本發(fā)明涉及一種幼兒及兒童配方食品，具體而言，涉及一種適用于1-3歲幼兒含有核苷酸的配方奶粉及其制備方法。
背景技術(shù)：
：目前市場上的國產(chǎn)1-3歲幼兒系列奶粉都是按照《GB10767-2010較大嬰兒和幼兒配方食品》的要求執(zhí)行，其中對總蛋白質(zhì)、總脂肪含量及亞油酸含量進(jìn)行了限定。然而，眾所周知，就蛋白質(zhì)而言，牛奶中蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與母乳不同，牛乳蛋白質(zhì)對于幼兒而言利用率較低，所以往往需要在配方中提高蛋白質(zhì)的比例才能達(dá)到幼兒的蛋白質(zhì)需要量，而提高了蛋白質(zhì)含量將會造成幼兒消化系統(tǒng)的負(fù)擔(dān)。就脂肪結(jié)構(gòu)而言，牛乳脂肪結(jié)構(gòu)與母乳也具有較大差異。近年來一些嬰幼兒配方奶粉中開始添加OPO結(jié)構(gòu)脂以使配方粉更接近母乳水平。OPO結(jié)構(gòu)脂，又稱結(jié)構(gòu)脂OPO，化學(xué)名稱：1，3-二油酸2-棕櫚酸甘油三酯，是一種結(jié)構(gòu)化脂肪，通過酶法脂交換技術(shù)模擬母乳脂質(zhì)分子結(jié)構(gòu)，使2位棕櫚酸比例高達(dá)40％以上。相關(guān)研究表明，特有的二位棕櫚酸結(jié)構(gòu)，消化時不易形成鈣皂，從而不易引起嬰幼兒便秘，更易于脂肪酸和鈣的消化吸收。據(jù)報道，臨床試驗(yàn)證明嬰幼兒每天吃22克OPO結(jié)構(gòu)脂，24小時明顯緩解嬰幼兒便秘的現(xiàn)狀。目前關(guān)于嬰幼兒配方乳粉中OPO結(jié)構(gòu)脂添加量沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。另外，已有許多實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明了核苷酸在生物體中的重要作用。核苷酸，是母乳非蛋白氮的一種，對出生嬰兒的生長發(fā)育極其重要，它能夠促進(jìn)生長，提高免疫功能，改善代謝等。2008年，我國已允許核苷酸添加到嬰幼兒奶粉中，但沒有規(guī)定五種核苷酸分量的添加量。US4,994,442中指出將各種核苷酸添加入嬰兒配方食品中可以增強(qiáng)T細(xì)胞免疫應(yīng)答，其中各種核苷酸組分(CMP、AMP、UMP、GMP和IMP)是以等量添加至配方食品中。EP1549158中公開了一種嬰兒奶粉組合物，其包含3.2-15.4mg/L的CMP、1.8-11.0mg/L的UMP、1.8-8.0mg/L的GMP、0.1-2.2mg/L的IMP和2.5-13.2mg/L 的AMP，其意圖給早產(chǎn)嬰兒使用，但沒有公開任何可能實(shí)現(xiàn)的效果。此外，CN1212068C、CN102283289B、CN102038041B、CN101233874B、CN101218940B、CN104222313A、CN104222314A、CN101731351A等均公開了將各種核苷酸按照特定的配比添加到嬰幼兒奶粉中。這些現(xiàn)有技術(shù)報道的添加的各種核苷酸的配比不盡相同。此外，亦有許多實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明了膳食纖維特別是益生元在生物體中的重要作用。益生元是指能夠選擇性地刺激腸內(nèi)一種或幾種有益菌生長繁殖，而且不被宿主消化的物質(zhì)。益生元應(yīng)具備以下四個條件：(a)在胃腸道的上部既不能水解，也不能被宿主吸收；(b)只能選擇性對腸內(nèi)有益菌(雙歧桿菌等)有刺激生長繁殖或激活代謝功能的作用；(c)能夠提高腸內(nèi)有益于健康的優(yōu)勢菌群的構(gòu)成和數(shù)量；(d)能起到增強(qiáng)宿主機(jī)體健康的作用。目前已知有大量的具有功能性質(zhì)低聚糖，其中以低聚半乳糖為主，大量的低聚糖類是雙歧桿菌的最好食物。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)大量低聚糖類對腸道內(nèi)有益菌有增殖作用，而胃腸道內(nèi)的有益菌又可以促進(jìn)嬰兒胃腸道消化吸收、抑制有害菌生長，幫助腸道蠕動。但對于1-3歲幼兒的配方奶粉，目前并沒有統(tǒng)一的關(guān)于膳食纖維或是益生元的推薦添加量。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個目的在于提供一種適用于1-3歲幼兒含有核苷酸和膳食纖維的配方奶粉，該配方奶粉含有核苷酸、膳食纖維、益生菌，可改善幼兒腸道菌群，提升免疫力。本發(fā)明的另一目的在于提供一種制備所述適用于1-3歲幼兒含有核苷酸和膳食纖維的配方奶粉的方法。一方面，本發(fā)明提供了一種含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉，該奶粉中的總蛋白含量為16～19g/100g，α-乳清蛋白含量為1.3～1.4g/100g，β-酪蛋白含量為3.3～3.5g/100g；脂肪含量為18～21g/100g，亞油酸含量為2500～3500mg/100g；膳食纖維0.95～1.2g/100g，所述膳食纖維包括低聚半乳糖和/或低聚果糖；碳水化合物含量為52～56g/100g；總核苷酸含量以核苷酸分子總量計為26～58mg/100g；并且，該配方奶粉產(chǎn)品中含有活性益生菌，活性益生菌的活菌數(shù)≥106CFU/g；其中：提供總蛋白的原料包括基于原料牛奶、全脂奶粉、脫脂奶粉、乳清蛋白粉、脫鹽 乳清粉中的一種或多種，還包括：為強(qiáng)化α-乳清蛋白而添加的原料α-乳清蛋白粉，以及為強(qiáng)化β-酪蛋白而添加的原料β-酪蛋白粉；提供脂肪的原料除含有乳脂的基礎(chǔ)原料外，還包括植物油；提供核苷酸的原料包括為強(qiáng)化核苷酸而添加的原料復(fù)配核苷酸。本案發(fā)明人對0-3歲幼兒的生長發(fā)育所需營養(yǎng)進(jìn)行了分析研究，并調(diào)查了市場上的各種幼兒奶粉的相應(yīng)喂養(yǎng)情況，著重對配方奶粉進(jìn)行了微觀結(jié)構(gòu)的調(diào)整，分別對蛋白、脂肪、核苷酸、膳食纖維(益生元)等方面進(jìn)行了適應(yīng)化設(shè)計，提供了一種適用于1-3歲幼兒含有核苷酸和膳食纖維的配方奶粉，該配方奶粉含有核苷酸、膳食纖維、益生菌，可改善幼兒腸道菌群，提升免疫力。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方案，本發(fā)明的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉中，總蛋白含量為16～19g/100g，所述的總蛋白主要包括乳蛋白。此外，其中乳清蛋白占總蛋白的比例通常控制為48％～61％。具體而言，提供乳蛋白的原料包括基礎(chǔ)原料牛奶、全脂奶粉、脫脂奶粉、乳清蛋白粉、脫鹽乳清粉中的一種或多種；優(yōu)選地，基于1000重量份的所述含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉，其原料包括：全脂奶粉100～150重量份；脫脂奶粉250～325重量份；所述全脂奶粉、脫脂奶粉可部分或全部用相當(dāng)量的全脂牛奶、脫脂牛奶替代。