專利名稱：?；蜓虿Ａ崦干a(chǎn)工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥及保健品技術(shù)領(lǐng)域，是利用?；蜓虿G丸作為原料提取純化玻璃酸酶的生產(chǎn)工藝。
背景技術(shù)：
玻璃酸酶又名透明質(zhì)酸酶，是一種能夠降低體內(nèi)透明質(zhì)酸的活性，從而提高組織中液體滲透能力的酶。玻璃酸酶主要存在于哺乳動物睪丸、蛇毒以及其他動物毒液中。玻璃酸酶根據(jù)其種類、分子量大小、最適PH值、降解底物的機理不同被分離。玻璃酸酶用于腫瘤治療可以降低人膀胱癌的復(fù)發(fā)率；用于心肌梗塞治療可使心肌透明質(zhì)酸含量顯著降低，增加血流量；另外用玻璃酸酶的酶液滴注眼前房可以降低白內(nèi)障病人術(shù)后過高的眼內(nèi)壓。玻璃酸酶不但在醫(yī)藥領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，而且在保健品領(lǐng)域也有卓越的貢獻，人為補充玻璃酸酶可消除皺紋或使局部器官增厚增高，使皮膚保持彈性，從而達到整容效果。我國是畜牧生產(chǎn)大國，2010年肉牛實際屠宰量達到285萬頭，屠宰后產(chǎn)生大量的睪丸，將其作為廢棄物處理不僅造成了資源浪費還會污染壞境。因此，大力開發(fā)利用牛、羊睪丸資源將會帶來巨大的經(jīng)濟效益。目前，生產(chǎn)玻璃酸酶普遍采用的提取劑為乙酸或乙酸與鹽酸的混合液，這類提取劑不利于保護酶的活力；采用的精制玻璃酸酶的方法多為硫酸銨與乙醇交替沉淀法，企業(yè)采用這類方法生產(chǎn)的玻璃酸酶以半成品為主，產(chǎn)品純度僅有50%，價格低廉，生產(chǎn)成本高，提取時間長，產(chǎn)品質(zhì)量波動較大。因此，如何提高玻璃酸酶純度,縮短制備時間，降低生產(chǎn)成本成為玻璃酸酶生產(chǎn)過程中的急需解決問題。從哺乳動物睪丸中提取玻璃酸酶的工藝雖然已有少量報道，但是至今尚未檢索到利用超聲波輔助提取一聯(lián)合色譜層析的方法精制?；蜓虿Ａ崦傅墓I(yè)化生產(chǎn)技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種利用?；蜓蛲涝缀蟮母碑a(chǎn)物一睪丸，用生物分離技術(shù)生產(chǎn)玻璃酸酶的工藝，該工藝得到的玻璃酸酶純度較高、性質(zhì)穩(wěn)定、在醫(yī)藥及保健品領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景，可以更好地滿足市場需求。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:
一種?；蜓虿Ａ崦干a(chǎn)工藝，包括A步驟原料預(yù)處理，還包括以下主要步驟:
B、勻漿
經(jīng)步驟A處理的睪丸與0.1~0.5摩爾每升的乙酸-乙酸鈉溶液混合，放入組織搗碎機中，攪拌均勻；
C、超聲波浸提 將步驟B處理得到的勻漿液泵入超聲波提取機中，在15 55千赫茲下超聲波浸提15 30分鐘，浸提后過不低于100目的網(wǎng)篩，得到的沉淀物進行二次提取，浸提步驟為先B后C，合并兩次浸提得到的濾液；
D、攪拌提取將步驟C得到的濾液泵入攪拌缸中，加入0.Γ0.5摩爾每升的氯化鈉，持續(xù)攪拌3飛小時，攪拌結(jié)束后低溫離心，棄去沉淀得到玻璃酸酶粗酶液I ;
E、硫酸銨除雜
F、硫酸銨沉淀
G、透析
本步驟用到的蒸餾水需要提前預(yù)冷，溫度為4°C ；
將步驟F得到的沉淀用蒸餾水溶解后裝入截留分子量為l(Tl4kDa的透析袋，在透析缸中攪拌透析2飛小時，低溫離心后將清液過濾，濾膜的孔徑為0.2^0.45微米，得到玻璃酸酶粗酶液2 ；
