專利名稱：一種經(jīng)過密碼子優(yōu)化的脂肪酸脫氫酶基因序列及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種脂肪酸脫氫酶(以下簡稱!^ )基因序列及其應(yīng)用，尤其是涉及一種促使細(xì)胞內(nèi)n-6脂肪酸向n-3脂肪酸轉(zhuǎn)化的!^atI基因序列及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
在現(xiàn)有技術(shù)中，n-6系列的亞油酸和n-3系列的亞麻酸都是多不飽和脂肪酸 (polyunsaturated fatty acids，以下簡稱PUFAs)是哺乳動物體內(nèi)的必需脂肪酸，其具有廣泛的生物學(xué)功能；他們參與細(xì)胞膜的構(gòu)建而且作為許多細(xì)胞應(yīng)答過程中的信號分子，它對人類及其他哺乳動物的正常發(fā)育起著至關(guān)重要的作用，在人體內(nèi)維持一定量的n-3PUFAs 可以很好的預(yù)防心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病等；因此隨著人們對n-3PUFAs認(rèn)識的增加對富含這一成分的食品需求也大大增加；但是，人類食譜中的n-3PUFAs含量又在不斷下降， 取而代之的是越來越多的n-6PUFAs ；而人體又不能有效將n_6PUFAs轉(zhuǎn)化為n-3PUFAs，這樣就使得n-6與n-3PUFAs的比值嚴(yán)重失調(diào)，甚至已經(jīng)危害到了人類的健康；而對于人體，無論 n-3PUFAs的過低還是n-6PUFAs的過高都會帶來極為不利的影響。n-3!^itl基因是合成n-3PUFAs的重要基因，他們利用n-6PUFAs做為底物在脂肪酸碳鏈甲基端第三個碳催化生成一個不飽和鍵，從而合成相應(yīng)的n-3PUFAs ；因此，為了改善動物體內(nèi)n-3PUFAs的含量，除了攝取含有較多n_3PUFAs的食物之外，還可以利用n_3FatI 基因以n-6PUFAs為底物來自身合成，進(jìn)而從根本上改善動物體內(nèi)n_6與n-3PUFAs比例失調(diào)問題；通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)，制備帶有n-3!^tl基因的畜禽動物，可以獲得自身合成n-3PUFAs 的畜禽，進(jìn)而高效、低廉地生產(chǎn)出含有n-3PUFAs的蛋奶肉制品；但是由于i^atl基因僅存在于真菌、植物和低等的動物如線蟲中，這些低等生物跟高等生物的密碼子偏好性不同，不利于直接表達(dá)；通過優(yōu)化線蟲密碼子，合成n-3!^tl基因，并通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染獲得穩(wěn)定表達(dá)該基因的雙基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株(CHO)，為培育富含n-3多不飽和脂肪酸的動物新品種提供有效途徑等方面的研究已成為業(yè)界正在追求的技術(shù)內(nèi)容。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點(diǎn)；一個目的是提供一種促使細(xì)胞內(nèi)n-6脂肪酸向n-3脂肪酸轉(zhuǎn)化的!^atI基因序列；本發(fā)明另一個目的是提供一種促使細(xì)胞內(nèi)n_6脂肪酸向n-3脂肪酸轉(zhuǎn)化的!^atI基因序列的真核表達(dá)載體；本發(fā)明再一個目的是提供一種穩(wěn)定表達(dá)促使細(xì)胞內(nèi)n-6脂肪酸向n-3脂肪酸轉(zhuǎn)化的!^atI基因序列的細(xì)胞株。為了實(shí)現(xiàn)上述第一個發(fā)明目的，本發(fā)明根據(jù)GenBank系列數(shù)據(jù)庫中的線蟲序列 (ACCESSION NM_001028389)，采用化學(xué)合成法合成針對哺乳動物進(jìn)行過密碼子優(yōu)化的!^itI 基因序列，并在起始密碼子ATG之前加上一段序列GTTGCGGCCGCCACC，其中包含有利于基因表達(dá)的Kozak序列，共12Mbp ；其完整的堿基序列如下GTTGCGGCCGCCACCATGGTCGCTCACTCCAGCGAAGGACTGTCCGCTACCGCTCCAGTGACAGGAG