進(jìn)一步，本發(fā)明的幼兒配方奶粉的原料還包括：為強(qiáng)化乳清蛋白而添加的乳清蛋白粉(例如乳清蛋白粉WPC80％、乳清蛋白粉WPC34％等)、脫鹽乳清粉(例如脫鹽乳清粉D70、D90等)中的一種或多種，優(yōu)選包括脫鹽乳清粉，以及乳清蛋白粉(如乳清蛋白粉WPC80％和/或乳清蛋白粉WPC34％)；且為強(qiáng)化產(chǎn)品中的α-乳清蛋白更進(jìn)一步添加有原料α-乳清蛋白粉，以及為強(qiáng)化產(chǎn)品中的β-酪蛋白更進(jìn)一步添加有原料β-酪蛋白粉；優(yōu)選地，基于1000重量份的所述含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉，其原料包括：乳清蛋白粉30～130重量份(優(yōu)選包括乳清蛋白粉WPC34％75～130重量份)；脫鹽乳清粉25～175重量份；α-乳清蛋白粉3～5重量份；β-酪蛋白粉1～2重量份。本發(fā)明的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉中，提供脂肪的原料除含有乳脂的基礎(chǔ)原料(如前述的全脂奶粉、脫脂奶粉、牛奶)外，還包括植物油，所述植物油可以包括葵花籽油、玉米油、大豆油、低芥酸菜籽油、椰子油、棕櫚油、核桃油中的一種或多種，優(yōu)選包括葵花籽油、玉米油和大豆油，這些植物油的添加一方面為產(chǎn)品提供脂肪成分，另一方面提供亞油酸，同時還可提供α-亞麻酸(優(yōu)選地，本發(fā) 明的奶粉中α-亞麻酸含量為310～340mg/100g)。此外，提供脂肪的原料還可選擇性包括為提供1,3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯而添加的原料OPO結(jié)構(gòu)脂。由于目前市場上所售OPO結(jié)構(gòu)脂原料純度不一，即其中有效成分1,3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯的含量不盡相同，通常在40％～70％左右，本發(fā)明中，為區(qū)分有效成分1,3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯及其原料，在描述有效成分時采用術(shù)語“1,3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯”，在描述提供有效成分1,3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯的食品原料時采用俗稱“OPO結(jié)構(gòu)脂”。OPO結(jié)構(gòu)脂的具體添加量可根據(jù)本發(fā)明奶粉產(chǎn)品中對1,3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯的含量要求及OPO結(jié)構(gòu)脂原料純度進(jìn)行換算。更優(yōu)選地，基于1000重量份的所述含有核苷酸和膳食纖維的幼兒配方奶粉，其原料包括：葵花籽油20～80重量份；玉米油10～30重量份；大豆油35～60重量份；OPO結(jié)構(gòu)脂0～85重量份。優(yōu)選地，本發(fā)明中所用原料葵花籽油、玉米油、大豆油、OPO結(jié)構(gòu)脂中的亞油酸和α-亞麻酸的含量分別為7.6～8.9％、0.25～0.38％，53.0～56.20％、0.9～1.6％，50.0～53.5％、7.6～9.6％，5.9～6.3％、0.4～0.62％，所用的低芥酸菜籽油亞油酸和α-亞麻酸的含量分別為16～19％、8.0～10.6％，椰子油亞油酸和α-亞麻酸的含量分別為1～3％、0～1％。OPO結(jié)構(gòu)脂原料中1,3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯的有效含量為40％～70％。本發(fā)明的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉中，采用復(fù)配核苷酸來提供產(chǎn)品核苷酸。實(shí)際上，牛乳中也含有一定的核苷酸，但相對于本發(fā)明額外添加的核苷酸的量而言，牛乳中核苷酸的含量非常少，且在普通牛乳加工成乳粉過程中大部分會被損耗，因此本發(fā)明所用全脂奶粉、脫脂奶粉等含乳成分原料中的基底核苷酸幾乎可以忽略不計。在食品添加領(lǐng)域，所采用的核苷酸主要有CMP(胞嘧啶核苷酸)、UMP(尿嘧啶核苷酸)、AMP(腺嘌呤核苷酸)、GMP(鳥嘌呤核苷酸)、IMP(次黃嘌呤核苷酸)等。目前市場上出售的5'-混合核苷酸含有5'-腺苷酸(AMP)、5'-胞苷酸(CMP)、5'-鳥苷酸(GMP)、5'-尿苷酸(UMP)和5'-肌苷酸(IMP)。通常，在組合使用的時候，這種5'-混合核苷酸可以例如以兩種類型存在：一種是5'-腺苷酸和5'-胞苷酸是以游離酸的形式存在，而其他3種核苷酸以鈉鹽形式存在，簡稱兩酸三鈉型；另一種則均以鈉鹽的形式存在，簡稱五鈉型。因此，本文所用的術(shù)語“核苷酸”還涵蓋其鹽的形式，例如堿金屬鹽或堿土金屬鹽，如鈉鹽、鉀鹽或鈣鹽等，例如一鈉鹽或二鈉鹽等，如CMPNa2、AMPNa2、UMPNa2、GMPNa2、IMPNa2和CMPK2、AMPK2、UMPK2、GMPK、IMPK2等。本發(fā)明的復(fù)配核苷酸中的各個核苷酸組分可以各自任選地且各自獨(dú)立地以各種鹽 形式存在，包括但不限于上文提及的“兩酸三鈉型”；或者各個組分及其鹽可以以任意組合的形式存在，例如僅GMP以鹽形式存在，僅CMP以鹽形式存在等。可選地，本發(fā)明的復(fù)配核苷酸中的各個核苷酸組分可以均以鹽的形式存在，包括但不限于上文提及的“五鈉型”。同樣，本文所用的術(shù)語“核苷酸”還涵蓋其各種形式的溶劑合物(如水合物)。因此，當(dāng)本發(fā)明的組合物包含核苷酸組分的諸如上文所列的其他形式時，這些形式在組合物中的配比應(yīng)當(dāng)換算成其對應(yīng)的核苷酸分子后計算。例如，當(dāng)CMP以其二鈉鹽形式(CMPNa2)存在時，應(yīng)當(dāng)換算成CMP來計算相應(yīng)的重量比。本發(fā)明的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉中，所述復(fù)配核苷酸的量是指原料量，其中核苷酸有效含量以核苷酸分子總量(即CMP、AMP、UMP、GMP和IMP分子總量)計，即如果復(fù)配核苷酸中含有各核苷酸的水合物或鹽類，應(yīng)折算成其對應(yīng)的核苷酸分子后計算，為599～750mg/g。根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選具體實(shí)施方案，本發(fā)明的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉中，所述復(fù)配核苷酸中，各核苷酸有效含量以CMP、AMP、UMP、GMP、IMP分子計分別為：胞苷酸(CMP)：365～430mg尿苷酸(UMP)：94～120mg鳥苷酸(GMP)：70～90mg腺苷酸(AMP)：70～90mg肌苷酸(IMP)：0，或者大于0且不高于20mg。