專利名稱：豬鈣蛋白酶抑制蛋白基因單體型的分離鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種豬鈣蛋白酶抑制蛋白基因單體型的分離鑒定方法，通過這種方法構(gòu)建了兩個(gè)新的豬鈣蛋白酶抑制蛋白基因的單體型，利用其與豬肉肉質(zhì)性狀顯著相關(guān)的特性，可為豬的標(biāo)記輔助選種和選配提供了新的分子標(biāo)記方法。屬于家畜分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
隨著生活水平提高，人們對(duì)食物有了更高的要求。豬肉作為人膳食中重要的組成部分，是人們近年來改善的重點(diǎn)。既瘦又嫩，多汁味美的豬肉在市場(chǎng)上頗受消費(fèi)者青睞。另一方面，隨著養(yǎng)豬業(yè)對(duì)提高肉豬生長(zhǎng)速率和飼料效率的遺傳選育，使得肉豬生產(chǎn)水平得到了提高，但同時(shí)，豬肉品質(zhì)變得粗老，適口性差，降低了消費(fèi)者對(duì)肉質(zhì)的滿意度。豬肉品質(zhì)成了當(dāng)今世界養(yǎng)豬界專家共同關(guān)心研究的一項(xiàng)重大課題。
鈣蛋白酶抑制蛋白基因(CAST)是影響豬肉嫩度的一個(gè)重要的候選基因，許多科研工作者都試圖在鈣蛋白酶抑制蛋白基因中尋找影響豬肉嫩度的SNP標(biāo)記(單核苷酸多態(tài)性)位點(diǎn)。經(jīng)文獻(xiàn)檢索和專利檢索發(fā)現(xiàn)，Ernst(1998)等將鈣蛋白酶抑制蛋白基因定位于2q2.1-2.4，并發(fā)現(xiàn)了3個(gè)在非編碼區(qū)上的PCR-RFLP多態(tài)性位點(diǎn)(HinfI，MspI，RsaI)。孫立彬(2005)等也發(fā)現(xiàn)了2個(gè)在非編碼區(qū)上的PCR-RFLP多態(tài)性位點(diǎn)(HinfI，TaqI)。Rothschild(2003)等在鈣蛋白酶抑制蛋白基因發(fā)現(xiàn)了影響豬肉質(zhì)性狀的單體型，并申請(qǐng)了美國專利(WO 03/060151)。
SNP標(biāo)記是指在染色體基因組水平上單個(gè)核苷酸的變異引起的DNA序列多態(tài)性。位于一條染色體上或某一區(qū)域的一組相關(guān)聯(lián)的SNP等位位點(diǎn)被稱為單體型(haplotype)。在家畜分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，單體型主要作為一種標(biāo)記輔助技術(shù)應(yīng)用于家畜的篩選，從而指導(dǎo)家畜的選種和選配。
關(guān)于豬的SNP標(biāo)記單體型的研究進(jìn)展十分迅速，與此同時(shí)有關(guān)豬SNP標(biāo)記單體型的專利爭(zhēng)奪正逐步展開。鑒于豬SNP標(biāo)記單體型數(shù)目多，還有大量未被發(fā)現(xiàn)，且它們有重要的理論和應(yīng)用價(jià)值，因此在我國開展豬的SNP標(biāo)記單體型的分析、鑒定和應(yīng)用研究，開發(fā)具有我國知識(shí)產(chǎn)權(quán)的SNP標(biāo)記單體型顯得十分迫切和必要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足和實(shí)際需求，提出一種豬鈣蛋白酶抑制蛋白基因單體型的分離鑒定方法，并通過此方法尋找新的與豬肉肉質(zhì)性狀顯著相關(guān)的單體型，可以用于豬只的輔助選種和選配，從而降低飼養(yǎng)成本。
為實(shí)現(xiàn)這一目的，本發(fā)明提出的方法包括，提取豬的基因組DNA，鈣蛋白酶抑制蛋白基因的PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物的多態(tài)性檢測(cè)，單體型的構(gòu)建及其與豬肉肉質(zhì)性狀的相關(guān)性分析，分離鑒定出兩個(gè)新的豬鈣蛋白酶抑制蛋白基因的單體型H2121和H1211。本發(fā)明利用鈣蛋白酶抑制蛋白基因的單體型與豬肉肉質(zhì)性狀顯著相關(guān)的特性，為豬的標(biāo)記輔助選種和選配提供了新的分子標(biāo)記方法。
本發(fā)明提供的豬鈣蛋白酶抑制蛋白基因單體型的分離鑒定方法包括如下步驟(1)采集豬耳組織，利用常規(guī)的苯酚/氯仿抽提方法提取基因組DNA，DNA樣品被稀釋成100ng/μL備用。
