專利名稱：一種檢測(cè)cyp1a2基因多態(tài)性的液相芯片方法及其試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及體外檢測(cè)技術(shù)、醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及CYP1A2基因多態(tài)性的液相芯片檢測(cè)方法及其檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)：
CYP1A2是一種重要的細(xì)胞色素P450酶(cytochrome P450, CYP)，基因定位于人類第15號(hào)染色體上，包括7個(gè)外顯子和6個(gè)內(nèi)含子。CYP1A2參與多種藥物在體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化，以及一些環(huán)境毒素的代謝和致癌物質(zhì)的激活過程。目前已知CYPlA參與咖啡因、華發(fā)林、茶堿、普萘洛爾、美西律、維拉帕爾、硝苯地平、他克林等幾十種藥物的代謝過程。CYP1A2 基因多態(tài)性是導(dǎo)致是CYP1A2酶活性及可誘導(dǎo)性產(chǎn)生個(gè)體差異的基礎(chǔ)，是引起藥物療效和毒性出現(xiàn)個(gè)體及種族差異的重要原因。因此，對(duì)CYP1A2基因多態(tài)性的鑒定分型在個(gè)性化用藥和安全用藥中具有重要的指導(dǎo)意義。CYP1A2的基因多態(tài)性主要包括CYP1A2*1F(-163C> Α)的點(diǎn)突變和CYPlA2*lD(-M67delT)的缺失突變等基因突變類型。當(dāng)前國內(nèi)外廣泛使用的分子生物學(xué)檢測(cè)CYP1A2基因多態(tài)性的方法中，熒光定量 PCR存在著檢測(cè)通量的局限性，所以都還不能真正滿足臨床診斷檢測(cè)的需要。傳統(tǒng)的固相生物芯片(Biochip)技術(shù)存在著可重復(fù)性差、靈敏度不夠好以及操作繁瑣的突出弱點(diǎn)。因此臨床上需要有一種檢測(cè)方法，能夠迅速、穩(wěn)定、準(zhǔn)確地對(duì)前列腺疾病相關(guān)的特異基因進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，液相芯片(xMAP)技術(shù)正是這樣一種新型檢測(cè)技術(shù)。液相芯片又稱液態(tài)芯片，能夠?qū)ι倭繕颖具M(jìn)行定性、定量檢測(cè)，具有高通量、操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、靈敏度高、線性范圍寬等突出優(yōu)點(diǎn)。該系統(tǒng)是由許多微球?yàn)橹饕|(zhì)構(gòu)成的，在微球的制造過程當(dāng)中，摻入了兩種不同的紅色分類熒光，根據(jù)這兩種熒光的比例不同，把球形基質(zhì)分為100種，可以標(biāo)記上100種不同的探針分子，能同時(shí)對(duì)一個(gè)樣品中多達(dá) 100種不同的目標(biāo)分子進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)檢測(cè)物的不同，微球表面可以共價(jià)結(jié)合各種各樣的核酸檢測(cè)探針，在雜交反應(yīng)進(jìn)行時(shí)再加上熒光標(biāo)記。在同一反應(yīng)體系中可以同時(shí)加入不同的檢測(cè)微球，這樣就可以利用少量的樣本進(jìn)行快速、高通量的檢測(cè)。反應(yīng)結(jié)束后，通過微流體技術(shù)將微球排成單列快速流經(jīng)液相芯片檢測(cè)儀，每個(gè)微球可同時(shí)被兩束激光檢測(cè)到，紅色激光激發(fā)微球上的紅色分類熒光，將各個(gè)不同的反應(yīng)區(qū)分開來而定性；綠色激光則激發(fā)結(jié)合在待測(cè)樣本上的熒光標(biāo)記進(jìn)行定量。當(dāng)標(biāo)記好的待測(cè)樣本與特定微球上的探針結(jié)合在一起時(shí)，兩束激光所激發(fā)的光均可被檢測(cè)到。最后，通過計(jì)算機(jī)的高速數(shù)字信號(hào)處理器，可以自動(dòng)統(tǒng)計(jì)分析得出特定微球上的平均熒光強(qiáng)度，從而確定檢測(cè)物的種類和數(shù)量。