GAGACGTGCTGGTCGATGCCAGAGCTAGCCTCGAGGAAAAAGAGGCCCCTCGAGATGTCAACGCCAATACCAAGCAGGCTACCACAGAGGAACCACGCATCCAGCTGCCTACAGTGGACGCTTTCCGACGAGCTATTCCAGCTCACTGTTTTGAACGAGATCTGGTCAAGTCCATCCGCTACCTCGTGCAGGACTTCGCCGCTCTGACCATTCTCTATTTTGCCCTGCCAGCTTTCGAGTACTTTGGACTGTTCGGGTATCTCGTCTGGA
ACATCTTCATGGGCGTGTTCGGATTTGCCCTGTTTGTGGTCGGACACGACTGCCTCCATGGGTCCTTCAGCGACAACCAGAATCTGAACGATTTCATCGGCCACATTGCCTTTTCCCCTCTCTTCAGCCCTTACTTTCCCTGGCAGAAATCCCACAAGCTGCACCATGCCTTCACCAGTCATATCGACAAAGATCCCGGCCATGTGTGGATTCAGGACAAAGATTGGGAGGCCATGCCATCTTGGAAGCGGTGGTTCAACCCCATCCCATTTTCAGGATGGCTGAAGTGGTTCCCCGTGTACACACTCTTCGGGTTTTGCGACGGCTCCCACTTCTGGCCATACTCTTCACTGTTTGTCAGGAATTCTGAGAGAGTGCAGTGTGTCATCTCAGGGATTTGCTGTTGCGTGTGCGCCTACATCGCTCTGACCATTGCCGGCTCTTATTCAAACTGGTTCTGGTACTATTGGGTGCCCCTGTCTTTCTTTGGGCTGATGCTCGTGATCGTCACATACCTCCAGCACGTGGACGATGTCGCCGAGGTGTATGAAGCTGACGAGTGGAGCTTCGTGCGGGGACAGACCCAGACAATCGACAGGTACTATGGGCTGGGCCTCGATACCACAATGCACCATATTACCGACGGGCATGTGGCCCACCATTTCTTTAACAAAATCCCTCACTACCATCTGATTGAAGCTACCGAGGGCGTCAAGAAAGTGCTGGAGCCCCTCTCCGATACACAGTACGGATATAAGAGCCAAGTGAATTACGACTTCTTTGCCAGGTTTCTGTGGTTCAACTACAAACTGGACTATCTCGTGCACAAGACCGCTGGAATCATGCAGTTCCGCACCACACTGGAGGAAAAGGCCAAAGCTAAGTAA。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明第二個目的，本發(fā)明根據(jù)GenBank中的的線蟲序列 (ACCESSI0NNM_001028389)，采用化學(xué)合成法合成針對哺乳動物進(jìn)行過密碼子優(yōu)化的!^atI 基因的編碼區(qū)序列，并在起始密碼子ATG之前加上了一段序列GTTGCGGCCGCCACC，其中包含了有利于基因表達(dá)的Kozak序列，并在其上下游分別引入了 HindIILKpnI限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)及相應(yīng)的保護(hù)堿基；合成的序列連接到克隆載體PUC57載體中，獲得重組質(zhì)粒 pUC57-FatI，將pUC57_FatI和真核表達(dá)載體pCDNA3. 1 (+)用限制性內(nèi)切酶HindIII、KpnI 進(jìn)行雙酶切，膠回收相應(yīng)的片段；將htl基因連接入真核表達(dá)載體ρ⑶NA3. 1(+)中獲得重組質(zhì)粒PCDNA3. 1 (+) -FatI，得到促使細(xì)胞內(nèi)n_6脂肪酸向n_3脂肪酸轉(zhuǎn)化的!^atI基因序列的真核表達(dá)載體。