一種大豆dna的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種大豆DNA的提取方法。一種大豆DNA的提取方法，主要步驟包括：首先將大豆粉碎成粉末狀，與CTAB裂解緩沖液充分混合裂解，然后加入酚：氯仿：異戊醇抽提蛋白，離心后上清液加入氯仿：異戊醇進行抽提，離心后上清液加入等體積的異丙醇進行沉淀30min，離心棄上清，保留沉淀，再用無水乙醇溶液洗滌沉淀，離心后的沉淀干燥后用TE溶解，加入RNAse酶37℃孵育30min，所得溶液即為大豆DNA溶液，-20℃貯存?zhèn)溆?。本發(fā)明的大豆DNA的提取方法的有益效果是：可以從大豆干種子中提取到高質(zhì)量的適宜于PCR檢測的基因組DNA，操作簡單、耗時短、利于快速檢測。
【專利說明】一種大豆DNA的提取方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種大豆DNA的提取方法。

【背景技術(shù)】
[0002]大豆是我國乃至全世界重要的經(jīng)濟與糧食作物，是食用油和植物蛋白最豐富、最廉價的來源。為了提高大豆的產(chǎn)量，滿足人們對大豆的需求量，科研人員采用基因工程與分子輔助育種方法，培育了一些高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)和抗逆以及適合農(nóng)場機械化種植的轉(zhuǎn)基因大豆品種。2010年國際農(nóng)業(yè)生物技術(shù)應(yīng)用服務(wù)組織(ISAAA)的數(shù)據(jù)顯示:2010年轉(zhuǎn)基因大豆仍然是最主要的轉(zhuǎn)基因作物，種植面積約7330萬公頃，占全球轉(zhuǎn)基因作物種植面積的50%左右。中國從上世紀(jì)末開始進口耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆，各種與轉(zhuǎn)基因大豆相關(guān)的產(chǎn)品越來越多地進入市場。為保障廣大消費者的知情權(quán)和選擇權(quán)，滿足國際貿(mào)易的需要，建立準(zhǔn)確、快速、高效的轉(zhuǎn)基因成分檢測技術(shù)至關(guān)重要。核酸檢測技術(shù)，尤其是常規(guī)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)和實時熒光PCR法，核酸檢測的關(guān)鍵因素是提取到高質(zhì)量的DNA。在做PCR試驗時，首先面臨的一個問題即是模板DNA的提取。對于大豆來說，一般實驗室都是利用幼苗葉片為材料，經(jīng)液氮研磨提取DNA。此過程必須要經(jīng)過浸種催芽、幼苗培養(yǎng)、液氮研磨等過程，一般要用兩周左右的時間才能進行DNA的提取并進一步開展實驗。常規(guī)提取方法耗費時間長，步驟繁瑣，并且提取的DNA純度不高，質(zhì)量差等。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是建立簡單、高效、穩(wěn)定的一種提取大豆DNA的方法。
[0004]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種大豆DNA的提取方法，包括以下步驟:(I)首先將大豆粉碎成粉末狀，分別稱取0.1g制備好的樣品，加入到兩支2ml離心管中；(2)加入2%CTAB裂解緩沖液，震蕩混勻，65°C孵育30min。(3)加入酚:氯仿:異戊醇，震蕩均勻，12000r/min離心20min。(4)吸取上清液,放入1.5ml離心管中，加入氯仿:異戊醇，震蕩均勻，12000r/min離心15min。(5)吸取上清液，放入另一 1.5ml離心管中，力口入等體積的異丙醇，沉淀30min, 12000r/min離心lOmin。(6)棄去上清,加入無水乙醇溶液洗漆，12000r/min,離心lmin。(7)棄去上清,沉淀室溫干燥,加入50ul TE溶液溶解沉淀。
(8)加入5ulRNAse酶溶液，37°C孵育30min，-20°C貯存?zhèn)溆谩?br> [0005]步驟(I)中所述的樣品為大豆干種子經(jīng)粉碎后，直徑小于0.1mm的顆粒。
[0006]步驟(2)中2%CTAB 裂解緩沖液的配方為:CTAB 4g,50mmoITris-HCL ΡΗ8.0、0.7molNaCl、1mmolEDTA PH8.0、20mmol 2-巰基乙醇。
[0007]本發(fā)明的大豆DNA的提取方法的有益效果是:可以從大豆干種子中提取到高質(zhì)量的適宜于PCR檢測的基因組DNA，操作簡單、耗時短、利于快速檢測。用本發(fā)明的方法得到的DNA 濃度為 118.15ngM, OD260/ OD280 的值為 1.85。

【具體實施方式】
[0008]本發(fā)明的一種提取大豆干種子DNA方法，包括以下步驟:
(O首先將大豆粉碎成粉末狀，達(dá)到直徑小于0.1mm的顆粒；分別稱取0.1g制備好的樣品，加入到兩支2ml尚心管中；
(2)加入600ul2%CTAB裂解緩沖液，震蕩混勻，65°C孵育30min ；2%CTAB裂解緩沖液:CTAB 4g、50mmolTris-HCL PH8.0,0.7moINaCIUOmmolEDTA PH8.0、20mmol 2-巰基乙醇；
(3)加入500ul酹:氯仿:異戍醇，震蕩均勻，12000r/min離心20min,酹、氯仿、異戍醇的體積比為25:24:1 ；
(4)吸取上清液，放入1.5ml離心管中，加入250ul氯仿:異戊醇，震蕩均勻，12000r/min離心15min ;氯仿、異戍醇的體積比為24:1 ;
(5)吸取上清液，放入另一1.5ml離心管中，加入等體積的異丙醇，沉淀30min，12000r/min 離心 1min ；
(6)棄去上清,加入無水乙醇溶液洗漆，12000r/min,離心Imin；
(7)棄去上清，干燥，加入50ulTE溶液溶解沉淀；
(8)加入5ulRNAse酶溶液，37°C孵育30min;-20°C貯存?zhèn)溆谩?br> 【權(quán)利要求】
1.一種大豆0嫩的提取方法，包括以下步驟:(1)首先將大豆粉碎成粉末狀，分別稱取0.18制備好的樣品，加入到兩支21111離心管中；(2)加入2%^1八8裂解緩沖液，震蕩混勻，65。〇孵育 30111111 ； (3)加入酹:氯仿:異戍醇，震蕩均勻，120001-/111111離心20111111； (4)吸取上清液，放入1.51111離心管中，加入氯仿:異戊醇，震蕩均勻，1200017111111離心15111111 ； (5)吸取上清液，放入另一1.51111離心管中，加入等體積的異丙醇，沉淀30111111，120001-/111111 離心 10111111 ； (6)棄去上清，加入無水乙醇溶液洗漆，120001-/111111,離心1111111； (7)棄去上清，沉淀室溫干燥，加入5011112溶液溶解沉淀； (8)加入51111？嫩86酶溶液，371孵育30111111，-201貯存?zhèn)溆谩?br> 2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大豆0嫩的提取方法，其特征在于:步驟(1)中所述的樣品為大豆干種子經(jīng)粉碎后，直徑小于0.1皿的顆粒。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大豆0嫩的提取方法，其特征在于:步驟(2)中2%^1仙裂解緩沖液的配方為刃了仙 4^,501111110111-18-1101 ^118.0,0.711101^01,101111110121)1^ ？肋』、20臟012-巰基乙醇。
【文檔編號】C12N15/10GK104450677SQ201410609628
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月4日
【發(fā)明者】劉曼, 逄淑梅, 牟特 申請人:青島康大分析檢測有限公司