本發(fā)明基于液相芯片技術(shù)的高通量、操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、靈敏度高、線性范圍寬等突出優(yōu)點(diǎn)，對(duì)CYP1A2的基因多態(tài)性進(jìn)行聯(lián)合并行檢測(cè)，能夠在實(shí)驗(yàn)和臨床檢測(cè)上得到更好的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是提供一種檢測(cè)CYP1A2基因多態(tài)性的液相芯片方法及檢測(cè)試劑盒。該方法及試劑盒包含對(duì)多種CYP1A2基因多態(tài)性的聯(lián)合檢測(cè)，并可以對(duì)藥物代謝方面和個(gè)性化用藥提供重要的參考依據(jù)。本檢測(cè)方法及試劑盒具有高靈敏度、高特異性、高準(zhǔn)確度、檢測(cè)迅速等優(yōu)點(diǎn)。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下在本發(fā)明的一方面，提供一種檢測(cè)CYP1A2基因多態(tài)性的液相芯片方法，包括以下步驟(1)包含多種不同熒光編碼的微球(Beads)(如羧基(-C00H)微球)，每種微球上分別共價(jià)結(jié)合針對(duì)CYP1A2的基因多態(tài)性位點(diǎn)所設(shè)計(jì)的特異性核酸探針；所述的CYP1A2 的基因多態(tài)性位點(diǎn)包含以下突變基因的任意一種或兩種或加上其它突變基因的組合 CYP1A2*1F(-163C > A)、CYP1A2*1D(_2467delT)；(2)針對(duì)CYP1A2的多種突變基因，分別設(shè)計(jì)上下游引物，其中一條引物含有生物素(Biotin)標(biāo)記；對(duì)不同的突變基因的DNA，通過PCR擴(kuò)增出相應(yīng)的產(chǎn)物；(3)將步驟⑴含有特異性核酸探針的微球與步驟Q)CYP1A2突變基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物混合雜交，加入鏈霉親和素-藻紅蛋白(Mi^ptavidin-PE)后，通過液相芯片xMAP 方法檢測(cè)熒光信號(hào)；(4)根據(jù)檢測(cè)到的熒光信號(hào)，從而確定檢測(cè)樣品中是否存在CYP1A2突變基因，并對(duì)其基因多態(tài)性進(jìn)行鑒定分型。以上檢測(cè)方法的步驟(1)中，所述的微球可以是平均直徑為5.6μπι，結(jié)合了不同熒光染料的聚苯烯微球，即顏色編碼微球(Color-coded beads) 0步驟(1)中，所述的共價(jià)結(jié)合于微球上的針對(duì)CYP1A2的基因多態(tài)性位點(diǎn)所設(shè)計(jì)的特異性核酸探針，包括如下序列，其中5’端含氨基修飾野生型CYPlA2*lF-wt :5，-AminolinkerC12 ATGCGTCCTGGGCCCACAGAG-3，，如 SEQ ID NO. 1 所示；突變型CYPlA2*lF-mut :5，-AminolinkerC12 ATGCGTCCTGTGCCCACAGAG-3，，如 SEQ ID NO. 2 所示；野生型CYPlA2*lD-wt :5，-AminolinkerC12 GTTGGGGTTCATGTGCCACAA-3，，如 SEQ ID N0. 3 所示；突變型CYPlA2*lD-mut :5，-AminolinkerC12 GTTGGGGTTCTGTGCCACAA-3，，如 SEQ ID N0. 4 所示；或者包含有上述序列或其互補(bǔ)序列的向5’端或/和3’端延長(zhǎng)的序列；或者與上述序列或其互補(bǔ)序列的同源性大于85%的序列；或者與上述序列的堿基互補(bǔ)序列；或者使用上述所有序列中的任意一種或一種以上的組合。步驟O)中，所述的針對(duì)CYP1A2的多種突變基因所設(shè)計(jì)的上下游引物，包括如下序列，其中上游引物5’端含生物素Biotin標(biāo)記CYP1A2*1F 上游引物 5，-biotin CAGCGTTCATGTTGGGAATCTT-3，，如 SEQ ID N0. 5 所示；下游引物 5’ -GCTGAGGGTTGAGATGGAGACAT-3，，如 SEQ ID N0. 6 所示；CYP1A2*1D 上游引物 5，_biotin AGGCTGAGGCAAGAGGATTGT-3，，如 SEQ ID N0. 7 所示；下游引物 5’ -AGGAGGAGGACAAGCCTTAAATTG-3，，如 SEQ ID N0. 8 所示；