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明第三個目的，本發(fā)明將涉及的含有n-3FatI基因的真核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染到CHO細(xì)胞中，經(jīng)過陽性克隆篩選得到能夠穩(wěn)定表達(dá)n-3!^tl基因的細(xì)胞株；經(jīng)過對陽性細(xì)胞株mRNA表達(dá)水平檢測其電泳結(jié)果如圖7所示陽性細(xì)胞株有清晰的1. 左右的條帶，而陰性對照無相應(yīng)條帶，n-3FatI基因能夠在細(xì)胞株中穩(wěn)定的表達(dá)；經(jīng)過對細(xì)胞中 n-3/n-6不飽和脂肪酸值的檢測結(jié)果如表1所示，表明含有轉(zhuǎn)染n-3!^tl基因的真核表達(dá)載體的細(xì)胞株中n-3/n-6值比未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株中η-3/η_6值提高8. 47%，說明n-3i^itl基因成功穩(wěn)定的表達(dá)并且改良細(xì)胞中n-3/n-6不飽和脂肪酸值。本發(fā)明涉及的經(jīng)過密碼子優(yōu)化的n-3!^tl基因，構(gòu)建促使細(xì)胞內(nèi)n-6脂肪酸向n_3 脂肪酸轉(zhuǎn)化的i^atl基因序列的真核表達(dá)載體以及將載體轉(zhuǎn)染到CHO細(xì)胞中，經(jīng)過陽性克隆篩選得到的能夠穩(wěn)定表達(dá)n-3htl基因的細(xì)胞株，可以應(yīng)用于培育富含n-3多不飽和脂肪酸的動物新品種。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比有益效果是采用密碼子優(yōu)化方法對!^atI基因序列進(jìn)行優(yōu)化，得到促使細(xì)胞內(nèi)n-6脂肪酸向n-3脂肪酸轉(zhuǎn)化的!^atI基因序列，優(yōu)化的!^atI基因序列更容易在真核細(xì)胞中得到表達(dá)；構(gòu)建含有該基因序列的真核表達(dá)載體并將載體轉(zhuǎn)染到 CHO細(xì)胞中，經(jīng)過陽性克隆篩選得到的能夠穩(wěn)定表達(dá)n-3!^tl基因的細(xì)胞株；本發(fā)明涉及的 n-3FatI基因能穩(wěn)定表達(dá)并且改良細(xì)胞中n-3/n-6不飽和脂肪酸值，可以應(yīng)用于培育富含 n-3PUFAs的動物新品種，獲得能自身合成n-3PUFAs的畜禽，進(jìn)而高效、低廉地生產(chǎn)出含有 n-3PUFAs的蛋奶肉制品，解決人們食譜中n_6與n-3PUFAs的比值失調(diào)的問題；本發(fā)明的工藝過程簡單，經(jīng)密碼子優(yōu)化的基因質(zhì)量優(yōu)良而且更容易在真核細(xì)胞中得到表達(dá)，應(yīng)用性好， 負(fù)面影響小。


圖1為!^atI基因序列密碼子優(yōu)化前后序列比對圖。圖2為經(jīng)過密碼子優(yōu)化的!^atI基因序列的顯示密碼子優(yōu)化圖譜。圖3為經(jīng)過密碼子優(yōu)化的!^atI基因序列顯示構(gòu)建的真核表達(dá)載體。圖4為經(jīng)過密碼子優(yōu)化的!^atI和pEGFP_Nl轉(zhuǎn)染后24h的細(xì)胞。圖5為經(jīng)過密碼子優(yōu)化的!^atI基因組DNAPCR檢測陽性克隆。圖6為本發(fā)明涉及的Southern Blot檢測1 tl基因的表達(dá)。圖7為本發(fā)明涉及的陽性克隆!^atI的mRNA表達(dá)水平及對照。
具體實(shí)施例方式下面通過具體實(shí)施例并結(jié)合附圖對本發(fā)明進(jìn)一步說明。實(shí)施例1 本實(shí)施例對穩(wěn)定表達(dá)促使細(xì)胞內(nèi)n-6脂肪酸向n_3脂肪酸轉(zhuǎn)化的!^atI 基因序列的細(xì)胞株培養(yǎng)，按下列步驟進(jìn)行1. ICHO細(xì)胞培養(yǎng)CH0細(xì)胞系常規(guī)復(fù)蘇后，將含有10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100mg/L硫酸鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基(本發(fā)明無特別說明，均用此種培養(yǎng)基)在37°C，5% C02環(huán)境的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞融合度85%左右的時候用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染。