專利名稱：一種復(fù)合菌漿液、其生產(chǎn)方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物應(yīng)用領(lǐng)域，具體地說(shuō)是一種復(fù)合菌漿液、其生產(chǎn)方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前，我國(guó)從事氨基酸生產(chǎn)的企業(yè)近百家，年產(chǎn)量已超過(guò)300萬(wàn)噸。氨基酸的生產(chǎn)原料主要為玉米、大米；年消耗量432. 6萬(wàn)噸，每生產(chǎn)一噸氨基酸就產(chǎn)生7-10噸廢漿液。氨基酸廢漿液中含有大量的碳水化合物、有機(jī)雜酸和蛋白質(zhì)等有機(jī)污染物，直接排放會(huì)污染環(huán)境，而要處理達(dá)標(biāo)后再排放則需要高昂費(fèi)用，已成為阻礙氨基酸生產(chǎn)行業(yè)發(fā)展的重要問(wèn)題。如何使氨基酸廢漿液得到充分地回收利用，已成為本領(lǐng)域技術(shù)人員渴望解決的技術(shù)問(wèn)題。類球紅細(xì)菌(Iihodobacter sphaeroides)屬于細(xì)菌域中紫色細(xì)菌群的α亞群，具有廣泛的代謝方式，可以在多種生長(zhǎng)條件下生長(zhǎng)。如它具有廣泛的能量代謝機(jī)制，包括光合作用、無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)、好氧和厭氧呼吸等。它還可以固定氮分子，合成重要生物活性物質(zhì)四吡咯(tetrapyrroles)、葉綠素(chlorophylls)、血紅素(heme)、維生素B12等。大量研究文獻(xiàn)表明，類球紅細(xì)菌已經(jīng)成為一種非常有工業(yè)化開(kāi)發(fā)潛力的微生物。屬于農(nóng)業(yè)部菌種分類中一級(jí)安全菌種。多粘芽孢桿菌(Paenikicillus polymyxa)原屬于芽孢桿菌屬，隨著研究的深入， 1993年Ash等將其從芽孢桿菌屬中獨(dú)立出來(lái)，定為類芽孢桿菌屬。它具有有機(jī)營(yíng)養(yǎng)、無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)、兼性厭氧生長(zhǎng)的能量代謝機(jī)制，主要代謝產(chǎn)物如多粘抗菌素、吲哚乙酸、苯丙氨酸等有機(jī)化合物，對(duì)農(nóng)作物有極好的促進(jìn)生長(zhǎng)和土傳病害的防治作用，我國(guó)農(nóng)業(yè)部把其分類為一級(jí)安全菌種。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)任務(wù)是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種類球紅細(xì)菌與多粘芽孢桿菌的復(fù)合菌漿液，該復(fù)合菌漿液以氨基酸廢漿液為發(fā)酵基發(fā)酵制得，可以使氨基酸廢漿液得到充分地回收利用。本發(fā)明第二個(gè)技術(shù)任務(wù)是提供上述復(fù)合菌漿液的生產(chǎn)方法；本發(fā)明第三個(gè)技術(shù)任務(wù)是提供上述復(fù)合菌漿液的應(yīng)用。本發(fā)明所使用的類球紅細(xì)菌(Rhodobacter sphaeroides)菌株已于2010年 4月20日保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為=CGMCC No. 3757，保藏單位地址北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編100101。該菌株的16S rDNA序列信息已遞交到GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)，登錄號(hào)為E似63643。本發(fā)明所使用的多粘芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa)菌株已于2008年2月 26日保藏在中國(guó)微生物菌種保藏委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC No. 2377，保藏單位地址北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編100101。該菌株的16S rDNA序列信息已遞交到GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)，登錄號(hào)為EFM5556。
