專利名稱：血管生成抑制的制作方法
血管生成抑制本申請要求申請于2008年4月7日的美國臨時專利申請61/042，936的在先申請 日權益，其題目為“調(diào)控血管形成的抑制性的RNA”，并在此全文參考并入。對于美國和其他允許僅通過參考引用即可并入的PCT締約國，在本申請中引用的 所有專利，專利申請和公開發(fā)表文獻都以參考引用的方式全文并入。本專利公開文本包含受版權保護的材料。版權所有者不反對任何人復制在美國 專利商標局檔案或記錄中的本專利文件或?qū)＠_文本，但保留除此之外的任何和所有版 權。
背景技術：
血管生成，即新生血管的形成，發(fā)生于健康個體的傷口愈合過程，重建流向受傷組 織的血流，其也發(fā)生于某些其他情況中。在沒有疾病的情況下，血管生成的過程通常由多種 正調(diào)控和負調(diào)控因子嚴格控制。血管生成過度是多種病理狀態(tài)中的一種因素。例如，異常 的新生血管形成是多種眼部疾病中的一種因素，其可導致眼部大出血和功能失常，促使與 早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜靜脈阻塞、年齡相關性黃斑變性和其他眼 部疾病相關的視力損失(請見，例如 Joshida et al. , 1999, Histol Histopathol. 14(4) 1287-94)。這些狀態(tài)是導致失明的主要原因(Aiello，1997，Ophthalmic Res. 29(5) 354-62)。血管生成過度還在其他疾病狀態(tài)如類風濕性關節(jié)炎和牛皮癬中起作用。而且，血 管生成在腫瘤生長和轉(zhuǎn)移中起重要的作用。幾種血管生成抑制劑已應用于臨床治療癌癥。 因此，在本領域需要新的和更好的血管生成抑制劑。發(fā)明概述本發(fā)明部分地基于一發(fā)現(xiàn)，即微小RNA miR-126在血管生成的過程中起功能性的 作用以及miR-U6抑制劑在體內(nèi)阻斷病理性的血管生成。因此，在一方面，本發(fā)明提供了一種在有需要的對象中抑制血管生成的方法，該方 法包括向所述對象給藥有效量的一 miR-126的抑制劑。在一些方面，需要抑制血管生成的 所述對象患有類風濕性關節(jié)炎、牛皮癬或癌癥。在其他方面，需要抑制血管生成的所述對象 患有某種與血管生長過度相關的眼部狀態(tài)或疾病，例如，眼部新生血管形成、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜 病變、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜靜脈阻塞、年齡相關性黃斑變性、后葡萄膜炎、病理性近 視和脈絡膜動脈硬化。本發(fā)明提供了治療這些疾病和狀態(tài)的方法。本發(fā)明提供的方法可以在任何有需要的對象中，如在任何動物種屬中，用于抑制 血管生成，或用于治療一狀態(tài)或疾病。在某些實施方式中，所述對象是哺乳動物。在優(yōu)選的 實施方式中，所述對象是人。本發(fā)明提供的方法還可以通過將細胞與有效量的一 miR-126的抑制劑進行接觸， 用于降低所述細胞中的miR-126，或抑制所述細胞中的miR-126的表達、功能或活性。所述 細胞可以是有miR-U6表達的任何細胞，包括動物體內(nèi)的細胞或體外維持的細胞。在一優(yōu) 選的實施方式中，所述細胞是上皮細胞。本發(fā)明所述的miR-U6抑制劑可以是能夠與miR_U6結(jié)合任何種類的物質(zhì)。在某些實施方式中，本發(fā)明所述的miR-126抑制劑是基于核酸的分子。在優(yōu)選的實施方式中，本 發(fā)明所述的基于核酸的分子是反義寡核苷酸。這樣的反義寡核苷酸可以包括，例如，核糖 核苷酸、脫氧核糖核苷酸、2’ -修飾的核苷酸、硫代磷酸酯連接的脫氧核糖核苷酸、肽核酸 (PNA)、鎖核酸(LNA)，或其他種天然或非天然產(chǎn)生的核苷酸形式。