專利名稱：用于生活污水高效處理菌株的篩選方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種處理菌株的方法，尤其是篩選用于生活污水處理的菌株的方法。
背景技術(shù)：
隨著生活污水處理技術(shù)的發(fā)展與進(jìn)步，固定化微生物技術(shù)在生活污水處理中已得到廣泛應(yīng)用，現(xiàn)已成為生活污水處理技術(shù)中的主流。該技術(shù)所用菌株的性能對(duì)其處理污水的能力和效果有作巨大的影響，然而，目前污水處理菌株的篩選多是采用LB培養(yǎng)基或在其基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。這些培養(yǎng)基均外加了豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，用這些培養(yǎng)基在進(jìn)行篩選時(shí)，一些對(duì)生活污水處理不具優(yōu)勢(shì)的菌株可能成為優(yōu)勢(shì)菌而大量、快速地生長(zhǎng)繁殖，使很多生活污水處理性能優(yōu)異的菌株被抑制或被淹沒(méi)，從而流失以至篩選失敗。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決目前生活污水處理工程菌的篩選方法會(huì)使很多對(duì)生活污水處理能力優(yōu)異的菌株流失的問(wèn)題，而提供的一種生活污水處理工程菌菌株的篩選方法，直接采用生活污水配制培養(yǎng)基及從生活污水排放地取樣分離篩選優(yōu)勢(shì)菌種。該方法按如下步驟進(jìn)行1)篩選用固體培養(yǎng)基的制備在需處理的生活污水中加15_20g瓊脂，經(jīng)滅菌處理后分置于培養(yǎng)皿中，靜置冷凝成平板，得到固體培養(yǎng)基平板；2)原混合菌的采集與稀釋取生活污水的污泥，用滅菌水按1 10的比例混合，放入盛有玻璃珠的容器中，密閉后振蕩5-15min，澄清后取上清液進(jìn)行梯度稀釋制得不同稀釋度的混合菌液；3)混合菌液的涂布從各個(gè)稀釋度的混合菌液中取0. ImL分別加入到制備好的固體培養(yǎng)基平板上，用滅菌的涂布棒將其均勻涂布，靜置使表面水分稍干后倒置放入生化培養(yǎng)箱中，于30°C培養(yǎng) 3-7 天；4)菌株的分離與純化挑選出菌落數(shù)為30-150個(gè)的平板，把其中不同性狀的菌逐一取出，轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基平板上，放入生化培養(yǎng)箱中于30°C培養(yǎng)，使其在培養(yǎng)皿上最后一區(qū)形成一些孤立的菌落，然后把孤立的菌落按照上述方法重復(fù)挑選，即可得到分離純化后的菌株；5)菌株降解活性的鑒定用接種環(huán)將分離純化后的菌接種到經(jīng)滅菌處理后冷卻到室溫的生活污水中，放入振蕩培養(yǎng)箱中于30°C、120r/min下培養(yǎng)Mh，定時(shí)取樣測(cè)定培養(yǎng)液的化學(xué)耗氧量(COD)，選出降解速率快、COD去除率高的菌株。進(jìn)一步的，所述滅菌處理為在115_130°C下滅菌10-30min。其中步驟2中澄清后取上清液進(jìn)行梯度稀釋，優(yōu)選每次稀釋10倍，制得稀釋倍數(shù)為IO4-IO8的原混合菌液；步驟3中將每個(gè)稀釋度的混合菌液進(jìn)行三個(gè)重復(fù)。另外，更具體的情況為，步驟4中使用接種環(huán)把菌取出，并采用分區(qū)劃線法轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基平板上。本發(fā)明采用的更具體的步驟如下1、固體培養(yǎng)基的制備取所需處理的生活污水IOOOmL,加15_20g瓊脂，經(jīng) 115-130°C滅菌10-30min，然后分置于培養(yǎng)皿中，靜置冷凝成平板，得到固體培養(yǎng)基平板。2、原混合菌的采集與稀釋從生活污水的排水溝取污泥，然后用滅菌水按1 10 的比例混合，放入盛有玻璃珠的容器中，密閉后振蕩5-15min，澄清后取上清液進(jìn)行梯度稀釋制得不同稀釋度的混合菌液。3、混合菌液的涂布從各個(gè)稀釋度的混合菌液中取0. ImL分別加入到制備好的固體培養(yǎng)基平板上，用滅菌的涂布棒將其均勻涂布，靜置使表面水分稍干后倒置放入生化培養(yǎng)箱中于30°C培養(yǎng)3-7天)每個(gè)稀釋度三個(gè)重復(fù))。