本發(fā)明的復(fù)合菌漿液，是以氨基酸廢漿液為發(fā)酵基發(fā)酵制得的，多粘類芽孢桿菌按6%的接種量、類球紅細(xì)菌按4%的接種量接種，在PH6. 5 7. 0、30°C 34°C和需氧條件下發(fā)酵Mh，即可得到上述復(fù)合菌漿液，所述復(fù)合菌漿液中多粘類芽孢桿菌含量》5X109CFU/ml ；類球紅細(xì)菌含量彡 3X109CFU/ml。上述復(fù)合菌漿液具體的生產(chǎn)方法將氨基酸生產(chǎn)中所產(chǎn)生的廢漿液調(diào)整pH至 6. 5 7. 0，經(jīng)121°C滅菌30min后，降溫至30°C 進(jìn)行菌種接種，多粘類芽孢桿菌按6%的接種量、類球紅細(xì)菌按4%的接種量接種，控制溫度30°C 34°C，以體積比每分鐘 0. 5 1. 0的通氣量通入凈化空氣，并以80-100r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，發(fā)酵24h即得復(fù)合菌漿液，所得復(fù)合菌漿液中多粘類芽孢桿菌含量》5X109CFU/ml ；類球紅細(xì)菌含量彡 3X109CFU/ml。具體地說(shuō)，上述復(fù)合菌漿液的生產(chǎn)方法包括(1)多粘類芽孢桿菌液體菌種制備所用液體培養(yǎng)基配制方法(以IOOOml為例)稱取土豆100g，切塊，并放入純凈水中沸煮30min，過(guò)濾，取濾液，加純凈水定容至1000ml，加入葡萄糖10g、磷酸氫二鉀2. 5g、磷酸二氫鉀1. 5g，用乙酸或氫氧化鈉調(diào)pH 6. 5 7. 0，121°C滅菌30min ；降溫至30°C
時(shí)，接菌種上搖床調(diào)溫30°C 32°C震蕩培養(yǎng)；搖床轉(zhuǎn)速100-120r/min，培養(yǎng)Mh，制成液體菌種，菌液中多粘類芽孢桿菌含量彡lX1010CFU/ml ；(2)類球紅細(xì)菌液體菌種制備所用液體培養(yǎng)基配制方法(以IOOOml為例)在蒸餾水中加入硫酸銨lg、硫酸鎂 200mg、硫酸亞鐵lOOmg、硫酸錳5mg、硫酸鋅60mg、硫酸銅％ig、磷酸二氫鉀600mg、磷酸氫二鉀900mg、氯化鈣75mg、硼酸:3mg、鉬酸鈉lmg、維生素B1、 煙酸各lmg、乙酸鈉3g，用乳酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6. 5 7. 0,121°C滅菌30min ；降溫至30°C 接種上搖床，調(diào)溫 30°C 32°C震蕩培養(yǎng)；搖床轉(zhuǎn)速100-120r/min，培養(yǎng)Mh，制成液體菌種，菌液中類球紅細(xì)菌含量彡5X109CFU/ml。(3)復(fù)合菌漿液制備將氨基酸生產(chǎn)中產(chǎn)生的廢漿液裝入100L種子培養(yǎng)罐至70L，調(diào)pH至6. 5 7. 0， 121°C滅菌30min;降溫至30°C 34°C接種，多粘類芽孢桿菌按6%的接種量、類球紅細(xì)菌按 4%的接種量接種，以體積比每分鐘0. 5 1. 0的通氣量通入凈化空氣，并以80-100r/min 的轉(zhuǎn)速攪拌，發(fā)酵Mh，所得混合菌種中多粘類芽孢桿菌含量> 5X109CFU/ml ；類球紅細(xì)菌含量彡 3X109CFU/ml, pH 值 7. 5 8. 5。放大發(fā)酵將氨基酸生產(chǎn)中產(chǎn)生的廢漿液裝入1000L發(fā)酵罐至700L，調(diào)pH至 6. 0 6. 5，121 °C滅菌30min ；降溫至30°C 32°C，將100L種子培養(yǎng)罐中發(fā)酵好的混合菌種轉(zhuǎn)入1000L發(fā)酵罐中，以體積比每分鐘為0. 5 1. 0的通氣量通入無(wú)菌空氣，并以SO-IOOr/ min的轉(zhuǎn)速攪拌，發(fā)酵Mh，所得復(fù)合菌漿液中多粘類芽孢桿菌含量> 5X109CFU/ml ；類球紅細(xì)菌含量彡3X109CFU/ml ；pH值7. 5 8. 5。復(fù)合菌漿液中含有大量多粘類芽孢桿菌和類球紅細(xì)菌。多粘類芽孢桿菌具有抑制沙門(mén)氏菌、葡萄球菌、大腸桿菌等有害菌生長(zhǎng)的特性；而類球紅細(xì)菌具有促進(jìn)放線菌、光合細(xì)菌、酵母菌、乳酸菌等益生菌群增殖的特性，利用兩種菌的互不拮抗、互不抑制的共生特征和協(xié)同作用，特別適合在養(yǎng)殖水體的凈化領(lǐng)域中的應(yīng)用。