H、陽離子交換色譜層析
步驟H和I由聯(lián)合色譜層析系統(tǒng)完成；純化步驟描述如下:
平衡預(yù)裝柱:用純化樣品的平衡液或洗脫液通過平衡柱，當(dāng)電導(dǎo)率檢測線，PH值檢測線，紫外檢測線都保持平直Γ2小時后，平衡預(yù)裝柱完成；
進樣:樣品由進樣泵流入預(yù)裝柱，進樣完成后將預(yù)裝柱封口待用；
洗脫:設(shè)定好色譜層析系統(tǒng)的參數(shù)，洗脫緩沖液進入分離柱開始洗脫樣品，被洗脫的液體由自動收集器收集；
陽離子交換色譜層析純化步驟如下: 平衡陽離子交換預(yù)裝柱，將玻璃酸酶粗酶液2進樣后用5(Γ100毫摩爾每升的乙酸-乙酸鈉溶液洗脫雜質(zhì)，洗脫2(Γ50分鐘，洗脫液更換為5(Γ100毫摩爾每升的乙酸-乙酸鈉溶液，洗脫前在該溶液中加入氯化鈉，使氯化鈉的濃度為0 1摩爾每升，洗脫流速每分鐘5 13毫升，洗脫時間31小時，洗脫后測定每個收集管的酶活力，將有活力的液體全部混合后備用；
1、凝膠過濾色譜層析
平衡凝膠過濾預(yù)裝柱，將步驟H得到的混合液，經(jīng)步驟G透析后為凝膠過濾預(yù)裝柱進樣，用5(Tl00毫摩爾每升的乙酸-乙酸鈉溶液洗脫，洗脫前在該溶液中加入氯化鈉，使氯化鈉的濃度為(Γ0.5摩爾每升，洗脫流速每分鐘Γ2毫升，洗脫時間2 4小時，洗脫后測定每個收集管的酶活力，將有活力的液體全部混合后用于步驟J ;
J、真空冷凍干燥。本發(fā)明提供的?；蜓虿Ａ崦干a(chǎn)工藝，利用牛或羊副產(chǎn)品一睪丸作為原料，在生產(chǎn)過程中首先采用酸性緩沖溶液浸提，保護劑的加入可以有效保護酶的活性，并且采用超聲波處理，提高了提取效率，縮短了提取時間；其次選用了攪拌透析的方法，大大縮短了透析時間，降低了生產(chǎn)成本；最后利用聯(lián)合色譜層析技術(shù)(離子交換色譜聯(lián)合凝膠過濾色譜)，顯著提高了產(chǎn)品純度。本發(fā)明提供的生產(chǎn)工藝所生產(chǎn)的?；蜓虿Ａ崦妇哂刑崛⌒矢?、純度高、性質(zhì)穩(wěn)定、生產(chǎn)時間短、變廢為寶的特點，在醫(yī)藥和保健品領(lǐng)域具有良好的應(yīng)用前景。中國藥典2010版規(guī)定玻璃酸酶質(zhì)量指標(biāo)為:白色至微黃色粉末，無臭，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮；酸度在4.5^7.5;干燥失重< 5.0% ;酪氨酸含量< 0.1微克；玻璃酸酶效價> 300單位。而本發(fā)明的產(chǎn)品依據(jù)中國藥典2010版測定其質(zhì)量指標(biāo)為:外觀為微黃色粉末，無臭，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮；玻璃酸酶效價> 1500單位，酪氨酸含量< 0.1微克，干燥失重<5.0%，酸度為6.5。顯然，本發(fā)明的產(chǎn)品質(zhì)量指標(biāo)遠遠高于國家標(biāo)準(zhǔn)。
具體實施例方式下述實施例中輔 料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為:乙酸鈉，白色粉狀固體，乙酸鈉> 95.0%，分析純；氯化鈉，白色顆粒狀固體，氯化鈉> 95.0%，分析純；硫酸銨，白色顆粒狀固體，硫酸銨彡95.0% ;分析純；
聯(lián)合色譜層析系統(tǒng)(PPS-2蛋白純化系統(tǒng)):純化儀控制中心；中低壓恒流泵；紫外檢測器；電導(dǎo)率檢測器；梯度混合器；自動收集器；進樣泵；陽離子交換色譜層析預(yù)裝柱；凝膠過濾色譜層析預(yù)裝柱；
