專利名稱：用作為鈣蛋白酶抑制劑的雜環(huán)取代酰胺的制作方法
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本發(fā)明涉及新的雜環(huán)取代酰胺，所述化合物是酶抑制劑，尤其是半胱氨酸蛋白酶例如鈣蛋白酶(calpain)(即鈣依賴性半胱氨酸蛋白酶)及其同工酶和組織蛋白酶例如組織蛋白酶B和L的抑制劑。
鈣蛋白酶是屬于半胱氨酸蛋白酶類的細(xì)胞內(nèi)蛋白水解酶，并存在于多種細(xì)胞內(nèi)。鈣蛋白酶是由鈣濃度增加而激活的，其分為由μ摩爾級濃度鈣離子激活的鈣蛋白酶Ⅰ或μ-鈣蛋白酶和由毫摩爾級濃度鈣離子激活的鈣蛋白酶Ⅱ或m-鈣蛋白酶(P.Johnson，Int.J.Biochem.1990，22(8)，811-22)。現(xiàn)在有人提出還存在其它鈣蛋白酶同工酶的假說(K.Suzuki等人，Biol.Chem.Hoppe-Seyler，1995，376(9)，523-9)。
有人懷疑鈣蛋白酶在多種生理過程中起重要作用。這些作用包括裂解調(diào)控蛋白例如蛋白激酶C、細(xì)胞骨架蛋白例如MAP2和血影蛋白、肌肉蛋白、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的蛋白斷裂、血小板活化中的蛋白、神經(jīng)肽代謝、有絲分裂中的蛋白、以及在M.J.Barrett等人，Life Sci.1991，48，1659-69和K.K.Wang等人，Trends in Pharmacol.Sci.，1994，15，412-9中列出的蛋白。
已經(jīng)在多種病生理過程中檢測到了鈣蛋白酶水平增高，例如心臟局部缺血(例如心肌梗塞)、腎局部缺血或中樞神經(jīng)系統(tǒng)局部缺血(例如“中風(fēng)”)、炎癥、肌肉營養(yǎng)不良、眼睛內(nèi)障、中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷(例如創(chuàng)傷)、阿爾茨海默氏病等(參見上述K.K.wang的文獻(xiàn))。人們懷疑這些疾病與細(xì)胞內(nèi)鈣水平持續(xù)增高有關(guān)。結(jié)果，鈣水平持續(xù)增高導(dǎo)致鈣依賴性過程被過度激活，從而不再受生理調(diào)控的支配。因此，鈣蛋白酶過度活化也可能引起病生理過程。所以有人提出鈣蛋白酶抑制劑可用于治療這些疾病的假說。各種研究證實了這個假說。Seung-Chyul Hong等人，Stroke 1994，25(3)，663-9和R.T.Bartus等人，Neurological Res.1995，17，249-58表明了鈣蛋白酶抑制劑在急性神經(jīng)變性疾病或局部缺血例如腦中風(fēng)后發(fā)生的局部缺血中的神經(jīng)保護(hù)作用。同樣，實驗性腦損傷后，鈣蛋白酶抑制劑改善了記憶力缺陷以及所發(fā)生的神經(jīng)運動障礙的恢復(fù)(K.E.Saatman等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1996，93，3428-3433)。C.L.Edelstein等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1995，92，7662-6發(fā)現(xiàn)了鈣蛋白酶抑制劑對由于氧不足導(dǎo)致的腎損傷的保護(hù)作用。Yoshida，Ken Ischi等人，Jap.Circ.J.1995，59(1)40-8能表明鈣蛋白酶抑制劑對由局部缺血或再灌注引起的心臟損害的有利作用。因為鈣蛋白酶抑制劑抑制β-AP4蛋白的釋放，所以有人提出其在治療阿爾茨海默氏病中的潛在應(yīng)用(J.Higaki等人，Neuron，1995，14，651-59)。鈣蛋白酶抑制劑還抑制白細(xì)胞介素-1α的釋放(N.Watanabe等人，Cytokine 1994，6(6)，597-601)。此外，還發(fā)現(xiàn)鈣蛋白酶抑制劑表現(xiàn)出對腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用(E.Shiba等人，20th MeetingInt.Ass.Breast Cancer Res.，Sendai Jp，1994，25-28Sept.，Int.J.Oncol.5(Suppl.)，1994，381)。