在將上述復(fù)合菌漿液用于凈化養(yǎng)殖水體時(shí)，可以直接將其投入水池等養(yǎng)殖水體。 但為了更好的延長(zhǎng)保存期菌活力和效能發(fā)揮，可以制成復(fù)合微生物顆粒劑，優(yōu)選以下方式以復(fù)合菌漿液為原料，生產(chǎn)用于養(yǎng)殖水體凈化的復(fù)合微生物顆粒劑，該顆粒劑含有多粘芽孢桿菌3X 108CFU/g以上，類球紅細(xì)菌2X 108CFU/g以上，所述顆粒劑的具體生產(chǎn)方法為(1)將權(quán)利要求1所述復(fù)合菌漿液與60-100目的沸石粉按重量比0. 1 0. 5 1 攪拌混合均勻，做成沸石粉與菌漿液混合的散狀混合物；將上述散狀混合物送入造粒機(jī)制成Φ2 Φ5πιπι顆粒，在50°C 60°C下干燥至水分含量小于20%時(shí)即得復(fù)合微生物顆粒劑成品。復(fù)合菌漿液中含有大量多粘類芽孢桿菌和類球紅細(xì)菌。多粘類芽孢桿菌具有抑制青枯病原菌和有害真菌的特性；而類球紅細(xì)菌具有促進(jìn)土壤放線菌、光合細(xì)菌、酵母菌、乳酸菌等益生菌群增殖的特性，兩種菌的協(xié)同作用，特別適合在制備生物有機(jī)肥的領(lǐng)域中的應(yīng)用。上述復(fù)合菌漿液可以用于制備各種液態(tài)肥、粉狀沖施肥等，但為了更好的促進(jìn)有效菌群的活力和效能發(fā)揮，優(yōu)選以下方式以復(fù)合菌漿液為原料，生產(chǎn)復(fù)合微生物有機(jī)肥顆粒，具體生產(chǎn)方法為(1)將有機(jī)肥料干粉與權(quán)利要求1所述復(fù)合菌漿液以重量比1 0. 1 0. 5比例混合均勻，做成散狀混合物；(2)將上述散狀混合物送入造粒機(jī)制成Φ2 Φ5πιπι顆粒，在50°C 60°C下干燥至水分含量小于20%時(shí)即得復(fù)合微生物有機(jī)肥顆粒成品。上述有機(jī)肥干粉由以下方式制得將腐植酸、沸石粉、肉骨粉、干牛糞以5 :2:1: 2的重量比混合，粉碎至50-100 目，即得所述有機(jī)肥料干粉；或者將腐植酸、沸石粉、肉骨粉或羽毛粉、干羊糞或干雞鴨糞以2 :4:1: 3的重量比混合，粉碎至50-100目，即得所述有機(jī)肥料干粉。本發(fā)明的復(fù)合菌漿液、其生產(chǎn)方法及其應(yīng)用與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下突出的有益效果(一 )以氨基酸生產(chǎn)中所產(chǎn)生的廢漿液為發(fā)酵基生產(chǎn)多粘類芽孢桿菌和類球紅細(xì)菌的復(fù)合菌漿液，變廢為寶，使氨基酸廢漿液得到充分地回收利用，節(jié)能環(huán)保，具有巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。( 二)將本發(fā)明的復(fù)合菌漿液應(yīng)用于凈化養(yǎng)殖水體，能夠抑制水體病原菌滋生，降解水體氨氮、硫化氫、亞硝酸鹽等有害物質(zhì)，提高水產(chǎn)養(yǎng)殖物種的成活率，對(duì)水產(chǎn)健康養(yǎng)殖發(fā)展有著積極的推動(dòng)作用，并對(duì)資源化利用促進(jìn)生態(tài)環(huán)境建設(shè)有深遠(yuǎn)的意義。適用于河蟹、 海參、對(duì)蝦、泥鰍、黑魚(yú)、黃顙魚(yú)等高密度養(yǎng)殖水體的凈化。
(三)將本發(fā)明的復(fù)合菌漿液應(yīng)用于生產(chǎn)有機(jī)肥料，能夠促進(jìn)作物對(duì)養(yǎng)分的吸收和利用，減少化肥的使用量，從而改善農(nóng)田環(huán)境質(zhì)量，提高農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)。


附圖1是本發(fā)明方法所制備復(fù)合微生物顆粒劑所做對(duì)比實(shí)驗(yàn)(實(shí)驗(yàn)例一)的效果圖；附圖2是本發(fā)明方法所制備復(fù)合微生物顆粒劑所做對(duì)比實(shí)驗(yàn)(實(shí)驗(yàn)例二 )的效果圖；附圖3是本發(fā)明方法所制備復(fù)合微生物顆粒劑所做對(duì)比實(shí)驗(yàn)(實(shí)驗(yàn)例三)的效果圖；附圖4是本發(fā)明方法所制備有機(jī)肥顆粒所做對(duì)比實(shí)驗(yàn)(實(shí)驗(yàn)例四)的效果圖；附圖5是本發(fā)明方法所制備有機(jī)肥顆粒所做對(duì)比實(shí)驗(yàn)(實(shí)驗(yàn)例五)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果圖。
