專利名稱：一種彎孢霉菌及吲哚里西啶生物堿的制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從海洋真菌IFB-Zio (.Curvularia sp.) 的液體發(fā)酵物中提取的一類新吲哚里西啶生物堿及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
雖然微生物的次生代謝產(chǎn)物已被廣泛研究，但一些特境微生物的代謝產(chǎn)物還是沒有引起人們足夠重視。海洋環(huán)境的特殊性造就了海洋真菌獨(dú)特的代謝方式和代謝產(chǎn)物。近年來人們不斷從各種海洋環(huán)境的真菌中尋找到能產(chǎn)生具有新型作用機(jī)制的抗生素。除了抗生素以外，海洋真菌還能夠產(chǎn)生多種酶的抑制劑，海洋真菌的多樣性為次生代謝產(chǎn)物提供了一個(gè)豐富的來源。阿爾茨海默癥(Alzheimer's disease，AD)是一種嚴(yán)重危害人類健康的神經(jīng)退行性疾病。目前研究認(rèn)為AD可能與β-淀粉樣蛋白沉積、τ蛋白聚集、腦內(nèi)異常氧化壓、低濃度乙酰膽堿等因素有關(guān)，其中最為廣泛接受的是“膽堿能假說”，因而提高腦內(nèi)乙酰膽堿 (ACh)的含量是治療AD的一個(gè)重要途徑.乙酰膽堿酯酶在調(diào)控膽堿能系統(tǒng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，因此乙酰膽堿酯酶抑制劑(AChEI)被認(rèn)為是治療AD最具療效的策略之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的問題是
1.提供具有乙酰膽堿酯酶抑制劑活性的吲哚里西啶生物堿curvulamine A-C, curvulamide A_B。2.提供一種提取、分離吲哚里西啶生物堿curvulamine A-C，curvu lamide A-B的方法。3.提供吲哚里西啶生物堿curvulamine A-C, curvu lamide A_B在制備乙酰膽堿酯酶抑制劑中的應(yīng)用。4.提供可制備成治療阿爾茨海默癥藥物的吲哚里西啶類生物堿curvulamine A_C, curvulamide A_B。本發(fā)明通過下述技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明所述，從海洋真菌IFB-ZlO (.Curvularia sp.)液體發(fā)酵提取物中分離得到的吲哚里西啶生物堿，其結(jié)構(gòu)式為
權(quán)利要求
1.一種彎孢霉菌IFB-Ζ ο，其特征是從海洋白姑魚腸道中分離得到，在PDA平板上，菌落中央稍突起，青黑色，菌落質(zhì)地絨毛狀，帶絮狀，灰白色氣生菌絲，背部為黑色，經(jīng)形態(tài)及分子生物學(xué)鑒定為彎孢霉sp.，現(xiàn)保藏中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址武漢市武昌珞珈山武漢大學(xué)，保藏編號(hào)為CCTCC M 2011059，保藏日期為2011年3月8日。
2.一種權(quán)利要求1所述彎孢霉IFB-ZlO發(fā)酵液制備的吲哚里西啶生物堿，其結(jié)構(gòu)為
3.一種權(quán)利要求2所述的吲哚里西啶生物堿的制備方法，其特征是由以下步驟構(gòu)成1)將從新鮮的白姑魚腸道中分離、純化得到的彎孢霉IFB-ZlO菌絲體塊接種到改良查氏培養(yǎng)基中，于搖床上，在150 rpmJ8°C條件下培養(yǎng)3天作為種子液；改良查氏培養(yǎng)基的組成為蔗糖 30 g，酵母膏 1. 0 g, NaNO3 3. 0 g, NaCl 0. 5 g, K2HPO4 1. 0 g, MgSO4 · 7H20 0. 5 g, FeSO4 · 7H20 0.01 g，1 L 蒸餾水；2)將種子液接種于改良查氏培養(yǎng)基中，在150rpm、28-3(TC條件下發(fā)酵12天；3)將步驟2所得發(fā)酵液經(jīng)紗布過濾，濾液用乙酸乙酯萃取，真空濃縮干燥得黑色粗浸膏Fl ；4)對(duì)浸膏Fl進(jìn)行硅膠柱層析，依次用4倍體積的氯仿，氯仿甲醇=100:1，氯仿甲醇=100:2，氯仿甲醇=100:4，進(jìn)行洗脫，濃縮100:1段得到黑色浸膏F2 ；100:4段得到黑色浸膏F3 ；5)對(duì)浸膏F2進(jìn)行kphadexLH-20分離，得到curvulamine A，合并其他流份得到棕色浸膏F2-1 ；6)對(duì)浸膏F2-1用高壓液相色譜法，色譜柱:AllsphereODS 5//m column ；流動(dòng)相 甲醇 / 水=80/20 流速2. 0 mL/min 分離得到 curvulamine B,保留時(shí)間 tR = 26. 1 min; curvulamine C 保留時(shí)間 3 min;7)對(duì)浸膏F3用高壓液相色譜法，色譜柱AllsphereODS 5//m column ；流動(dòng)相 甲醇 / 水=48/52，流速2. 0 mL/min 分離得到 curvulamide A，保留時(shí)間3 min; curvuIamide B，保留時(shí)間 1 min。
4.一種權(quán)利要求2所述的吲哚里西啶生物堿在制備乙酰膽堿酯酶抑制劑中的應(yīng)用。
5.一種權(quán)利要求2所述的吲哚里西啶生物堿在制備治療阿爾茨海默癥藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從海洋真菌液體發(fā)酵物中提取的吲哚里西啶生物堿及其制備方法與應(yīng)用。該吲哚里西啶生物堿從海洋來源的彎孢霉IFB-Z10(Curvularia sp.)發(fā)酵液中分離純化得到。該類生物堿對(duì)乙酰膽堿酯酶具有較強(qiáng)的抑制作用，且對(duì)細(xì)胞沒有毒性，因此該類吲哚里西啶生物堿可作為乙酰膽堿酯酶抑制劑的先導(dǎo)化合物，并在制備乙酰膽堿酯酶抑制劑中得到應(yīng)用，可制備成治療阿爾茨海默癥的藥物。
文檔編號(hào)C12R1/645GK102329735SQ20111010550
公開日2012年1月25日 申請(qǐng)日期2011年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月27日
發(fā)明者宋勇春, 崔江濤, 張高飛, 汪偉, 譚仁祥 申請(qǐng)人:南京大學(xué)