根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選具體實(shí)施方案，本發(fā)明的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉中，所述復(fù)配核苷酸中，以各核苷酸折算成CMP、AMP、UMP、GMP、IMP分子計的總量為100％，各核苷酸有效百分含量以CMP、AMP、UMP、GMP、IMP分子計分別為：CMP58～70％、AMP7.5～12.5％、UMP12～16.5％、GMP10～13％、IMP為0或者大于且不高于2.5％；優(yōu)選為：CMP59～65％、AMP8～12.5％、UMP14～16.5％、GMP11～12.5％、IMP為0或者大于0且不高于2％；更優(yōu)選為CMP59～60％、AMP12～12.5％、UMP16～16.5％、GMP12～12.5％、IMP0。最優(yōu)選的，本發(fā)明的復(fù)配核苷酸添加到所述的0-12月嬰兒配方粉中，使配方粉中核苷酸比例為(以奶粉中各核苷酸折算成CMP、AMP、UMP、GMP、IMP分子計的總量為100％計)：CMP：60％、AMP：12％、UMP：16％和GMP：12％。本發(fā)明的復(fù)配核苷酸添加到所述的1-3隨幼兒配方粉中，可有助于幼兒免疫力的提高。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方案，本發(fā)明的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉中，所述膳食纖維包括低聚半乳糖和低聚果糖，適當(dāng)調(diào)整二者含量使產(chǎn)品中膳食纖維0.95～1.2g/100g。優(yōu)選地，膳食纖維使奶粉產(chǎn)品中含有特定配比的低聚半乳糖和低聚果糖。優(yōu)選地，使奶粉產(chǎn)品中低聚半乳糖含量0.54～0.68g/100g、低聚果糖含量0.45～0.72g/100g。進(jìn)一步優(yōu)選地，使奶粉產(chǎn)品中低聚半乳糖含量0.56～0.64g/100g、低聚果糖含量0.50～0.58g/100g；更優(yōu)選地，使奶粉產(chǎn)品中低聚半乳糖含量0.6g/100g、低聚果糖含量0.54g/100g。本案發(fā)明人對目前已知的具有功能性質(zhì)的大量低聚糖進(jìn)行了考察和篩選實(shí)驗(yàn)，選定含有低聚果糖和低聚半乳糖的原料提供產(chǎn)品中的膳食纖維，這樣的原料通常為低聚果糖粉、低聚半乳糖漿。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方案，為實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品中低聚果糖和低聚半乳糖含量，本發(fā)明中，通常，基于1000重量份的所述含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉，其原料包括：低聚果糖粉5～8重量份；低聚半乳糖漿12.5～16重量份。實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明所用的特定配比的低聚半乳糖和低聚果糖的組合，有助于促進(jìn)雙歧桿菌的增殖，且奶粉的加工性能不受影響，能夠有效避免傳統(tǒng)低聚果糖在酸性和高溫環(huán)境下被緩慢分解而影響最終產(chǎn)品中含量和有效吸收量的問題，也不會出現(xiàn)低聚半乳糖口感不好而影響奶粉口感的問題。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方案，本發(fā)明的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉中，所述益生菌為雙歧桿菌。優(yōu)選地，基于1000重量份的所述含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉，雙歧桿菌的添加量為0.1～0.2重量份；再優(yōu)選為0.18～0.2重量份。更優(yōu)選地，每重量份雙歧桿菌粉含雙歧桿菌為3×1010CFU以上。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方案，本發(fā)明的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉，碳水化合物一部分來自含有乳糖的基礎(chǔ)原料如牛奶、全脂奶粉和/或脫脂奶粉等，此外應(yīng)額外添加乳糖原料來提供碳水化合物。即，本發(fā)明的幼兒配方奶粉中，提供碳水化合物的原料除含有乳糖的基礎(chǔ)原料外，還包括原料乳糖。優(yōu)選地，基于1000重量份的所述含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉，其原料包括：乳糖125～275重量份?？稍谒龇秶鷥?nèi)調(diào)整乳糖的具體添加量以使本發(fā)明的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉碳水化合物含量為52～56g/100g。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方案，本發(fā)明的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方 奶粉，其原料中還包括適當(dāng)?shù)腄HA、ARA、乳鐵蛋白等中的一種或多種，還包括包含鈣粉、維生素和礦物質(zhì)的復(fù)配營養(yǎng)素，此外還包括在奶粉制備工藝中噴霧干燥時所用的載體無水奶油和磷脂。優(yōu)選地，基于1000重量份的所述含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉，其原料包括：DHA2.5～3.5重量份；ARA3.5～6重量份；乳鐵蛋白0～0.6重量份；包含鈣粉、維生素和礦物質(zhì)的復(fù)配營養(yǎng)素9～15重量份；磷脂1～2.5重量份；無水奶油0.5～1.5重量份。本發(fā)明的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉中，所述的復(fù)配營養(yǎng)素為符合國家標(biāo)準(zhǔn)的營養(yǎng)成分的組合，按照不同配方使用不同添加量。本發(fā)明的配方奶粉根據(jù)需要若添加營養(yǎng)素可選擇性采用下述復(fù)配營養(yǎng)素成分中的任一或任意組合。優(yōu)選地，所述復(fù)配營養(yǎng)素至少包括復(fù)配維生素、鈣粉、礦物質(zhì)營養(yǎng)包，各組分用量為：1)復(fù)配維生素，每克復(fù)配維生素中：維生素A：2600～3620μgRE維生素D：30～45μg維生素B1：3000～4200μg維生素B2：1000～1600μg維生素B6：1750～2500μg維生素B12：5.0～8.5μg維生素K：260～410μg維生素C：360～500mg維生素E：17～24mgα-TE煙酰胺：19000～26000μg葉酸：430～580μg生物素：75～105μg泛酸：8000～11000μg葉黃素：0～1230μg；2)鈣粉(碳酸鈣)，每1000千克奶粉中：鈣：1300～1600g；3)礦物質(zhì)，每克礦物質(zhì)中：鐵：60～85mg鋅：23～35mg銅：3000～3900μg碘：500～670μg。