實施例1:以牛睪丸為原料生產(chǎn)牛玻璃酸酶的工藝:
A、原料預(yù)處理
牛屠宰后，立即摘下睪丸，清洗干凈，去除附屬物，剝除外膜，切成塊狀，在4°C冰箱中冷減備用；
B、勻漿
經(jīng)步驟A處理的50千克睪丸與0.1或0.3或0.5摩爾每升的乙酸-乙酸鈉溶液混合，料液比為1:5，攪拌均勻后放入組織搗碎機，持續(xù)攪拌10分鐘，轉(zhuǎn)速為每分鐘2000轉(zhuǎn)；
C、超聲波浸提
將步驟B處理得到的勻漿液泵入超聲波提取機中，在15或30或50千赫茲下超聲波浸提15或20或30分鐘，浸提后過不低于100目的網(wǎng)篩，得到的沉淀物進行二次提取，浸提步驟為先B后C，合并兩次過浸提得到的濾液；
D、攪拌提取
將步驟C得到的濾液泵入攪拌缸中，加入0.1或0.3或0.5摩爾每升的氯化鈉，持續(xù)攪拌3或4或6小時，攪拌結(jié)束后將其轉(zhuǎn)入高速冷凍離心機，在4°C，離心30分鐘，轉(zhuǎn)速為每分鐘4000轉(zhuǎn)，棄去沉淀后得到玻璃酸酶粗酶液I ;
E、硫酸銨除雜
在步驟D得到的粗酶液I中加入固體硫酸銨，添加比例為每升180克，加入時不斷攪拌，使硫酸銨完全溶解后靜置3小時，然后將含有硫酸銨的粗酶液轉(zhuǎn)入高速冷凍離心機，在4°C，離心30分鐘，轉(zhuǎn)速為每分鐘6000轉(zhuǎn)，棄去沉淀后得到清液用于步驟F ；
F、硫酸銨沉淀
在步驟E得到的清液中加入固體硫酸銨，添加比例為每升380克，加入時不斷攪拌，使硫酸銨完全溶解后靜置3小時，然后將其轉(zhuǎn)入高速冷凍離心機，離心條件同步驟E，棄去上清液得到含有玻璃酸酶的沉淀；
G、透析
本步驟用到的蒸餾水需要提前預(yù)冷，溫度為4°C ；
將步驟F得到的沉淀用蒸餾水溶解后裝入截留分子量為10或12或14 kDa的透析袋中，透析袋兩頭用棉線扎緊，然后把透析袋固定在透析缸中間的柱子上，透析缸中灌滿蒸餾水，使透析袋完全浸沒，攪拌2或3或5小時，每隔30分鐘更換一次蒸餾水，透析結(jié)束后，將透析袋內(nèi)的沉淀和蒸餾水轉(zhuǎn)入高速冷凍離心機，離心條件同步驟E，棄去沉淀后，將得到的液體過濾，濾膜的孔徑為0.2或0.3或0.45微米，得到玻璃酸酶粗酶液2 ；
H、陽離子交換色譜層析
步驟H和I中用到的聯(lián)合色譜層析系統(tǒng)主要設(shè)備有:純化儀控制中心、中低壓恒流泵、紫外檢測器、電導(dǎo)率檢測器、梯度混合器、自動收集器、進樣泵、預(yù)裝柱，純化樣品時管路連接順序為:平衡液或洗脫液一梯度混合器一中低壓恒流泵一電導(dǎo)率檢測器一預(yù)裝柱一紫外檢測器一自動收集器；
步驟H和I中關(guān)鍵純化步驟描述如下:
平衡預(yù)裝柱:將預(yù)裝柱固定在鐵架臺上，連接好管路，打開純化儀所有設(shè)備，在控制中心設(shè)定好中低壓恒流泵的流速，用純化樣品的平衡液或洗脫液流過整個管路，當(dāng)純化儀控制中心顯示的電導(dǎo)率檢測線，pH值檢測線，紫外檢測線都保持平直I小時后，平衡預(yù)裝柱完成；
進樣:將進樣泵與預(yù)裝柱連接，打開進樣泵，設(shè)定好進樣泵的流速，該流速與中低壓恒流泵的流速相同，用平衡液或洗脫液流過進樣泵管路，除盡空氣后停止泵，樣品流過進樣泵全部進入預(yù)裝柱后，斷開進樣泵和預(yù)裝柱，將預(yù)裝柱封口待用；
洗脫:將完成進樣的預(yù)裝柱按照管路連接順序接好后設(shè)定中低壓恒流泵的流速、保護壓力，梯度洗脫時間和樣品采集時間，洗脫緩沖液通過梯度混合器、中低壓恒流泵、PH電導(dǎo)檢測器之后，進入分離柱開始洗脫樣品，被洗脫的液體通過紫外檢測器后由自動收集器全部收集；