具體實(shí)施例方式以具體制備實(shí)施例、實(shí)驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明的復(fù)合菌漿液、其生產(chǎn)方法及其應(yīng)用作以下詳細(xì)地說(shuō)明。制備實(shí)施例一以取自江蘇漢光生物工程有限公司的氨基酸廢漿液為原料。廢漿液中主要含有碳水化合物、有機(jī)酸、蛋白質(zhì)、氨基酸、B族維生素、氮、磷、鉀等多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，總固形物含量 6. 7%。生產(chǎn)步驟(1)多粘類芽孢桿菌液體菌種制備所用液體培養(yǎng)基配制方法(以IOOOml為例)稱取土豆100g，切成Icm方塊放入 IOOOml純凈水中沸煮30min，過(guò)濾，取濾液，加純凈水定容至1000ml，加入葡萄糖10g、磷酸氫二鉀2. 5g、磷酸二氫鉀1. 5g，用乙酸或氫氧化鈉調(diào)pH6. 5 7. 0，121°C滅菌30min ；降溫至31°C時(shí)，接菌種上搖床調(diào)溫30°C震蕩培養(yǎng)；搖床轉(zhuǎn)速llOr/min，培養(yǎng)Mh，制成液體菌種， 菌液中多粘類芽孢桿菌含量彡lX1010CFU/mL·(2)類球紅細(xì)菌液體菌種制備所用液體培養(yǎng)基配制方法(以IOOOml為例)在IOOOml蒸餾水中加入硫酸銨lg、 硫酸鎂200mg、硫酸亞鐵lOOmg、硫酸錳5mg、硫酸鋅60mg、硫酸銅％ig、磷酸二氫鉀600mg、 磷酸氫二鉀900mg、氯化鈣75mg、硼酸:3mg、鉬酸鈉lmg、維生素B1, B6煙酸各lmg、乙酸鈉 3g，用乳酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6. 5 7. 0，121°C滅菌30min ；降溫至31°C接種上搖床， 調(diào)溫30°C震蕩培養(yǎng)；搖床轉(zhuǎn)速llOr/min，培養(yǎng)Mh，制成液體菌種，菌液中類球紅細(xì)菌含量彡 5X109CFU/ml。(3)復(fù)合菌漿液制備將氨基酸廢漿液裝入100L種子培養(yǎng)罐至70L，用氫氧化鈉調(diào)pH至6. 5 7. 0， 121°C滅菌30min;降溫至31°C接種，多粘類芽孢桿菌按6%的接種量、類球紅細(xì)菌按4%的接種量接種，以體積比每分鐘0. 7的通氣量通入凈化空氣，并以90r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，發(fā)酵Mh，所得混合菌種中多粘類芽孢桿菌含量彡5X 109CFU/ml ；類球紅細(xì)菌含量彡3X IO9CFU/ ml, pH 值 7. 5 8. 5。放大發(fā)酵將氨基酸廢漿液裝入1000L發(fā)酵罐至700L，用氫氧化鈉調(diào)pH至 6. 0 6. 5，121°C滅菌30min ；降溫至30°C，將100L種子培養(yǎng)罐中發(fā)酵好的混合菌種轉(zhuǎn)入 1000L發(fā)酵罐中，以體積比每分鐘為0. 7的通氣量通入無(wú)菌空氣，并以90r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，發(fā)酵Mh，所得復(fù)合菌漿液中多粘類芽孢桿菌含量> 5X109CFU/ml ；類球紅細(xì)菌含量彡 3 X 109CFU/ml ；pH 值 7. 5 8. 5。制備實(shí)施例二 生產(chǎn)步驟(1)多粘類芽孢桿菌液體菌種制備所用液體培養(yǎng)基配制方法(以IOOOml為例)稱取土豆100g，切成Icm方塊放入 IOOOml蒸餾水中沸煮30min，過(guò)濾，取濾液，加水定容至1000ml，加入葡萄糖10g、磷酸氫二鉀2. 5g、磷酸二氫鉀1. 5g，用氫氧化鈉調(diào)pH 6. 5 7. 