此外，所述復(fù)配營養(yǎng)素中還可選擇性包括氯化膽堿(每1000千克奶粉中含膽堿300～550g)，所述復(fù)配維生素中還可選擇性包括牛磺酸(160～220mg/g)。復(fù)配營養(yǎng)素的基料優(yōu)選為乳糖。優(yōu)選地，基于1000重量份的所述含有核苷酸的母乳化嬰兒配方奶粉，復(fù)配營養(yǎng)素的添加量為7～10重量份，其中，復(fù)配維生素營養(yǎng)包優(yōu)選為2～3重量份，鈣粉營養(yǎng)包優(yōu)選為2～6重量份，礦物質(zhì)營養(yǎng)包優(yōu)選為0.5～3重量份，各營養(yǎng)包的基料優(yōu)選為乳糖。上述復(fù)配營養(yǎng)素的各組分含量，是指為強(qiáng)化所述營養(yǎng)素物質(zhì)的添加量，不包括奶粉其他原料中的營養(yǎng)素組分含量，例如，鈣粉(碳酸鈣)，每1000千克奶粉中“鈣：1300～1600g”是指為強(qiáng)化產(chǎn)品中的鈣元素，基于1000千克重量的奶粉，添加鈣粉(例如碳酸鈣)以其中鈣元素重量計為1300～1600g。本發(fā)明的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉中，所用原料磷脂和無水奶油主要是用于噴霧干燥過程中粉顆粒的成型，所述磷脂可以是大豆磷脂和/或卵磷脂。磷脂和無水奶油的用量較少，但對于奶粉產(chǎn)品中脂肪含量也具有一定貢獻(xiàn)。根據(jù)本發(fā)明的一優(yōu)選的具體實(shí)施方案，本發(fā)明的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉，其原料包括：復(fù)配核苷酸0.45～0.65重量份，其中核苷酸有效量以核苷酸分子總量計不超過 0.58重量份，且其中IMP為0、或大于0且不高于2％；包含鈣粉、維生素和礦物質(zhì)的復(fù)配營養(yǎng)素7～10重量份；可以理解，本發(fā)明的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉中，各原料的具體用量應(yīng)在滿足對配方奶粉產(chǎn)品指標(biāo)要求的前提下進(jìn)行調(diào)整而確定。本發(fā)明的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉中，未詳細(xì)說明或列出的產(chǎn)品性能指標(biāo)均應(yīng)按照《GB10767-2010較大嬰兒和幼兒配方食品》及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和法規(guī)的規(guī)定執(zhí)行。本發(fā)明的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉中，各原料均可商購獲得，各原料的選用應(yīng)符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求，其中所述復(fù)配核苷酸同時應(yīng)滿足本發(fā)明所述要求。此外，所述復(fù)配核苷酸、復(fù)配營養(yǎng)素也可自行復(fù)配。本發(fā)明中僅是為方便表述而采用“復(fù)配”，并不意味著復(fù)配物中各組分必須先混合在一起再應(yīng)用。各原料均應(yīng)在滿足相關(guān)法規(guī)前提下添加使用。另一方面，本發(fā)明還提供了一種制備所述的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉的方法，其制備的工藝流程主要包括：配料、均質(zhì)、濃縮殺菌、噴霧干燥、干混得到成品。具體而言，本發(fā)明的制備所述的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉的方法包括：配料：將配方奶粉原料中除噴霧載體(磷脂及無水奶油)及后混料(如DHA、ARA、乳鐵蛋白、雙歧桿菌等)外的其他原料進(jìn)行混合，得混合料液；均質(zhì)：混合料液進(jìn)行均質(zhì)；濃縮殺菌：均質(zhì)后的料液進(jìn)行濃縮殺菌，濃縮殺菌條件為：雙效濃縮，殺菌溫度≥83℃，殺菌時間15～30秒，并控制出料濃度為48％～52％干物質(zhì)；噴霧干燥：濃奶液經(jīng)刮熱器預(yù)熱到60～70℃，預(yù)熱后物料經(jīng)0.8～1.2mm孔徑的過 濾器過濾后，打入干燥塔噴霧干燥，控制噴霧干燥條件為：進(jìn)風(fēng)溫度165～180℃，排風(fēng)溫度75-90℃，高壓泵壓力160～210bar，塔負(fù)壓-4～-2mbar；流化床干燥冷卻：從干燥塔出來的粉再經(jīng)一級流化床二次干燥后，經(jīng)二級流化床冷卻到25～30℃，同時在壓縮空氣作用下，將加熱至60～65℃的磷脂(卵磷脂和/或大豆磷脂)與載體(無水奶油)的混合物均勻分散到粉表面，得到粉顆粒；后混料：將DHA、ARA、乳鐵蛋白、雙歧桿菌與流化床干燥冷卻后的粉顆粒干混混均，包裝，得奶粉成品。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方案，本發(fā)明的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉的制備方法中，營養(yǎng)素添加順序及攪拌溶解時間也是非常重要的，優(yōu)選地，配料時，鈣粉、維生素和核苷酸、礦物質(zhì)是依序添加到混好的其他粉料和油料混合物中，且添加鈣粉后攪拌溶解15～25分鐘，添加維生素和核苷酸后攪拌溶解15～20分鐘，添加礦物質(zhì)后攪拌溶解15～20分鐘。發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)，先添加鈣粉，鈣可以與牛奶蛋白中的酪蛋白結(jié)合形成膠體鈣，因此可以避免或減弱鈣的沉淀，然而這一結(jié)合過程需要足夠的時間。同時如果鈣與礦物質(zhì)同時添加，鈣粉可以吸附部分礦物質(zhì)如鐵，促使其由二價鐵變?yōu)槿齼r鐵，三價鐵為紅色，因此易造成黃至紅色的沉淀。其次加入維生素和復(fù)配核苷酸，目的是維生素中含有易被金屬離子氧化的成分如VC，如果先加入礦物質(zhì)，會由于局部的維生素濃度過高而造成維生素的損失。并且VC如果局部濃度過高，會加速二價鐵的氧化。最后加入礦物質(zhì)是因?yàn)榈V物質(zhì)分散在水中比維生素慢，同時在礦物質(zhì)分散過程中，要在其顆粒表面形成水膜才能使其穩(wěn)定，并且不會對牛奶蛋白產(chǎn)生破壞，這一過程需要足夠的之間。等維生素充分與牛奶混合稀釋后加入礦物質(zhì)，可以減弱礦物質(zhì)對維生素的損失。