K.K.Wang，Trends in Pharmacol.Sci.，1994，15，412-8中列出了鈣蛋白酶抑制劑的其它可能應(yīng)用.文獻(xiàn)中已經(jīng)描述過鈣蛋白酶抑制劑。然而，這些抑制劑主要是不可逆或肽抑制劑。一般而言，不可逆抑制劑通常是烷化物質(zhì)，其缺點是在體內(nèi)非選擇性地反應(yīng)，或者不穩(wěn)定。因此這些抑制劑通常會表現(xiàn)出不利的副作用、例如毒性，從而限制了其應(yīng)用或者不可使用。不可逆抑制劑可以包括例如環(huán)氧化物E64(E.B.McGowan等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.1989，158，432-5)、α-鹵代酮(H.Angliker等人，J.Med.Chem.1992，35，216-20)或二硫化物(R.Matsueda等人，Chem.Lett.1990，191-194)。
在半胱氨酸蛋白酶例如鈣蛋白酶的已知可逆抑制劑中，有很多是肽醛，尤其是二肽和三肽醛，例如Z-Val-Phe-H(MDL 28170)(S.Mehdi，Trends in Biol.Sci.1991，16，150-3)和EP 520336中記載的化合物。
肽酮衍生物已作為半胱氨酸蛋白酶抑制劑、尤其是鈣蛋白酶抑制劑公開過。然而，人們發(fā)現(xiàn)只有其中一方面α-位離去基團(tuán)引起不可逆抑制作用、并且另一方面羧酸衍生物激活酮基的酮是有效抑制劑(參見上述M.R.Angelastro等人的文獻(xiàn)；WO92/11850；WO92/12140；WO94/00095和WO95/00535)。在這些酮酰胺和酮酯中，迄今為止據(jù)描述只有肽衍生物是有效的(Zhaozhao Li等人，J.Med.Chem.1993，36，3472-80；S.L.Harbenson等人，J.Med.Chem.1994，37，2918-29，以及上述M.R.Angelastro等人的文獻(xiàn))。
到目前為止，還沒有人表明非肽酮也是有效的可逆鈣蛋白酶抑制劑。因此人們的目標(biāo)是獲得衍生自羰基化合物的非肽抑制劑并改進(jìn)肽的一般問題(代謝穩(wěn)定性、細(xì)胞膜越過能力很弱等)。
酮苯甲酰胺在文獻(xiàn)中是已知的.WO91/09801、WO94/00095和WO92/11850中描述了酮酯PhCO-Abu-COOCH2CH3。M.R.Angelastro等人，J.Med.Chem.1990，33，11-13中描述了類似的苯基衍生物Ph-CONH-CH(CH2Ph)-CO-COCOOCH3，然而，該衍生物僅是弱鈣蛋白酶抑制劑。J.P.Burkhardt，Tetrahedron Lett.，1988，3433-36中也描述了該衍生物。迄今為止，還沒有人研究雜環(huán)取代酰胺的重要性。
另一方面，人們試圖發(fā)現(xiàn)可逆非肽類鈣蛋白酶抑制劑。因此JP8183759、JP 8183769、JP 8183771和EP 520336中描述了衍生自二肽的醛，其中是將飽和碳環(huán)例如環(huán)己烷、或飽和雜環(huán)例如哌啶類并入這些肽類抑制劑內(nèi)以替代氨基酸，結(jié)果獲得了作為鈣蛋白酶抑制劑的新醛。
在本發(fā)明中，描述了取代的非肽類雜環(huán)取代酰胺。這些化合物是新的，并且令人驚奇的是，通過并入剛性結(jié)構(gòu)片段，其具有獲得半胱氨酸蛋白酶、例如鈣蛋白酶的有效非肽類抑制劑的可能性。
本發(fā)明涉及通式Ⅰ雜環(huán)取代酰胺、其互變異構(gòu)體和異構(gòu)體、可能的對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體、以及可能的生理可接受鹽， 其中各變量具有下述含義A是哌嗪、高哌嗪、哌啶或吡咯烷，其中所述雜環(huán)還可攜帶基團(tuán)R5，B是苯基、吡啶、嘧啶、吡嗪或噠嗪環(huán)，R1和R2彼此獨立地為氫、支鏈或直鏈C1-C6-烷基、支鏈或直鏈O-C1-C6-烷基、OH、Cl、F、Br、I、CF3、NO2、NH2、CN、COOH、COO-C1-C4-烷基、NHCO-C1-C4-烷基、NHCO-苯基、CONHR9、NHSO2-C1-C4-烷基、NHSO2-苯基、SO2-C1-C4-烷基和SO2-苯基，并且R1和R2可以一起形成可攜帶1個或2個取代基R6的-CH=CH-CH=CH-鏈，R3是可攜帶下述基團(tuán)的支鏈或直鏈C1-C6-烷基S-CH3、環(huán)己基、環(huán)戊基、環(huán)庚基、苯基、吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、吡唑基(pyrazyl)、吲哚基、噻吩基或萘基環(huán)，其中所述環(huán)被最多2個R7取代，R7是氫、支鏈或直鏈C1-C4-烷基、O-C1-C4-烷基、OH、Cl、F、Br、I、CF3、NO2、NH2、CN、COOH、COO-C1-C4-烷基、CONHR9、NHCO-C1-C4-烷基、NHCO-苯基、NHSO2-C1-C4-烷基、NHSO2-苯基、SO2-C1-C4-烷基和SO2-苯基，R4是氫、-COR8，其中R8可以是-OR9和-NR9R10，R5是氫、可攜帶取代基R11的支鏈或直鏈C1-C6-烷基，或者R5是可攜帶1個或2個取代基R6的苯基、吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、吡唑基、萘基、噻吩基、哌啶基、吡咯烷基或咪唑基環(huán)，R6是氫、支鏈或直鏈C1-C6-烷基、支鏈或直鏈O-C1-C6-烷基、OH、Cl、F、Br、I、CF3、NO2、NH2、CN、COOH、COO-C1-C4-烷基、或C1-C4-烷基-NR9R13，或者兩個R6可一起形成橋OC(R9)2O，R9是氫、支鏈或直鏈C1-C6-烷基，R10是氫、支鏈或直鏈C1-C6-烷基，該C1-C6-烷基可被攜帶R12的苯基環(huán)取代或者被 取代，R11可以是可攜帶1個或2個取代基R6的苯基、吡啶基、嘧啶基、萘基、噻吩基、呋喃基、噠嗪基、吡嗪基、吡唑基、吡咯基或咪唑基環(huán)，R12是氫、支鏈或直鏈C1-C6-烷基、支鏈或直鏈O-C1-C6-烷基、OH、Cl、F、Br、I、CF3、NO2、NH2、CN、COOH、COO-C1-C4-烷基，R13是氫、C1-C4-烷基鏈和C0-C4-烷基苯基，其中該苯基環(huán)可攜帶1個或2個基團(tuán)R12，x是0、1或2。
式Ⅰ化合物可以作為外消旋體或?qū)τ钞悩?gòu)純化合物或非對映異構(gòu)體使用。如果需要對映異構(gòu)純化合物，可通過例如用適當(dāng)?shù)男庑詨A或酸將式Ⅰ化合物或其中間體進(jìn)行常規(guī)外消旋體拆分來獲得對映異構(gòu)純化合物。另一方面，對映異構(gòu)化合物同樣可通過使用市售化合物例如旋光性氨基酸如苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸來制得。
本發(fā)明還涉及式Ⅰ化合物的內(nèi)消旋體或互變異構(gòu)體，例如其中式Ⅰ上的酮基呈烯醇互變異構(gòu)體的式Ⅰ化合物。
本發(fā)明還包括式Ⅰ化合物與生理可接受酸形成的酸加成鹽。合適的生理可接受有機酸和無機酸有例如鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸、草酸、馬來酸、富馬酸、乳酸、酒石酸、己二酸和苯甲酸。其它可使用的酸描述在Fortschritte der Arzneimittelforschung，第10卷，page 224 ff.，Birkhuser Verlag，Basle和Stuttgart，1966中。
本發(fā)明酰胺可通過在合成方案1、2、3和4中概述的不同方法制得。
羧酸酯Ⅲ是通過將羧酸酯Ⅱ與相應(yīng)的哌嗪或哌啶衍生物反應(yīng)而制得的，其中X是離去基團(tuán)例如氯、溴、碘或甲苯磺酸酯。該反應(yīng)是在常規(guī)條件下，在溶劑例如THF、DMF、甲苯或苯中，用仲胺的氨基化鈉或氨基化鉀進(jìn)行的，或者在Cu催化劑存在下進(jìn)行的(參見C.R.Larock，Comprehensive Organic Transformations，VCH Publisher，1989，p.397)。當(dāng)B是含氮芳環(huán)時，該反應(yīng)優(yōu)選在高溫下、在溶劑例如DMF或THF中、適當(dāng)時在堿例如三乙胺、NaH或碳酸鉀和冠醚存在下進(jìn)行。當(dāng)B是苯環(huán)、A是哌啶衍生物、且A-B鍵是由C-C鍵合建立起來的時，則進(jìn)行Suzuki偶合(Suzuki等人，THL 1986，27，6369)或者與有機錫化合物偶合(參見C.R.Larock，Comprehensive OrganicTransformations，VCH Publisher，1989，p.64)。
在水介質(zhì)或水與有機溶劑例如醇或四氫呋喃的混合物中，在室溫或高溫下、例如在25-100℃，用酸或堿例如氫氧化鋰、氫氧化鈉或氫氧化鉀將羧酸酯Ⅲ轉(zhuǎn)化成酸Ⅳ。采用常規(guī)條件，例如在Houben-Weyl，Methoden der Oragnischen Chemie[有機化學(xué)方法]，4thEdition，E5，Chap.V，和C.R.Larock，Comprehensive OrganicTransformations，VCH Publisher，1989，Ch.9中描述的條件，將酸Ⅳ連接到α-氨基酸衍生物上。