陽離子交換色譜層析純 化步驟如下:
平衡陽離子交換預(yù)裝柱，將玻璃酸酶粗酶液2進樣后用50或80或100毫摩爾每升的乙酸-乙酸鈉溶液洗脫雜質(zhì)，洗脫20或30或50分鐘，洗脫液更換為50或80或100毫摩爾每升的乙酸-乙酸鈉溶液，洗脫前在該溶液中加入氯化鈉，使氯化鈉的濃度為O或0.5或I摩爾每升，洗脫流速每分鐘5或9或13毫升，洗脫時間3或5或8小時，洗脫后測定每個收集管的酶活力，將有活力的液體全部混合后備用；
1、凝膠過濾色譜層析
平衡凝膠過濾預(yù)裝柱，將步驟H得到的混合液，經(jīng)步驟G透析后為凝膠過濾預(yù)裝柱進樣，用50或70或100毫摩爾每升的乙酸-乙酸鈉溶液洗脫，洗脫前在該溶液中加入氯化鈉，使氯化鈉的濃度為O或0.25或0.5摩爾每升，洗脫流速每分鐘I或2毫升，洗脫時間2或4小時，洗脫后測定每個收集管的酶活力，將有活力的液體全部混合后用于步驟J ；
J、真空冷凍干燥
將步驟I得到的混合液經(jīng)步驟G濃縮后置于真空冷凍干燥箱，使真空泵的壓力達到300帕、溫度在4°C，冷凍干燥10個小時，取出干燥后的玻璃酸酶，將其置于粉碎機中進行粉碎，即得玻璃酸酶；
K、包裝
將玻璃酸酶及時包裝，于陰涼干燥處保存。該實施例生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量指標(biāo)為:外觀為微黃色粉末，無臭，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮；玻璃酸酶效價> 1550單位，酪氨酸含量< 0.1微克，干燥失重< 5.0%，酸度為6.5o
實施例2:以羊睪丸為原料生產(chǎn)羊玻璃酸酶的工藝:
A、原料預(yù)處理
羊屠宰后，立即摘下睪丸，清洗干凈，去除附屬物，剝除外膜，切成塊狀，在4°C冰箱中冷減備用；
輔料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與實施例1相同；
B、勻漿
經(jīng)步驟A處理的50千克睪丸與0.2或0.4或0.5摩爾每升的乙酸-乙酸鈉溶液混合，料液比為1:3，攪拌均勻后放入組織搗碎機，持續(xù)攪拌10分鐘，轉(zhuǎn)速為每分鐘2000轉(zhuǎn)；
C、超聲波浸提
將步驟B處理得到的勻漿液泵入超聲波提取機中，在20或40千赫茲下超聲波浸提10或20分鐘，浸提后過不低于100目的網(wǎng)篩，得到的沉淀物進行二次提取，浸提步驟為先B后C，合并兩次過浸提得到的濾液；
D、攪拌提取
將步驟C得到的濾液泵入攪拌缸中，加入0.2或0.4摩爾每升的氯化鈉，持續(xù)攪拌3或4或6小時，攪拌結(jié)束后將其轉(zhuǎn)入高速冷凍離心機，在4°C，離心30分鐘，轉(zhuǎn)速為每分鐘4000轉(zhuǎn)，棄去沉淀后得到玻璃酸酶粗酶液I ;
E、硫酸銨除雜
在步驟D得到的粗酶液I 中加入固體硫酸銨，添加比例為每升170克，加入時不斷攪拌，使硫酸銨完全溶解后靜置5小時，然后將含有硫酸銨的粗酶液轉(zhuǎn)入高速冷凍離心機，在4°C，離心30分鐘，轉(zhuǎn)速為每分鐘6000轉(zhuǎn)，棄去沉淀后得到清液用于步驟F ;
F、硫酸銨沉淀
在步驟E得到的清液中加入固體硫酸銨，添加比例為每升350克，加入時不斷攪拌，使硫酸銨完全溶解后靜置4小時，然后將其轉(zhuǎn)入高速冷凍離心機，離心條件同步驟E，棄去上清液得到含有玻璃酸酶的沉淀；
G、透析
本步驟用到的蒸餾水需要提前預(yù)冷，溫度為4°C ；
