專利名稱：牛胰酶的新生產工藝的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于藥物制造技術，特別涉及牛胰酶的新生產工藝。
背景技術：
胰酶系各國藥典收載的助消化藥，是從動物胰臟中提取的多種酶的混合物，主要成分為胰蛋白酶、胰脂肪酶和胰淀粉酶。胰酶主要用于消化不良，食欲不振及肝、胰腺疾病引起的消化障礙，同時也適用于先天性胰功能不全、腹部手術和外傷胰腺切除導致的胰功能不全。此外，胰酶中含有多種活性物質，可以作為基礎原料從其提取多種生化藥品，如胰激肽酶原，彈性蛋白酶，門冬酰胺酶，糜蛋白酶，羧肽酶等。胰酶具有重大的工業(yè)價值，目前胰酶的生產主要是從豬的胰臟中提取，未見到實用、簡便低成本的可規(guī)?；耘Ｒ扰K提取牛胰酶的工藝。我國是畜牧生產大國，而超過90%的牛胰臟被廢棄，不但造成浪費，還增加了企業(yè)的后續(xù)處理和環(huán)境污染，有必要開發(fā)提供效率高、酶活力高、性質穩(wěn)定、生產周期短、成本低廉的牛胰酶提取工藝，使牛胰臟變廢為寶，可產生明顯的經濟效益。在醫(yī)藥、食品、化工、皮革、洗滌行業(yè)等領域將具有良好的推廣前景，尤其在穆斯林清真市場。

發(fā)明內容

根據上述領域存在的缺陷和需求，本發(fā)明提供一種牛胰酶制備方法，具有提取效率高、酶活力高、性質穩(wěn)定、生產周期短的特點,具體如下:牛胰酶的生產工藝，其步驟如下:(I)原料處理:原料為檢疫合格的牛胰臟和牛胰臟重量I 5%的豬十二指腸；原料用創(chuàng)胰機創(chuàng)片，再用膠體磨磨漿制成胰漿，(2)激活、提取:在胰漿中添加胰漿重量0.5 1%的氯化鈣和0.5 1%的胰酶粉作為激活劑，再加入胰臟重量0.5 2倍、濃度10 20% (v/v)的丙酮溶液作提取劑，攪拌30 60分鐘，10 20°C條件下提取5 8小時，用分離機過濾，棄去濾渣，得胰乳濾液，(3)沉淀、壓榨:在胰乳濾液中加入冷丙酮溶液，攪拌均勻后裝袋壓榨成塊狀得胰酶塊，(4)脫脂、脫水:胰酶塊用脫脂袋盛裝，再用冷原丙酮脫脂，然后于脫水離心機中離心，(5)制粒:將離心的胰酶塊，用制粒機制粒，得胰酶濕顆粒，(6)干燥、粉碎:將胰酶濕顆粒置于雙錐回轉真空干燥機中干燥，干燥條件為真空泵壓力維持在500 750mmHg之間，溫度10 35°C，干燥6 10小時，胰酶顆粒用粉碎機粉碎成細粉，過80目篩，得胰酶粉。步驟(3)中，在胰乳濾液中加入的冷丙酮溶液為比輕計讀數為0.85預冷至_5°C的的丙酮溶液，加入的丙酮終體積百分比為60 75%，攪拌均勻指攪拌30 60分鐘，用240目布袋裝袋后壓榨成塊狀。
步驟(4)中，脫脂過程為:將脫脂袋置于脫脂桶內，加入胰酶塊重量1.5倍的溫度為O 5°C，比重密度< 0.800預冷的原丙酮，脫脂2小時，打開閥門放出丙酮；重復上述脫脂過程2 3次；脫水的過程為:浙干脫脂袋中的丙酮，于脫水離心機中離心10 20分鐘。步驟(5)中，制粒用12 14目錦綸布作篩網，用YK-160型制粒機制粒。本發(fā)明首次提出了一種適合從牛胰臟中提取牛胰酶的工藝，胰酶收率為11%以上，制備的胰酶中，脂肪殘留<20mg/g，干燥失重< 5.0%，每克牛胰酶粉中，胰蛋白酶活力彡1000u/g、胰淀粉酶活力> 10000u/g、脂肪酶活力> 7000u/g。具有提取效率高、酶活力高、性質穩(wěn)定、生產周期短、工藝簡單、成本低的特點，能夠變廢為寶產生明顯的經濟效益，在食品、皮革、洗滌清潔及醫(yī)藥等領域具有良好的應用推廣前景，尤其在穆斯林清真市場。


圖1牛胰酶生產工藝流程圖
具體實施例方式以下通過具體實施方式
對本發(fā)明的技術方案及效果作詳細說明。實驗材料: 牛胰臟和豬十二指腸。胰酶粉:重慶奧力生物制藥有限公司生產，型號:國藥準字H50020258。氯化鈣:食品級或化學純工業(yè)純級及以上。丙酮:工業(yè)純級及以上。比重小于0.850的丙酮:用比輕計測定，回收再利用丙酮。原丙酮:比重密度彡0.800，北京燕山丙酮，用比輕計測定。10 20% (v/v)丙酮溶液:丙酮與水的體積比丙酮與水按體積比10 20:90 80混合而得。實施例1.
