專利名稱：一種胎牛血清生產(chǎn)工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種胎牛血清，更具體地說(shuō)涉及一種胎牛血清的生產(chǎn)工藝。
技術(shù)背景胎牛血清系健康懷孕母牛八月齡左右胎牛的血液為原料，經(jīng)無(wú)菌采集、低 溫分離，微孔過(guò)濾分裝而成。具有極佳的促細(xì)胞生長(zhǎng)作用，適用于原代和傳代 細(xì)胞株的保藏及嬌貴細(xì)胞的培養(yǎng)，主要用于高、精、尖的生物和醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)當(dāng)中。 目前，由于國(guó)內(nèi)技術(shù)上的原因，暫時(shí)還沒(méi)有真正意義上的胎牛血清，幾乎全部依賴進(jìn)口，進(jìn)口胎牛血清價(jià)格偏高，每升達(dá)到6000元左右。從美國(guó)、歐洲進(jìn)口 胎牛血清不僅成本高，而且有瘋牛病的隱患。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種胎牛血清生產(chǎn)工藝，通過(guò)對(duì)胎牛血清生產(chǎn)的關(guān)鍵 過(guò)程，原血清的采集和生產(chǎn)過(guò)程的控制，開(kāi)發(fā)并規(guī)?；a(chǎn)高端優(yōu)化的胎牛血 清產(chǎn)品，徹底改變我國(guó)胎牛血清完全依賴國(guó)外進(jìn)口的狀況，大幅度提升中國(guó)牛 血清產(chǎn)業(yè)的技術(shù)層次和產(chǎn)品級(jí)別。本發(fā)明包括全封閉無(wú)菌采集、低溫分離、微孔膜過(guò)濾，其特點(diǎn)是將懷孕8個(gè)月左右的母牛進(jìn)行剖腹產(chǎn)，產(chǎn)前采用側(cè)臥保定方法，麻醉采用全身麻醉和術(shù) 部局部麻醉相結(jié)合的方法。手術(shù)切口位置選擇在左肷窩腹壁的三分之一處，髂
結(jié)節(jié)下角IO公分的下方為起始位置，作反斜杠"/"標(biāo)記，切口長(zhǎng)為30公分， 到左乳房靜脈前8公分處。切至腹膜時(shí)，用止血鉗提出腹膜作一切U，再用手 術(shù)剪剪開(kāi)腹膜，找準(zhǔn)于宮，前推瘤胃，雙手抱出子宮，隔著子宮壁握住胎牛的 腳或頭，將子宮大彎拉出腹壁切口處，在子宮與腹壁切口之間塞上大塊滅菌紗 布后，沿子宮角大彎，避開(kāi)子宮阜，作一與腹壁切口等長(zhǎng)的切口。然后抓住胎 牛前兩肢，抬出胎牛帶進(jìn)潔凈室層流罩下的采血架上，將其背高頭低，頭部朝 右懸掛保定。胎牛拉出后縫合母牛子宮，在此同時(shí)對(duì)胎牛也進(jìn)行心臟穿刺采血。 縫合子宮采用3#羊腸線，然后用0.9%生理鹽水沖洗腹腔，清理千凈后，在子 宮切口處涂上大油劑，將子宮納入腹腔，對(duì)整個(gè)腹腔作無(wú)菌處理，最后依次作 腹腔縫合。心臟穿刺采血前做好采血器械的準(zhǔn)備和消毒工作，取一 30cm長(zhǎng)的 20mm穿刺采血管，穿刺采血管通過(guò)離心瓶瓶蓋，并固定在離心瓶瓶蓋上，用牛 皮紙包裹嚴(yán)密，再用高壓蒸汽滅菌器高壓1個(gè)小時(shí)。在第三肋間胸骨左緣的lH 中，用聽(tīng)診器來(lái)確定心跳最顯的部位，用75%的酒精檫試消毒，最后將穿刺采血 管針頭垂直刺入心臟，血液隨即通過(guò)采血管進(jìn)入離心瓶?jī)?nèi)。 