將羧酸Ⅳ轉(zhuǎn)化成“活化的”酸衍生物R’-COOL，其中L是離去基團(tuán)例如Cl、咪唑或N-羥基苯并三唑，然后通過與氨基酸衍生物H2N-CH(R3)-COOR反應(yīng)轉(zhuǎn)化成衍生物Ⅴ。在-25℃-+25℃、在無水惰性溶劑例如二氯甲烷、四氫呋喃和二甲基甲酰胺中進(jìn)行該反應(yīng)。
按照與上述水解相似的方法，將衍生物Ⅴ轉(zhuǎn)化成酮羧酸Ⅵ。在與Dakin-West反應(yīng)相似的反應(yīng)中制備酮酯Ⅰ’，該反應(yīng)是依據(jù)Zhaozhao Li等人，J.Med.Chem.1993，36，3472-80的方法進(jìn)行的。在該反應(yīng)中，在高溫下(50-100℃)、在溶劑例如四氫呋喃中，將羧酸例如Ⅵ與草酸單酯酰氯反應(yīng)，然后將所得產(chǎn)物與堿例如乙醇鈉在乙醇中于25-80℃反應(yīng)，以生成本發(fā)明酮酯Ⅰ’?？扇缟纤鰧⑼ア瘛?，以生成例如本發(fā)明酮羧酸。合成方案1 生成酮酰胺Ⅰ’的反應(yīng)也可以通過與ZhaoZhao Li等人的方法(參見上文)相似的方法進(jìn)行。在室溫、在惰性溶劑例如二氯甲烷中，在路易斯酸例如三氟化硼合乙醚催化下，加入1,2-乙二硫醇將Ⅰ’中的酮基保護(hù)，獲得了二噻烷。將這些衍生物與胺R8-H在極性溶劑例如醇中于0-80℃反應(yīng)，獲得了酮酰胺Ⅰ()。
合成方案2 另一方法如反應(yīng)方案2所示。采用常規(guī)肽偶合方法(參見上文Houben-Weyl)，將羧酸Ⅳ與氨基羥基羧酸衍生物Ⅶ反應(yīng)(Ⅳ的制備，參見S.L.Harbenson等人，J.Med.Chem.1994，37，2918-29)，獲得了酰胺Ⅷ?？蓪⑦@些醇衍生物Ⅷ氧化成本發(fā)明酮羧酸衍生物Ⅰ。對于該氧化，可采用多種常規(guī)氧化反應(yīng)(參見C.R.Larock，Comprehensive Organic Transformations，VCH Publisher，1989，page 604 f.)，例如Swern氧化和類Swern氧化，優(yōu)選在室溫或-50-25℃、在溶劑例如二氯甲烷或四氫呋喃中、適當(dāng)時加入二甲亞砜、優(yōu)選用二甲亞砜/吡啶-三氧化硫復(fù)合物進(jìn)行氧化(T.T.Tidwell，Synthesis 1990，857-70)，或用次氯酸鈉/TEMPO進(jìn)行氧化(參見上文S.L.Harbenson等人的文獻(xiàn))。
如果Ⅷ是α-羥基酯(X=O-烷基)，可將其水解成羧酸Ⅸ，采用類似于上述方法的方法進(jìn)行該水解反應(yīng)，但是優(yōu)選用氫氧化鋰在水/四氫呋喃混合物中于室溫下進(jìn)行水解。通過在上述偶合條件下與醇或胺反應(yīng)來制備其它酯或酰胺Ⅹ。同樣可將醇衍生物Ⅹ氧化成本發(fā)明酮羧酸衍生物Ⅰ。
本發(fā)明式Ⅰ醛(R5=氫)可按照類似于合成方案3的方法制備。將羧酸衍生物Ⅳ連接到合適的氨基醇Ⅺ上，以生成相應(yīng)的酰胺Ⅻ。對于該連接，使用常規(guī)肽偶合方法，即在C.R.Larock，ComprehensiveOrganic Transformations，VCH Publisher，1989，page 972f.或Houben-Weyl，Methoden der Oragnischen Chemie[有機化學(xué)方法]，4th Edition，E5，Chap.V.中提及的方法。優(yōu)選使用其中羧基COOH被轉(zhuǎn)化成COL的Ⅲ“活化的”酸衍生物進(jìn)行該反應(yīng)。L是離去基團(tuán)，例如Cl、咪唑或N-羥基苯并三唑。然后用胺將該活化羧酸轉(zhuǎn)化成酰胺Ⅻ。在無水惰性溶劑例如二氯甲烷、四氫呋喃和二甲基甲酰胺中于-20-+25℃進(jìn)行該反應(yīng)。
可將這些醇衍生物Ⅻ氧化成本發(fā)明醛衍生物Ⅰ。對于該氧化，可采用多種常規(guī)氧化反應(yīng)(參見C.R.Larock，Comprehensive OrganicTransformations，VCH Publisher，1989，page 604 f.)，例如Swern氧化和類Swern氧化(T.T.Tidwell，Synthesis 1990，857-70)，或用次氯酸鈉/TEMPO氧化(參見上文S.L.Harbenson等人的文獻(xiàn))，或Dess-Martin(J.Org.Chem.1983，48，4155)。依據(jù)上述方法(參見上述文獻(xiàn))，優(yōu)選在惰性非質(zhì)子傳遞溶劑例如二甲基甲酰胺、四氫呋喃或二氯甲烷中于-50℃-+25℃、使用氧化劑例如DMSO/吡啶×SO3或DMSO/草酰氯進(jìn)行該反應(yīng)。