例如，在一種實施方式中， 本發(fā)明所述的miR-126抑制劑是，或包括，嗎啉核酸或拮抗核酸(Antagomirs)。在優(yōu)選的 實施方式中，本發(fā)明所述的miR-126抑制劑含有一核苷酸序列，其與本 申請中提供的SEQ ID. NO. 1和/或SEQ ID. NO. 2可形成雙鏈體(duplex)。在其他的優(yōu)選實 施方式中，本發(fā)明所述的miR-126抑制劑含有本申請中提供的SEQ ID. NO. 4、SEQ ID. NO. 5 或SEQ ID. NO. 6的核苷酸序列。本發(fā)明還提供了分離的核酸，其能與SEQ ID. NO. 1和/或SEQ ID. NO. 2形成雙鏈， 例如具有本申請中提供的SEQ ID. NO. 4、SEQ ID. NO. 5或SEQ ID. NO. 6的序列的核苷酸。本發(fā)明還提供了藥物組分，其含有本發(fā)明所述的miR-126抑制劑，以及含有編碼 本發(fā)明所述的miR-126抑制劑的核酸的表達載體。本發(fā)明的這些以及其他實施方式在本申請的通篇都有描述，包括在實施例部分以 及在權利要求部分。附圖簡要說明

圖1、核酸印跡顯示，在用不同細胞因子處理的內(nèi)皮細胞中有miR-126的表達，但 在其他細胞種類如平滑肌細胞和成纖維細胞中沒有表達。圖2、2’ O-Me miR-126減少在新生兒的視網(wǎng)膜中的血管形成。圖2A顯示了視網(wǎng) 膜血管結(jié)構在對照狀態(tài)和在使用2，O-Me修飾的miR-126抑制劑(具有SEQ ID. NO. 4的序 列)處理后的示例圖片。圖2B顯示了在6只小鼠中注射后血管閉合和新生毛細血管叢的數(shù)量。圖3、2’ O-Me miR-126在氧氣誘導的視網(wǎng)膜病變模型中減少了新生兒視網(wǎng)膜中的 血管形成。圖3A顯示了視網(wǎng)膜血管結(jié)構在對照狀態(tài)和在使用2’0-Me修飾的miR-126抑制 劑(具有SEQ ID. NO. 4的序列)處理后的示例圖片。圖3B顯示了在6只小鼠中注射后血 管閉合和新生毛細血管叢的數(shù)量。圖4、miR-126在氧氣誘導的視網(wǎng)膜病變模型中減少了新生兒視網(wǎng)膜中的血管形 成。圖4A顯示了視網(wǎng)膜血管結(jié)構在對照狀態(tài)和在使用miR-126的反義寡核苷酸處理后的 示例圖片，所述miR-126的反義寡核苷酸具有硫代磷酸酯連接修飾和2’ O-Me修飾。且具 有通過羥基脯氨酸連接的膽固醇5，GSCSAUUAUUACUCACGGUACSGSA 3，Chol (SEQ ID N0:5，下 標s表示硫代磷酸酯連接)和對照。圖4B顯示了在6只小鼠中注射后血管閉合和新生毛 細血管叢的數(shù)量。圖5、miR-126是斑馬魚正常模式發(fā)育(patterning)中所必需，且可能與VEGF-A 通路相互作用。(A)Tg(flil:EGFP)yl斑馬魚在未注射(左)和注射了 20ng miR-126的嗎 啉核酸(右)后的共聚焦圖像。(B)注射了 mir-126M0、VEGF-AMO或兩者都注射的變異魚 樣本的共聚焦圖片。(C)變異的fli-lgfp斑馬魚的表型分析。根據(jù)觀察者無標記的觀察評 估，VEGF-A MO (0. 5ng)和miR_126M0 (7. 5ng)都不能單獨引起顯著的血管生成表型，但是兩 種嗎啉核酸聯(lián)用卻導致了嚴重的血管生成表型。圖6、miR-126。抑制miR-126可在缺血誘發(fā)的新生兒視網(wǎng)膜病變中防止新生毛細血管叢的形成。對C57/BL6/129S小鼠進行氧氣誘導的視網(wǎng)膜病變，然后在出生后12天 對其一只眼進行玻璃體內(nèi)注射抗miR-126 2’ O-Me，在另一只眼中注射對照2’ O-Me。用 整體染色顯微觀察術檢察視網(wǎng)膜。用反義2’ O-Me寡核苷酸抑制miR-126可減少血管 生成。