4、菌株的分離與純化挑選出菌落數(shù)為30-150個(gè)的平板，并用接種環(huán)把其中不同性狀的菌逐一取出并用分區(qū)劃線法轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基平板上，放入生化培養(yǎng)箱中于30°C培養(yǎng)，使其在培養(yǎng)皿上最后一區(qū)形成一些孤立的菌落，然后把孤立的菌落按照上述方法再挑一次，反復(fù)2-3次，即可得到分離純化后的菌株。5、菌株降解活性的鑒定用接種環(huán)將分離純化獲得的菌接種到經(jīng)115_130°C滅菌 10-30min后冷卻到室溫的生活污水中，放入振蕩培養(yǎng)箱中于30°C、120r/min下培養(yǎng)Mh，每 4h取樣測(cè)定培養(yǎng)液的C0D，選出降解速率快、COD去除率高的菌株。本發(fā)明通過(guò)直接以生活污水加瓊脂為固體培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在平板上生長(zhǎng)的均為能分解生活污水中污染物的菌株，與現(xiàn)有方法相比，具有簡(jiǎn)便，獲得的優(yōu)良菌株多，分離效果好的特點(diǎn)，避免了對(duì)生活污水處理能力優(yōu)異的菌株流失的問(wèn)題。
具體實(shí)施例方式下面將描述本發(fā)明的實(shí)施例，更進(jìn)一步了解本發(fā)明。實(shí)施例1 從城市生活污水排污管取生活污水，分出IOOOmL于2000mL燒瓶中，加18g瓊脂， 加熱使瓊脂溶解，然后放入IOOOmL三角燒瓶中，蓋好后經(jīng)121°C滅菌20min，然后分置于培養(yǎng)皿中，靜置冷凝成平板，得到固體培養(yǎng)基平板。從十個(gè)地段城市生活污水排污溝各取污泥約100g，混合均勻后取5g左右放入250mL三角瓶中，加入IOOmL無(wú)菌水并放入Φ 4玻璃珠約10顆，密閉后振蕩lOmin，澄清后取上清液進(jìn)行梯度稀釋，每次稀釋10倍，制得稀釋倍數(shù)為IO4-IO8的原混合菌液。從各個(gè)稀釋度的混合菌液中取0. ImL分別加入到制備好的固體培養(yǎng)基平板上，用滅菌的涂布棒將其均勻涂布，靜置使表面水分稍干后倒置放入生化培養(yǎng)箱中于30°C培養(yǎng)(每個(gè)稀釋度三個(gè)重復(fù))。7天后，稀釋倍數(shù)為IO6倍的平板上落數(shù)符合菌落數(shù)在30-150的標(biāo)準(zhǔn)，把稀釋倍數(shù)為IO6倍的三個(gè)平板選出，用接種環(huán)把其中不同性狀的菌逐一取出并用分區(qū)劃線法轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基平板上，然后放入生化培養(yǎng)箱中于30°C 培養(yǎng)5天，然后把培養(yǎng)皿上最后一區(qū)形成的孤立菌落按照上述方法再挑一次，反復(fù)2-3次， 即可得到分離純化后的菌株。把生活污水放入容器中蓋好后放入高壓滅菌鍋內(nèi)經(jīng)121°C滅菌20min，然后分裝在250mL的三角瓶中，每個(gè)瓶加入IOOmL,用接種環(huán)將分離純化獲得的菌接種到其中(每個(gè)菌株接三瓶，每批用三個(gè)不接種的為空白對(duì)照)，放入振蕩培養(yǎng)箱中于 300C、120r/min下培養(yǎng)Mh，每4h取樣測(cè)定培養(yǎng)液的C0D，選出降解速率快、COD去除率高的菌株。實(shí)施例2 從某旅游區(qū)賓館污水排污溝取生活污水，分出IOOOmL于2000mL燒瓶中，加20g瓊脂，加熱使瓊脂溶解，然后放入IOOOmL三角燒瓶中，蓋好后經(jīng)115°C滅菌30min，然后分置于培養(yǎng)皿中，靜置冷凝成平板，得到固體培養(yǎng)基平板。從這個(gè)賓館的污水溝5個(gè)不同段各取污泥約100g，混合均勻后取大約5g放入250mL三角瓶中，加入IOOmL無(wú)菌水并放入Φ 4玻璃珠約15顆，密閉后振蕩lOmin，澄清后取上清液進(jìn)行梯度稀釋，每次稀釋10倍，制得稀釋倍數(shù)為IO4-IO8的原混合菌液。從各個(gè)稀釋度的混合菌液中取0. ImL分別加入到制備好的固體培養(yǎng)基平板上，用滅菌的涂布棒將其均勻涂布，靜置使表面水分稍干后倒置放入生化培養(yǎng)箱中于30°C培養(yǎng)(每個(gè)稀釋度三個(gè)重復(fù))。7天后，稀釋倍數(shù)為IO5倍的平板上落數(shù)符合菌落數(shù)在30-150的標(biāo)準(zhǔn)，把稀釋倍數(shù)為IO5倍的三個(gè)平板選出，用接種環(huán)把其中不同性狀的菌逐一取出并用分區(qū)劃線法轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基平板上，然后放入生化培養(yǎng)箱中于30°C培養(yǎng)6天，使其在培養(yǎng)皿上最后一區(qū)形成一些孤立的菌落，然后把孤立的菌落按照上述方法再挑一次，反復(fù)2-3次，即可得到分離純化后的菌株。把賓館污水放入容器中蓋好后放入高壓滅菌鍋內(nèi)經(jīng)115°C滅菌30min，然后分裝在250mL的三角瓶中，每個(gè)瓶加入IOOmL,用接種環(huán)將分離純化獲得的菌接種到其中(每個(gè)菌株接三瓶，每批用三個(gè)不接種的為空白對(duì)照)， 放入振蕩培養(yǎng)箱中于30°C、120r/min下培養(yǎng)Mh，每4h取樣測(cè)定培養(yǎng)液的C0D，選出降解速率快、COD去除率高的菌株。