將步驟F得到的沉淀用蒸餾水溶解后裝入截留分子量為10或14 kDa的透析袋中，透析袋兩頭用棉線扎緊，然后把透析袋固定在透析缸中間的柱子上，透析缸中灌滿蒸餾水，使透析袋完全浸沒，攪拌2或4小時，每隔30分鐘更換一次蒸餾水，透析結(jié)束后，將透析袋內(nèi)的沉淀和蒸餾水轉(zhuǎn)入高速冷凍離心機，離心條件同步驟E，棄去沉淀后，將得到的液體過濾，濾膜的孔徑為0.3或0.4微米，得到玻璃酸酶粗酶液2 ；
H、陽離子交換色譜層析
步驟H和I中用到的聯(lián)合色譜層析系統(tǒng)主要設(shè)備有:純化儀控制中心、中低壓恒流泵、紫外檢測器、電導(dǎo)率檢測器、梯度混合器、自動收集器、進樣泵、預(yù)裝柱，純化樣品時管路連接順序為:平衡液或洗脫液一梯度混合器一中低壓恒流泵一電導(dǎo)率檢測器一預(yù)裝柱一紫外檢測器一自動收集器；
步驟H和I中關(guān)鍵純化步驟描述如下:
平衡預(yù)裝柱:將預(yù)裝柱固定在鐵架臺上，連接好管路，打開純化儀所有設(shè)備，在控制中心設(shè)定好中低壓恒流泵的流速，用純化樣品的平衡液或洗脫液流過整個管路，當(dāng)純化儀控制中心顯示的電導(dǎo)率檢測線，pH值檢測線，紫外檢測線都保持平直I小時后，平衡預(yù)裝柱完成；
進樣:將進樣泵與預(yù)裝柱連接，打開進樣泵，設(shè)定好進樣泵的流速，該流速與中低壓恒流泵的流速相同，用平衡液或洗脫液流過進樣泵管路，除盡空氣后停止泵，樣品流過進樣泵全部進入預(yù)裝柱后，斷開進樣泵和預(yù)裝柱，將預(yù)裝柱封口待用；
洗脫:將完成進樣的預(yù)裝柱按照管路連接順序接好后設(shè)定中低壓恒流泵的流速、保護壓力，梯度洗脫時間和樣品采集時間，洗脫緩沖液通過梯度混合器、中低壓恒流泵、PH電導(dǎo)檢測器之后，進入分離柱開始洗脫樣品，被洗脫的液體通過紫外檢測器后由自動收集器全部收集；
陽離子交換色譜層析純化步驟如下:
平衡陽離子交換預(yù)裝柱，將玻璃酸酶粗酶液2進樣后用40或80毫摩爾每升的乙酸-乙酸鈉溶液洗脫雜質(zhì)，洗脫20或40分鐘，洗脫液更換為40或80毫摩爾每升的乙酸-乙酸鈉溶液，洗脫前在該溶液中加入氯化鈉，使氯化鈉的濃度為O或0.5或I摩爾每升，洗脫流速每分鐘6或8或10毫升，洗脫時間5或8小時，洗脫后測定每個收集管的酶活力，將有活力的液體全部混合后備用；
1、凝膠過濾色譜層析
平衡凝膠過濾預(yù)裝柱，將步驟H得到的混合液，經(jīng)步驟G透析后為凝膠過濾預(yù)裝柱進樣，用60或80毫摩爾每升的乙酸-乙酸鈉溶液洗脫，洗脫前在該溶液中加入氯化鈉，使氯化鈉的濃度為0.25或0.5摩爾每升，洗脫流速每分鐘I或2毫升，洗脫時間2或4小時，洗脫后測定每個收集管的酶活力，將有活力的液體全部混合后用于步驟J ;
J、真空冷凍干燥 將步驟I得到的混合液經(jīng)步驟G濃縮后置于真空冷凍干燥箱，使真空泵的壓力達到300帕、溫度在4°C，冷凍干燥12個小時，取出干燥后的玻璃酸酶，將其置于粉碎機中進行粉碎，即得玻璃酸酶；
K、包裝
將玻璃酸酶及時包裝，于陰涼干燥處保存。本發(fā)明生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量指標(biāo)為:外觀為微黃色粉末，無臭，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮；玻璃酸酶效價> 1490單位，酪氨酸含量< 0.1微克，干燥失重< 5.0%，酸度為6.5。以上所述的僅是本發(fā)明具體實施例，并不是對本發(fā)明的限定。應(yīng)當(dāng)指出:對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，在本發(fā)明所提供的技術(shù)啟示下，做出的其它等同變型和改進都應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。