1. 2載體構(gòu)建根據(jù)GenBank中的的線蟲序列(ACCESSION NM_001028389)，采用化學(xué)合成法合成針對哺乳動物進(jìn)行過密碼子優(yōu)化的i^atl基因序列，并在起始密碼子 ATG之前加上一段序列GTTGCGGCCGCCACC，其中包含有利于基因表達(dá)的Kozak序列，并在其上下游分別引入了 Hindlll、KpnI限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)及相應(yīng)的保護(hù)堿基；合成的序列連接到克隆載體PUC57載體中，獲得重組質(zhì)粒pUC57-FatI ；將pUC57_FatI和真核表達(dá)載體P⑶NA3. 1 (+)用限制性內(nèi)切酶Hindlll、KpnI進(jìn)行雙酶切；膠回收相應(yīng)的片段， 將!^atI基因連接入真核表達(dá)載體pCDNA3. 1 (+)中獲得重組質(zhì)粒pCDNA3. 1 (+)-FatI ；由于 PCDNA3. 1 (+) -FatI上具有2個Mil酶切位點(diǎn)，將質(zhì)粒pCDNA3. 1 (+) -FatI用Mil酶切后膠回收含有I^atl的相對大的片段，以備轉(zhuǎn)染。1. 3細(xì)胞轉(zhuǎn)染在細(xì)胞匯合度達(dá)到85%左右時，進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染；轉(zhuǎn)染的步驟如下 用胰酶消化收集細(xì)胞，并用PBS沖洗2次，以徹底去掉胰酶，用無抗生素的細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞，加入經(jīng)過酶切回收的帶有i^atl基因的DNA，混合后冰浴lOmin，用電穿孔儀ECM830 進(jìn)行電轉(zhuǎn)染；所用的電擊條件為:M0DE =HV ；Voltage :600v，P. length :400us，Pulses :2 ； Interval :800ms ；取出電擊杯，冰浴IOmin后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中在37°C，5% C02環(huán)境的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；同時設(shè)陰性對照(未加入質(zhì)粒)和陽性對照(轉(zhuǎn)入線性化的PEGFP-N1)， 轉(zhuǎn)染成功后，轉(zhuǎn)入pEGFP-Nl的陽性對照中，綠色熒光蛋白會在CMV啟動子的驅(qū)動下發(fā)出綠色熒光。1.4陽性克隆篩選細(xì)胞培養(yǎng)至對小時后加G418，進(jìn)行抗性篩選，由于轉(zhuǎn)入的基因帶有新霉素抗性基因(Neo)，因此轉(zhuǎn)入了該外源基因的細(xì)胞就會對G418產(chǎn)生抗性，而正常細(xì)胞在G418篩選壓力下死亡；經(jīng)過11天的培養(yǎng)篩選，培養(yǎng)皿中開始出現(xiàn)陽性克隆，將陽性克隆挑出后培養(yǎng)于96孔板中，然后逐級放大到M孔板和6孔板中，得到穩(wěn)定表達(dá)促使細(xì)胞內(nèi)n-6脂肪酸向n-3脂肪酸轉(zhuǎn)化的!^atI基因序列的細(xì)胞株。實(shí)施例2 本實(shí)施例對細(xì)胞株檢測及其脂肪酸分析，按下列步驟進(jìn)行2. 1基因組PCR初步檢測陽性細(xì)胞克隆放大培養(yǎng)過程中留在原培養(yǎng)板上的細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)板時用胰酶消化收集細(xì)胞，基因組抽提試劑盒提取細(xì)胞的基因組，RT-PCR初步檢測外源基因是否進(jìn)入細(xì)胞，所用引物為i^itI-F:5' -CAT GGT CGC TCA CTC CAG C-3'，F(xiàn)atI-R :5' -GGT ACC TTA CTT AGC TTT GGC CTT TTC-3‘；反應(yīng)條件 940C 5min，94°C lmin,60°C 30sec，72°C Imin ；30 個循環(huán)，72°C 5min ；瓊脂糖凝膠電泳檢測陽性的細(xì)胞株用于下一步實(shí)驗。