合成方案3 或者，也可將羧酸Ⅳ與酯或酰胺ⅩⅢ反應(yīng)。通過還原可將所得酰胺Ⅺ轉(zhuǎn)化成本發(fā)明醛Ⅰ。R.C.Larock，Comprehensive OrganicTransformations，VCH Publisher，1989，第619-26頁中列出了這些方法。
按照與最后方法類似的方法，可將苯甲酸Ⅳ與氨基異羥肟酸衍生物ⅩⅥ反應(yīng)，以生成酰胺ⅩⅦ。對于該反應(yīng)，使用與制備Ⅻ相同的反應(yīng)方法。異羥肟酸衍生物ⅩⅥ也是由保護(hù)的氨基酸ⅩⅤ通過與羥基胺反應(yīng)而制得的。在該方法中，使用上述酰胺制備方法。通過常規(guī)方法，例如在二氯甲烷中用三氟乙酸除去保護(hù)基Y2、例如Boc。通過還原將苯甲酰氨基異羥肟酸ⅩⅦ轉(zhuǎn)化成本發(fā)明醛Ⅰ。在該方法中，在惰性溶劑例如四氫呋喃或乙醚中于-60-0℃使用氫化鋰鋁作為還原劑進(jìn)行還原。
合成方案4 合成方案4描述了適于制備例如其中A是哌嗪衍生物且B是吡啶衍生物的實例的另一方法。上文中已經(jīng)詳細(xì)描述了該非常短的合成路線的各合成步驟。
本發(fā)明酮苯甲酰胺Ⅰ是半胱氨酸蛋白酶抑制劑，尤其是半胱氨酸蛋白酶例如鈣蛋白酶Ⅰ和Ⅱ以及組織蛋白酶B和L的抑制劑。酮苯甲酰胺Ⅰ的抑制作用是用文獻(xiàn)中記載的常規(guī)酶測試法測定的，以酶活性被抑制50％時所測定的抑制劑濃度(=IC50)作為作用標(biāo)度。在某些情況下，也測定Ki值。以該方式測定苯甲酰胺Ⅰ抑制鈣蛋白酶Ⅰ、鈣蛋白酶Ⅱ和組織蛋白酶B的作用。
組織蛋白酶B測試按照類似于S.Hasnain等人，J.Bio1.Chem.1993，268，235-40的方法測定組織蛋白酶B抑制作用。
將用抑制劑和DMSO制得的2μL抑制劑溶液(終濃度100μM-0.01μM)加到88μL組織蛋白酶B(得自人肝臟的組織蛋白酶B(Calbiochem)，在500μM緩沖液中稀釋至5單位)中。將該混合物在室溫(25℃)預(yù)培養(yǎng)60分鐘，然后通過加入10μL 10mM Z-Arg-Arg-pNA(在含有10％DMSO的緩沖液中)來啟動反應(yīng)。用微量滴定板讀數(shù)計在405nM監(jiān)視反應(yīng)30分鐘。然后由最大梯度確定IC50。
鈣蛋白酶Ⅰ和Ⅱ測試在含有50mM tris-HCl、0.1M NaCl、1mM二硫蘇糖醇、0.11mMCaCl2、pH為7.5的緩沖液中，用螢光鈣蛋白酶底物Suc-Leu-Tyr-AMC(溶于DMSO中，濃度為25mM，Bachem/Switzerland)測定鈣蛋白酶抑制劑的抑制特性。從紅細(xì)胞中分離出人μ-鈣蛋白酶，經(jīng)過幾個色譜法純化步驟(DEAE-瓊脂糖，苯基瓊脂糖，Superdex200和BlueSepharose)之后，獲得了純度＞95％的酶，其中該酶的純度是通過SDS-PAGE、Western印跡分析和N-末端序列分析測定的。在Spex-Fluorolog熒光計中于λex=380 nm和λem=460nm處測定裂解產(chǎn)物7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)的熒光度。在60分鐘的測定期間內(nèi)，底物的裂解與時間呈線性關(guān)系，并且如果實驗是在12℃進(jìn)行的話，鈣蛋白酶的自動催化活性很低。將抑制劑和鈣蛋白酶底物以DMSO溶液形式加到實驗批料中，其中DMSO的終濃度不能超過2％。
將在實驗批料中的10μl底物(終濃度為250μM)和10μlμ-鈣蛋白酶(終濃度為2μg/ml，即18nM)依次加到含有緩沖液的1ml比色杯中。測定15-20分鐘鈣蛋白酶介導(dǎo)的底物裂解。然后加入10μl抑制劑(50-100μM的DMSO溶液)，測定40分鐘對裂解的抑制。
Ki值是依據(jù)可逆抑制的經(jīng)典公式確定的Ki=I/(vo/vi)-1；其中I=抑制劑濃度，vo=加入抑制劑前的初速度，vi=平衡中的反應(yīng)速度。
速度是由v=AMC釋放/時間，即高度/時間計算的。
鈣蛋白酶是細(xì)胞內(nèi)半胱氨酸蛋白酶。為了阻止細(xì)胞內(nèi)蛋白被鈣蛋白酶斷裂，鈣蛋白酶抑制劑必須穿越細(xì)胞膜。有些已知的鈣蛋白酶抑制劑例如E64和亮抑蛋白酶肽只能非常困難地越過細(xì)胞膜，因此，雖然它們是良好的鈣蛋白酶抑制劑，但是在細(xì)胞內(nèi)的作用很弱。人們的目標(biāo)是發(fā)現(xiàn)具有更強膜進(jìn)入能力的化合物。我們使用人血小板來確定鈣蛋白酶抑制劑的膜進(jìn)入能力。