(2)針對(duì)鈣蛋白酶抑制蛋白基因的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)200A/G、1187C/T，設(shè)計(jì)鈣蛋白酶抑制蛋白基因特異性引物，進(jìn)行PCR反應(yīng)，得到擴(kuò)增產(chǎn)物1；其中，核苷酸編號(hào)基于GenBank索引號(hào)AY594692。所述的基因特異性引物具有5`-AAAGCCTACCCACGCACT-3`和5-GCAGATACACCAGTAACAGA AA-3`的序列。所述的擴(kuò)增產(chǎn)物1長(zhǎng)度為100～3000bp，且含有AY594692的200位和1187位。
(3)針對(duì)鈣蛋白酶抑制蛋白基因的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)998A/G、1189C/T，設(shè)計(jì)鈣蛋白酶抑制蛋白基因特異性引物，進(jìn)行PCR反應(yīng)，得到擴(kuò)增產(chǎn)物2；其中，核苷酸編號(hào)基于GenBank索引號(hào)AY522920。所述的基因特異性引物具有5`-AGTGATGACAAAAAACTTGAC-3`和5`-CTCATCCTTATCCAAGAGATTC-3`的序列。所述的擴(kuò)增產(chǎn)物2長(zhǎng)度為100～3000bp，且含有AY522920的998位和1189位。
(4)檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物1的200位和1187位和擴(kuò)增產(chǎn)物2的998位和1189位的多態(tài)性。
本發(fā)明可以利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析相結(jié)合(PCR-RFLP)來檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物多態(tài)性。即在設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)時(shí)，引物位于基因突變部位的兩側(cè)，先將目的基因擴(kuò)增，使其易于檢測(cè)，若突變引起已有的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)改變，則可先用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶酶切擴(kuò)增產(chǎn)物，再進(jìn)行凝膠電泳觀察，根據(jù)產(chǎn)物片段大小或數(shù)量與正常對(duì)照做出判斷。若突變未能引起限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)改變，則通過堿基錯(cuò)配引入一個(gè)已知限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)，使得突變引起該限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)發(fā)生改變。并通過對(duì)純合型的酶切位點(diǎn)進(jìn)行DNA測(cè)序，對(duì)本發(fā)明中鈣蛋白酶抑制蛋白基因的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的堿基序列分別為200A/G、1187C/T和998A/G、1189C/T。
(5)構(gòu)建單體型，針對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的多態(tài)性用統(tǒng)計(jì)分析的方法共分離鑒定出4種單體型H1211，H2121，H2122，H2221。對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，單體型的構(gòu)建方法可以根據(jù)需要而改變只要適合檢測(cè)本發(fā)明的單體型即可。
(6)通過本領(lǐng)域熟知的偏回歸分析方法，作單體型的相關(guān)性分析，確定與肉質(zhì)量性狀相關(guān)的單體型，其中，單體型H2121與肌肉嫩度(meat tenderness，MT)顯著正相關(guān)，單體型H1211與肌內(nèi)脂肪含量(intramuscular fat，IMF)顯著正相關(guān)。其中攜帶有上述單體型H2121的個(gè)體和單體型H1211個(gè)體的豬肉肉質(zhì)性狀顯著優(yōu)于含有其它單體型的個(gè)體。