(A)用同工凝集素B4-FITC對視網(wǎng)膜血管結(jié)構染色的示例圖片，顯示了血管閉合 (vaso-obliteration)和新生血管形成(標尺，1mm)。(B)在6只小鼠中注射后血管閉合和 新生毛細血管叢的數(shù)量。*P小于或等于0. 005。(C)在表達可誘導的miR-126的HEK293細 胞中，含有miR-126預測的mRNA靶點的3’UTR的構建子在miR-126存在時(誘導)或缺失 時(未誘導)的相對熒光素酶活性。對每一個3’ UTR構建子，未誘導的細胞的熒光素酶水 平被設為1。發(fā)明內(nèi)容具體說明本發(fā)明基于一 發(fā)現(xiàn)，即微小RNA miR-126在血管生成的過程中起功能性的作用以 及miR-126抑制劑在體內(nèi)阻斷病理性的血管生成。因此，本發(fā)明提供了 miR-126抑制劑， 其可用于抑制血管生成，以及其可用于，例如，治療涉及異常過度或不必要的血管生長的狀 態(tài)。本申請中描述了本發(fā)明的這些和其他方面。單數(shù)形式“一”、“一個”和“所述”包括復數(shù)形式，除非上下文明確另行指示。術語“大約”在本申請中是指接近于、在某個區(qū)域、粗略地或大概。當術語“大約” 與一數(shù)字范圍一起使用時，其對所述范圍進行修飾，延展所述數(shù)值的上邊界和下邊界?？傮w 上，術語“大約”在本申請中用于將某一數(shù)值修飾為在所述值以上或以下有20%的變動。涉及血管生成的狀態(tài)血管生成(angiogenesis)的過程，在本申請中也被稱為新生血管形成 (neovascularization)，是新血管形成的基礎過程。該過程包括血管內(nèi)皮細胞遷移進入組 織，然后這些內(nèi)皮細胞聚集形成管道。血管生成可以被外源的血管生成物質(zhì)所誘導，或者也 可以是自然條件的結(jié)果。該過程為多種正常身體活動所必需，例如，生殖、發(fā)育和傷口修復。 雖然該過程還沒有被完全認知，但是它涉及對內(nèi)皮細胞一即毛細血管的主要細胞一的生 長和遷移具刺激和抑制作用的多種分子之間的復雜的相互作用。在正常條件下，這些分子 看起來是將微血管結(jié)構維持在一個靜止期(即，沒有毛細血管生長)，并持續(xù)較長的時間， 可以是幾年或甚至幾十年。一個內(nèi)皮細胞的更新時間可以是大約一千天。但是，在適當?shù)臈l 件下(如，在傷口修復過程中)，這些同樣的細胞可以在非常短的時間里快速增殖和更新， 在這些情況下通常的更新率可以是5天(Folkman and Shing，1989，J. Biol. Chem. 267 (16) 10931-10934 ；Folkman and Klagsbrun, 1987，Science 235 442-447)。雖然血管生成在正常條件下是被高度調(diào)控的過程，但是許多疾病(定性為“血管 生成疾病”)都是由血管生成所驅(qū)動，或牽涉血管生成。在這樣的疾病狀態(tài)中，血管生成可 以是引起疾病的直接原因，也可以使已有病理狀態(tài)更加惡化。許多狀態(tài)都涉及異常、過度或不必要的血管生成，本發(fā)明的方法和組分可以用于 治療這樣的狀態(tài)。在健康哺乳動物的眼睛中，角膜和玻璃體都不含有血管，而且這兩個部分都 具有抗血管生成的活性(Brem et al. , 1977, Am. Ophthalmol. 84 323 ；Henkind, 1978, Am. Ophthalmol. 85 287 ；Kaminska and Niederkom,1993,Invest. Opthalmol. Vis. Sci. 34 222)。角膜中不能排除血管則可能關系到視覺靈敏度喪失、渾濁化和異常愈合(Kaminska and Niederkom，1993，Invest. Opthalmol. Vis. Sci. 34 222)。 