0，121°C滅菌30min ；降溫至?xí)r， 接菌種上搖床調(diào)溫32°C震蕩培養(yǎng)；搖床轉(zhuǎn)速llOr/min，培養(yǎng)Mh，制成液體菌種，菌液中多粘類芽孢桿菌含量彡lX1010CFU/ml ；(2)類球紅細(xì)菌液體菌種制備所用液體培養(yǎng)基配制方法(以IOOOml為例)在IOOOml蒸餾水中加入硫酸銨lg、 硫酸鎂200mg、硫酸亞鐵lOOmg、硫酸錳5mg、硫酸鋅60mg、硫酸銅％ig、磷酸二氫鉀600mg、 磷酸氫二鉀900mg、氯化鈣75mg、硼酸:3mg、鉬酸鈉lmg、維生素B1, B6煙酸各lmg、乙酸鈉 3g，用乳酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6. 5 7. 0，121°C滅菌30min ；降溫至:34°C接種上搖床， 調(diào)溫32°C震蕩培養(yǎng)；搖床轉(zhuǎn)速llOr/min，培養(yǎng)Mh，制成液體菌種，菌液中類球紅細(xì)菌含量彡 5X109CFU/ml。(3)復(fù)合菌漿液制備將氨基酸廢漿液裝入100L種子培養(yǎng)罐至70L，用氫氧化鈉調(diào)pH至6. 5 7. 0， 121°C滅菌30min;降溫至34°C接種，多粘類芽孢桿菌按6%的接種量、類球紅細(xì)菌按4%的接種量接種，以體積比每分鐘0. 9的通氣量通入凈化空氣，并以90r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，發(fā)酵 Mh，所得混合菌種中多粘類芽孢桿菌含量彡5X 109CFU/ml ；類球紅細(xì)菌含量彡3X IO9CFU/ ml, pH 值 7. 5 8. 5。放大發(fā)酵將氨基酸廢漿液裝入1000L發(fā)酵罐至700L，用氫氧化鈉調(diào)pH至 6. 0 6. 5，121°C滅菌30min ；降溫至32°C，將100L種子培養(yǎng)罐中發(fā)酵好的混合菌種轉(zhuǎn)入 1000L種子罐中，以體積比每分鐘為0.8的通氣量通入無(wú)菌空氣，并以90r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，發(fā)酵Mh，所得復(fù)合菌漿液中多粘類芽孢桿菌含量> 5X 109CFU/ml ；類球紅細(xì)菌含量彡 3 X 109CFU/ml ；pH 值 7. 5 8. 5。制備實(shí)施例三以復(fù)合菌漿液為原料，生產(chǎn)用于養(yǎng)殖水體凈化的復(fù)合微生物顆粒劑。配方復(fù)合菌漿液(制備實(shí)施例一制得) Ikg ；沸石粉(80目)7kg。制備步驟
(1)將上述配方量的復(fù)合菌漿液與沸石粉攪拌混合均勻，做成沸石粉與菌漿液混合的散狀混合物；(2)將上述散狀混合物送入造粒機(jī)制成Φ2 Φ5πιπι顆粒，在50°C下干燥至水分含量小于20%時(shí)即得復(fù)合微生物顆粒劑成品。所得顆粒劑含有多粘芽孢桿菌彡3X 108CFU/g，類球紅細(xì)菌彡2X 108CFU/g。制備實(shí)施例四以復(fù)合菌漿液為原料，生產(chǎn)有機(jī)肥顆粒。配方有機(jī)肥干粉IOkg ；復(fù)合菌漿液(制備實(shí)施例一制得)^g。有機(jī)肥干粉是以腐植酸、沸石粉、肉骨粉、干牛糞以5 :2:1: 2的重量比混合， 并粉碎至80目所得。生產(chǎn)步驟(1)將上述配方量的有機(jī)肥料干粉與復(fù)合菌漿液混合均勻，做成散狀混合物；(2)將上述散狀混合物送入造粒機(jī)制成Φ2 Φ5πιπι顆粒，在55°C下干燥至水分含量小于20%時(shí)即得復(fù)合微生物有機(jī)肥顆粒成品。所得有機(jī)肥顆粒中含有多粘芽孢桿菌彡3X 108CFU/g，類球紅細(xì)菌彡2X 108CFU/g。制備實(shí)施例五以復(fù)合菌漿液為原料，生產(chǎn)有機(jī)肥顆粒。配方有機(jī)肥干粉IOkg ；復(fù)合菌漿液(制備實(shí)施例一制得)4kg。有機(jī)肥干粉是將腐植酸、沸石粉、羽毛粉、干羊糞以2 :4:1: 3的重量比混合， 并粉碎至80目所得。生產(chǎn)步驟(1)將上述配方量的有機(jī)肥料干粉與復(fù)合菌漿液混合均勻，做成散狀混合物；(2)將上述散狀混合物送入造粒機(jī)制成Φ2 Φ5πιπι顆粒，在55°C下干燥至水分含量小于20%時(shí)即得復(fù)合微生物有機(jī)肥顆粒成品。所得有機(jī)肥顆粒中含有多粘芽孢桿菌彡3X 108CFU/g，類球紅細(xì)菌彡2X 108CFU/g。實(shí)驗(yàn)例一；以制備實(shí)施例三所得復(fù)合微生物顆粒劑進(jìn)行水體凈化實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)時(shí)間2010年5月19日 6月20日實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)宜興市高塍鎮(zhèn)蟹塘實(shí)驗(yàn)蟹塘水深90cm，5月19日投放復(fù)合微生物顆粒劑m2的用量為3g，6月5日又投放同等量的顆粒劑。試驗(yàn)期共投放2次。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如表一所示。項(xiàng)目名稱_養(yǎng)殖水體水質(zhì)指標(biāo)的變化