權(quán)利要求
1.一種牛或羊玻璃酸酶生產(chǎn)工藝，包括A步驟原料預(yù)處理，其特征是還包括以下主要步驟: B、勻漿 經(jīng)所述A步驟處理的睪丸與0.Γ0.5摩爾每升的乙酸-乙酸鈉溶液混合，放入組織搗碎機中，攪拌均勻； C、超聲波浸提 將步驟B處理得到的勻漿液泵入超聲波提取機中，在15 55千赫茲下超聲波浸提15 30分鐘，浸提后過不低于100目的網(wǎng)篩，得到的沉淀物進行二次提取，浸提步驟為先B后C，合并兩次浸提得到的濾液； D、攪拌提取 將步驟C得到的濾液泵入攪拌缸中，加入0.Γ0.5摩爾每升的氯化鈉，持續(xù)攪拌3飛小時，攪拌結(jié)束后低溫離心，棄去沉淀得到玻璃酸酶粗酶液I ; E、硫酸銨除雜 F、硫酸銨沉淀 G、透析 本步驟用到的蒸餾水需要提前預(yù)冷，溫度為4°C ； 將步驟F得到的沉淀用所述蒸餾水溶解后裝入截留分子量為l(Tl4kDa的透析袋，在透析缸中攪拌透析2飛小時，低溫離心后將清液過濾，濾膜的孔徑為0.2^0.45微米，得到玻璃酸酶粗酶液2 ； H、陽離子交換色譜層析 步驟H和I由聯(lián)合色譜層析系統(tǒng)完成；純化步驟描述如下: 平衡預(yù)裝柱:用純化樣品的平衡液或洗脫液通過平衡柱，當(dāng)電導(dǎo)率檢測線，PH值檢測線，紫外檢測線都保持平直Γ2小時后，平衡預(yù)裝柱完成； 進樣:樣品由進樣泵流入預(yù)裝柱，進樣完成后將預(yù)裝柱封口待用； 洗脫:設(shè)定好色譜層析系統(tǒng)的參數(shù)，洗脫緩沖液進入分離柱開始洗脫樣品，被洗脫的液體由自動收集器收集； 陽離子交換色譜層析純化步驟如下: 平衡陽離子交換預(yù)裝柱，將玻璃酸酶粗酶液2進樣后用5(Γ100毫摩爾每升的乙酸-乙酸鈉溶液洗脫雜質(zhì)，洗脫2(Γ50分鐘，洗脫液更換為5(Γ100毫摩爾每升的乙酸-乙酸鈉溶液，洗脫前在該溶液中加入氯化鈉，使氯化鈉的濃度為0 1摩爾每升，洗脫流速每分鐘5 13毫升，洗脫時間31小時，洗脫后測定每個收集管的酶活力，將有活力的液體全部混合后備用； 1、凝膠過濾色譜層析 平衡凝膠過濾預(yù)裝柱，將步驟H得到的混合液，經(jīng)步驟G透析后為凝膠過濾預(yù)裝柱進樣，用5(Tl00毫摩爾每升的乙酸-乙酸鈉溶液洗脫，洗脫前在該溶液中加入氯化鈉，使氯化鈉的濃度為(Γ0.5摩爾每升，洗脫流速每分鐘Γ2毫升，洗脫時間2 4小時，洗脫后測定每個收集管的酶活力，將有活力的液體全部混合后用于步驟J ; J、真空冷凍干燥。
全文摘要
一種?；蜓虿Ａ崦干a(chǎn)工藝，包括原料預(yù)處理，勻漿，超聲波浸提，攪拌提取，硫酸銨除雜，硫酸銨沉淀，透析，陽離子交換色譜層析，凝膠過濾色譜層析，真空冷凍干燥等工藝步驟。本發(fā)明提供的生產(chǎn)工藝所生產(chǎn)的牛或羊玻璃酸酶的質(zhì)量指標(biāo)為外觀為微黃色粉末，無臭，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮；玻璃酸酶效價≥1500單位，酪氨酸含量＜0.1微克，干燥失重＜5.0%，酸度為6.5。具有提取效率高、純度高、性質(zhì)穩(wěn)定、生產(chǎn)時間短、變廢為寶的特點，在醫(yī)藥和保健品領(lǐng)域具有良好的應(yīng)用前景。
文檔編號C12N9/26GK103103170SQ20131004726
公開日2013年5月15日 申請日期2013年2月6日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月6日
發(fā)明者余群力, 杜宇廷, 韓玲, 李儒仁, 張麗, 楊萌萌 申請人:甘肅天森藥業(yè)有限公司, 余群力