一種甜葉懸鉤子水溶性多糖用于保護(hù)肝臟及激活乙醛脫氫酶的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] -種從薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取的水溶性多糖用于保護(hù)肝臟及激活 乙醛脫氫酶的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 乙酸脫氫酶（acetaldehyde dehydrogenase，ALDH) (EC1. 2. 1. 10) (CAS[9028-91-5])，作為醛脫氫酶的一種，負(fù)責(zé)催化乙醛氧化為乙酸的反應(yīng)。在酒精代謝 中起主要作用，廣泛存在于各種動(dòng)物、植物和微生物體內(nèi)。哺乳動(dòng)物乙醛脫氫酶根據(jù)其亞 細(xì)胞定位、結(jié)構(gòu)及動(dòng)力學(xué)特性和原始序列的相似性可以分為三類：第一類存在于細(xì)胞質(zhì)中 (ALDH1)，第二類存在于線粒體中（ALDH2)，第三類則是可誘導(dǎo)性的細(xì)胞質(zhì)的乙醛脫氫酶和 可誘導(dǎo)性的微粒體的乙醛脫氫酶（如ALDH3)。乙醛脫氫酶2(ALDH2)是存在于線粒體內(nèi)的 廣泛參與體內(nèi)醛類物質(zhì)氧化的一種醛類氧化酶，ALDH2基因位于第12號染色體，它的主要 多態(tài)性位于外顯子12的G1510A，正常的等位基因記為ALDH2*1，單堿基突變的等位基因記 為ALDH2*2。突變基因表達(dá)的酶中，殘基487的谷氨酸變?yōu)橘嚢彼?，造成酶的催化活性基?喪失。有ALDH2*2突變表達(dá)出的酶無法正常代謝乙醇的氧化產(chǎn)物乙醛，血液乙醛濃度增高， 造成一系列飲酒后的不良反應(yīng)，如臉紅、頭暈、心跳加快等。而純合子的ALDH22*2活性近 乎為零。由于ALDH2*2攜帶者對乙醛代謝較差，有認(rèn)為乙醛對肝臟的損傷是酒精肝在亞洲 人群中常見的原因。有研究表明，ALDH2突變型患者阿爾茨海默病的發(fā)病率更高，ALDH2的 失活導(dǎo)致乙醛的蓄積與乙醇性多發(fā)性神經(jīng)病變有關(guān)，ALDH2可減輕神經(jīng)細(xì)胞的氧化應(yīng)激損 傷，對神經(jīng)保護(hù)具有重要的意義，激活A(yù)LDH2將為神經(jīng)退行性變疾病的治療提供靶點(diǎn)。同時(shí) 又研究提出，ALDH2基因參與了冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。–HD)的發(fā)生發(fā)展過程，在缺氧 心肌中ALDH2基因下調(diào)，ALDH2對氧化刺激導(dǎo)致的神經(jīng)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞損傷有明顯的拮抗作 用，而ALDH2基因G487A多態(tài)性有可能成為老年CHD發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
[0003] 酒精性肝病是由于長期大量飲酒導(dǎo)致的肝臟疾病。初期通常表現(xiàn)為脂肪肝，進(jìn)而 可發(fā)展成酒精性肝炎、肝纖維化和肝硬化。其主要臨床特征是惡心、嘔吐、黃疸、可有肝臟腫 大和壓痛。并可并發(fā)肝功能衰竭和上消化道出血等。嚴(yán)重酗酒時(shí)可誘發(fā)廣泛肝細(xì)胞壞死， 甚至肝功能衰竭。酒精性肝病是我國常見的肝臟疾病之一，嚴(yán)重危害人民健康。
[0004] 酒精性肝病主要是乙醇及其代謝產(chǎn)物乙醛直接或間接誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，氧化應(yīng) 激、腸源性內(nèi)毒素、炎性介質(zhì)和營養(yǎng)失衡（尤其是蛋白質(zhì)-熱量營養(yǎng)不良）等多種因素相互 作用的結(jié)果。另外，"二次打擊"學(xué)說認(rèn)為，酒精因素作為初次打擊，通過氧化應(yīng)激促使反應(yīng) 性氧化物增加，而誘發(fā)肝臟脂肪聚集。在氧化應(yīng)激相關(guān)的脂質(zhì)過氧化及炎性細(xì)胞因子的作 用下，使脂肪變的肝細(xì)胞發(fā)生第二次打擊，造成炎癥、壞死和纖維化。乙醛是肝細(xì)胞內(nèi)乙醇 代謝的主要產(chǎn)物，其藥理毒性比乙醇更為劇烈。乙醛可通過多種途徑作用于肝組織，首先， 乙醛可直接作用于肝組織，對肝臟產(chǎn)生毒性作用。其次，乙醛還可損傷大多數(shù)肝細(xì)胞的線粒 體和微管，進(jìn)而引起脂肪酸氧化和肝細(xì)胞分泌功能障礙，導(dǎo)致肝細(xì)胞內(nèi)脂肪酸蓄積和分泌 性蛋白貯留。大量研究已經(jīng)顯示乙醛在活體生理狀態(tài)下能與多種蛋白發(fā)生共價(jià)結(jié)合，形成 穩(wěn)定的和不穩(wěn)定的乙醛蛋白加和物（APA)。其形成不但改變了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，而且造成了 蛋白質(zhì)功能異常，如蛋白酶失活、DNA修復(fù)蛋白功能障礙、谷胱甘肽耗竭、線粒體損傷、氧利 用障礙和膠原蛋白合成增加。而且可作為抗原誘生免疫反應(yīng)，產(chǎn)生相應(yīng)抗體，引起肝細(xì)胞炎 癥、壞死及纖維組織增生。