1、牛胰酶生產工藝(I)解凍原料、刨片、磨漿:準確稱取檢疫合格的凍牛胰臟和牛胰臟重量1%的豬十二指腸用刨胰機刨片，再用磨漿機磨漿。(2)激活、提取、過濾:將胰漿置于反應斧中，添加胰臟重量0.6%食用氯化鈣和
0.5%的胰酶粉作為激活劑，再加入胰臟重量1.5倍、濃度15%的丙酮水溶液攪拌30分鐘，放入提取罐內，溫度15°C，提取6小時，用分離機過濾，濾渣按相同方法再提取一次，合并兩次提取液，棄去濾渣，得胰乳濾液。(3)沉淀、壓榨:胰乳濾液中加入預冷至_5°C的丙酮(比輕計濃度0.85)溶液，使其在該胰乳濾液和丙酮溶液的混合體系中體積百分比濃度達到60 75%，攪拌30分鐘，立即用240目布袋裝袋后壓榨，收集塊狀物。(5)脫脂、脫水:將脫脂袋置于脫脂桶內，加入沉淀物重量1.5倍的冷原丙酮(溫度為O 5°C，比重密度< 0.800)，脫脂2小時，打開閥門放出脫脂丙酮，重復上述脫脂過程2次。脫水脫脂完畢后，浙干丙酮，裝袋于脫水離心機中4000轉/分鐘離心15分鐘。(6)制粒:將離心的胰酶塊，用12目錦綸布作篩網，用YK-160型制粒機制粒。
(7)干燥、粉碎:將上述胰酶濕顆粒置于雙錐回轉真空干燥機中干燥，維持真空泵壓力500mmHg，溫度10°C，干燥8小時。干燥的胰酶用KFC-400型除塵粉碎機粉碎成細粉，過80目篩，得胰酶粉。(8)包裝:將胰酶粉即時包裝，于陰涼干燥處保存。2、產品質量檢測方法:( I)收率:胰酶收率=(胰酶粉重量/原料重量)*%。(2)牛胰酶中胰蛋白酶測定:對照品溶 液的制備取酪氨酸對照品，精密稱定，加0.2mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋成每Iml中約含50 μ g的溶液。供試品原液的制備取本品約0.lg，精密稱定，置乳缽中，加入冷至5°C以下的氯化鈣溶液(取氯化鈣1.47g，加水500ml使溶解，用0.lmol/L鹽酸溶液或0.lmol/L氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值至6.0 6.2)少量，研磨均勻，置IOOml量瓶中，加氯化鈣溶液至刻度，搖勻；精密量取適量，加入冷至5°C以下的硼酸鹽緩沖液(取硼砂2.85g、硼酸10.5g與氯化鈉
2.50g，加水使溶解成1000ml，調節(jié)pH值至7.5±0.1)，定量稀釋制成每Iml中約含胰蛋白酶約0.12活力單位的溶液。測定法取試管3支，分別精密量取供試品原液Iml與上述硼酸鹽緩沖液2ml，在40°C水浴中保溫10分鐘，分別精密加入在40°C水浴中預熱的酪蛋白溶液(取酪蛋白對照品
1.5g，加入0.lmol/L氫氧化鈉溶液13ml與水40ml，在60°C水浴中加熱使溶解，放冷，加水稀釋至100ml，調節(jié)pH值至8.0) 5ml，搖勻，立即置40°C ±0.5°C水浴中準確反應30分鐘，再各精密加入5%三氯醋酸溶液5ml終止反應，混勻，濾過，取續(xù)濾液作供試品溶液；另精密量取供試品原液Iml，加上述硼酸鹽緩沖液2.0ml，在40°C水浴中保溫10分鐘，精密加5%三氯醋酸溶液5ml，搖勻，置40°C ±0.5°C水浴中準確反應30分鐘，立即精密加入酪蛋白溶液5ml，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作空白對照；照紫外-可見分光光度法(《中國藥典》2010版二部附錄IV A)，在275nm的波長處，測定并計算供試品溶液吸收度的平均值(K h另用0.2mol/