一頭胎牛一個(gè)瓶， 采血完畢，立即換上無(wú)孔瓶蓋。將離心瓶放入大容量冷凍離心機(jī)以3400轉(zhuǎn)/分 的轉(zhuǎn)速離心30分鐘，析出血清在潔凈室的超凈臺(tái)上收集到己滅菌的容器內(nèi)冷凍 保存。胎牛血清成品的生產(chǎn)在凈化車間內(nèi)進(jìn)行，首先做好原血清的解凍工作， 將原血清整齊地?cái)[放在融凍間的鐵架上，核對(duì)容器編號(hào)，做好記錄，用26° C 熱風(fēng)均勻地循環(huán)整個(gè)房間，使原血清化開(kāi)。過(guò)濾和分裝在局部百級(jí)下進(jìn)行，采 用進(jìn)口的微孔過(guò)濾膜，過(guò)濾孔徑為0.1um，經(jīng)過(guò)3次過(guò)濾；成品分裝貼完瓶簽 后，放入-2(TC以下速凍庫(kù)內(nèi)快速冷凍24小時(shí)。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是目前，胎牛血清幾乎全部依賴進(jìn)口，進(jìn)口胎牛血清價(jià)格 偏高，達(dá)到每升6000元左右。從美國(guó)、歐洲進(jìn)口胎牛血清不僅成本高，而且有
瘋牛病的隱患。而我們采用本工藝生產(chǎn)的胎牛血清價(jià)格每升只有4000—5000元 左右，徹底改變了我國(guó)胎牛血清完全依賴國(guó)外進(jìn)口的狀況，這樣可以大幅度提 升中國(guó)血清產(chǎn)業(yè)的技術(shù)層次和產(chǎn)品級(jí)別。
具體實(shí)施方式
胎牛原血清采集的關(guān)鍵技術(shù)主要是懷孕母牛的剖腹產(chǎn)和胎牛的全封閉無(wú)菌 心臟穿刺采血。對(duì)懷孕8個(gè)月左右的母牛進(jìn)行剖腹產(chǎn)，產(chǎn)前采用側(cè)臥保定方法， 保定時(shí)兩前腿綁好向前拉，兩后腿綁好向后拉，頭部用繩固定。麻醉時(shí)采取全 身麻醉和術(shù)部局部麻醉相結(jié)合的方法，即全身麻醉采用2%普魯卡因腰旁神經(jīng)干 傳導(dǎo)麻醉，局部麻醉分別麻醉第18肋間神經(jīng)、髂腹下神經(jīng)和髂腹股溝神經(jīng)。確 實(shí)有效的麻醉是順利進(jìn)行剖腹產(chǎn)的重要保證。因此，找準(zhǔn)注射位置，垂直進(jìn)針 達(dá)腰椎橫突游離端前角或后角，并將針前移至橫突前緣或后緣下刺1公分左右， 注射藥液10ml，然后提至皮下注射10ml，分別各點(diǎn)注射。術(shù)部表面用0.5%鹽 酸普魯卡因麻醉。用囊腫穿刺針，外套16號(hào)針頭作護(hù)套保護(hù)進(jìn)針，邊推液邊后 退，效果較好。手術(shù)切口位置選擇在左肷窩腹壁的上三分之一處，髂結(jié)節(jié)下角 10公分的下方為起始部位，作反斜杠"/ "標(biāo)記，切口長(zhǎng)約30公分，到左乳房 靜脈前8公分左右處。該切口的優(yōu)點(diǎn)是靠近子宮角，便于術(shù)中縫合快速收縮的 子宮，其次是內(nèi)容物不易流入腹腔，減少腹腔被污染而帶來(lái)腹、盆兩腔感染而 引發(fā)的生殖系統(tǒng)器質(zhì)性病變的風(fēng)險(xiǎn)。手術(shù)切口處一定要剃毛，并作嚴(yán)格消毒， 防止切口處的毛物污染術(shù)者的手及器械而引發(fā)術(shù)后感染傷口及兩腔。