一種延長(zhǎng)水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種延長(zhǎng)水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法，屬于生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】。將香櫞果粉碎勻漿后加入甲醇提取，減壓濃縮后與海藻酸鈉溶液混合，然后與氯化鈣溶液作用成膜于水產(chǎn)品體表，用于水產(chǎn)品的保鮮儲(chǔ)藏。本發(fā)明采用天然香櫞提取物，并結(jié)合高分子成膜技術(shù)用于水產(chǎn)品的保鮮，以對(duì)蝦為例，在6天保藏期內(nèi)，與空白處理、殼聚糖對(duì)照處理的對(duì)蝦相比，菌落總數(shù)分別低1.17、0.31個(gè)數(shù)量級(jí)，失水率僅為空白對(duì)照的82%，而與殼聚糖處理的沒(méi)有顯著差異，對(duì)蝦色澤、滋氣味等感官特性的保持也明顯優(yōu)于空白處理和殼聚糖對(duì)照，該發(fā)明大大延長(zhǎng)了鮮活對(duì)蝦的保藏時(shí)間，有著廣闊的市場(chǎng)前景。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種延長(zhǎng)水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法 一、

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明為一種延長(zhǎng)水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法，將天然植物來(lái)源的提取物結(jié)合 成膜技術(shù)應(yīng)用于水產(chǎn)品的保鮮，屬于生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】。 二、

【背景技術(shù)】
[0002] 香櫞（學(xué)名：Citrus medica L.)又名枸櫞，為蕓香科柑橘屬植物，其藥用始載 于《本草拾遺》，稱(chēng)其性味辛、微苦、酸、溫，歸肝、脾、肺經(jīng)，是理氣、舒郁、消痰、利膈的一味中 藥。《本經(jīng)》謂其"安五臟諸不足，益氣補(bǔ)中，止痛解毒，除眾病，和百藥"。而后不少古籍中 也都記載香櫞具有疏肝解郁、理氣寬中、化痰止咳的功效，主治胸脅脹痛、脘腹脹痛、噯氣吞 酸、嘔惡食少、痰濕咳嗽。
[0003] 目前香櫞作為食品、保健品的應(yīng)用還不多。有關(guān)香櫞的相關(guān)研究比較少，僅見(jiàn)一些 關(guān)于香椽揮發(fā)油研究的實(shí)驗(yàn)文章，李雪梅等通過(guò)GC-MS技術(shù)從新鮮香櫞葉精油中鑒定出30 種化學(xué)成分，其中主要成分有檸檬烯、橙花醛、香葉醛、香茅醛等。在工業(yè)生產(chǎn)上，因其果皮 所含揮發(fā)油成分較多，開(kāi)發(fā)作為一種天然香精及熬制香櫞油，質(zhì)量上乘，香氣具佳可替代進(jìn) 口同類(lèi)產(chǎn)品，廣泛應(yīng)用于食品及化妝品行業(yè)。另外現(xiàn)代藥理研究證明，香櫞所含的橙皮苷有 維生素 P樣作用，可降低毛細(xì)血管的通透性、防止微細(xì)血管出血；能拮抗組胺、溶血磷脂酰 膽堿引起的血管通透性增加；能增強(qiáng)纖維蛋白溶解，抗血栓形成；有利膽作用。
[0004] 我國(guó)是水產(chǎn)品的生產(chǎn)與消費(fèi)大國(guó)，水產(chǎn)品味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，是動(dòng)物蛋白質(zhì)的重 要來(lái)源。隨著人們生活水平的提高，對(duì)水產(chǎn)品品質(zhì)和新鮮度的要求也越來(lái)越高，水產(chǎn)品保鮮 工作正受到前所未有的重視。但水產(chǎn)品組織柔嫩，結(jié)締組織少，蛋白質(zhì)、不飽和脂肪酸及水 分含量較高，體內(nèi)組織酶活性強(qiáng)，很容易變質(zhì)、腐敗，失去食用價(jià)值，而且水產(chǎn)品的收獲期相 對(duì)集中，我國(guó)的冷藏保鮮體系還很不完善，嚴(yán)重影響水產(chǎn)品的市場(chǎng)流通和銷(xiāo)售，成為限制水 產(chǎn)行業(yè)發(fā)展的桎梏。