脈絡膜新生血管形成發(fā)生在一些具有玻璃膜異常和/或視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)異 常的疾病中，最常見的是年齡相關性黃斑變性(或ARMD)。玻璃膜是一個5層的細胞外的 膜結(jié)構，將脈絡膜毛細血管層與RPE分隔開來；其看起來是提供了一個物理和生化屏障以 防止血管入侵視網(wǎng)膜下腔。在實驗動物包括猴子和小鼠中，通過用激光光凝法破壞玻璃膜 (Miller et al. , 1986 ；Tobe et al.，1998)，可有效造成脈絡膜新生血管形成。除ARMD以外，其他涉及新生血管形成過度的眼病狀態(tài)包括，糖尿病性視網(wǎng)膜病變 (DR)、病理性近視、視網(wǎng)膜靜脈阻塞、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變(ROP)、以及新生血管性青光眼。在 這些疾病中，新生血管從視網(wǎng)膜循環(huán)中發(fā)散出來，其危及眼內(nèi)大出血和牽引性視網(wǎng)膜脫落 以及隨后的視力損失。ROP是兒童失明的一個主要原因，其產(chǎn)生是由于對早產(chǎn)新生兒的氧氣 供給抑制了視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的生成。因此，新生兒表現(xiàn)出高氧導致的視網(wǎng) 膜血管退化，當暴露在正常的室內(nèi)空氣中時，新生兒的視網(wǎng)膜就會變得缺血。這種狀態(tài)反過 來又導致了對視網(wǎng)膜新生血管形成的刺激。糖尿病性視網(wǎng)膜病變(DR)是一種慢性高血糖所致糖尿病的并發(fā)癥。其產(chǎn)生是由 于視網(wǎng)膜血管泄漏和視網(wǎng)膜、視神經(jīng)和虹膜上新生血管的生長而導致。泄漏的血管導致視 網(wǎng)膜腫脹和視力損失。DR的病理機制包括毛細血管閉合或減少、內(nèi)皮細胞損傷、視網(wǎng)膜血流 減少導致隨后的局部缺血、新生血管形成，以及血管-視網(wǎng)膜屏障被破壞。在視神經(jīng)和視網(wǎng) 膜上生長的新生血管也會出血，導致嚴重的視力損失。此外，在虹膜中的新生血管可阻塞眼 部導管，并可導致眼部的極度高壓且伴隨強烈的疼痛和可能的眼部喪失。DR可影響幾乎每 個患有糖尿病的人?？傮w上，患糖尿病的時間越長，發(fā)展出DR的危險就越大。最終，幾乎每 一個患有少年發(fā)作型糖尿病的人都發(fā)展出了 DR的某些癥狀。那些在生命晚些時候患上糖 尿病的人也有DR的風險。本發(fā)明的所述組分和方法可以用于治療和/或預防以上描述的狀態(tài)，包括但不限 于，早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜靜脈阻塞、年齡相關性黃斑變性(或 ARMD)、后葡萄膜炎、病理性近視和脈絡膜動脈硬化。本領域的技術人員會意識到與涉及血 管生成異常的其他眼部疾病。所有的這些狀態(tài)都在本發(fā)明的范圍內(nèi)，并且本發(fā)明的所述組 分和方法可以用于治療或預防所有涉及血管生成異常過度的這樣的眼部狀態(tài)。實體瘤的生長和轉(zhuǎn)移通常依賴于血管生成(J. Folkman, Cancer Res.，46 467-473 (1986)，J. Folkman, J. Natl. Cancer Inst.，82 :4_6 (1989))。增大到大于 2mm 的腫 瘤可以通過誘導新的毛細血管生長來獲得自身的血液供給。一旦這些新的血管埋植入腫瘤 內(nèi)，它們就為腫瘤細胞提供了一種途徑使其可進入循環(huán)系統(tǒng)并轉(zhuǎn)移到遠端位置如肝臟、肺 部以及骨骼(N. ffeidner, et. al, N. Engl. J. Med.，324 :1_8(1991))。確實，腫瘤誘導的血管 生成通常是腫瘤生長所必需。多種抗癌藥物都是通過抑制腫瘤血管生成來起效。