鈣蛋白酶介導(dǎo)的血小板中酪氨酸激酶pp60src的斷裂血小板活化后，酪氨酸激酶pp60src被鈣蛋白酶裂解。Oda等人在J.Biol.Chem.，1993，Vol268，12603-12608中描述了對此的詳細(xì)研究。該文章指出，pp60src的裂解可被calpeptin－一種鈣蛋白酶抑制劑阻止。該文章發(fā)表以后，我們測定了本發(fā)明化合物的細(xì)胞有效性。將用檸檬酸鹽處理的新鮮人血以200g的轉(zhuǎn)速離心15分鐘。收集富含血小板的血漿，并用血小板緩沖液(血小板緩沖液68mMNaCl、2.7mM KCl、0.5mM MgCl2×6H2O、0.24mM NaH2PO4×H2O、12mM NaHCO3、5.6mM葡萄糖、1mM EDTA、pH7.4)進(jìn)行1∶1稀釋。離心并用血小板緩沖液洗滌后，將血小板濃度調(diào)節(jié)至107個細(xì)胞/ml。在室溫分離人血小板。
在測試批料中，將分離的血小板(2×106)與不同濃度的抑制劑(溶于DMSO中)在37℃預(yù)培養(yǎng)5分鐘。然后用1μM離子載體A23187和5mM CaCl2將血小板活化。培養(yǎng)5分鐘后，以13000rpm轉(zhuǎn)速將血小板簡單地離心，把血小板置于SDS樣本緩沖液中(SDS樣本緩沖液20mM tris-HCl、5mM EDTA、5mM EGTA、1mM DTT、0.5mM PMSF、5μg/ml亮抑蛋白酶肽、10μg/ml胃蛋白酶抑制劑、10％甘油和1％SDS)。在12％強度的凝膠中分離蛋白，通過Western印跡法鑒定pp60src及其52kDa和47kDa裂解產(chǎn)物。使用購自BiomolFeinchemikalien(Hamburg)公司的多克隆兔子抗體抗-Cys-src(pp60src)。用山羊的HRP偶合第二代抗體(Boehringer Mannheim，F(xiàn)RG)檢測該初生抗體。依據(jù)已知方法進(jìn)行Western印跡測定。
通過光密度法定量測定pp60src的裂解，所用對照是未活化血小板(對照1未裂解)和用離子載體與鈣處理的血小板(對照2相當(dāng)于100％裂解)。ED50值是顏色反應(yīng)的強度降低50％時抑制劑的濃度。
皮層神經(jīng)元中谷氨酸鹽誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡該測試是按照Choi D.W.，Maulucci-Gedde M.A.和KriegsteinA.R.，“谷氨酸鹽在皮層細(xì)胞培養(yǎng)物中的神經(jīng)毒性”.J.Neurosci.1989，7，357-368進(jìn)行的。
從15天大小的小鼠胚胎中把皮質(zhì)解剖為兩半，通過酶處理(胰蛋白酶)獲得了獨立細(xì)胞。將這些細(xì)胞(神經(jīng)膠質(zhì)和皮層神經(jīng)元)接種到24孔板上。3天(涂布昆布氨酸的培養(yǎng)板)或7天(涂布鳥氨酸的培養(yǎng)板)后，用FDU(5-氟-2-去氧尿嘧啶核苷)進(jìn)行有絲分裂處理。將細(xì)胞培養(yǎng)15天后，加入谷氨酸鹽來誘導(dǎo)細(xì)胞死亡(15分鐘)。除去谷氨酸鹽后，加入鈣蛋白酶抑制劑。24小時后，通過測定細(xì)胞培養(yǎng)物上清液中的乳酸脫氫酶(LDH)來確定細(xì)胞損傷。
有人提出鈣蛋白酶也在細(xì)胞程序死亡中起作用的假說(M.K.T.Squier等人，J.Cell.Physiol.1994，159，229-237；T.Patel等人，F(xiàn)aseb Journal 1996，590，587-597)。因此，在另一模型中，在鈣離子載體存在下、在人細(xì)胞系中用鈣誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。鈣蛋白酶抑制劑必須進(jìn)入細(xì)胞，并且抑制那里的鈣蛋白酶，以便防止所誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡。
NT2細(xì)胞中鈣介導(dǎo)的細(xì)胞死亡可在人細(xì)胞系NT2(Stratagene GmbH)中，在離子載體A 23187存在下、用鈣誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。在實驗前20小時，將細(xì)胞以105個細(xì)胞/孔的量置于微量滴定板中20小時。20小時后，在2.5μM離子載體和5mM鈣存在下、將細(xì)胞與不同濃度的抑制劑培養(yǎng)。5小時后，將0.05ml XTT(細(xì)胞增殖試劑盒Ⅱ，Boehringer Mannheim)加到該反應(yīng)批料中。約17小時后，依據(jù)制造商的使用說明，用SLT公司生產(chǎn)的EasyReader EAR 400測定光密度。細(xì)胞死亡一半時的光密度是由不使用抑制劑、在或不在離子載體存在下培養(yǎng)細(xì)胞的兩個對照組計算的。