[0005] 目前，應(yīng)用于水產(chǎn)品保鮮的技術(shù)主要有低溫保鮮、化學(xué)保鮮、氣調(diào)保鮮和輻照保鮮 等。傳統(tǒng)的化學(xué)保鮮、輻照保鮮存在一定的安全隱患，低溫保鮮存在一定的局限性，如增加 成本，特別是冷凍儲(chǔ)藏后嚴(yán)重影響產(chǎn)品食用口感等。因此加強(qiáng)水產(chǎn)品保鮮工作勢(shì)在必行，特 別是應(yīng)用天然防腐保鮮劑和新型處理技術(shù)綜合利用，發(fā)揮綜合優(yōu)勢(shì)和協(xié)同效應(yīng)。
[0006] 香櫞果很耐儲(chǔ)存，不用任何保鮮劑能保持?jǐn)?shù)月以上而不變色味，因此推測(cè)香櫞果 中含有具有良好抑菌作用的組分，其提取物可以作為天然保鮮劑用于食品的保鮮。本發(fā)明 采用溶劑提取香櫞果浸膏，并結(jié)合多糖成膜法，用于水產(chǎn)品的保鮮，獲得了一種能顯著延長(zhǎng) 新鮮水產(chǎn)品保質(zhì)期和感官性能的方法。 三、


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明的目的是提供一種延長(zhǎng)水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法，實(shí)現(xiàn)水 產(chǎn)品保質(zhì)期延長(zhǎng)一倍以上。
[0008] 技術(shù)方案本發(fā)明提供一種延長(zhǎng)水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法，包括：
[0009] (1)香櫞提取物的制備：香櫞果洗凈，切塊，用組織勻漿機(jī)打漿；香櫞果洗凈，切 塊，用組織勻漿機(jī)打漿；香櫞勻漿中加入甲醇提取，提取液蒸發(fā)甲醇后得到濃縮的香櫞提取 物浸膏；
[0010] (2)成膜試劑的制備：分別稱(chēng)取海藻酸鈉和氯化鈣，以水溶解，配制成溶液，海藻 酸鈉溶液的濃度為〇. 3-0. 6g/L，氯化鈣溶液的濃度為l-3g/L ;
[0011] (3)水產(chǎn)品的保鮮處理：取步驟（1)中獲得的香櫞提取物浸膏，以步驟（2)中的 海藻酸鈉溶液溶解，配制成提取物稀釋液，提取物稀釋液中海藻酸鈉溶液溶解的終濃度為 0. 2-0. 6mg/ml ;水產(chǎn)品洗凈，浙干，于上述香櫞提取物稀釋液中浸漬l-5min后取出，再放入 步驟（2)中的氯化鈣溶液中立即取出，浙干，4°C保藏。
[0012] 所述步驟（1)中香櫞提取物的制備是將香櫞勻漿中加入5倍體積的甲醇，于 120rpm條件下室溫振蕩30min，過(guò)濾上清，再加入甲醇重復(fù)提取2次，合并3次甲醇提取液， 于40°C下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無(wú)甲醇蒸出，得到濃縮的提取物浸膏。
[0013] 步驟（2)中所用海藻酸鈉溶液的濃度為0. 5g/L，所用氯化鈣溶液的濃度為2g/L。
[0014] 步驟（3)中香櫞提取物浸膏用海藻酸鈉溶液溶解的終濃度為0. 4mg/ml。
[0015] 步驟（3)中水產(chǎn)品在香櫞提取物稀釋液中浸漬的時(shí)間為2min ;水產(chǎn)品放入氯化鈣 溶液中立即取出，時(shí)間不超過(guò)5s。
[0016] 有益效果
[0017] 水產(chǎn)品一般蛋白質(zhì)和游離氨基酸含量豐富，隨著人們生活水平的提高，人們對(duì)健 康和水產(chǎn)食品質(zhì)量越來(lái)越關(guān)注。水產(chǎn)品捕撈后如不采取適當(dāng)?shù)姆栏ｕr處理極易腐敗變 質(zhì)，嚴(yán)重影響水產(chǎn)品的市場(chǎng)流通和銷(xiāo)售。目前，應(yīng)用于水產(chǎn)品保鮮的技術(shù)主要有低溫保鮮、 化學(xué)保鮮、氣調(diào)保鮮和輻照保鮮等。傳統(tǒng)的化學(xué)保鮮、輻照保鮮存在一定的安全隱患，低溫 保鮮存在一定的局限性，如增加成本，特別是冷凍儲(chǔ)藏后嚴(yán)重影響產(chǎn)品食用口感等。
[0018] 1、香櫞果很耐儲(chǔ)存，不用任何保鮮劑能保持?jǐn)?shù)月以上而不變色味，本發(fā)明經(jīng)研究， 香櫞果中含有具有良好抑菌作用的組分，其提取物可以作為天然保鮮劑用于食品的保鮮。
[0019] 2、本發(fā)明采用溶劑提取香櫞果浸膏，并結(jié)合多糖成膜法，用于水產(chǎn)品的保鮮，獲得 了一種能顯著延長(zhǎng)新鮮水產(chǎn)品保質(zhì)期和感官性能的方法。
[0020] 3、本發(fā)明采用天然的香櫞提取物，體外抑菌實(shí)驗(yàn)證明能抑制多種特征性的水產(chǎn)品 腐敗菌，如銅綠假單胞菌、熒光假單胞菌、單核增生李斯特菌、腐敗希瓦菌、變形斑沙雷氏 菌、嗜水氣單胞菌、耶耳辛氏腸炎桿菌等。
