專利名稱：乙肝病毒基因擴增檢測前的樣本處理方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及生物化學、酶學、突變或遺傳過程，是在變異或遺傳工程中涉及基因工程的DNA或其分離、制備或純化，其宿主的應用;進一步說，是涉及由二個或二個以上細胞融合、DNA片段、編碼性微生物蛋白質(zhì)，如內(nèi)毒素的基因，具體地說，是涉及編碼病毒蛋白質(zhì)的基因，如肝炎病毒。
據(jù)統(tǒng)計，全世界約有2億以上人攜帶HBV(乙肝病毒)，而我國受HBV感染的人至少有1億以上。大量證據(jù)表明HBV持續(xù)感染和肝癌發(fā)生有相關(guān)關(guān)系，據(jù)報道，HBV感染人群中發(fā)生肝癌的相對危險性為非感染人群的200倍以上，肝癌患者中血清HBV標志流行率也較高，用放免法檢測HBeAg，在對照人群中低于6%，而肝癌患者的血清中HBeAg陽性率達45%至80%，如果包括將抗HBe也作為HBV感染的標志，則對照人群與肝癌人群在HBV標志方面的這種差異更大，因此，HBV的準確迅速檢測就顯得十分重要，但是傳統(tǒng)檢測法存在敏感性比較差、費時、假陰性多等問題，而PCR高度敏感，因而可檢出潛在的低水平HBV感染。
已有的PCR直接檢測HBVDNA，通常比較復雜、使用不便、且需花費較多時間。關(guān)鍵在于PCR檢測前的血清樣本處理存在一些缺陷。
本發(fā)明的目的是提供一種簡單、快速、不加任何試劑的乙肝病毒基因擴增檢測(HBVDNAPCR)前的樣本處理方法。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是一種乙肝病毒基因擴增檢測前的樣本處理方法首先將血清樣本在90℃-99℃下加熱5-25分鐘，再經(jīng)離心后，吸取上清液作為血清中靶DNA。
本發(fā)明中的加熱溫度以94℃-95℃為佳，當然，也可采用其他合適的溫度值。
本發(fā)明中的加熱時間以10-15分鐘為佳。
當然，也可采用其他合適的時間值。
本發(fā)明中離心時的離心速度1萬轉(zhuǎn)，離心時間2-5分鐘，當然，也可采用其他合適的離心速度和離心時間。
本發(fā)明的優(yōu)點是快速、穩(wěn)定可靠，重復性好。而且在處理血清時(PCR之前)無需加入任何試劑，除了簡化操作、節(jié)約試劑、節(jié)省時間外，還使PCR操作人員不必接觸有損健康的苯酚/氯仿等有機溶劑，可在沒有防護設施的普通實驗室內(nèi)開展PCR操作，可避免經(jīng)典法經(jīng)常遇到的操作誤差。更有利于普及推廣應用。
下表即為本發(fā)明方法與其他方法的比較
以下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明例1取50μl血清樣品于94℃下加熱15分鐘，再12000rpm離心2分鐘，吸取5μl上清液作為血清中靶DNA。
例2取50μl血清樣品于97℃下加熱5分鐘，再9800rpm離心3分鐘，吸取5μl上清液作為血清中靶DNA。
例3取50μl血清樣品于95℃下加熱10分鐘，再10000rpm離心5分鐘，吸取5μl上清液作為血清中靶DNA。
本發(fā)明中所取血清樣品的量、加熱溫度、加熱時間、離心速度、離心時間、及吸取上清液的量均可作合適的變化。以符合要求為準。
權(quán)利要求
1.一種乙肝病毒基因擴增檢測前的樣本處理方法，其特征在于首先將血清樣本在90℃-99℃下加熱5-25分鐘，再經(jīng)離心后，吸取上清液作為血清中靶DNA。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乙肝病毒基因擴增檢測前的樣本處理方法，其特征在于加熱溫度以94℃-95℃為佳。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的乙肝病毒基因擴增檢測前的樣本處理方法，其特征在于加熱時間以10-15分鐘為佳。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的乙肝病毒基因擴增檢測前的樣本處理方法，其特征在于離心速度1萬轉(zhuǎn)，離心時間2-5分鐘。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種乙肝病毒基因擴增檢測前的樣本處理方法。其特點首先將血清樣本在90℃—99℃下加熱5—25分鐘，再經(jīng)離心后吸取上清液作為血清中靶DNA。優(yōu)點血清用量少，無需加入任何試劑，簡化操作，節(jié)省時間，有利于普及推廣。
文檔編號C12N15/10GK1072453SQ9210784
公開日1993年5月26日 申請日期1992年12月6日 優(yōu)先權(quán)日1992年12月6日
發(fā)明者余竹元, 周銘, 湯釗猷, 劉建寧, 杜菁, 陳建華 申請人:上海醫(yī)科大學附屬中山醫(yī)院, 南勇宏達生物技術(shù)有限公司