_總體變化趨勢(shì)_平均變化幅度
COD 降低 41.8% 溶解氧升高 41.6% 硫化氫降低 53.5%-88.6% 氨氮降低 49%-71.2% 亞硝酸氮__72%-91.6%
0103] 表一實(shí)驗(yàn)前后(30天)效果圖片見(jiàn)附圖一。實(shí)驗(yàn)例二 ；以制備實(shí)施例三所得復(fù)合微生物顆粒劑進(jìn)行水體凈化實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)時(shí)間:2010.4. 20-8. 28實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)山東海陽(yáng)行村對(duì)蝦養(yǎng)殖池塘實(shí)驗(yàn)蟹塘水深100cm，復(fù)合微生物顆粒劑m2的用量為5g。4. 20日、5. 20日、6. 22 日、7. 19日共投放四次；用量相同。實(shí)驗(yàn)前后(一周)效果圖片見(jiàn)附圖二。實(shí)驗(yàn)例三；以制備實(shí)施例三所得復(fù)合微生物顆粒劑進(jìn)行水體凈化實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)時(shí)間:2010.6. 6-8. 10實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)江蘇贛榆的泥鰍養(yǎng)殖塘實(shí)驗(yàn)塘水深100cm，復(fù)合微生物顆粒劑m2的用量為5g。6.6日、7. 10日同等量投放2次。實(shí)驗(yàn)前后(10天)效果圖片見(jiàn)附圖三。實(shí)驗(yàn)例四以制備實(shí)施例四所得有機(jī)肥顆粒及市售的周天牌生物有機(jī)肥進(jìn)行對(duì)甜瓜種植比實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)宜興市徐舍鎮(zhèn)時(shí)間2010. 4. 17-7. 12壤質(zhì)黃棕壤保護(hù)地實(shí)驗(yàn)方法共設(shè)3個(gè)實(shí)驗(yàn)小區(qū)；3個(gè)對(duì)照小區(qū)，每小區(qū)20平方米。每個(gè)實(shí)驗(yàn)小區(qū)施入制備實(shí)施例四所得有機(jī)肥顆粒20kg，對(duì)照組每個(gè)小區(qū)施入市售的周天牌生物有機(jī)肥20kg，施入后同時(shí)翻耕于4. 17日栽苗。于2010年7月12日大小甜瓜一次性摘完稱量計(jì)算產(chǎn)量，結(jié)果如下對(duì)照組平均每小區(qū)產(chǎn)量為39. 7kg ；實(shí)驗(yàn)組平均每小區(qū)產(chǎn)量為53. ^ig,平均比對(duì)照提高產(chǎn)量35 %，達(dá)到極顯著增產(chǎn)水平。對(duì)比實(shí)驗(yàn)效果如附圖四所示。
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實(shí)驗(yàn)例五以制備實(shí)施例五所得有機(jī)肥顆粒及市售的天耕牌生物有機(jī)肥進(jìn)行小麥種植對(duì)比實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)江蘇宜興時(shí)間種植時(shí)間是2010. 11. 25 ；收割時(shí)間2011. 6. 2。小麥品種“寧麥15”對(duì)照組CK，畝用50kg天耕牌生物有機(jī)肥；實(shí)驗(yàn)組T1，畝用30kg制備實(shí)施例五所得有機(jī)肥顆粒；T2，畝用30kg制備實(shí)施例五所得有機(jī)肥顆粒；T3，畝用40kg制備實(shí)施例五所得有機(jī)肥顆粒；T4，畝用50kg制備實(shí)施例五所得有機(jī)肥顆粒；實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果如附圖五所示。如附圖五所示與對(duì)照組CK比，Tl增產(chǎn)12. 5%，T2增產(chǎn)14. 8%，Τ3增產(chǎn)16. 7%，. Τ4增產(chǎn)19.3%。平均比CK增產(chǎn)15. 8%。