在很多神經(jīng)性疾病或心理障礙中，都發(fā)生導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)過度興奮或毒性作用的谷氨酸鹽活性增加。谷氨酸鹽通過多種受體介導(dǎo)其作用。其中有兩種受體通過特異性激動劑被劃分為NMDA受體和AMPA受體。能減弱谷氨酸鹽介導(dǎo)作用的物質(zhì)可用于治療這些疾病，尤其是治療神經(jīng)變性疾病例如亨廷頓氏舞蹈病和帕金森氏病，低氧、缺氧、局部缺血和損傷后發(fā)生的神經(jīng)毒害疾病，例如中風(fēng)和創(chuàng)傷后發(fā)生的神經(jīng)毒害疾病，或用作抗癲癇劑(參見Arzneim.Forschung 1990，40，511-514；TIPS，1990，11，334-338；Drugs of the Future 1989，14，1059-1071)。抗興奮性氨基酸誘導(dǎo)的腦過度興奮的保護(hù)作用(小鼠中的NMDA或AMPA拮抗作用)腦內(nèi)給予興奮性氨基酸(EAA)，結(jié)果在短時間內(nèi)誘導(dǎo)了嚴(yán)重的過度興奮，導(dǎo)致動物(小鼠)痙攣和死亡?？赏ㄟ^系統(tǒng)給予例如腹膜內(nèi)給予中樞活性化合物(EAA拮抗劑)來抑制這些癥狀。因為中樞神經(jīng)系統(tǒng)的EAA受體的過度激活在多種神經(jīng)性疾病的發(fā)病機制中起重要作用，所以可從體內(nèi)證實的EAA拮抗作用得出這樣的結(jié)論，即抗這種類型CNS障礙的物質(zhì)可能有治療作用。為了測定這種物質(zhì)的效力，通過提前腹膜內(nèi)給予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，確定50％動物的由固定劑量NMDA或AMPA引起的癥狀被消除時的ED50值。
已經(jīng)有人表明鈣蛋白酶抑制劑還在細(xì)胞培養(yǎng)物中表現(xiàn)出抗EAA誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡的保護(hù)作用(H.Cauer等人，Brain Research 1993，607，354-356；Yu Cheg和A.Y.Sun，Neurochem.Res.1994，19，1557-1564)。令人驚奇的是，本申請所提供的鈣蛋白酶抑制劑甚至具有抗由EAA(例如NMDA或AMPA)在體內(nèi)(小鼠)誘導(dǎo)的痙攣的活性，因此提供了對于上述CNS障礙的可能治療應(yīng)用。
本發(fā)明雜環(huán)取代酰胺Ⅰ是半胱氨酸衍生物例如鈣蛋白酶Ⅱ或Ⅱ和組織蛋白酶B或L的抑制劑，并因此可用于控制與鈣蛋白酶或組織蛋白酶的酶活性增加有關(guān)的疾病。因此本發(fā)明酰胺Ⅰ可用于治療局部缺血、創(chuàng)傷、蛛網(wǎng)膜下出血和中風(fēng)后發(fā)生的神經(jīng)變性，和神經(jīng)變性疾病例如多發(fā)性梗塞性癡呆、阿爾茨海默氏病、亨廷頓氏舞蹈病和癲癇，以及可用于治療心臟缺血后的心臟損傷、血管閉塞后的損傷和再灌注、腎局部缺血后的腎臟損傷、骨骼肌損傷、肌肉營養(yǎng)不良、由于平滑肌細(xì)胞增殖所導(dǎo)致的損傷、冠狀血管痙攣、腦血管痙攣、眼睛內(nèi)障、血管成形術(shù)后的血流再狹窄。此外，本發(fā)明酰胺Ⅰ可用于腫瘤和腫瘤轉(zhuǎn)移的化學(xué)治療，并且可用于治療其中白細(xì)胞介素-1水平增加的疾病，例如炎癥和風(fēng)濕性疾病。
處理常規(guī)藥物輔料以外，本發(fā)明藥物制劑含有治療有效量的化合物Ⅰ。
對于局部外用給藥，例如以粉劑、軟膏劑或噴霧劑形式給藥，制劑中活性化合物的濃度可以為常規(guī)濃度。按重量計，活性化合物的含量一般為0.001-1％，優(yōu)選為0.001-0.1％。
對于內(nèi)部給藥，制劑以不連續(xù)劑量給藥。每單次劑量為0.1-100mg/kg體重。根據(jù)所治療疾病的類型和嚴(yán)重程度，每天給予一個或多個單次劑量的制劑。
根據(jù)給藥所需的劑型，本發(fā)明藥物制劑含有除活性化合物以外的常規(guī)賦形劑和稀釋劑。對于局部外用給藥制劑，可使用藥物輔料例如乙醇、異丙醇、乙氧基化蓖麻油、乙氧基化氫化蓖麻油、聚丙烯酸、聚乙二醇、聚乙二醇硬脂酸酯、乙氧基化脂肪醇、石蠟油、凡士林和羊毛脂。對于內(nèi)部給藥制劑，例如乳糖、丙二醇、乙醇、淀粉、滑石和聚乙烯吡咯烷酮是合適的。