其中所述的單體型H2121即在GenBank索引號(hào)AY59469的200A/G、1187C/T和GenBank索引號(hào)AY522920的998A/G、1189C/T位點(diǎn)的單核苷酸分別為G、C、G、C。其中所述的單體型H1211即在GenBank索引號(hào)AY59469的200A/G、1187C/T和GenBank索引號(hào)AY522920的998A/G、1189C/T位點(diǎn)的單核苷酸分別為A、T、A、C。
本發(fā)明的積極效果(1)發(fā)明一種豬鈣蛋白酶抑制蛋白基因單體型的分離鑒定方法，并利用此方法在鈣蛋白酶抑制蛋白基因中分離鑒定出兩個(gè)單體型H2121和H1211，經(jīng)文獻(xiàn)檢索和專利檢索，證明為新的單體型。
(2)經(jīng)將上述的單體型與PIC豬群125頭非相關(guān)個(gè)體的豬肉肉質(zhì)性狀進(jìn)行相關(guān)性分析，新分離鑒定出的兩個(gè)單體型H2121和H1211與豬肉肉質(zhì)性狀顯著相關(guān)，可以用于豬只的早期篩選，從而降低飼養(yǎng)成本，增加產(chǎn)品的附加值。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明針對(duì)PIC豬群進(jìn)行了深入的研究。針對(duì)鈣蛋白酶抑制蛋白基因四個(gè)SNP位點(diǎn)組成的單體型進(jìn)行分析，其中統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，在鈣蛋白酶抑制蛋白基因的單體型H2121與反映肉質(zhì)性狀豬肉嫩度顯著正相關(guān)(p＝0.0056)，單體型H1211與反映肉質(zhì)性狀的肌內(nèi)脂肪含量顯著正相關(guān)(p＝0.0075)。因此這兩個(gè)單體型可作為檢測(cè)豬肉肉質(zhì)性狀的特異性單體型，用于豬的標(biāo)記輔助選種和選配。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件如Sambrook等人，分子克隆實(shí)驗(yàn)手冊(cè)(New YorkCold SpringHarbor Laboratory Press，1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
實(shí)施例(1)采集豬耳組織，利用常規(guī)的苯酚/氯仿抽提方法提取基因組DNA，DNA樣品被稀釋成100ng/μL備用。其中實(shí)驗(yàn)豬共125頭，為PIC五系雜交商品豬，由上海農(nóng)工商肉食品公司提供和飼養(yǎng)。在平均體重達(dá)90千克時(shí)集中屠宰。
(2)針對(duì)鈣蛋白酶抑制蛋白基因的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)200A/G、1187C/T，設(shè)計(jì)鈣蛋白酶抑制蛋白基因特異性引物，進(jìn)行PCR反應(yīng)，其中，核苷酸編號(hào)基于GenBank索引號(hào)AY594692。引物參考豬的鈣蛋白酶抑制蛋白基因蛋白編碼序列(GenBank Acc №M20160)，利用Primer Premier 5.0軟件自行設(shè)計(jì)引物。引物由上海捷倍思基因技術(shù)有限公司合成。所述的基因特異性引物為5`-AAAGCCTACCCACGCACT-3`和5-GCAGATACACCAGTAACAGAAA-3`。PCR擴(kuò)增體系的總體積均為25μL，其中基因組DNA20～40ng，10×PCR緩沖液2.5μL(2.5mmol/L)，dNTP混合液2.0μL，rTaq 1U，0.2μmol/L引物。引物1反應(yīng)程序?yàn)?5℃預(yù)變性5min，95℃1min，62.5℃1min，72℃1min 50s，35個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min。得到擴(kuò)增產(chǎn)物1為1459bp。