2. 2Southern Blot 檢測將 1. 2 中構(gòu)建好的載體 pCDNA3. 1 (+) -FatI 用 HindIII, KpnI限制性內(nèi)切酶的酶切后切膠回收!^atI片段作為模板，1 μ g模板加滅菌雙蒸水到 16μ 1，沸水浴變性lOmin，迅速在冰上冷卻；加入4μ 1 DIG-High I^rime，37 °C孵育lh， 65°C IOmin終止反應(yīng)獲得地高辛標(biāo)記的探針；細(xì)胞株基因組酶切后電泳轉(zhuǎn)膜，經(jīng)過預(yù)雜交、 雜交、漂洗步驟后顯色。2. 3FatI的mRNA水平表達(dá)檢測基因組PCR檢測為陽性的一個細(xì)胞株提取RNA，反轉(zhuǎn)錄后PCR檢測細(xì)胞株中!^atI的mRNA表達(dá)水平；所用引物為!^atI-F 5' -CAT GGT CGC TCACTC CAG C-3'，F(xiàn)atI-R :5' -GGT ACC TTA CTT AGC TTT GGC CTT TTC-3‘；反應(yīng)條件 940C 5min，94°C lmin,60°C 30sec，72°C Imin ；30 個循環(huán)，72°C 5min ；未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞作為陰性對照，做同樣處理。2. 4轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞系后脂肪酸分析DNA處理及轉(zhuǎn)染、陽性篩選和克隆放大步驟同前；轉(zhuǎn)染線性化PEGFp-Nl的CHO細(xì)胞為陽性對照，未轉(zhuǎn)染外源基因的CHO為陰性對照；陽性克隆放大到IOcm細(xì)胞培養(yǎng)皿上后，添加10 μ mol/L的亞油酸和花生四烯酸進(jìn)行培養(yǎng)，細(xì)胞完全長滿后，用胰酶消化收集細(xì)胞；細(xì)胞用去離子水洗滌，加入2. 5% H2SO4/甲醇溶液lmL， 80°C加熱90min，冷卻到室溫后加入1. 5mL 0.9% NaCl溶液和ImL正己烷，震動、低速離心(2000-3000r/min)將脂肪酸提取到有機(jī)相；吸取上層清液經(jīng)液氮吹干后用于氣相色譜 (GC_MS)分析；轉(zhuǎn)pEGFP-Nl的CHO細(xì)胞作為對照做相同處理。實(shí)施例3 本實(shí)施例對優(yōu)化結(jié)果進(jìn)行分析如下3. 1密碼子優(yōu)化、基因合成及表達(dá)載體的構(gòu)建根據(jù)哺乳動物密碼子偏好性，對線蟲的htl基因序列進(jìn)行了密碼子優(yōu)化；優(yōu)化后的序列CAI由0. 65提高到0. 81 (附圖2)， 通常認(rèn)為CAI大于0. 9時非常有利于基因表達(dá)，并在起始密碼子ATG之前加上了一段序列GTTGCGGCCGCCACC，其中包含了有利于基因表達(dá)的Kozak序列，并在其上下游分別引入了 Hindlll，KpnI限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)及相應(yīng)的保護(hù)堿基；優(yōu)化過的序列與原始序列比對如附圖1，優(yōu)化過的序列部分用紅字表示；優(yōu)化后的序列通過化學(xué)合成法合成，并連接到克隆載體PUC57載體中，獲得重組質(zhì)粒pUC57-FatI ；將pUC57_FatI和真核表達(dá)載體 PCDNA3. 1(+)分別用限制性內(nèi)切酶HindIILKpnI進(jìn)行雙酶切；膠回收相應(yīng)的片段，將!^atI 基因連接入將連接入真核表達(dá)載體PCDNA3. 1(+)中獲得重組質(zhì)粒？0)嫩3.1(+)呼站1(如附圖3)。3. 2細(xì)胞轉(zhuǎn)染和陽性克隆篩選將真核表達(dá)載體P⑶NA3. 