[0021] 4、本發(fā)明利用海藻酸鈉多糖凝膠和金屬陽(yáng)離子的成膜特性，將香櫞提取物混于成 膜系統(tǒng)中，緩解水產(chǎn)品保鮮過(guò)程中的變色、失水等問(wèn)題。
[0022] 5、采用的保鮮試劑和成膜試劑均為天然物質(zhì)，無(wú)毒性、無(wú)異味、安全可靠，工藝、操 作簡(jiǎn)單。
[0023] 6、本發(fā)明采用天然的香櫞提取物，可以顯著抑制水產(chǎn)品中的特征性腐敗菌，同時(shí) 利用海藻酸鈉多糖凝膠和金屬陽(yáng)離子的成膜特性，緩解水產(chǎn)品保鮮過(guò)程中的變色、失水等 問(wèn)題，實(shí)現(xiàn)水產(chǎn)品保質(zhì)期延長(zhǎng)一倍以上。 四、【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0024] 圖1新鮮對(duì)蝦
[0025] 圖2無(wú)保鮮處理的對(duì)照組對(duì)蝦存放6天后的狀態(tài)
[0026] 圖3香櫞提取物處理的對(duì)蝦存放6天后的狀態(tài)
[0027] 圖4殼聚糖處理的對(duì)蝦存放6天后的狀態(tài)
[0028] 圖5對(duì)蝦6天儲(chǔ)存過(guò)程中揮發(fā)性鹽基氮含量的變化趨勢(shì) 五、具體實(shí)施例
[0029] 1.香櫞提取物的制備
[0030] 香櫞果5kg洗凈，切塊約3cmX3cm大小，去籽，果肉用組織勻漿機(jī)（西貝樂(lè)電器 有限公司）低速打漿lmin。香櫞勻漿中加入5倍體積的甲醇，于120rpm條件下室溫振蕩 30min，過(guò)濾上清，殘?jiān)性偌尤爰状贾貜?fù)提取2次，合并3次甲醇提取液，于40°C下真空旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無(wú)甲醇蒸出，得到濃縮的提取浸膏約23. 5g，4°C保藏備用；
[0031] 2.海藻酸鈉溶液的配制：稱(chēng)取海藻酸鈉0. 5g，以IOOOml水溶解，配制成終濃度 0· 5g/L的溶液；
[0032] 3.氯化鈣溶液的配制：稱(chēng)取氯化鈣2g，以IOOOml水溶解，配制成終濃度2g/L的溶 液；
[0033] 4.稱(chēng)取適量步驟1中的香櫞浸膏，以0. 5g/L的海藻酸鈉溶液溶解，配制成終濃度 為0. 4mg/ml的提取物稀釋液；
[0034] 5.以市售對(duì)蝦為例進(jìn)行保鮮處理。對(duì)蝦樣品洗凈浙干，于步驟4所述配制的香櫞 提取物稀釋液中浸漬2min，撈出浙干；
[0035] 6.放入氯化鈣溶液中立即取出，時(shí)間不超過(guò)5s，浙干后裝袋，封口（溫州市興業(yè)機(jī) 械設(shè)備有限公司），4°C保藏。
[0036] 7.體外抑菌實(shí)驗(yàn)：
[0037] 米用改良的平板孔講擴(kuò)散法（Gomez S, Cosson C, Deschamps AM. Evidence for a bacteriocin-1 ike substance produced by a new strain of Streptococcus sp., inhibitory to Gram-positive food-borne pathogens.Research in Microbiology, 1997, 148:757-766)研究香櫞提取物對(duì)特征性的水產(chǎn)品腐敗菌的生長(zhǎng)抑制 活性。
[0038] 參考下列文獻(xiàn)依據(jù)選擇抗菌試驗(yàn)腐敗指示菌：曲敏，趙舉風(fēng)，孫懷軍，劉志廣.魚(yú) 類(lèi)特定腐敗菌及其腐敗能力研究概況.寧夏農(nóng)林科技，2013,54(10) :58-59,99;羅慶 華.水產(chǎn)品特定腐敗菌研究進(jìn)展，食品科學(xué)，2010,31 (23) :468-472。該7株菌分別為銅綠假 單胞菌（Pseudomonas aeruginosa CGMCCL 10712,購(gòu)買(mǎi)自中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中 心）、焚光假單胞菌（Pseudomonas fluorescens CGMCCL 6279,購(gòu)買(mǎi)自中國(guó)普通微生物菌種 保藏管理中心）、單核增生李斯特菌（Listeria monocytogenes CMCC (B) 54002,購(gòu)買(mǎi)自廣東 省菌種保藏中心）、腐敗希瓦菌（Shewanella putrefaciens ATCC1109,購(gòu)買(mǎi)自美國(guó)典型培 養(yǎng)物保藏中心）、變形斑沙雷氏菌（Serratia proteamaculans ATCC 35476,購(gòu)買(mǎi)自美國(guó)典 型培養(yǎng)物保藏中心）、嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila CGMCC1. 