或者包含有上述序列或其互補(bǔ)序列的向5’端或/和3’端延長(zhǎng)的序列；或者與上述序列或其互補(bǔ)序列的同源性大于85%的序列；或者與上述序列的堿基互補(bǔ)序列；或者使用上述所有序列中的任意一種或一種以上的組合。在本發(fā)明的另一方面，提供一種檢測(cè)CYP1A2基因多態(tài)性的試劑盒，包含共價(jià)結(jié)合了針對(duì)CYP1A2基因多態(tài)性位點(diǎn)的特異性探針的微球混合物、所述的CYP1A2突變基因的上下游引物、鏈霉親和素-藻紅蛋白和質(zhì)控品。以上試劑盒中所述的質(zhì)控品包含陽性對(duì)照和陰性對(duì)照，其中陽性對(duì)照為含有各種 CYP1A2基因多態(tài)性位點(diǎn)的質(zhì)粒的混合液；陰性對(duì)照為不含有CYP1A2基因多態(tài)性位點(diǎn)的質(zhì)粒溶液；所述的微球混合物，根據(jù)不同檢測(cè)樣品的需要自由組合。在本發(fā)明的另一方面，提供一種檢測(cè)CYP1A2基因多態(tài)性的試劑盒在檢測(cè)體外樣品中的應(yīng)用；以及通過檢測(cè)體外樣品，對(duì)藥物代謝方面及個(gè)性化用藥進(jìn)行指導(dǎo)中的應(yīng)用。由于本發(fā)明利用了液相芯片技術(shù)，使檢測(cè)方法及試劑盒具有高靈敏度、高特異性、 高通量、穩(wěn)定性好、檢測(cè)迅速、準(zhǔn)確等突出優(yōu)點(diǎn)，能夠?qū)YP1A2基因多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)和鑒定分型，能在實(shí)驗(yàn)和臨床檢測(cè)上得到更好的應(yīng)用。此外，本發(fā)明可以對(duì)藥物代謝方面及個(gè)性化用藥提供重要的參考依據(jù)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例詳細(xì)說明本發(fā)明，但并不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。所述的實(shí)施例只提供闡明核酸探針、試劑盒及其制作和應(yīng)用方法而不為其所限制。期間各種變化形式在本發(fā)明和所述的權(quán)項(xiàng)的范圍內(nèi)是可預(yù)期的。實(shí)驗(yàn)材料引物和探針均由invitrogen公司合成；DNA提取試劑盒QIAamp DNA Blood Mini Kit 和 Gentra Puregene Buccal Cell Kit、多重 Multiplex PCR 試劑盒、不同編號(hào)的微球 (表面羧基修飾)、鏈霉親和素-藻紅蛋白均購置于QIAGEN公司；1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)購置于Pierce公司；2-(N-嗎啉)-乙磺酸(MES)、 N-月桂酰基氨酸鈉(Sarkosyl)、四甲基氯化銨(TMAC)均購置于sigma公司。緩沖液和雜交液的配置偶聯(lián)緩沖液，PH4. 5250 ml
MES4. 88g ；
1.5XTMAC 雜交溶液250 ml
5M TMAC225 ml
20% Sarkosyl1. 88 ml
IM Tris-HCl, PH8. O18.75 ml
0. 5M EDTA PH8. 03. 0 ml
dH201. 37 ml ；
IX TMAC雜交溶液250 ml
5M TMAC150 ml
20% Sarkosyl1. 25 ml
IM Tris-HCl PH8. O12. 5 ml
0. 5M EDTA PH8. 02. 0 ml
dH2084. 25 ml ；
TE 緩沖液，PH8. 0500 ml
IM Tris-HCl PH8. 05 ml
0. 5M EDTA PH8. 01 ml
dH20444 ml實(shí)施例1 :CYP1A2基因多態(tài)性CYP1A2*1F(-163C > A)的液相芯片聯(lián)合檢測(cè)方法具體的檢測(cè)方法包括如下步驟一 .檢測(cè)CYP1A2基因多態(tài)性的微球混合液的制備1.按照以下序列合成寡核苷酸探針CYPlA2*lF-wt :5， -AminolinkerC12 ATGCGTCCTG(G)GCCCACAGAG-3，，如 SEQ ID NO. 1所示；CYPlA2*lF-mut :5，-AminolinkerC12 ATGCGTCCTG(T)GCCCACAGAG-3，，如 SEQ ID NO. 2所示；2.將以上含有氨基修飾的寡核苷酸探針分別與編號(hào)為11、15號(hào)的2種羧基微球 偶聯(lián)2. 1取出ー小份-20°C保存的新鮮干粉狀EDC平衡到室溫；2. 2用dH20分別溶解CYPlA2*lF-wt和CYPlA2*lF_mut的寡核苷酸探針，濃度為 ImMdnmol/U 1)；