確保無(wú)菌 操作，防止污染腹腔，正確科學(xué)選定手術(shù)部位是成功手術(shù)的前提，也利于后續(xù) 操作的順利進(jìn)行。手術(shù)時(shí)，術(shù)者手、器械要嚴(yán)格消毒。切開(kāi)皮膚，肌層要果斷， 避免復(fù)刀。為避免手術(shù)刀傷及子宮或瘤胃，當(dāng)切開(kāi)腹腔切至腹膜時(shí)，用止血鉗 提出腹膜作一切口，再用手術(shù)剪剪開(kāi)腹膜，找準(zhǔn)子宮切口，前推瘤胃，雙手抱 出子宮，隔著子宮壁握住胎牛的腳或頭，小心地將子宮大彎拉出腹壁切l(wèi)」處， 在子宮與腹壁切口之間塞上大塊滅菌紗布后，沿著子宮角大彎，避開(kāi)子宮阜， 作一與腹壁切口等長(zhǎng)的切口。先剝離一部分子宮切口附近胎膜，然后抓住胎牛 兩前肢，由助手抬出胎牛后迅速帶進(jìn)潔凈室，空氣潔凈度達(dá)到百級(jí)的層流罩卩 的采血架上，將其背高頭低、頭部朝右懸掛保定?？焖?、有效的子宮縫合是手 術(shù)成敗的關(guān)鍵，由于產(chǎn)出胎牛后的子宮收縮極快，因此，在胎牛拉出后一定要快速縫合子宮，在此同時(shí)對(duì)胎牛也進(jìn)行心臟穿剌采血?？p合子宮使用3#羊腸線， 第一層對(duì)子宮切口全層連續(xù)縫合，第二層進(jìn)行漿膜肌層連續(xù)內(nèi)翻縫合術(shù)口，然 后用0.9%生理鹽水對(duì)腹腔沖洗、清理干凈，在腹壁切口處涂上大油劑，把子宮 納入腹腔。對(duì)整個(gè)腹腔作無(wú)菌化處理，最后依次作腹腔縫合，并對(duì)各層作無(wú)菌 化處理。在整個(gè)腹腔內(nèi)操作過(guò)程中，嚴(yán)格做到無(wú)菌操作，杜絕術(shù)者手、針、刀、 剪等器械碰及卵巢、輸卵管等生殖附件。嚴(yán)格控制羊水、胎盤(pán)等碎片流入腹腔， 以免引起腹腔內(nèi)感染。子宮要縫合確實(shí)，以防止子宮內(nèi)容物流入腹腔引發(fā)的術(shù) 后感染。該階段操作中，關(guān)鍵是控制腹腔、盆腔污染，避免兩腔感染而引發(fā)生 殖道附件器質(zhì)性病變而致不育。胎牛心臟穿刺采血前應(yīng)做好采血器械的準(zhǔn)備和消毒工作。取一 30cm長(zhǎng)的 20mm穿刺采血管，然后將離心瓶瓶蓋打孔，其孔徑與穿刺采血管直徑相同，使 穿刺采血管通過(guò)1000ml離心瓶瓶蓋，并固定在離心瓶瓶蓋上，用牛皮紙包裹嚴(yán) 密，再用高壓蒸汽滅菌器12rC高壓'l個(gè)小時(shí)左右。這樣穿刺采血管和離心瓶連 成一體，可以減少胎牛血接觸空氣污染機(jī)會(huì)，同時(shí)避免了由于紅細(xì)胞破裂，血 清溶血。采血前要探明心臟搏動(dòng)最強(qiáng)部位，通常在第三肋間胸骨左緣的正中， 用聽(tīng)診器來(lái)確定心跳最顯的部位，用75%的酒精擦試消毒后，將穿刺采血管針