2017,購(gòu)買(mǎi)自中國(guó)普 通微生物菌種保藏管理中心）、耶耳辛氏腸炎桿菌（Yersinia enterocolitica ATCC27729， 購(gòu)買(mǎi)美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心）。
[0039] 將活化好的7種抗菌試驗(yàn)指示菌種用冷卻到50°C左右的肉湯培養(yǎng)基（牛肉膏3g， 蛋白胨l〇g，氯化鈉5g，瓊脂12g，水1000ml，pH7. O?7· 2)稀釋至106cfu/ml以上，倒平板。 待培養(yǎng)基冷凝后，用直徑為7mm的打孔器于平板上均勻打出三個(gè)孔，吸取10 μ L融化的培養(yǎng) 基封底以防止培養(yǎng)基與平皿底的出現(xiàn)裂隙。分別吸取處理好的香櫞提取物100 μ L注入孔 中，37°C下分別培養(yǎng)24h后觀察抑菌圈，另外，采用氨芐青霉素、慶大霉素、四環(huán)素作為陽(yáng)性 對(duì)照。
[0040] 體外抑菌實(shí)驗(yàn)證明，香櫞提取物能抑制多種特征性的水產(chǎn)品腐敗菌，如銅綠假單 胞菌、熒光假單胞菌、單核增生李斯特菌、腐敗希瓦菌、變形斑沙雷氏菌、嗜水氣單胞菌、耶 耳辛氏腸炎桿菌等，結(jié)果見(jiàn)表1。
[0041] 8.菌落總數(shù)測(cè)定：
[0042] 按照上述具體實(shí)施例步驟1-6進(jìn)行保鮮處理，另外用不做任何處理的對(duì)蝦作為空 白對(duì)照，以及l(fā)〇g/L殼聚糖處理的對(duì)蝦作為陽(yáng)性對(duì)照。
[0043] 參照《GB47892-2010食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定》進(jìn)行 測(cè)定。用香櫞提取物處理的對(duì)蝦樣品，儲(chǔ)存6天后菌落總數(shù)達(dá)到3. 4X IO5CFU/克（折 合成IgCFU為5. 53)，如表2所示，空白處理和10g/L殼聚糖處理的對(duì)蝦菌落總數(shù)分別為 5 X IO6CFU/克（折合成IgCFU為6. 70)、7 X IO5CFU/克（折合成IgCFU為5. 85)，相比之下 用香櫞提取物處理的對(duì)蝦樣品比空白處理和殼聚糖處理的對(duì)蝦中菌落總數(shù)低I. 17、0. 31 個(gè)數(shù)量級(jí)。
[0044] 9.理化指標(biāo)和感官指標(biāo)評(píng)定：
[0045] 按照上述具體實(shí)施例步驟1-6進(jìn)行保鮮處理，另外用不做任何處理的對(duì)蝦作為空 白對(duì)照，以及l(fā)〇g/L殼聚糖處理的對(duì)蝦作為陽(yáng)性對(duì)照。表3為這三種不同處理的對(duì)蝦儲(chǔ)存6 天后失水率的變化，采用本發(fā)明所述香櫞提取物成膜保鮮的對(duì)蝦樣品在6天儲(chǔ)存期后失水 率最低，為18. 24%，而空白對(duì)照組的失水率達(dá)到22. 21%。
[0046] 感官評(píng)定：按照表4感官評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各個(gè)保鮮處理的樣品進(jìn)行感官評(píng)定。表5所 示為三種不同處理后對(duì)蝦的感官性狀評(píng)分結(jié)果，6天儲(chǔ)存期后香櫞提取物成膜保鮮的對(duì)蝦 樣品色澤、滋氣味等感官特性的保持明顯優(yōu)于空白處理和殼聚糖對(duì)照，相關(guān)圖片見(jiàn)圖1? 圖4。
[0047] 揮發(fā)性鹽基氮TVB-N測(cè)定：參照《GB/T5009. 44-2003肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析 方法》進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)圖5。