2. 3分別全速渦旋編號(hào)為11、15號(hào)的2種羧基微球儲(chǔ)存懸液至少3min，產(chǎn)生均一的微球懸液；2. 4分別取2. 5 X IO6微球儲(chǔ)存懸液到2個(gè)離心管中；2. 5 10，000g，離心，l-2min ；2. 6移除上清液，用50 μ 1 0. IM MES, ρΗ4. 5的偶聯(lián)緩沖液，重懸微球，渦旋震蕩 20秒；2.7將2種濃度為ImM寡核苷酸探針分別用dH20以1 10的比例稀釋，使其濃度為 0. Inmol/μ 1 ；2. 8每種探針各加入2 μ 1 (濃度為0. Inmol/μ 1)到混勻的相應(yīng)的微球里，渦旋混合；2. 9用dH20配置10mg/ml的新鮮EDC溶液(注意保持EDC粉末干燥，便于下一步EDC的使用)；2.10加入2. 5μ1 10mg/ml EDC的新鮮EDC溶液分別到2種微球中Q5 μ g終濃度約為0. 5 μ g/ μ 1)渦旋混勻；2. 11室溫避光孵育30min ；2. 12用dH20配置第二份10mg/ml的EDC新鮮溶液(注意EDC粉末如果潮解，則應(yīng)丟棄，建議每一步偶聯(lián)過程都使用新鮮的EDC粉末)；2. 13 2種微球中各加入2. 5 μ 1 10mg/ml的EDC新鮮溶液，渦旋混勻；2. 14室溫避光孵育30min ；2. 15 2 種偶聯(lián)微球中各加入 Iml 0. 02% Tween-20 ；2. 16 10，000g,離心，l_2min ；2. 17移除上清，分別用Iml 0. 1 % SDS重懸2種偶聯(lián)微球，振蕩混勻；2. 18 10，000g,離心，l_2min ；2. 19移除上清，分別加入100 μ 1 TE, ΡΗ8. 0，渦旋混合20s,重懸微球；2. 20用細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)2種偶聯(lián)了寡核苷酸探針的微球；a.用dH20將偶聯(lián)微球以1 100稀釋；b.渦旋震蕩充分混勻；c.取10 μ 1到細(xì)胞計(jì)數(shù)器上；d.數(shù)細(xì)胞計(jì)數(shù)器上4個(gè)角大格的微球總量；e.微球/ μ 1 = (4大格微球總量)X 2. 5 X 100(稀釋倍數(shù))。3.微球混合液的配置將上述偶聯(lián)了寡核苷酸探針的微球，如下列CYPlA2*lF_wt探針微球11和 CYPlA2*lF-mut探針微球15，等比例混合，各種微球的終濃度為1500個(gè)/ μ 1，2_8°C避光保存。二 .樣本的制備1-10號(hào)樣本為中國人外周靜脈血(EDTA或肝素抗凝)或唾液及口腔粘膜采集的樣本。對(duì)于外周靜脈血(EDTA或肝素抗凝)樣本，按照QIAGEN公司的QIAamp DNA Blood Mini Kit試劑盒的說明提取DNA。對(duì)于唾液及口腔粘膜采集的樣本，按照QIAGEN公司的Gentra PuregeneBuccal Cell Kit 試劑盒的說明提取 DNA。
三.多重PCR按照如下方法對(duì)上述的1-10號(hào)樣本的DNA進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增1.按照如下序列合成引物CYP1A2*1F 上游引物 5，-biotin CAGCGTTCATGTTGGGAATCTT-3，，如 SEQ ID NO. 5 所示；下游引物 5’ -GCTGAGGGTTGAGATGGAGACAT-3，，如 SEQ ID NO. 6 所示；2.多重PCR反應(yīng)采用的是QIAGEN公司的多重Multiplex PCR試劑盒，體系如下
Template DNA或陽性及陰性對(duì)照DNA10μ1
2 X QIAGEN Multiplex PCR Master Mix25μ1
IOXPrimer mix5M-I
RNase-free water10M-1