(3)針對(duì)鈣蛋白酶抑制蛋白基因的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)998A/G、1189C/T，設(shè)計(jì)鈣蛋白酶抑制蛋白基因特異性引物，進(jìn)行PCR反應(yīng)，其中，核苷酸編號(hào)基于GenBank索引號(hào)AY522920。引物參考豬的鈣蛋白酶抑制蛋白基因蛋白編碼序列(GenBank Acc №M20160)，利用Primer Premier 5.0軟件自行設(shè)計(jì)引物。引物由上海捷倍思基因技術(shù)有限公司合成。所述的基因特異性引物為5`-AGTGATGACAAAAAACTTGAC-3和5`-CTCATCCTTATCCAAGAGATTC-3`。PCR擴(kuò)增體系的總體積均為25μL，其中基因組DNA20～40ng，10×PCR緩沖液2.5μL(2.5mmol/L)，dNTP混合液2.0μL，rTaq 1U，0.2μmol/L引物。引物1反應(yīng)程序?yàn)?5℃預(yù)變性5min，95℃1min，58.5℃1min，72℃1min 50s，35個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min。得到擴(kuò)增產(chǎn)物2為1991bp。
(4)檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物1的200位和1187位和擴(kuò)增產(chǎn)物2的998位和1189位的多態(tài)性。
酶切反應(yīng)體系20μL，在5μL擴(kuò)增產(chǎn)物1中加入4U的限制性內(nèi)切酶HinfI(華美生物公司)，37℃水浴4h。3％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)酶切結(jié)果，凝膠成像系統(tǒng)(上海天能)觀察并記錄。
酶切反應(yīng)體系20μL，在5μL擴(kuò)增產(chǎn)物1產(chǎn)物中加入4U的限制性內(nèi)切酶MspI(華美生物公司)，37℃水浴4h。3％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)酶切結(jié)果，凝膠成像系統(tǒng)觀察并記錄。
酶切反應(yīng)體系20μL，在5μL擴(kuò)增產(chǎn)物2中加入4U的限制性內(nèi)切酶HinfI(華美生物公司)，37℃水浴4h。3％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)酶切結(jié)果，凝膠成像系統(tǒng)(上海天能)觀察并記錄。
酶切反應(yīng)體系20μL，在5μL擴(kuò)增產(chǎn)物2中加入1μL的限制性內(nèi)切酶TaqI(TaKaRa)，65℃水浴1h。2.0％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)酶切結(jié)果，凝膠成像系統(tǒng)觀察并記錄。
對(duì)于有多態(tài)性的片段，分別選取和純合基因型片段對(duì)應(yīng)的實(shí)驗(yàn)豬各2頭。對(duì)鈣蛋白酶抑制蛋白基因的擴(kuò)增產(chǎn)物1和擴(kuò)增產(chǎn)物2進(jìn)行克隆回收并送交上海華諾生物技術(shù)公司測(cè)序。測(cè)序結(jié)果顯示，酶切突變位點(diǎn)均在內(nèi)含子內(nèi)。
擴(kuò)增產(chǎn)物1，PCR-RFLP/HinfI兩種純合基因型的序列比較，在第200bp的位置(Acc.No.AY594692)發(fā)生突變，由A→G，導(dǎo)致HinfI酶切位點(diǎn)的消失；引物1PCR-RFLP/MspI兩種純合基因型的序列比較，在第1187bp的位置(Acc.No.AY594692)發(fā)生突變，由C→T，導(dǎo)致MspI酶切位點(diǎn)的消失。
擴(kuò)增產(chǎn)物2，PCR-RFLP/HinfI兩種純合基因型的序列比較，在第998bp的位置(Acc.No.AY522920)發(fā)生突變，由A→G，導(dǎo)致HinfI酶切位點(diǎn)的消失；引物2PCR-RFLP/TaqI兩種純合基因型的序列比較在第1189bp的位置(Acc.No.AY522920)發(fā)生突變，由C→T，導(dǎo)致TaqI酶切位點(diǎn)的消失。
(5)單體型的構(gòu)建，用本領(lǐng)域所熟知的PL-EM version 1.0(http//www.people.fas.harvard.edu)構(gòu)建單體型。共分離鑒定出4種單體型H1211，H2121，H2122，H2221。在4-SNP-haplotype中的每一個(gè)位置的核苷酸用數(shù)字1和2來代表。例如一個(gè)動(dòng)物帶有單體型H1211即在GenBank索引號(hào)AY59469的200A/G位為A，1187位為C/T為T。在GenBank索引號(hào)AY522920的998A/G位為A，1189位C/T為C。