同樣地，本發(fā)明所述的組分和 方法可用于抑制癌癥中腫瘤的生長和/或轉(zhuǎn)移，癌癥包括但不限于，乳腺癌、肺癌、頭頸癌、 腦癌、腹部癌癥、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、食道癌、胃腸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝癌、舌癌、神經(jīng)母細胞 瘤、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、視網(wǎng)膜母細胞瘤、腎母細胞瘤、多發(fā)性骨髓瘤、皮膚 癌(如黑色素瘤)、淋巴瘤以及其他血液癌癥。
另外，涉及血管生成異常的狀態(tài)包括但不限于，類風濕性關節(jié)炎、牛皮癬，和多種 炎癥疾病。例如，在關節(jié)炎中，新近形成的毛細血管可能侵入關節(jié)并破壞軟骨。本發(fā)明所述 的組分和方法可用于治療或預防這樣的狀態(tài)。 微小RNA miR-126微小RNA(miRNAs)是一類單鏈非編碼RNA(ncRNAs)，其在植物和動物的進化中一 直保守。成熟的miRNA —般長度為大約17-24個核苷酸，但也可能更長或更短。它們在細胞 中從miRNA前體開始，經(jīng)過一系列的RNA處理步驟而生成。首先生成一個具有發(fā)卡結(jié)構的 pri-miRNA。成熟的miRNA位于這個前體發(fā)卡的一臂/鏈(發(fā)卡的對應鏈，也稱為星號(*) 鏈，通常被降解掉(請見，Wang et al，2008，Dev. Cell, 15，ρ 261-271))。所述 pri-miRNA 在細胞核中被處理形成pre-miRNA，其被運出到細胞質(zhì)。所述pre-miRNA在細胞質(zhì)中進行進 一步的處理形成成熟的miRNA。成熟的miRNA在轉(zhuǎn)錄后階段根據(jù)Watson-Crick堿基配對 與靶基因的mRNA結(jié)合，且抑制其靶基因的表達。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)miRNA在多種生物過程中發(fā)揮作 用，包括發(fā)育時間調(diào)控、分化、凋亡、細胞增殖、器官發(fā)育和代謝。本發(fā)明涉及稱作miR-126的微小RNA。miR-126衍生自其發(fā)卡前體的一條鏈，而 miR-126*(—個不同的序列)衍生自同樣的發(fā)卡前體的對應鏈(如文獻所描述Wang et al.，2008，Dev. Cell, 15，ρ 261-271，其內(nèi)容在此參考并入)。之前的研究表明，miR-126富集在具有血管構成的組織中，例如心臟和肺(請見 Lagos-Quintana et al. ,2002 Current Biology，12，p735_739，禾口 Wienholds et al., 2005，Science，309，ρ310-311)。但是，在本發(fā)明以前，miR-126的功能幾乎是未知。本發(fā)明 部分地基于一個發(fā)現(xiàn)，即微小RNAmiR-126調(diào)控體內(nèi)血管生成，以及miR-126抑制劑在體內(nèi) 可以抑制病理性血管生成，這在本申請實施例部分有更加完整的描述。在本申請中，術語“miR-126”是指具有序列UCGUACC⑶GAGUAAUAAUGCG(22個核苷 酸，SEQ ID NO. 2，見表 1)或UCGUACC⑶GAGUAAUAAUGC(SEQ ID NO. 1，其包括 SEQ ID NO. 2 的 前21個核苷酸，見表1)的miRNA，以及其同源物。miR-126的序列在進化中一直高度保守， 在人、大鼠、狗、雞、斑馬魚和河豚中100%保守，在如下文獻中有描述Wang et al. ,2008, Dev.Cell,15，ρ 261-271。在某些實施方式中，本發(fā)明是關于miR-126和具有或包含SEQ ID NO. 1或SEQ ID N0. 