終體積為50 μ (2 X QIAGEN Multiplex PCR Master Mix 中含熱啟動(dòng) TaqDNA 酶、MgCl2 和 dNTP Mix。)PCR 擴(kuò)增程序95°C 15min ；94°C 30s, 55°C 90s, 72V 90s, 35 個(gè)循環(huán)；72°C IOmin ； 4°C保溫。四.寡核苷酸探針和PCR產(chǎn)物的雜交1.選取步驟一中配置的寡核苷酸探針微球混合物；2.渦旋震蕩20s，混勻微球；3.制備微球工作液，用1. 5 X TMAC雜交溶液稀釋偶聯(lián)微球至濃度為150個(gè)微球/ μ 1。(注每個(gè)反應(yīng)需要33 μ 1的微球工作液)；4.渦旋震蕩20s，混勻微球工作液；5.向樣本孔、陽性對(duì)照孔、陰性對(duì)照孔內(nèi)分別加入33μ 1微球工作液；6.向每個(gè)樣品孔內(nèi)分別加入1-10號(hào)臨床樣本、陽性及陰性對(duì)照的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物和 TE溶液(PH為8. 0)，總體積為17 μ 1 ；7.用排槍上下吸打，溫柔混勻反應(yīng)液；8.蓋上反應(yīng)蓋避免蒸發(fā)，在95-100°C下孵育Umin，使樣品中的寡核苷酸去掉二級(jí)結(jié)構(gòu)；9.在雜交溫度下孵育反應(yīng)板15min ；10.制備新鮮的檢測(cè)混合液，用IXTMAC雜交溶液稀釋鏈霉親和素藻紅蛋白溶液至10 μ g/ml (每個(gè)反應(yīng)需要25 μ 1的檢測(cè)混合液)；11.向每孔加入25 μ 1的檢測(cè)混合液，用排槍上下吸打，溫柔混勻；12.在雜交溫度下孵育5min ；上述步驟可以通過PCR儀按以下方案編程將其合并95°C, l-3min ；雜交溫度，forever；
13.在液相芯片儀(Luminex)上，保持雜交溫度，對(duì)各反應(yīng)孔進(jìn)行檢測(cè)分析，測(cè)定熒光MFI值。五.檢測(cè)結(jié)果及分析檢測(cè)結(jié)果(熒光MFI值)如表1所示表 權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)CYP1A2基因多態(tài)性的液相芯片方法，其特征在于，包括以下步驟(1)包含多種不同熒光編碼的微球Beads，每種微球上分別共價(jià)結(jié)合針對(duì)CYP1A2的基因多態(tài)性位點(diǎn)所設(shè)計(jì)的特異性核酸探針；所述的CYP1A2的基因多態(tài)性位點(diǎn)包含以下突變基因的任意一種或兩種或加上其它突變基因的組合CYP1A2*1F(-163C > A)、 CYPlA2*lD(-2467delT)；(2)針對(duì)CYP1A2的多種突變基因，分別設(shè)計(jì)上下游引物，其中一條引物含有生物素 Biotin標(biāo)記；對(duì)不同的突變基因的DNA，通過PCR擴(kuò)增出相應(yīng)的產(chǎn)物；(3)將步驟(1)含有特異性核酸探針的微球與步驟0)CYP1A2突變基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物混合雜交，加入鏈霉親和素-藻紅蛋白Mi^ptavidin-PE后，通過液相芯片xMAP方法檢測(cè)熒光信號(hào)；(4)根據(jù)檢測(cè)到的熒光信號(hào)，從而確定檢測(cè)樣品中是否存在CYP1A2突變基因，并對(duì)其基因多態(tài)性進(jìn)行鑒定分型。
2.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)CYP1A2基因多態(tài)性的液相芯片方法，其特征在于，步驟 (1)中，所述的微球是一種顏色編碼微球Color-coded Beads，且結(jié)合了不同熒光染料的聚苯烯微球。
3.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)CYP1A2基因多態(tài)性的液相芯片方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的共價(jià)結(jié)合于微球上的針對(duì)CYP1A2的基因多態(tài)性位點(diǎn)所設(shè)計(jì)的特異性核酸探針，包括如下序列，其中5’端含氨基修飾野生型 CYPlA2*lF-wt :5’ -AminolinkerC12ATGCGTCCTGGGCCCACAGAG_3，，如 SEQ ID NO. 1所示；突變型 CYPlA2*lF-mut :5’ -AminolinkerC12ATGCGTCCTGTGCCCACAGAG_3，，如 SEQ ID NO. 2所示；野生型 CYPlA2*lD-wt :5，-AminolinkerC12GTTGGGGTTCATGTGCCACAA_3，，如 SEQ ID NO. 3所示；突變型 CYPlA2*lD-mut :5，-AminolinkerC12GTTGGGGTTCTGTGCCACAA_3，，如 SEQ ID NO. 4所示或者包含有上述序列或其互補(bǔ)序列的向5’端或/和3’端延長(zhǎng)的序列； 或者與上述序列或其互補(bǔ)序列的同源性大于85%的序列； 或者與上述序列的堿基互補(bǔ)序列； 或者使用上述所有序列中的任意一種或一種以上的組合。