權(quán)利要求
1.一種復(fù)合菌漿液，其特征在于，以氨基酸廢漿液為發(fā)酵基，多粘類芽孢桿菌按6 %的接種量、類球紅細(xì)菌按4%的接種量接種，在pH6. 5 7. 0、30°C 34°C和需氧條件下發(fā)酵 24h,即得復(fù)合菌漿液，所述復(fù)合菌漿液中多粘類芽孢桿菌含量> 5X109CFU/ml ；類球紅細(xì)菌含量彡 3X109CFU/ml。
2.權(quán)利要求1所述的復(fù)合菌漿液的生產(chǎn)方法，其特征在于以氨基酸廢漿液為發(fā)酵基， 多粘類芽孢桿菌按6%的接種量、類球紅細(xì)菌按4%的接種量接種，在pH6. 5 7. 0、30°C 34°C和需氧條件下發(fā)酵Mh，即得復(fù)合菌漿液，所述復(fù)合菌漿液中多粘類芽孢桿菌含量> 5X109CFU/ml ；類球紅細(xì)菌含量彡 3X109CFU/ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述復(fù)合菌漿液的生產(chǎn)方法，其特征在于將氨基酸生產(chǎn)中所產(chǎn)生的廢漿液調(diào)整pH至6. 5 7. 0，經(jīng)121 °C滅菌30min后，降溫至30°C :34°C進(jìn)行菌種接種， 多粘類芽孢桿菌按6%的接種量、類球紅細(xì)菌4%的接種量接種，控制溫度30°C 34°C，以體積比每分鐘0. 5 1. 0的通氣量通入凈化空氣，并以80-100r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，發(fā)酵24h 即得復(fù)合菌漿液，所得復(fù)合菌漿液中多粘類芽孢桿菌含量> 5X109CFU/ml ；類球紅細(xì)菌含量彡 3X109CFU/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述復(fù)合菌漿液的生產(chǎn)方法，其特征在于該方法包括(1)多粘類芽孢桿菌液體菌種制備所用液體培養(yǎng)基配制方法稱取土豆100g，切塊，并放入純凈水中沸煮30min，過(guò)濾，取濾液，加純凈水定容至1000ml，加入葡萄糖10g、磷酸氫二鉀2. 5g、磷酸二氫鉀1. 5g，用乙酸或氫氧化鈉調(diào)PH 6. 5 7. 0，121°C滅菌30min ；降溫至30°C 時(shí)，接菌種上搖床調(diào)溫 30°C 32°C震蕩培養(yǎng)；搖床轉(zhuǎn)速100-120r/min，培養(yǎng)Mh，制成液體菌種，菌液中多粘類芽孢桿菌含量彡1 X 1010CFU/ml ；(2)類球紅細(xì)菌液體菌種制備所用液體培養(yǎng)基配制方法以IOOOml蒸餾水為例，在蒸餾水中加入硫酸銨lg、硫酸鎂 200mg、硫酸亞鐵lOOmg、硫酸錳5mg、硫酸鋅60mg、硫酸銅％ig、磷酸二氫鉀600mg、磷酸氫二鉀900mg、氯化鈣75mg、硼酸:3mg、鉬酸鈉lmg、維生素Bi、B6煙酸各lmg、乙酸鈉3g，用乳酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6. 5 7. 0,121°C滅菌30min ；降溫至30°C 接種上搖床，調(diào)溫 30°C 32°C震蕩培養(yǎng)；搖床轉(zhuǎn)速100-120r/min，培養(yǎng)Mh，制成液體菌種，菌液中類球紅細(xì)菌含量彡5X109CFU/ml。(3)復(fù)合菌漿液制備將氨基酸生產(chǎn)中產(chǎn)生的廢漿液裝入100L種子培養(yǎng)罐至70L，調(diào)pH至6. 5 7. 0，121°C 滅菌30min ；降溫至30°C 34°C接種，多粘類芽孢桿菌按6%的接種量、類球紅細(xì)菌按4% 的接種量接種，以體積比每分鐘0. 5 1. 0的通氣量通入凈化空氣，并以80-100r/min的轉(zhuǎn)速攪拌，發(fā)酵Mh，所得混合菌種中多粘類芽孢桿菌含量> 5X109CFU/ml ；類球紅細(xì)菌含量彡 3X109CFU/ml, pH 值 7. 5 8. 5。放大發(fā)酵將氨基酸生產(chǎn)中產(chǎn)生的廢漿液裝入1000L發(fā)酵罐至700L，調(diào)pH至6. 0 6. 5，121°C滅菌30min ；降溫至30°C 32°C，將100L種子培養(yǎng)罐中發(fā)酵好的混合菌種轉(zhuǎn)入1000L發(fā)酵罐中，以體積比每分鐘為0. 5 1. 0的通氣量通入無(wú)菌空氣，并以80-100r/min 的轉(zhuǎn)速攪拌，發(fā)酵Mh，所得復(fù)合菌漿液中多粘類芽孢桿菌含量> 5X109CFU/ml ；類球紅細(xì)菌含量彡 3X109CFU/ml ；pH 值 7. 5 8. 5。