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方案，本發(fā)明的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉的制備方法中，所述配料過程包括：粉類添加：各種粉類原料按配方經(jīng)計量后通過風(fēng)送系統(tǒng)統(tǒng)一加入到配粉罐中，并通過真空系統(tǒng)吸入真空混料罐中；溶化配油：按配方要求將配方中規(guī)定的油脂放入化油間，化油間的溫度保持在50～90℃，待油溶化后，打入混合油貯罐中，并按配方要求將混合油經(jīng)油泵打入混料罐中；營養(yǎng)素溶解添加：將鈣粉、維生素和核苷酸、礦物質(zhì)用純凈水分別溶解后，依序 添加到混料罐中，得到混合的料液。在本發(fā)明的一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉的制備方法按照如下操作進(jìn)行：1)粉類添加：各種粉類原料按配方經(jīng)計量后通過風(fēng)送系統(tǒng)統(tǒng)一加入到配粉罐中貯存。2)真空吸粉：配粉罐中的各種粉類原料通過真空系統(tǒng)吸入真空混料罐中。3)溶化配油：按配方要求將配方中規(guī)定的油脂放入化油間，化油間的溫度應(yīng)保持在50～90℃，待油溶化后，按配方比例要求通過油泵和流量計打入混合油貯罐中。4)混合油料貯存：混合油在油貯存罐中保溫貯存，溫度40～50℃，貯存時間小于12小時防止脂肪氧化。5)稱重：按配方要求將混合油經(jīng)油泵打入混料罐。6)營養(yǎng)素溶解添加：鈣粉、礦物質(zhì)、維生素及核苷酸等分別添加，用100～200kg純凈水，分別溶解后，打入濕混缸，每打完一種用100kg純凈水沖洗添加罐和管線。7)過濾：經(jīng)混合的料液經(jīng)濾網(wǎng)過濾，去除原料中可能帶入的物理雜質(zhì)。8)均質(zhì)：混合后的料液通過均質(zhì)機(jī)進(jìn)行均質(zhì)，均質(zhì)一級壓力為105±5bar，均質(zhì)一級壓力為32±3bar，將脂肪球進(jìn)行機(jī)械處理，把它們分散成均勻一致的脂肪球。9)冷卻與貯存：均質(zhì)后的料液進(jìn)入板式換熱器進(jìn)行冷卻：冷卻至20℃以下，暫存在預(yù)存缸中，6小時內(nèi)進(jìn)入下道工序，攪拌器按設(shè)定需求開啟。10)濃縮殺菌：生產(chǎn)時使用雙效濃縮，殺菌溫度≥83℃，殺菌時間25秒。出料濃度均為48％～52％干物質(zhì)。11)濃奶貯存、預(yù)熱過濾、噴霧干燥：濃縮后的奶暫存在濃奶平衡罐。經(jīng)刮板預(yù)熱器預(yù)熱到60～70℃，預(yù)熱后物料經(jīng)1mm孔徑的過濾器過濾后，用高壓泵打入干燥塔噴霧干燥，細(xì)粉按要求在塔頂或流化床附聚。進(jìn)風(fēng)溫度：165～180℃，排風(fēng)溫度75-90℃，高壓泵壓力160～210bar，塔負(fù)壓-4～-2mbar。12)流化床干燥冷卻：從干燥塔出來的粉再經(jīng)流化床(一級)二次干燥后，經(jīng)流化床(二級)冷卻到25～30℃。同時磷脂與載體混合后加熱至60～65℃，在壓縮空氣作用下，均勻分散到粉表面，使粉顆粒附聚增加其顆粒度和速溶性。13)分裝：制粉車間人員按照配方要求，將DHA、ARA乳鐵蛋白、雙歧桿菌稱量封袋分裝。14)干混：將稱量好的DHA、ARA、乳鐵蛋白、雙歧桿菌與奶粉在干混機(jī)內(nèi)混均。15)篩粉：通過振動篩，使奶粉的顆粒度均勻，粉渣報廢處理。16)出粉：用經(jīng)過消毒的集粉箱接粉，并由出粉間運(yùn)至上粉間。17)上粉：將奶粉按包裝要求倒入大小包裝機(jī)上的儲粉罐中。18)包裝：400克自動包裝機(jī)充氮包裝。充氮時含氧量低于1％。900克鐵聽自動充氮包裝含氧量低于5％。19)裝箱：將已包裝的小袋裝入紙箱中同時加入粉勺，用封箱機(jī)封口。20)成品檢驗(yàn)：對包裝完后的產(chǎn)品按檢驗(yàn)計劃進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)。21)入庫貯存：經(jīng)檢驗(yàn)合格的產(chǎn)品入庫貯存，要求在常溫下貯存，濕度≤65％。綜合而言，本發(fā)明提供了一種含有核苷酸和膳食纖維的1-3歲幼兒配方奶粉及其制備方法，本發(fā)明的幼兒配方奶粉的乳蛋白、脂肪、核苷酸組成和比例等更適用于亞洲嬰兒特別是中國人(華人)嬰兒，可以提升嬰兒的免疫力。具體實(shí)施方式以下通過具體實(shí)施例詳細(xì)說明本發(fā)明的實(shí)施過程和產(chǎn)生的有益效果，旨在幫助閱讀者更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和特點(diǎn)，不作為對本案可實(shí)施范圍的限定。下列實(shí)施例中未注明具體條件的方法，通常按照所屬領(lǐng)域的常規(guī)操作進(jìn)行。實(shí)施例1一種適用于1-3歲幼兒含有核苷酸的配方奶粉(制備1000公斤)：脫脂奶粉275，乳糖250千克，全脂奶粉150千克，乳清蛋白粉WPC34％125千克，脫鹽乳清粉D9025千克，葵花籽油65千克份，玉米油30千克，大豆油50千克，α-乳清蛋白粉4千克，β-酪蛋白粉1千克，復(fù)配核苷酸0.54千克，卵磷脂2千克，無水奶油1千克，低聚果糖粉6.1千克(其中低聚果糖有效含量89％)，低聚半乳糖漿14.3千克(其中低聚半乳糖有效含量42％)，復(fù)配營養(yǎng)素7.65千克，DHA2.9千克，ARA5千克，乳鐵蛋白0.60千克，雙歧桿菌0.2千克。其中0.54千克復(fù)配核苷酸各核苷酸有效成分如下：CMP：229..68g，AMP：46.9g，UMP：63.0g，GMP：46.9g。復(fù)配核苷酸中除各核苷酸的水合物或鹽類外，其余為乳糖。其中復(fù)配營養(yǎng)素包括復(fù)配維生素營養(yǎng)包約2.4千克、氯化膽堿營養(yǎng)包約0.5千克、鈣粉營養(yǎng)包約3.75千克、礦物質(zhì)營養(yǎng)包約1千克，各營養(yǎng)包的基料為乳糖，具體的主要營養(yǎng)素組成如下：1)復(fù)配維生素，每克復(fù)配維生素中，牛磺酸：200mg；維生素A(醋酸視黃酯)：3000μgRE；維生素D(膽鈣化醇)：40μg；維生素B1(硝酸硫胺素)：4100μg；維生素B2(核黃素)：1300μg；維生素B6(鹽酸吡哆醇)：2000μg；維生素B12(氰鈷胺)：8.0μg；維生素K1(植物甲萘醌)：380μg；維生素C(L-抗壞血酸)：460mg；維生素E(dl-α-醋酸生育酚)：20mgα-TE；煙酰胺：24800μg；葉酸：500μg；生物素(D-生物素)：100μg；泛酸(D-泛酸鈣)：8000μg；葉黃素：1000μg；2)鈣粉，每1000千克奶粉中，鈣(碳酸鈣)：1500g；3)礦物質(zhì)，每克礦物質(zhì)中，鐵(硫酸亞鐵)：75mg；鋅(硫酸鋅)：29mg；銅(硫酸銅)：3600μg；碘(碘化鉀)：600μg；4)氯化膽堿，每1000千克奶粉中，膽堿(氯化膽堿)：450g。其中所用原料葵花籽油、玉米油、大豆油中的亞油酸和α-亞麻酸的含量分別為8.20％、0.3％，55.50％、1.2％，52.10％、8.8％。其中每重量份雙歧桿菌粉含雙歧桿菌≥3×1010CFU。本實(shí)施例的幼兒配方奶粉具體制備工藝如下：1)粉類添加：各種粉類原料按配方經(jīng)計量后通過風(fēng)送系統(tǒng)統(tǒng)一加入到配粉罐中貯存。2)真空吸粉：配粉罐中的各種粉類原料通過真空系統(tǒng)吸入真空混料罐中。