L鹽酸溶液作空白對照，在275nm的波長處測定對照品溶液吸收度(As)。按下式計算:
權利要求
1.牛胰酶的生產工藝，其步驟如下: (O原料處理:原料為檢疫合格的牛胰臟和牛胰臟重量I 5%的豬十二指腸；原料用創(chuàng)胰機創(chuàng)片，再用膠體磨磨漿制成胰漿， (2)激活、提取:在胰漿中添加胰漿重量0.5 1%的氯化鈣和0.5 1%的胰酶粉作為激活劑，再加入胰臟重量0.5 2倍、濃度10 20%(v/v)的丙酮溶液作提取劑，攪拌30 60分鐘，10 20°C條件下提取5 8小時，用分離機過濾，棄去濾渣，得胰乳濾液， (3)沉淀、壓榨:在胰乳濾液中加入冷丙酮溶液，攪拌均勻后裝袋壓榨成塊狀得胰酶塊， (4)脫脂、脫水:胰酶塊用脫脂袋盛裝，再用冷原丙酮脫脂，然后于脫水離心機中離心， (5)制粒:將離心的胰酶塊，用制粒機制粒，得胰酶濕顆粒， (6)干燥、粉碎:將胰酶濕顆粒置于雙錐回轉真空干燥機中干燥，干燥條件為真空泵壓力維持在500 750mmHg之間，溫度10 35°C，干燥6 10小時，胰酶顆粒用粉碎機粉碎成細粉，過80目篩，得胰酶粉。
2.根據權利要求1所述的生產工藝，步驟(3)中:在胰乳濾液中加入的冷丙酮溶液為比輕計讀數為0.85預 冷至-5°C的的丙酮溶液，加入的丙酮終體積百分比為60 75%，攪拌均勻指攪拌30 60分鐘，用240目布袋裝袋后壓榨成塊狀。
3.根據權利要求1所述的生產工藝，步驟(4)中脫脂過程為:將脫脂袋置于脫脂桶內，加入胰酶塊重量1.5倍的溫度為O 5°C，比重密度彡0.800預冷的原丙酮，脫脂2小時，打開閥門放出丙酮；重復上述脫脂過程2 3次；脫水的過程為:浙干脫脂袋中的丙酮，于脫水離心機中離心10 20分鐘。
4.根據權利要求1所述的生產工藝，步驟(5)中制粒用12 14目錦綸布作篩網，用YK-160型制粒機制粒。
全文摘要
本發(fā)明牛胰酶的新生產工藝，屬于藥物制造技術，其步驟包括原料處理、激活、提取、沉淀、脫脂、干燥、粉碎；其特征在于激活、提取的步驟為在胰漿中添加原料重量0.5～1%的氯化鈣和0.5～1%的胰酶粉作為激活劑，用原料重量0.5～2倍的10～20%(v/v)的丙酮溶液作提取劑，攪拌30～60分鐘，10～20℃條件下提取10～15小時，用分離機過濾，棄去濾渣，得胰乳濾液，然后進行其余步驟，具有提取效率高、酶活力高、性質穩(wěn)定、生產周期短的特點，能夠變廢為寶，產生明顯的經濟效益，在食品、皮革、洗滌清潔及醫(yī)藥等領域具有良好的應用推廣前景。
文檔編號C12N9/94GK103215245SQ20131012490
公開日2013年7月24日 申請日期2013年4月11日 優(yōu)先權日2013年4月11日
發(fā)明者冉崇榮, 朱占權, 陳曾, 蘭乾 申請人:重慶奧力生物制藥有限公司