2的核苷酸及其同源物。另外，本發(fā)明是關于SEQ ID NOs. 1和2的片段和變異體，其結(jié)合 miR-126靶基因并調(diào)控血管生成。因此，本發(fā)明的SEQ ID NOs. 1和2的片段和變異體具有 與SEQ ID NOs. 1或2大于大約70 %，或大于大約75 %，或大于大約80 %，或大于大約85 %， 或大于大約90%，或大于大約95%，或大于大約99%的核苷酸相似度，并且與miR-126靶 基因結(jié)合并調(diào)控血管生成。另外，本發(fā)明還提供了 SEQ ID NOs. 1和2的片段和變異體，其 有一定數(shù)量的核苷酸不同于SEQ ID NOs. 1和2。例如，在一種實施方式中，本發(fā)明提供了 序列，其有不多于10個核苷酸不同于SEQ ID NOs. 1或2，或不多于9個核苷酸，或不多于8 個核苷酸，或不多于7個核苷酸，或不多于6個核苷酸，或不多于5個核苷酸，或不多于4個 核苷酸，或不多于3個核苷酸，或不多于2個核苷酸，或不多于1個核苷酸，并且與miR-126 靶基因結(jié)合并調(diào)控血管生成。在優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明是關于miR-126的抑制劑以及使用這樣的抑制劑來 抑制血管生成的方法，下面有更全面的描述。
表1.核苷酸序列
權利要求
1.一種在有需要的對象中抑制血管生成的方法，所述方法包括向所述對象給藥有效量 的一 miR-126的抑制劑。
2.如權利要求1所述的方法，其中所述對象患有選自下組的一種狀態(tài)眼部新生血管 形成、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜靜脈阻塞、年齡相關性黃斑變性、后 葡萄膜炎、病理性近視、脈絡膜動脈硬化、類風濕性關節(jié)炎、牛皮癬和癌癥。
3.如權利要求1所述的方法，其中所述對象是哺乳動物。
4.如權利要求1所述的方法，其中所述對象是人。
5.如權利要求1所述的方法，其中所述miR-126的抑制劑是基于核酸的抑制劑。
6.如權利要求5所述的方法，其中所述基于核酸的抑制劑是反義寡核苷酸。
7.如權利要求6所述的方法，其中所述反義寡核苷酸包括核糖核苷酸、脫氧核糖核苷 酸、2’ -修飾的核苷酸、硫代磷酸酯連接的脫氧核糖核苷酸、肽核酸(PNA)或鎖核酸(LNA)。
8.如權利要求6所述的方法，其中所述反義寡核苷酸包括嗎啉核酸或拮抗核酸。
9.如權利要求5所述的方法，其中所述基于核酸的miR-126的抑制劑包括一能夠與SEQ ID. NO. 1或SEQ ID. NO. 2形成雙鏈體的核苷酸序列。
10.如權利要求5所述的方法，其中所述基于核酸的miR-U6的抑制劑包括一選自下組 的核苷酸序列SEQ ID. NO. 4、SEQ ID. NO. 5 和 SEQ ID. NO. 6。
11.一種在有需要的對象中治療涉及血管生長過度的眼部疾病的方法，所述方法包括 向所述對象給藥有效量的miR-126的一抑制劑。
12.如權利要求11所述的方法，其中所述眼部疾病選自下組眼部新生血管形成、早產(chǎn) 兒視網(wǎng)膜病變、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜靜脈阻塞、年齡相關性黃斑變性、后葡萄膜炎、 病理性近視和脈絡膜動脈硬化。
13.如權利要求11所述的方法，其中所述對象是哺乳動物。
14.如權利要求11所述的方法，其中所述對象是人。
15.如權利要求11所述的方法，其中所述miR-126的抑制劑是基于核酸的抑制劑。
16.如權利要求15所述的方法，其中所述基于核酸的抑制劑是反義寡核苷酸。
17.如權利要求16所述的方法，其中所述反義寡核苷酸包括核糖核苷酸、脫氧核糖 核苷酸、2’ -修飾的核苷酸、硫代磷酸酯連接的脫氧核糖核苷酸、肽核酸(PNA)或鎖核酸 (LNA)。
18.如權利要求16所述的方法，其中所述反義寡核苷酸包括嗎啉核酸或拮抗核酸。