3)溶化配油：按配方要求將配方中規(guī)定的油脂放入化油間，化油間的溫度應(yīng)保持在60℃，待油溶化后，按配方比例要求通過油泵和流量計打入混合油貯罐中。4)稱重：按配方要求將混合油經(jīng)油泵打入混料罐中。5)營養(yǎng)素溶解添加：鈣粉、礦物質(zhì)、維生素及核苷酸等分別添加，用150kg純凈水，分別溶解后，打入混料罐中，每打完一種用100kg純凈水沖洗添加罐和管線。6)過濾：經(jīng)混合的料液經(jīng)濾網(wǎng)過濾，去除原料中可能帶入的物理雜質(zhì)。7)均質(zhì)：混合后的料液通過均質(zhì)機(jī)進(jìn)行均質(zhì)，將脂肪球進(jìn)行機(jī)械處理，把它們分散成均勻一致的脂肪球。8)冷卻與貯存：均質(zhì)后的料液進(jìn)入板式換熱器進(jìn)行冷卻：冷卻至20℃以下，暫存在預(yù)存缸中，6小時內(nèi)進(jìn)入下道工序，攪拌器按設(shè)定需求開啟。9)濃縮殺菌：生產(chǎn)時使用雙效濃縮，殺菌溫度≥83℃，殺菌時間25秒。出料濃 度均為50％干物質(zhì)。10)濃奶貯存、預(yù)熱過濾、噴霧干燥：濃縮后的奶暫存在濃奶平衡罐。經(jīng)刮板預(yù)熱器預(yù)熱到60℃，預(yù)熱后物料經(jīng)1mm孔徑的過濾器過濾后，用高壓泵打入干燥塔噴霧干燥，細(xì)粉按要求在塔頂或流化床附聚。進(jìn)風(fēng)溫度：180℃，排風(fēng)溫度86℃，高壓泵壓力200bar，塔負(fù)壓-4mbar左右。11)流化床干燥冷卻：從干燥塔出來的粉再經(jīng)流化床(一級)二次干燥后，經(jīng)流化床(二級)冷卻到30℃。同時卵磷脂與載體混合后加熱至60℃，在壓縮空氣作用下，均勻分散到粉表面，使粉顆粒附聚增加其顆粒度和速溶性。12)分裝：制粉車間人員按照配方要求，將DHA、ARA、乳鐵蛋白或雙歧桿菌稱量封袋分裝。13)干混：將稱量好的DHA、ARA、乳鐵蛋白或雙歧桿菌與奶粉在干混機(jī)內(nèi)混均。14)篩粉：通過振動篩，使奶粉的顆粒度均勻，粉渣報廢處理。15)出粉：用經(jīng)過消毒的集粉箱接粉，并由出粉間運(yùn)至上粉間。16)上粉：將奶粉按包裝要求倒入大小包裝機(jī)上的儲粉罐中。17)包裝：400克自動包裝機(jī)充氮包裝。充氮時含氧量低于1％。900克鐵聽自動充氮包裝含氧量低于5％。18)裝箱：將已包裝的小袋裝入紙箱中同時加入粉勺，用封箱機(jī)封口。19)成品檢驗(yàn)：對包裝完后的產(chǎn)品按檢驗(yàn)計劃進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)。20)入庫貯存：經(jīng)檢驗(yàn)合格的產(chǎn)品入庫貯存，要求在常溫下貯存，濕度≤65％。實(shí)施例2本實(shí)施例的適用于1-3歲幼兒的配方奶粉配方(制備1000公斤)：乳糖140千克，全脂奶粉100千克，脫脂奶粉310千克，乳清蛋白粉WPC34％75千克，脫鹽乳清粉D90175千克，葵花籽油20千克，玉米油15千克，大豆油50千克，OPO結(jié)構(gòu)脂(1,3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯有效含量40％)83千克，α-乳清蛋白粉4千克，β-酪蛋白粉1千克，復(fù)配核苷酸0.57千克，大豆磷脂2千克，無水奶油1千克，低聚果糖粉6千克(其中低聚果糖有效含量90％)，低聚半乳糖漿14千克(其中低聚果糖有效含量42％)，復(fù)配營養(yǎng)素7.85千克，DHA3千克，ARA4千克，雙歧桿菌0.18千克。其中0.57千克復(fù)配核苷酸各核苷酸有效成分如下：CMP：230.43g，AMP：47.75g，UMP：64.06g，GMP：47.75g。復(fù)配核苷酸中除各核苷酸的水合物或鹽類外，其余為乳糖。其中復(fù)配營養(yǎng)素包括復(fù)配維生素營養(yǎng)包約2.4千克、氯化膽堿營養(yǎng)包約0.45千克、鈣粉營養(yǎng)包約3.75千克、礦物質(zhì)營養(yǎng)包約1.25千克，各營養(yǎng)包的基料為乳糖，具體的主要營養(yǎng)素組成如下：1)復(fù)配維生素，每克復(fù)配維生素中，牛磺酸：190mg；維生素A(醋酸視黃酯)：3100μgRE；維生素D(膽鈣化醇)：41μg；維生素B1(硝酸硫胺素)：4000μg；維生素B2(核黃素)：1400μg；維生素B6(鹽酸吡哆醇)：2200μg；維生素B12(氰鈷胺)：7.5μg；維生素K1(植物甲萘醌)：360μg；維生素C(L-抗壞血酸)：490mg；維生素E(dl-α-醋酸生育酚)：22mgα-TE；煙酰胺：25000μg；葉酸：520μg；生物素(D-生物素)：80μg；泛酸(D-泛酸鈣)：8000μg；2)鈣粉，每1000千克奶粉中，鈣(碳酸鈣)：1500g；3)礦物質(zhì)，每克礦物質(zhì)中，鐵(硫酸亞鐵)：80mg；鋅(硫酸鋅)：30mg；銅(硫酸銅)：3700μg；碘(碘化鉀)：630μg；4)氯化膽堿，每1000千克奶粉中，膽堿(氯化膽堿)：350g。其中所用原料葵花籽油、玉米油、大豆油中的亞油酸和α-亞麻酸的含量分別為8.20％、0.3％，55.50％、1.2％，52.10％、8.8％。其中每重量份雙歧桿菌粉含雙歧桿菌≥3×1010CFU。本實(shí)施例的幼兒配方奶粉具體制備工藝如下：1)粉類添加：各種粉類原料按配方經(jīng)計量后通過風(fēng)送系統(tǒng)統(tǒng)一加入到配粉罐中貯存。2)真空吸粉：配粉罐中的各種粉類原料通過真空系統(tǒng)吸入真空混料罐中。3)溶化配油：按配方要求將配方中規(guī)定的油脂放入化油間，化油間的溫度應(yīng)保持在60℃，待油溶化后，按配方比例要求通過油泵和流量計打入混合油貯罐中。4)稱重：按配方要求將混合油經(jīng)油泵打入混料罐中。5)營養(yǎng)素溶解添加：鈣粉、礦物質(zhì)、維生素及核苷酸等分別添加，用150kg純凈水，分別溶解后，打入混料罐中，每打完一種用100kg純凈水沖洗添加罐和管線。6)過濾：經(jīng)混合的料液經(jīng)濾網(wǎng)過濾，去除原料中可能帶入的物理雜質(zhì)。7)均質(zhì)：混合后的料液通過均質(zhì)機(jī)進(jìn)行均質(zhì)，將脂肪球進(jìn)行機(jī)械處理，把它們分散成均勻一致的脂肪球。8)冷卻與貯存：均質(zhì)后的料液進(jìn)入板式換熱器進(jìn)行冷卻：冷卻至20℃以下，暫存在預(yù)存缸中，6小時內(nèi)進(jìn)入下道工序，攪拌器按設(shè)定需求開啟。9)濃縮殺菌：生產(chǎn)時使用雙效濃縮，殺菌溫度≥83℃，殺菌時間25秒。出料濃度均為50％干物質(zhì)。10)濃奶貯存、預(yù)熱過濾、噴霧干燥：濃縮后的奶暫存在濃奶平衡罐。經(jīng)刮板預(yù)熱器預(yù)熱到60℃，預(yù)熱后物料經(jīng)1mm孔徑的過濾器過濾后，用高壓泵打入干燥塔噴霧干燥，細(xì)粉按要求在塔頂或流化床附聚。進(jìn)風(fēng)溫度：180℃，排風(fēng)溫度86℃,高壓泵壓力200bar，塔負(fù)壓-4mbar左右。11)流化床干燥冷卻：從干燥塔出來的粉再經(jīng)流化床(一級)二次干燥后，經(jīng)流化床(二級)冷卻到30℃。