權(quán)利要求
1.一種用于生活污水高效處理菌株的篩選方法，主要包括如下步驟1)篩選用固體培養(yǎng)基的制備在需處理的生活污水中加15-20g瓊脂，經(jīng)滅菌處理后分置于培養(yǎng)皿中，靜置冷凝成平板，得到固體培養(yǎng)基平板；2)原混合菌的采集與稀釋取生活污水的污泥，用滅菌水按1 10的比例混合，放入盛有玻璃珠的容器中，密閉后振蕩5-15min，澄清后取上清液進(jìn)行梯度稀釋制得不同稀釋度的混合菌液；3)混合菌液的涂布從各個(gè)稀釋度的混合菌液中取0. ImL分別加入到制備好的固體培養(yǎng)基平板上，用滅菌的涂布棒將其均勻涂布，靜置使表面水分稍干后倒置放入生化培養(yǎng)箱中，于30°C培養(yǎng)3-7 天；4)菌株的分離與純化挑選出菌落數(shù)為30-150個(gè)的平板，把其中不同性狀的菌逐一取出，轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基平板上，放入生化培養(yǎng)箱中于30°C培養(yǎng)，使其在培養(yǎng)皿上最后一區(qū)形成一些孤立的菌落，然后把孤立的菌落按照上述方法重復(fù)挑選，即可得到分離純化后的菌株；5)菌株降解活性的鑒定用接種環(huán)將分離純化后的菌接種到經(jīng)滅菌處理后冷卻到室溫的生活污水中，放入振蕩培養(yǎng)箱中于30°C、120r/min下培養(yǎng)Mh，定時(shí)取樣測(cè)定培養(yǎng)液的C0D，選出降解速率快、COD 去除率高的菌株。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述滅菌處理為在115-130°C下滅菌 10_30mino
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟3中每個(gè)稀釋度的混合菌液進(jìn)行三個(gè)重復(fù)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟4中使用接種環(huán)把菌取出，并采用分區(qū)劃線法轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基平板上。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟4中孤立的菌落重復(fù)挑選2-3次。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟2中澄清后取上清液進(jìn)行梯度稀釋， 每次稀釋10倍，制得稀釋倍數(shù)為IO4-IO8的原混合菌液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種分離篩選用于處理生活污水的高效菌株的方法，首先取生活污水制成固體培養(yǎng)基，然后取生活污水的污泥，經(jīng)梯度稀釋后涂布在固體培養(yǎng)基上，待表面水分稍干后倒置放入生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，在形成的菌落中挑取單菌落到固體培養(yǎng)基平板上劃線純化得到純菌，最后將純菌菌苔接種于經(jīng)滅菌后冷卻到室溫的生活污水中，放入振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，定時(shí)取樣測(cè)定培養(yǎng)液的COD，選出降解速率快、COD去除率高的菌株。該法直接以生活污水加瓊脂為固體培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在平板上生長(zhǎng)的均為能分解生活污水中污染物的菌株，避免了對(duì)生活污水處理能力優(yōu)異的菌株流失的問(wèn)題。
文檔編號(hào)C12N1/02GK102443541SQ20111014725
公開(kāi)日2012年5月9日 申請(qǐng)日期2011年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月2日
發(fā)明者彭清靜 申請(qǐng)人:吉首大學(xué)