[0005] 甜葉懸鉤子是薔薇科懸鉤子屬的一個(gè)變種，屬于多年生有刺灌木，主要生長于我 國廣西省的山區(qū)，由于其葉味道甘甜，口感獨(dú)特，故又稱廣西甜茶，是廣西特有的無毒、低熱 量、高甜度的野外珍稀天然植物。在民間有悠久的應(yīng)用歷史，長期以來當(dāng)?shù)匕傩找恢币云淙~ 當(dāng)茶飲用，也用來代糖加工食品。根據(jù)廣西中藥藥物標(biāo)準(zhǔn)記載，甜葉懸鉤子具有清熱降火、 潤肺生津、止咳祛痰的功效。其食用性以及藥用性早已為當(dāng)?shù)孛耖g醫(yī)藥所證實(shí)。但是直至 上世紀(jì)80年代的全國藥物調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，雖然懸鉤子植物在我國各地均有分布，但都不具備 廣西甜葉懸鉤子這種甜味，因此該植物被植物學(xué)家李樹剛確定為懸鉤子的變種，與其它懸 鉤子區(qū)分來。自上世紀(jì)80年代發(fā)現(xiàn)該物種以來，我國逐步展開了對甜葉懸鉤子的研究，在 其食用和藥用等方面獲得了一定的進(jìn)展。研究表明，甜葉懸鉤子葉片中含有豐富的必需氨 基酸、黃酮苷、甜葉懸鉤子苷、多酚、維生素以及人體所必需的多種微量元素；甜葉懸鉤子粗 提物具有降糖、降脂、抗炎、抗過敏、改善皮膚瘙癢等多種藥理活性。
[0006] 多糖是一類具有廣泛生物活性的天然大分子化合物，廣泛分布于自然界高等植 物、藻類、微生物（細(xì)菌和真菌）及動(dòng)物體內(nèi)。多糖類物質(zhì)是除蛋白質(zhì)和核酸之外的又一類 重要的生物大分子，是很多植物藥發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)，植物多糖具有復(fù)雜的、多方面的生 物活性和功能，如免疫調(diào)節(jié)功能、抗感染、抗輻射、抗凝血、降血糖、降血脂、促進(jìn)核酸與蛋白 質(zhì)的生物合成以及抗衰老等作用。如甘草多糖具有明顯的抗病毒和抗腫瘤作用；黑木耳多 糖、銀杏外種皮多糖和蘆薈多糖可抗腫瘤和增強(qiáng)人體免疫功能；柴胡多糖具有抗輻射、增強(qiáng) 免疫功能等生物學(xué)作用；麥冬多糖具有降血糖及免疫增強(qiáng)作用；爬山虎多糖具有抗病毒和 抗衰老作用；石斛多糖、牡蠣多糖、玉郎傘多糖等植物多糖具有保護(hù)急性酒精性肝損傷的作 用，且石斛多糖、玉郎傘多糖可增加肝組織ALDH活性，加速乙醛代謝。目前已有部分天然多 糖類化合物用于臨床，顯示出良好的療效，已然成為天然藥物及保健品研發(fā)中的重要部分。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：從薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取的水溶性多 糖用于保護(hù)肝臟及激活乙醛脫氫酶。
[0008] 本發(fā)明的技術(shù)方案是：
[0009] 1.從薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取水溶性多糖
[0010] 將甜葉懸鉤子干葉粉碎后，用體積百分?jǐn)?shù)為80% -85%的乙醇水溶液在60-80°C 浸泡80-100min，抽濾，棄濾液，茶渣用去離子水在50-70°C保溫浸取兩次，每次90-150min， 冷卻后抽濾，合并兩次濾液，加入相當(dāng)于濃縮物三倍體積的無水乙醇，4°C靜置過夜沉淀，離 心分離，得到沉淀物a，稱重，用丙酮、乙醚、乙醇交替洗滌3次，加去離子水溶解，加入相當(dāng) 于沉淀物a質(zhì)量的2% -3%的三氯乙酸，于4°C靜置90-150min，離心分離，取上清濾液置于 蒸餾水中透析20-30h，每隔8h換一次透析液，透析后的溶液冷凍干燥，即得到甜葉懸鉤子 水溶性多糖。
[0011] 2.從薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取的水溶性多糖的結(jié)構(gòu)特征的檢測
[0012] (1)總糖含量、糖醛酸含量、蛋白質(zhì)含量
[0013] 采用苯酚-硫酸法測定薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取水溶性多糖、草酸鹽 溶果膠類多糖、堿溶性多糖的總糖含量，采用間羥基聯(lián)苯比色法測定其糖醛酸含量，采用考 馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)含量，其結(jié)果見實(shí)施例表1。
[0014] (2)單糖組成
[0015] 采用氣相色譜測定薔薇科懸鉤子屬植物甜葉懸鉤子提取水溶性多糖、 草酸鹽溶果膠類多糖、堿溶性多糖單糖組成，結(jié)果顯示，甜葉懸鉤子提取水溶性 多糖主要由核糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖5種單糖組成，其摩爾比為 0.146 : 0.403 : 17.745 : 1.436 : 0.382。
[0016] (3)紅外光譜
[0017] 甜葉懸鉤子提取水溶性多糖中較