頭垂直刺入心臟，血液隨即通過(guò)釆血管進(jìn)入離心瓶?jī)?nèi)。注意事項(xiàng)(l)動(dòng)作宜迅 速，縮短在心臟內(nèi)的留針時(shí)間和防止血液凝固。(2)如果針頭已進(jìn)入心臟但抽不 出血時(shí)，應(yīng)將針頭稍微后退一點(diǎn)。(3)在胸腔內(nèi)針頭不應(yīng)左右擺動(dòng)以防止傷及心， 肺。 一頭胎牛一個(gè)瓶，待血液收集完后，立即換掉采血時(shí)使用的離心瓶瓶蓋， 擰上無(wú)孔的離心瓶瓶蓋。將離心瓶放入大容量冷凍離心機(jī)內(nèi)，以3400轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn) 速離心30分鐘，再將析出的血清在潔凈室的超凈臺(tái)上收集到已滅菌的容器內(nèi)， 并迅速冷凍保存。原血清在整個(gè)貯存過(guò)程溫度要求在-2(TC以下。為了便于溯源， 從開(kāi)始就要做好各項(xiàng)記錄，如母牛的相關(guān)資料、生產(chǎn)過(guò)程記錄、 一只胎牛血清 的數(shù)量及其裝入容器的編號(hào)等等。胎牛血清成品生產(chǎn)在凈化車間內(nèi)進(jìn)行，首先做好原血清的解凍工作。根據(jù) 生產(chǎn)計(jì)劃，將原血清整齊地?cái)[放在融凍間的鐵架上(要一一核對(duì)容器編號(hào)，并 做好記錄)，用26"C熱風(fēng)均勻地循環(huán)整個(gè)房間，使得原血清能化開(kāi)。尤其過(guò)濾和 分裝兩個(gè)關(guān)鍵過(guò)程是在空氣潔凈度達(dá)到百級(jí)的層流罩下的潔凈臺(tái)上進(jìn)行的。采 用進(jìn)口的微孔過(guò)濾膜，最小過(guò)濾孔徑為0.1um (100nm)，經(jīng)過(guò)3次過(guò)濾。成品 分裝貼完瓶簽后馬上放入-2(TC以下速凍庫(kù)內(nèi)快速冷凍24小時(shí)。胎牛血清成品 的貯存也在-2(TC以下。
權(quán)利要求
1、一種胎牛血清生產(chǎn)工藝，包括全封閉無(wú)菌采集、低溫分離、微孔膜過(guò)濾，其特征在于a、將懷孕8個(gè)月的母牛進(jìn)行剖腹產(chǎn)，產(chǎn)前采用側(cè)臥保定方法；麻醉采用全身麻醉和術(shù)部局部麻醉相結(jié)合的方法；b、手術(shù)切口位置選擇在左肷窩腹壁的三分之一處，髂結(jié)節(jié)下角10公分的下方為起始位置，作反斜杠“/”標(biāo)記，切口長(zhǎng)為30公分，到左乳房靜脈前8公分處；c、切至腹膜時(shí)，用止血鉗提出腹膜作一切口，再用手術(shù)剪剪開(kāi)腹膜，找準(zhǔn)子宮，前推瘤胃，雙手抱出子宮，隔著子宮壁握住胎牛的腳或頭，將子宮大彎拉出腹壁切口處，在子宮與腹壁切口之間塞上大塊滅菌紗布后，沿子宮角大彎，避開(kāi)子宮阜，作一與腹壁切口等長(zhǎng)的切口，然后抓住胎牛前兩肢，抬出胎牛帶進(jìn)放置在潔凈室層流罩下的采血架上，將其背高頭低，頭部朝右懸掛保定；d、胎牛拉出后縫合母牛子宮，在此同時(shí)對(duì)胎牛也進(jìn)行心臟穿刺采血；縫合子宮采用3#羊腸線，然后用0.9％生理鹽水沖洗腹腔，清理干凈后，在子宮切口處涂上大油劑，將子宮納入腹腔，對(duì)整個(gè)腹腔作無(wú)菌處理，最后依次作腹腔縫合；胎牛心臟穿刺采血是在潔凈室層流罩下進(jìn)行的，心臟穿刺采血前要做好采血器械的準(zhǔn)備和消毒工作，取一30cm長(zhǎng)的20mm穿刺采血管，穿刺采血管通過(guò)離心瓶瓶蓋，并固定在離心瓶瓶蓋上，用牛皮紙包裹嚴(yán)密，再用高壓蒸汽滅菌器高壓1個(gè)小時(shí)；在第三肋間胸骨左緣的正中，用聽(tīng)診器來(lái)確定心跳最顯的部位，用75％的酒精檫試消毒，最后將穿刺采血管針頭垂直刺入心臟，血液隨即通過(guò)采血管進(jìn)入離心瓶