同時大豆磷脂與載體混合后加熱至60℃，在壓縮空氣作用下，均勻分散到粉表面，使粉顆粒附聚增加其顆粒度和速溶性。12)分裝：制粉車間人員按照配方要求，將DHA、ARA、乳鐵蛋白或雙歧桿菌稱量封袋分裝。13)干混：將稱量好的DHA、ARA、乳鐵蛋白或雙歧桿菌與奶粉在干混機(jī)內(nèi)混均。14)篩粉：通過振動篩，使奶粉的顆粒度均勻，粉渣報廢處理。15)出粉：用經(jīng)過消毒的集粉箱接粉，并由出粉間運(yùn)至上粉間。16)上粉：將奶粉按包裝要求倒入大小包裝機(jī)上的儲粉罐中。17)包裝：400克自動包裝機(jī)充氮包裝。充氮時含氧量低于1％。900克鐵聽自動充氮包裝含氧量低于5％。18)裝箱：將已包裝的小袋裝入紙箱中同時加入粉勺，用封箱機(jī)封口。19)成品檢驗(yàn)：對包裝完后的產(chǎn)品按檢驗(yàn)計劃進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)。20)入庫貯存：經(jīng)檢驗(yàn)合格的產(chǎn)品入庫貯存，要求在常溫下貯存，濕度≤65％。各實(shí)施例奶粉質(zhì)量檢測數(shù)據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例1、2的檢測數(shù)據(jù)見表1：表1不同配比核苷酸的免疫功效試驗(yàn)本試驗(yàn)意圖證實(shí)本發(fā)明的奶粉中各核苷酸比例在免疫刺激方面的效果，其原理和步驟參見“保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范(2003年版)”第二部分第一章的規(guī)定和要求。1.材料與方法1.1.主要試劑CN1182786C、CN1218647C、本試驗(yàn)中所用的主要試劑有：RPMI-1640培養(yǎng)基(Gibco)；胎牛血清(Gibco)；ConA(Sigma)(中文名為：刀豆蛋白A)；淋巴細(xì)胞分離液、全血及組織稀釋液、細(xì)胞洗滌液(天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司)；5％雞紅細(xì)胞懸液(實(shí)驗(yàn)室制備)；MTT試劑盒、Hank's液(碧云天生物技術(shù)研究所)；Giemsa染液(珠海貝索生物技術(shù)有限公司)；EDTA抗凝管(BD)；96孔細(xì)胞培養(yǎng)板(Corning)；百呈牌牛初乳膠囊(上海孚正生物科技有限公司)；核苷酸樣品(南京同凱兆業(yè))。如果沒有特別指明，這里所用試劑和設(shè)備均購自(碧云天生物技術(shù)研究所)。1.2.主要儀器設(shè)備CO2培養(yǎng)箱(三洋MCO-18AIC(UV))；超凈工作臺(AIRTECH)；倒置顯微鏡(OLYMPUS)；日立水平離心機(jī)(himac-CT6EL)；酶標(biāo)儀(BIO-RADModel680)；OLYMPUS顯微鏡(BX51)；DNP恒溫培養(yǎng)箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。1.3.實(shí)驗(yàn)動物5～6周齡雄性KM小鼠160只，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司提供。1.4.動物分組使KM小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7天后，將其隨機(jī)分為8組，每組20只，即空白對照組，陽性對照組，樣品一的高、中、低劑量組以及比較樣品的高、中、低劑量組。向每組動物分別灌胃溶解了各樣品(見下文)的無菌水，空白對照組灌胃相同體積的無菌水。每天1次，連續(xù)飼喂或灌胃30天。高劑量組的飼喂的劑量為67.37mg﹒kg-1﹒d-1，中劑量組的劑量為41.82mg﹒kg-1﹒d-1，低劑量組的劑量為23.23mg﹒kg-1﹒d-1。陽性對照組的劑量為(150.17mg﹒kg-1﹒d-1)。陽性對照組：牛初乳膠囊。實(shí)驗(yàn)組：樣品一：參照本發(fā)明實(shí)施例奶粉中核苷酸含量的復(fù)配核苷酸組合物，其組成和配比(按重量計)為CMP：60％、AMP：12％、UMP：16％和GMP：12％。比較樣品：該樣品為根據(jù)市售的某款添加核苷酸的嬰幼兒食品中所用的核苷酸組分和配比制備的核苷酸組合物，其組成和配比(按重量計)為CMP：33.7％、AMP20.3％、UMP23.1％、GMP7.6％和IMP15.3％。1.5.檢測指標(biāo)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)：各組于實(shí)驗(yàn)第38天，隨機(jī)取10只小鼠，使用2mLEDTA抗凝管，摘除眼球采血，采用Ficoll密度梯度離心法，無菌分離淋巴細(xì)胞。取1mL新鮮抗凝血，將其與全血和組織稀釋液以1:1混勻，然后小心加于等體積淋巴細(xì)胞分離液的液面上。用水平離心機(jī)以1500轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，收集環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層，將其用細(xì)胞洗滌液洗滌2次。用RPMI-1640完全培養(yǎng)液配制為1×107個/mL，然后加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔100μL，每鼠6孔，其中3孔加入ConA(終濃度為5μg/mL)，另3孔不加作為對照。在5％CO2和37℃的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)68小時后， 加入MTT(5mg/mL)溶液(10μL/孔)，繼續(xù)培養(yǎng)4小時后，每孔加入100μLFormazan(中文名為：甲臜)溶液，然后在37℃的CO2培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育，直至觀察到Formazan全部溶解。在酶標(biāo)儀上以波長570nm測定OD值，計算刺激指數(shù)(SI)：SI＝ConA刺激管OD平均值/對照管OD平均值。腹腔巨噬細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)：各組于實(shí)驗(yàn)第38天，隨機(jī)取10只小鼠，每鼠腹腔注射5％雞紅細(xì)胞懸液1mL。30分鐘后，以頸椎脫臼法處死小鼠。腹腔注入lmL生理鹽水，輕揉小鼠腹部1分鐘，剪開腹壁皮膚，在肌肉層上開口，用吸管伸入腹腔吸取腹腔液lmL，滴加于潔凈的載玻片上。將載玻片放入墊有濕紗布的搪瓷盒中，然后放入37℃培養(yǎng)箱孵育30分鐘。取出載玻片，漂洗去除上清液和未粘附在玻片上的細(xì)胞，然后在室溫下晾干，用1:1丙酮/甲醇溶液固定后，置于Giemsa染色液中，浸染15～30分鐘，然后水洗并晾干。在高倍鏡下計數(shù)巨噬細(xì)胞，每張玻片計數(shù)100個，分別計算吞噬百分率和吞噬指數(shù)。1.6.統(tǒng)計學(xué)分析數(shù)據(jù)均以表示，采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，兩兩比較采用snk法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α＝0.05。