時平均5.4次出入蜂巢，比第一組高8%，比第二組高20%，經(jīng)分析，在花粉飼料中添加的中藥成分提高了熊蜂的活性和抗病能力，增加其活躍度。
[0041 ] 通過調(diào)查統(tǒng)計，第一組熊蜂工蜂生命周期4-6周占56%，7-9周占33%，10-12周占11% ；第二組熊蜂工蜂生命周期4-6周占38%，7-9周占36%，10-12周占26%;第三組熊蜂工蜂生命周期4-6周占21%，7-9周占24%，10-12周占55 %。
[0042]重復以上試驗多次后，發(fā)現(xiàn)結果與以上試驗相符。
[0043]試驗后分析，花粉飼料在花粉的基礎上添加豆粉和其它成分后，其它飼料成分成本低，花粉飼料的生成成本可以降低三分之一。酵母和乳酸菌的聯(lián)合發(fā)酵，熊蜂抗病力顯著提尚O
[0044]利用馴化的酵母菌和乳酸片球菌為破壁菌種，工藝簡單，容易控制。酵母菌為食用酵母，乳酸片球菌從牛奶中篩選，兩種菌背景清晰透明，不會對環(huán)境、動物和人員產(chǎn)生危害；工藝簡單，指標清晰，操作方便。
[0045]除非另有說明，本發(fā)明中所采用的百分數(shù)均為質(zhì)量百分數(shù)。
[0046]上述的【具體實施方式】只是示例性的，是為了使本領域技術人員能夠更好的理解本
【發(fā)明內(nèi)容】
，不應理解為是對本發(fā)明保護范圍的限制，只要是根據(jù)本發(fā)明技術方案所作的改進，均落入本發(fā)明的保護范圍。
【主權項】
1.一種熊蜂飼料的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: a、菌種選取:酵母菌和乳酸片球菌，4°C斜面冰箱保存； b、酵母菌培養(yǎng)基:土豆去皮切塊，每200g加入500 mL水，煮沸30 min，雙層紗布過濾至燒杯中，加入20 g蔗糖和5g玉米花粉，加水至I L，121°C高壓滅菌20 min； c、乳酸片球菌培養(yǎng)基:取大豆蛋白胨5.0g、牛肉膏粉5.0g、酵母浸膏5.0g、葡萄糖20g和乳糖20g，加水至I L，121°C高壓滅菌20 min。2.如權利要求1所述的一種熊蜂飼料的制備方法，其特征在于，還包括以下步驟: d、基礎培養(yǎng)基:取葡萄糖35g、果糖35g、蔗糖10g、豆粉100g、黃芪粉5g、大棗粉10g、山藥粉5g、蜂蜜20g和水200mL，攪拌均勾，121°C高壓滅菌30 min。3.如權利要求1所述的一種熊蜂飼料的制備方法，其特征在于，還包括以下步驟: e、發(fā)酵培養(yǎng)基:取荷花粉150g、茶花粉150g，在0.8ppm臭氧/立方米下殺菌30min，與降溫到60°C的基礎培養(yǎng)基混勻，用無菌水控制混合物水分含量在30%，保溫30min后，冷卻到室溫置冰箱4°C保存。4.如權利要求1所述的一種熊蜂飼料的制備方法，其特征在于，還包括以下步驟: f、種子培養(yǎng)1:取冰箱4°C保藏的酵母菌種在超凈臺接種到酵母菌培養(yǎng)基，28°C，轉(zhuǎn)速.160轉(zhuǎn)/分鐘搖床培養(yǎng)3天;獲得酵母菌菌種； 種子培養(yǎng)2:取冰箱4°C保藏的乳酸菌在超凈臺接種到一瓶乳酸片球菌培養(yǎng)基，37°C，轉(zhuǎn)速140轉(zhuǎn)/分鐘搖床培養(yǎng)2天，獲得乳酸片球菌菌種。5.如權利要求1所述的一種熊蜂飼料的制備方法，其特征在于，還包括以下步驟: g、將步驟f培養(yǎng)好的酵母菌菌種取20mL接種到發(fā)酵培養(yǎng)基，無菌攪拌均勻，溫度28°C真菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)2天。6.如權利要求1所述的一種熊蜂飼料的制備方法，其特征在于，還包括以下步驟: h、將步驟g培養(yǎng)后的發(fā)酵培養(yǎng)基升溫到50°C保溫3小時，降低溫度到35°C; 再添加步驟f所得乳酸片球菌菌種20mL，攪拌均勻后35°C培養(yǎng)I天后密封，繼續(xù)35°C培養(yǎng)2天； I、將步驟h所得物升溫到55°C保持3小時； j、將步驟i所得物降溫到室溫后，無菌操作分制成柱狀飼料，4 °(:冰箱保存。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種熊蜂飼料的制備方法，包括菌種選取、酵母菌培養(yǎng)基、乳酸片球菌培養(yǎng)基、基礎培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)，將酵母菌菌種接種到發(fā)酵培養(yǎng)基，溫度28℃真菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)，將發(fā)酵培養(yǎng)基升溫到50℃保溫，降低溫度到35℃；再添加乳酸片球菌菌種，攪拌均勻后35℃培養(yǎng)1天，繼續(xù)35℃培養(yǎng)；無菌制成飼料，成本降低1/3，工蜂存活期10-12周占55%，熊蜂的活性、抗病力強，熊蜂抗病能力提高，熊蜂活躍度高；每小時平均5.4次出入蜂巢，比自主采集草莓花粉的高8%，比自主采集花粉并在蜂巢直接輔助喂食花粉的高20%，出巢時間平均每天4.8小時/蜂，熊蜂繁殖力比只采集草莓花粉的提高60%，比自主采集花粉并在蜂巢直接輔助喂食花粉的提高14.3%。
【IPC分類】A23K10/18, A23K50/90
【公開號】CN105661016
【申請?zhí)枴緾N201610054721
【發(fā)明人】田國寧, 孫軍, 吳偉, 郭禮強, 韓亮, 丁奎英, 郭婷
【申請人】田國寧
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2016年1月27日