19.如權利要求15所述的方法，其中所述基于核酸的miR-126的抑制劑包括一能夠與 SEQ ID. NO. 1或SEQ ID. NO. 2形成雙鏈體的核苷酸序列。
20.如權利要求15所述的方法，其中所述基于核酸的miR-126的抑制劑包括一選自下 組的核苷酸序列SEQ ID. NO. 4、SEQ ID. NO. 5 和 SEQ ID. NO. 6。
21.如權利要求11所述的方法，其中所述抑制劑通過眼內(nèi)給藥。
22.—種在一細胞中減少miR-U6的量的方法，所述方法包括用有效量的一miR-U6的 抑制劑接觸一細胞。
23.如權利要求22所述的方法，其中所述細胞在一動物中。
24.如權利要求22所述的方法，其中所述細胞在體外。
25.如權利要求22所述的方法，其中所述細胞是內(nèi)皮細胞。
26.如權利要求22所述的方法，其中所述miR-126的抑制劑是基于核酸的抑制劑。
27.如權利要求沈所述的方法，其中所述基于核酸的抑制劑是反義寡核苷酸。
28.如權利要求27所述的方法，其中所述反義寡核苷酸包括核糖核苷酸、脫氧核糖 核苷酸、2’ -修飾的核苷酸、硫代磷酸酯連接的脫氧核糖核苷酸、肽核酸(PNA)或鎖核酸 (LNA)。
29.如權利要求27所述的方法，其中所述反義寡核苷酸包括嗎啉核酸或拮抗核酸。
30.如權利要求沈所述的方法，其中所述基于核酸的miR-126的抑制劑包括一能夠與 SEQ ID. NO. 1或SEQ ID. NO. 2形成雙鏈體的核苷酸序列。
31.如權利要求沈所述的方法，其中所述基于核酸的miR-126的抑制劑包括一選自下 組的核苷酸序列SEQ ID. NO. 4、SEQ ID. NO. 5 和 SEQ ID. NO. 6。
32.一種在細胞中抑制miR-U6表達的方法，所述方法包括用有效量的miR-U6的一抑 制劑接觸一細胞。
33.如權利要求32所述的方法，其中所述細胞在一動物中。
34.如權利要求32所述的方法，其中所述細胞在體外。
35.如權利要求32所述的方法，其中所述細胞是內(nèi)皮細胞。
36.如權利要求32所述的方法，其中所述miR-126的抑制劑是基于核酸的抑制劑。
37.如權利要求36所述的方法，其中所述基于核酸的抑制劑是反義寡核苷酸。
38.如權利要求37所述的方法，其中所述反義寡核苷酸包括核糖核苷酸、脫氧核糖 核苷酸、2’ -修飾的核苷酸、硫代磷酸酯連接的脫氧核糖核苷酸、肽核酸(PNA)或鎖核酸 (LNA)。
39.如權利要求37所述的方法，其中所述反義寡核苷酸包括嗎啉核酸或拮抗核酸。
40.如權利要求36所述的方法，其中所述基于核酸的miR-126的抑制劑包括一能夠與 SEQ ID. NO. 1或SEQ ID. NO. 2形成雙鏈體的核苷酸序列。
41.如權利要求36所述的方法，其中所述基于核酸的miR-126的抑制劑包括一選自下 組的核苷酸序列SEQ ID. NO. 4、SEQ ID. NO. 5 和 SEQ ID. NO. 6。
42.一種分離的核酸，其含有一可與SEQ ID. NO. 1或SEQ ID. NO. 2形成雙鏈體的核酸序列。
43.—種分離的核酸，其含有一選自下組的核酸序列SEQ ID. NO. 4,SEQ ID. NO. 5和SEQ ID. NO. 6。
44.一種藥物成分，其含有如權利要求42或43所述的任一核酸以及一種藥用可接受載劑。
45.一種表達載體，其含有操作地連接于一啟動子的如權利要求42或43所述的任一核
全文摘要
本發(fā)明涉及微小RNA miR-126和調(diào)控血管生成的miR-126的抑制劑。本發(fā)明提供了抑制miR-126以及在體內(nèi)抑制血管生成的組分和方法。
文檔編號C12Q1/68GK102046810SQ200980119638
公開日2011年5月4日 申請日期2009年4月7日 優(yōu)先權日2008年4月7日
發(fā)明者M·拉各斯-奎因-塔納, S·H·查瓦拉, S·拉法 申請人:康奈爾研究基金公司