[0048] 綜上所述，參照國(guó)際食品微生物規(guī)格委員會(huì)對(duì)水產(chǎn)品菌落總數(shù)不超過(guò) 5X IO5CFU/克規(guī)定，以及《GB2733-2005鮮、凍動(dòng)物性水產(chǎn)品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》對(duì)揮發(fā)性鹽基氮/ (mg/100g) < 30的規(guī)定可以看出，未經(jīng)處理的空白對(duì)蝦樣品的菌落總數(shù)在儲(chǔ)存第2后就高 達(dá)1. 08 X IO6CFU/克（見(jiàn)表2)，揮發(fā)性鹽基氮在儲(chǔ)存3天后也高于30mg/100g (見(jiàn)圖5)，而 采用香櫞提取物處理的對(duì)蝦在儲(chǔ)存6天后菌落總數(shù)和揮發(fā)性鹽基氮的數(shù)值都仍在規(guī)定限 量以下（見(jiàn)表2、圖5)?？梢?jiàn)本發(fā)明提供了一種延長(zhǎng)水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法，實(shí)現(xiàn)水 產(chǎn)品保質(zhì)期延長(zhǎng)一倍以上。
[0049] 表1香櫞提取物體外抑菌活性
[0050]

【權(quán)利要求】
1. 一種延長(zhǎng)水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法，包括： (1) 香櫞提取物的制備：香櫞果洗凈，切塊，用組織勻漿機(jī)打漿；香櫞勻漿中加入甲醇 提取，提取液蒸發(fā)甲醇后得到濃縮的香櫞提取物浸膏； (2) 成膜試劑的制備：分別稱(chēng)取海藻酸鈉和氯化鈣，以水溶解，配制成溶液，海藻酸鈉溶 液的濃度為〇. 3-0. 6g/L，氯化鈣溶液的濃度為l-3g/L ; (3) 水產(chǎn)品的保鮮處理：取步驟（1)中獲得的香櫞提取物浸膏，以步驟（2)中的海 藻酸鈉溶液溶解，配制成提取物稀釋液，提取物稀釋液中海藻酸鈉溶液溶解的終濃度為 0. 2-0. 6mg/ml ;水產(chǎn)品洗凈，浙干，于上述香櫞提取物稀釋液中浸漬l-5min后取出，再放入 步驟（2)中的氯化鈣溶液中立即取出，浙干，4°C保藏。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種延長(zhǎng)水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法，其特征在于，步驟 (1)中香櫞提取物的制備是將香櫞勻漿中加入5倍體積的甲醇，于120rpm條件下室溫振蕩 30min，過(guò)濾上清，再加入甲醇重復(fù)提取2次，合并3次甲醇提取液，于40°C下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 至無(wú)甲醇蒸出，得到濃縮的提取物浸膏。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述一種延長(zhǎng)水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法，其特征在于， 步驟（2)中所用海藻酸鈉溶液的濃度為0. 5g/L，所用氯化鈣溶液的濃度為2g/L，步驟 (3)中香櫞提取物浸膏用海藻酸鈉溶液溶解的終濃度為0. 4mg/ml。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述一種延長(zhǎng)水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法，其特征在于，步驟 (3)中水產(chǎn)品在香櫞提取物稀釋液中浸漬的時(shí)間為2min ;水產(chǎn)品放入氯化鈣溶液中立即取 出，時(shí)間不超過(guò)5s。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述一種延長(zhǎng)水產(chǎn)品保質(zhì)期的生物保鮮方法，其特征在于，步驟（3) 中水產(chǎn)品在香櫞提取物稀釋液中浸漬的時(shí)間為2min ;水產(chǎn)品放入氯化鈣溶液中立即取出， 時(shí)間不超過(guò)5s。
【文檔編號(hào)】A23B4/18GK104222255SQ201410462316
【公開(kāi)日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2014年9月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月11日
【發(fā)明者】劉小莉, 周劍忠, 張麗霞, 李瑩, 夏秀東, 王英, 黃自蘇 申請(qǐng)人:江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院