2.結(jié)果2.1.樣品對淋巴細(xì)胞增殖功能的影響表2樣品對小鼠淋巴細(xì)胞增殖功能的影響(n＝10)組別刺激指數(shù)(SI)空白對照組1.24±0.19陽性對照組2.13±0.47*樣品一高劑量組2.09±0.23*樣品一中劑量組1.87±0.26*樣品一低劑量組1.46±0.34*比較樣品高劑量組1.51±0.18*比較樣品中劑量組1.30±0.22比較樣品低劑量組1.27±0.15注：*與空白對照組相比差異顯著(p<0.05)。由表2可見，樣品一的高、中、低劑量組的SI值均顯著高于空白對照組(p<0.05)， 并且呈劑量依賴性；比較樣品的高劑量組的SI值顯著高于空白對照組(p<0.05)，比較樣品的中、低劑量組SI值與空白對照組差異不顯著(p>0.05)；樣品一的低劑量組的SI值顯著高于比較樣品中劑量組(p<0.05)。以上結(jié)果表明本發(fā)明的奶粉中的核苷酸配比可顯著提高小鼠淋巴細(xì)胞增殖功能，且效果優(yōu)于比較樣品。2.2.樣品對巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響表3樣品對小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響(n＝10)組別吞噬百分率(％)吞噬指數(shù)空白對照組35.2±4.20.43±0.06陽性對照組52.7±8.6*0.62±0.10*樣品一高劑量組50.1±2.5*0.59±0.01*樣品一中劑量組48.7±3.2*0.57±0.13*樣品一低劑量組46.7±3.1*0.53±0.07*比較樣品高劑量組49.8±2.0*0.50±0.22*比較樣品中劑量組34.9±1.70.44±0.12比較樣品低劑量組35.1±3.90.42±0.19注：*與空白對照組相比差異顯著(p<0.05)。由表3可見，樣品一的高、中、低劑量組的吞噬百分率及吞噬指數(shù)均顯著高于空白對照組(p<0.05)；比較樣品的高劑量組的吞噬百分率及吞噬指數(shù)顯著高于空白對照組(p<0.05)，比較樣品的中、低劑量組的吞噬百分率及吞噬指數(shù)與空白對照組差異不顯著(p>0.05)；樣品一的低劑量組的吞噬百分率及吞噬指數(shù)顯著高于比較樣品的中劑量組(p<0.05)。以上結(jié)果表明本發(fā)明的奶粉中的核苷酸配比可顯著提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能，且效果優(yōu)于比較樣品。3.結(jié)論從以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，本發(fā)明的奶粉中的核苷酸配比可顯著提高淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能，增強(qiáng)腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能，具有提高免疫功能的作用，且免疫調(diào)節(jié)作用顯著高于比較樣品。不同益生元的功效實(shí)驗(yàn)由于缺少幼兒對益生元的有效攝取量，本發(fā)明以成人有效攝取量進(jìn)行對比，參照成人標(biāo)制訂了如下推薦攝取量。表4低聚糖有效攝取量表注1、最大無作用量以體重60kg計。最大無作用量表示，當(dāng)給予動物藥物或毒素時，其給與量不超過限度時，并不會引發(fā)毒性。2、日常攝取量：最大無作用量×(1/安全系數(shù))3、最小有效劑量：當(dāng)藥物發(fā)揮其功效，所需服用之最低劑量。實(shí)驗(yàn)方法：實(shí)驗(yàn)用益生元的種類和含量列于表5。除了表5中所示益生元種類和含量之外，以與實(shí)施例1所述相同的方法和原料制備奶粉。另外，制備未添加任何益生元的奶粉作為對照。選取受試者60位幼兒均分為6組，年齡在1-3周歲之間，分別為A1、A2、B、C、D、E組，分組時盡可能地考慮影響結(jié)果的主要因素如年齡、性別等，進(jìn)行均衡性檢驗(yàn)，以保證組間的可比性。六組幼兒每人每日服用的樣品見表5，其中E組為對照組，所制奶粉樣品未添加任何益生元。受試者每個幼兒每日早晚各食用30克實(shí)施例奶粉樣品，服用時將受試的奶粉樣品溶解于200毫升溫水中服用。表5試驗(yàn)樣品表在受試者受試之前，采用無菌取樣方式采取受試者糞便110克，10倍稀釋，選擇合適的稀釋度分別接種在各培養(yǎng)基上。培養(yǎng)后，以菌落形態(tài)，革蘭氏染色鏡檢、生化反應(yīng)等鑒定計數(shù)菌落，計算出每克濕便中的菌數(shù)，取對數(shù)后進(jìn)行統(tǒng)計處理。最后一次給予米粉樣品之后24小時，再次檢測菌落數(shù)。試驗(yàn)中腸道菌群的檢驗(yàn)和培養(yǎng)方法分別為：雙歧桿菌：BBL培養(yǎng)基37℃48-72小時厭氧培養(yǎng)；乳桿菌：LBs培養(yǎng)基37℃48小時培養(yǎng)；腸桿菌：EMB培養(yǎng)基37℃24 小時培養(yǎng)；腸球菌：疊氮鈉-結(jié)晶紫-七葉苷瓊脂37℃48小時培養(yǎng)。腸道菌群檢測的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理：將人體試食實(shí)驗(yàn)結(jié)果30天的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)，并用ststa軟件進(jìn)行統(tǒng)計和處理，結(jié)果見表6：表6不同樣品對人體腸道菌群調(diào)節(jié)的檢測結(jié)果對照組E(空白)試食前后比較，試食者的各指標(biāo)菌差異不顯著(P>0.05)。A1、A2、B、C、D與空白對照組E組比較，各組人群試食前的各指標(biāo)菌差異都不顯著(P>0.05)。A1組試食者服用水蘇糖后，雙歧桿菌數(shù)量明顯增加，差異有顯著性(P<0.05)；A2組試食者服用水蘇糖后，試食者腸道內(nèi)的四種指標(biāo)菌的數(shù)量發(fā)生了變化，雙歧桿菌數(shù)量明顯增加，差異有極顯著性(P<0.01)，乳桿菌數(shù)量明顯增加，差異有顯著性(P<0.05)；B、C、D組試食者服用樣品后，雙歧桿菌和乳桿菌數(shù)量有增加，但差異不顯著。對A1和A2組試食后的各項指標(biāo)菌進(jìn)行了組間對比分析，發(fā)現(xiàn)雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量隨著添加量的增加有增大趨勢，但其差異并無統(tǒng)計學(xué)意(P>0.05)。各試食組組內(nèi)及組間腸道內(nèi)的腸桿菌、腸球菌數(shù)量差異均無顯著性(P>0.05)。通過以上實(shí)驗(yàn)可得出以下結(jié)論：每日服用本發(fā)明的奶粉早晚各30克，服用3周后，腸道內(nèi)雙歧桿菌、乳桿菌顯著增加；每日服用添加其他益生元的奶粉，腸道內(nèi)雙歧桿菌、乳桿菌增加不顯著；所有試食者服用添加上述低聚糖奶粉樣品3周內(nèi)對身體健康無不良影響。當(dāng)前第1頁1 2 3