5.權(quán)利要求1所述的復(fù)合菌漿液在凈化養(yǎng)殖水體中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述復(fù)合菌漿液在凈化養(yǎng)殖水體中的應(yīng)用，其特征在于，以復(fù)合菌漿液為原料，生產(chǎn)用于養(yǎng)殖水體凈化的復(fù)合微生物顆粒劑，該顆粒劑含有多粘芽孢桿菌 3X108CFU/g以上，類球紅細(xì)菌2Xl(fCFU/g以上，所述顆粒劑的生產(chǎn)方法為(1)將權(quán)利要求1所述復(fù)合菌漿液與60-100目的沸石粉按重量比0.1 0.5 1攪拌混合均勻，做成沸石粉與菌漿液混合的散狀混合物；(2)將上述散狀混合物送入造粒機(jī)制成Φ2 Φ5πιπι顆粒，在50°C 60°C下干燥至水分含量小于20%時(shí)即得復(fù)合微生物顆粒劑成品。
7.權(quán)利要求1所述的復(fù)合菌漿液在制備生物有機(jī)肥中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述復(fù)合菌漿液在制備生物有機(jī)肥中的應(yīng)用，其特征在于，以復(fù)合菌漿液為原料，生產(chǎn)復(fù)合微生物有機(jī)肥顆粒，所述有機(jī)肥顆粒的生產(chǎn)方法為(1)將有機(jī)肥料干粉與權(quán)利要求1所述復(fù)合菌漿液以重量比1 0. 1 0. 5比例混合均勻，做成散狀混合物；(2)將上述散狀混合物送入造粒機(jī)制成Φ2 Φ5πιπι顆粒，在50°C 60°C下干燥至水分含量小于20%時(shí)即得復(fù)合微生物有機(jī)肥顆粒成品。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的復(fù)合菌漿液在制備生物有機(jī)肥中的應(yīng)用，其特征在于，將腐植酸、沸石粉、肉骨粉、干牛糞以5 :2:1: 2的重量比混合，粉碎至50-100目， 即得所述有機(jī)肥料干粉。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的復(fù)合菌漿液在制備生物有機(jī)肥中的應(yīng)用，其特征在于， 將腐植酸、沸石粉、肉骨粉或羽毛粉、干羊糞或干雞鴨糞以2 :4:1: 3的重量比混合，粉碎至50-100目，即得所述有機(jī)肥料干粉。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種復(fù)合菌漿液、其生產(chǎn)方法及其應(yīng)用，屬于微生物應(yīng)用領(lǐng)域。所述復(fù)合菌漿液由以下方式制得以氨基酸廢漿液為發(fā)酵基，多粘類芽孢桿菌按6％的接種量、類球紅細(xì)菌按4％的接種量接種，在pH6.5～7.0、30℃～34℃和需氧條件下發(fā)酵24h，即得復(fù)合菌漿液。該復(fù)合菌漿液中多粘類芽孢桿菌含量≥5×109CFU/ml；類球紅細(xì)菌含量≥3×109CFU/ml，可應(yīng)用于凈化養(yǎng)殖水體或制備有機(jī)肥料。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的復(fù)合菌漿液以氨基酸廢漿液為發(fā)酵基，具有生產(chǎn)成本低、節(jié)能環(huán)保等特點(diǎn)，可廣泛應(yīng)用于養(yǎng)殖水體凈化及有機(jī)肥生產(chǎn)中。
文檔編號(hào)C12N1/20GK102352316SQ20111028137
公開(kāi)日2012年2月15日 申請(qǐng)日期2011年9月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月13日
發(fā)明者關(guān)曉歡, 凌德霞, 吳美君, 張艷, 李磊, 王棟, 白志輝, 蔣杰, 陸震 申請(qǐng)人:無(wú)錫中科活力生物技術(shù)有限公司