1 (+)-FatI用MlI酶切后膠回收相對大的片段對CHO細(xì)胞系進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染；只轉(zhuǎn)入pEGFP-m的陽性對照80% (藍(lán)光激發(fā)下的細(xì)胞數(shù)(附圖4-B)/白光下細(xì)胞數(shù)(附圖4-A))以上的細(xì)胞都發(fā)出綠色熒光， 表明轉(zhuǎn)染效率較高 ’轉(zhuǎn)染48小時后加入G418進(jìn)行抗性篩選，篩選到第11天開始出現(xiàn)細(xì)胞克隆，對這些克隆增值由96孔板逐級放大培養(yǎng)到6孔板，獲得陽性克隆細(xì)胞群。3. 3基因組PCR初步檢測陽性細(xì)胞及Southern Blot分析對獲得的細(xì)胞克隆提取基因組進(jìn)行RT-PCR初步檢測，電泳結(jié)果附圖5所示，陽性細(xì)胞具有清晰的1. 2K左右的條帶，所用分子量Marker為DL2000(附圖幻；Southern Blot分析進(jìn)一步表明所得細(xì)胞株為陽性(附圖6)。3. 4陽性細(xì)胞株mRNA表達(dá)水平檢測基因組PCR檢測為陽性的細(xì)胞提取RNA，反轉(zhuǎn)錄后PCR，電泳結(jié)果如附圖7所示陽性細(xì)胞株有清晰的1.業(yè)左右的條帶，而陰性對照無相應(yīng)條帶，所用分子量Marker為DL2000。3. 5脂肪酸組成分析為了證明該!^atI基因序列在細(xì)胞內(nèi)具有脂肪酸去飽和酶的功能，檢測了轉(zhuǎn)染ρ⑶NA3. I-FatI的CHO細(xì)胞和轉(zhuǎn)染pEGFP-Nl的CHO細(xì)胞(對照)中脂肪酸含量，檢測結(jié)果如表1所示；表1 CN 102533807 A
權(quán)利要求
1.一種經(jīng)過密碼子優(yōu)化的脂肪酸脫氫酶基因序列，其特征在于具有序列表中序列1 所示的核苷酸序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的經(jīng)過密碼子優(yōu)化的脂肪酸脫氫酶基因序列，其特征在于將該基因構(gòu)建促使細(xì)胞內(nèi)n-6脂肪酸向n-3脂肪酸轉(zhuǎn)化的真核表達(dá)載體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的經(jīng)過密碼子優(yōu)化的脂肪酸脫氫酶基因序列，其特征在于將該基因培養(yǎng)促使細(xì)胞內(nèi)n-6脂肪酸向n-3脂肪酸轉(zhuǎn)化的細(xì)胞株。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的經(jīng)過密碼子優(yōu)化的脂肪酸脫氫酶基因序列，其特征在于應(yīng)用于培育富含n-3多不飽和脂肪酸的動物新品種。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種經(jīng)過密碼子優(yōu)化的脂肪酸脫氫酶(以下稱FatI)基因序列及應(yīng)用；通過構(gòu)建真核表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞，G418篩選后獲得穩(wěn)定表達(dá)FatI的細(xì)胞株；經(jīng)過基因組PCR及Southern Blot確定外源基因整合入基因組，且該外源基因能在此細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄為mRNA；成功轉(zhuǎn)染后的CHO細(xì)胞系，其細(xì)胞n-3/n-6值比對照細(xì)胞提高8.47％，說明該FatI基因序列能促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)n-6脂肪酸向n-3脂肪酸的轉(zhuǎn)化。
文檔編號C12N15/85GK102533807SQ20121000496
公開日2012年7月4日 申請日期2012年1月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月10日
發(fā)明者孫曉鳳, 李蘭, 李秀娟, 沈偉 申請人:青島農(nóng)業(yè)大學(xué)