本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知，上述單體型的構(gòu)建方法可以根據(jù)需要而改變只要適合檢測(cè)本發(fā)明的單體型即可。
(6)單體型的相關(guān)性分析確定與肉質(zhì)性狀相關(guān)的單體型。測(cè)定肉質(zhì)性狀指標(biāo)主要包括5個(gè)①宰后24h pH值(pH24)、②滴水損失(drip loss，DL)、③嫩度(meat tenderness，MT)、④肌內(nèi)脂肪含量(intramuscular fat，IMF)、⑤背膘(backfat，BF)。為使胴體盡量少受破壞，肉樣采集位置為個(gè)體的最后肋骨和最后腰椎間單側(cè)背最長(zhǎng)肌(帶有皮和背膘)，采集量為800g/個(gè)體左右。各指標(biāo)的測(cè)定根據(jù)陳潤生(2002)所述方法進(jìn)行。
根據(jù)每個(gè)個(gè)體所構(gòu)建的單體型，用本領(lǐng)域所熟悉的偏回歸分析方法進(jìn)行分析。
y＝1μ+X1H1+X2H2+X3H3+X4H4+X5S+e模型中，y為個(gè)體測(cè)定肉質(zhì)性狀指標(biāo)表型記錄向量，μ為總體均數(shù)，S為性別效應(yīng)向量；B為群體效應(yīng)向量；M為基因型效應(yīng)向量；e為隨機(jī)誤差向量，相互獨(dú)立且服從于N(0，σ2)；1、X1、X2、X3、X4、X5為設(shè)計(jì)矩陣；其中X1、X2、X3、X4當(dāng)有0，1，2個(gè)拷貝時(shí)值為-1，0，+1。統(tǒng)計(jì)分析采用SAS(8.02)軟件進(jìn)行分析。
結(jié)果CAST基因單體型對(duì)宰后24h pH值(pH24)、滴水損失(drip loss，DL)、背膘(backfat，BF)后沒有顯著效應(yīng)。單體型H2121與肌肉嫩度(meat tenderness，MT)顯著正相關(guān)(表2)，單體型H1211與肌內(nèi)脂肪含量(intramuscular fat，IMF)顯著正相關(guān)(表3)。
其中所述的單體型H2121即在GenBank索引號(hào)AY59469的200A/G、1187C/T和GenBank索引號(hào)AY522920的998A/G、1189C/T位點(diǎn)的單核苷酸分別為G、C、G、C。其中所述的單體型H1211即在GenBank索引號(hào)AY59469的200A/G、1187C/T和GenBank索引號(hào)AY522920的998A/G、1189C/T位點(diǎn)的單核苷酸分別為A、T、A、C。
表2CAST基因單體型與肌肉嫩度的偏回歸分析

表3CAST基因單體型與肌內(nèi)脂肪含量的偏回歸分析

根據(jù)上述研究，發(fā)明了一種豬鈣蛋白酶抑制蛋白基因單體型的分離鑒定方法，并通過這種方法構(gòu)建了兩個(gè)新的豬鈣蛋白酶抑制蛋白基因的單體型這一發(fā)明在豬種選育和品種改良上具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。通過對(duì)鈣蛋白酶抑制蛋白基因四個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行基因型定型，若發(fā)現(xiàn)某個(gè)個(gè)體攜帶H2121或H1211單體型，則該個(gè)體與攜帶其它單體型的個(gè)體相比期望有更優(yōu)的肉質(zhì)性狀。劇此，育種工作者可以指導(dǎo)豬只的早期篩選，從而降低飼養(yǎng)成本，增加產(chǎn)品的附加值?？梢姡}蛋白酶抑制蛋白基因單體型在豬的標(biāo)記輔助選種和選配中有重要的應(yīng)用前景。
權(quán)利要求
1.一種豬鈣蛋白酶抑制蛋白基因單體型的分離鑒定方法，其特征在于包括如下步驟1)采集豬耳組織，利用常規(guī)的苯酚/氯仿抽提方法提取基因組DNA；2)針對(duì)鈣蛋白酶抑制蛋白基因的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)200A/G、1187C/T，設(shè)計(jì)鈣蛋白酶抑制蛋白基因特異性引物，進(jìn)行PCR反應(yīng)，得到擴(kuò)增產(chǎn)物1；其中，核苷酸編號(hào)基于GenBank索引號(hào)AY594692，所述的基因特異性引物具有5`-AAAGCCTACCCACGCACT-3`和5-GCAGATACACCAGTAACAGAAA