4.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)CYP1A2基因多態(tài)性的液相芯片方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的針對(duì)CYP1A2的多種突變基因所設(shè)計(jì)的上下游引物，包括如下序列，其中上游引物5’端含生物素Biotin標(biāo)記CYP1A2*1F 上游引物 5，-biotin CAGCGTTCATGTTGGGAATCTT-3，，如 SEQ ID NO. 5 所示; 下游引物 5，-GCTGAGGGTTGAGATGGAGACAT-3，，如 SEQ ID NO. 6 所示；CYP1A2*1D 上游引物 5，-biotin AGGCTGAGGCAAGAGGATTGT-3，，如 SEQ ID NO. 7 所示； 下游引物 5，-AGGAGGAGGACAAGCCTTAAATTG-3，，如 SEQ ID NO. 8 所示；或者包含有上述序列或其互補(bǔ)序列的向5’端或/和3’端延長(zhǎng)的序列； 或者與上述序列或其互補(bǔ)序列的同源性大于85%的序列；或者與上述序列的堿基互補(bǔ)序列；或者使用上述所有序列中的任意一種或一種以上的組合。
5.一種檢測(cè)CYP1A2基因多態(tài)性的試劑盒，其特征在于，包含權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)中所述的共價(jià)結(jié)合了針對(duì)CYP1A2基因多態(tài)性位點(diǎn)的特異性探針的微球混合物、權(quán)利要求1-4 任一項(xiàng)中所述的CYP1A2突變基因的上下游引物、鏈霉親和素-藻紅蛋白和質(zhì)控品。
6.如權(quán)利要求5所述的檢測(cè)CYP1A2基因多態(tài)性的試劑盒，其特征在于，所述的微球混合物，根據(jù)不同檢測(cè)樣品的需要自由組合。
7.如權(quán)利要求5所述的檢測(cè)CYP1A2基因多態(tài)性的試劑盒，其特征在于，所述的質(zhì)控品包含陽性對(duì)照和陰性對(duì)照，其中陽性對(duì)照為含有各種CYP1A2基因多態(tài)性位點(diǎn)的質(zhì)粒的混合液；陰性對(duì)照為不含有CYP1A2基因多態(tài)性位點(diǎn)的質(zhì)粒溶液。
8.一種如權(quán)利要求5-7任一項(xiàng)所述的檢測(cè)CYP1A2基因多態(tài)性的試劑盒在檢測(cè)體外樣品中的應(yīng)用。
9.一種如權(quán)利要求5-7任一項(xiàng)所述的檢測(cè)CYP1A2基因多態(tài)性的試劑盒通過檢測(cè)體外樣品，對(duì)藥物代謝方面及個(gè)性化用藥進(jìn)行指導(dǎo)中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種CYP1A2基因多態(tài)性的液相芯片檢測(cè)方法及檢測(cè)試劑盒，通過對(duì)CYP1A2基因多態(tài)性CYP1A2*1F(-163C＞A)、CYP1A2*1D(-2467delT)設(shè)計(jì)引物和探針，將探針與微球共價(jià)結(jié)合形成的探針微球混合物，與PCR擴(kuò)增產(chǎn)物雜交，加入鏈霉親和素藻紅蛋白后，可檢測(cè)出不同微球的熒光信號(hào)，從而確定待檢測(cè)樣品中CYP1A2基因多態(tài)性的類型。本發(fā)明所述的方法及試劑盒具有高靈敏度、高通量性、檢測(cè)快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，能夠?qū)YP1A2基因多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)和鑒定分型，同時(shí)為藥物代謝方面及個(gè)性化用藥提供重要的參考依據(jù)。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102399899SQ201110407798
公開日2012年4月4日 申請(qǐng)日期2011年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月9日
發(fā)明者李玲, 涂文娟, 鄧景人, 邵棠, 陳慶 申請(qǐng)人:邵棠