?jī)?nèi)；一頭胎牛一個(gè)瓶，采血完畢，立即換上無(wú)孔瓶蓋；e、將離心瓶放入大容量冷凍離心機(jī)中，以3400轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速離心30分鐘，析出血清在超凈臺(tái)上收集到已滅菌的容器內(nèi)冷凍保存；f、胎牛血清成品生產(chǎn)在凈化車間內(nèi)進(jìn)行，首先做好原血清的解凍工作，將原血清整齊地?cái)[放在融凍間的鐵架上，核對(duì)容器編號(hào)，做好記錄，用26℃熱風(fēng)均勻地循環(huán)整個(gè)房間，使原血清化開(kāi)；g、胎牛血清的過(guò)濾和分裝在局部百級(jí)下進(jìn)行，采用進(jìn)口的微孔過(guò)濾膜，過(guò)濾孔徑為0.1μm，經(jīng)過(guò)3次過(guò)濾；成品分裝貼完瓶簽后，放入-20℃以下速凍庫(kù)內(nèi)快速冷凍24小時(shí)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胎牛血清生產(chǎn)工藝，其中所說(shuō)的產(chǎn)前側(cè)臥保 定方法是將母牛兩前腿綁好向前拉，兩后腿綁好向后拉，頭部用繩固定。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胎牛血清生產(chǎn)工藝，其中所說(shuō)的麻醉時(shí)采用 全身麻醉和術(shù)部局部麻醉相結(jié)合的方法是全身麻醉采用2%普魯卡因腰旁神經(jīng) 干傳導(dǎo)麻醉；局部麻醉分別麻醉第18肋間神經(jīng)，髂腹下神經(jīng)和髂腹股溝神經(jīng)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種胎牛血清生產(chǎn)工藝。本發(fā)明包括全封閉無(wú)菌采集、低溫分離、微孔膜過(guò)濾，其特點(diǎn)是將懷孕8個(gè)月左右的母牛進(jìn)行剖腹產(chǎn)，產(chǎn)前采用側(cè)臥保定方法，麻醉采用全身麻醉和術(shù)部局部麻醉相結(jié)合的方法。對(duì)胎牛進(jìn)行全封閉無(wú)菌心臟穿刺采血，待血液收集完后，用大容量冷凍離心機(jī)以3400轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速離心30分鐘，析出的血清在“局部百級(jí)”下收集到已滅菌的容器內(nèi)，迅速冷凍保存。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是進(jìn)口胎牛血清價(jià)格偏高，達(dá)到每升6000元左右。從美國(guó)、歐洲進(jìn)口胎牛血清不僅成本高，而且有瘋牛病的隱患。而我們采用本工藝生產(chǎn)的胎牛血清價(jià)格每升只有4000-5000元左右，徹底改變了我國(guó)胎牛血清完全依賴國(guó)外進(jìn)口的狀況。
文檔編號(hào)A61D1/00GK101112334SQ20061010447
公開(kāi)日2008年1月30日 申請(qǐng)日期2006年7月28日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月28日
發(fā)明者富小剛, 馬忠仁 申請(qǐng)人:蘭州民科生物技術(shù)中心