-3`的序列，所述的擴(kuò)增產(chǎn)物1長(zhǎng)度為100～3000bp，且含有AY594692的200位和1187位；3)針對(duì)鈣蛋白酶抑制蛋白基因的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)998A/G、1189C/T，設(shè)計(jì)鈣蛋白酶抑制蛋白基因特異性引物，進(jìn)行PCR反應(yīng)，得到擴(kuò)增產(chǎn)物2；其中，核苷酸編號(hào)基于GenBank索引號(hào)AY522920，所述的基因特異性引物具有5`-AGTGATGACAAAAAACTTGAC-3`和5`-CTCATCCTTATCCAAGAGATTC-3`的序列，所述的擴(kuò)增產(chǎn)物2長(zhǎng)度為100～3000bp，且含有AY522920的998位和1189位；4)檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物1的200位和1187位和擴(kuò)增產(chǎn)物2的998位和1189位的多態(tài)性；5)構(gòu)建單體型，針對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的多態(tài)性用統(tǒng)計(jì)分析的方法共分離鑒定出4種單體型H1211，H2121，H2122，H2221；6)通過偏回歸分析方法確定與肉質(zhì)量性狀相關(guān)的單體型，其中，單體型H2121與肌肉嫩度顯著正相關(guān)，單體型H1211與肌內(nèi)脂肪含量顯著正相關(guān)，攜帶有上述單體型H2121的個(gè)體和單體型H1211個(gè)體的豬肉肉質(zhì)性狀顯著優(yōu)于含有其它單體型的個(gè)體；其中所述的單體型H2121在GenBank索引號(hào)AY59469的200A/G、1187C/T和GenBank索引號(hào)AY522920的998A/G、1189C/T位點(diǎn)的單核苷酸分別為G、C、G、C；所述的單體型H1211即在GenBank索引號(hào)AY59469的200A/G、1187C/T和GenBank索引號(hào)AY522920的998A/G、1189C/T位點(diǎn)的單核苷酸分別為A、T、A、C。
2.一種豬鈣蛋白酶抑制蛋白基因單體型H2121，其特征在于該單體型在GenBank索引號(hào)AY59469的200A/G、1187C/T和GenBank索引號(hào)AY522920的998A/G、1189C/T位點(diǎn)的單核苷酸分別為G、C、G、C。
3.一種豬鈣蛋白酶抑制蛋白基因單體型H1211，其特征在于該單體型在GenBank索引號(hào)AY59469的200A/G、1187C/T和GenBank索引號(hào)AY522920的998A/G、1189C/T位點(diǎn)的單核苷酸分別為A、T、A、C。
4.一種權(quán)利要求2或3的豬鈣蛋白酶抑制蛋白基因單體型的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用于豬的標(biāo)記輔助選種和選配。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種豬鈣蛋白酶抑制蛋白基因單體型的分離鑒定方法，屬于家畜分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。其步驟包括，提取豬的基因組DNA，鈣蛋白酶抑制蛋白基因的PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物的多態(tài)性檢測(cè)，單體型的構(gòu)建及其與豬肉肉質(zhì)性狀的相關(guān)性分析。本發(fā)明的特征是分離鑒定出兩個(gè)新的豬鈣蛋白酶抑制蛋白基因的單體型H2121和H1211。本發(fā)明利用鈣蛋白酶抑制蛋白基因的單體型與豬肉肉質(zhì)性狀顯著相關(guān)的特性，為豬的標(biāo)記輔助選種和選配提供了新的分子標(biāo)記方法。
文檔編號(hào)C12N15/10GK1904065SQ20061002888
公開日2007年1月31日 申請(qǐng)日期2006年7月13日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月13日
發(fā)明者潘玉春, 王起山, 孫立彬, 李婧, 白春艷 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)