本發(fā)明藥物制劑還可含有抗氧化劑例如生育酚、叔丁基化的羥基苯甲醚以及丁基化羥基甲苯，矯味劑，穩(wěn)定劑，乳化劑和潤滑劑。
本發(fā)明藥物制劑所含有的除活性化合物以外的物質(zhì)和在藥物制劑制備中所使用的物質(zhì)在毒理學(xué)方面是可接受的，并且與各個活性化合物相配伍。本發(fā)明藥物制劑是以常規(guī)方法制得的，例如通過將活性化合物與其它常規(guī)賦形劑和稀釋劑混合而制得。
本發(fā)明藥物制劑可以通過多種給藥途徑給藥，例如口服給藥，非胃腸道給藥例如靜脈內(nèi)輸注、皮下、腹膜內(nèi)給藥，和局部給藥。因此可采用劑型例如片劑、乳劑、輸液和注射液、糊劑、軟膏劑、凝膠劑、霜劑、洗劑、粉劑和噴霧劑。
實施例實施例12-(4-(吡啶-4-基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-(吡啶-4-基)哌嗪-1-基)煙酸甲酯將3.4g氯煙酸甲酯、5.5g碳酸鉀、3.3g 4-吡啶基哌嗪和一鏟尖18-冠-6在75ml DMF中于100℃加熱5小時，然后在室溫攪拌60小時。濾除過量碳酸鉀，將濾液濃縮，把殘余物在水和乙酸乙酯之間分配。將有機相用硫酸鎂干燥后，把溶劑濃縮，獲得了3.9g(82％)產(chǎn)物。b)2-(4-(吡啶-4-基)哌嗪-1-基)煙酸將5.6g中間體化合物1a置于100ml THF中，在50ml水中于室溫下用1.4g LiOH處理。加入10ml甲醇使該渾濁溶液變澄清。將該反應(yīng)混合物在室溫攪拌12小時，用等摩爾量的1M HCl水解。將該反應(yīng)混合物濃縮至干，把殘余物置于甲醇/甲苯中。除去溶劑后，獲得了8.2g仍然含有鹽的產(chǎn)物，無需純化將其直接用于下一步反應(yīng)。c)2-(4-(吡啶-4-基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺將8.2g中間體化合物1b和5.2g三乙胺置于200ml二氯甲烷和50ml DMF中。加入5g硫酸鈉，將該混合物攪拌30分鐘。在0℃依次加入2.6g苯丙氨醇、2.3g HOBT和3.6g EDC，將該混合物在室溫攪拌過夜。將該反應(yīng)混合物倒入蒸餾水中，用碳酸氫鈉堿化，用氯化鈉飽和，用100ml二氯甲烷萃取3次。將有機相用水洗滌2次，用硫酸鎂干燥。將溶劑濃縮后，獲得了0.61g(8％)產(chǎn)物。d)2-(4-(吡啶-4-基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺在0.6g三乙胺存在下，將0.6g中間體化合物1c置于20ml DMSO中，將該混合物用0.9g SO3-吡啶復(fù)合物處理。將該反應(yīng)混合物在室溫攪拌過夜。將該反應(yīng)混合物倒入250ml蒸餾水中，用碳酸氫鈉堿化，用氯化鈉飽和，用100ml二氯甲烷萃取，并用硫酸鎂干燥。將溶劑濃縮后，把殘余物溶于THF中，用溶于二氧雜環(huán)己烷中的HCl沉淀出鹽酸鹽。將產(chǎn)物抽濾，用乙醚洗滌數(shù)次。產(chǎn)量0.08g(11％)MSm/e=488(M+)實施例22-(4-甲基哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-甲基哌嗪-1-基)煙酸甲酯按照與實施例1a類似的方式，將3.4g氯煙酸甲酯、5.5g碳酸鉀、和2.0g N-甲基哌嗪在50ml DMF中進(jìn)行反應(yīng)，獲得了3.9g(82％)產(chǎn)物。b)2-(4-甲基哌嗪-1-基)煙酸按照與實施例1b類似的方式，將100ml THF中的3.5g中間體化合物2a與50ml水和10ml甲醇中的1.1g LiOH在室溫反應(yīng)。獲得了6.1g仍然含有鹽的產(chǎn)物，無需純化將其直接用于下一步反應(yīng)。c)2-(4-甲基哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例1c類似的方式，在2.7g EDC、1.9g HOBT和5.0g三乙胺存在下，將6.1g中間體化合物2b與2.1g苯丙氨醇在100mlDMF中反應(yīng)，獲得了1.2g(23％)產(chǎn)物。d)2-(4-甲基哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例1d類似的方式，在1.2ml三乙胺存在下，在25mlDMSO中用1.9g SO3-吡啶復(fù)合物將1.0g中間體化合物2c氧化，獲得了0.7g(60％)鹽酸鹽形式的產(chǎn)物。1H NMR(d6-DMSO)δ=2.5(3H)，2.7-3.9(10H)，4.7(1H)，6.9-7.9(6H)，8.1-8.2(2H)，9.7(1H)，10.9(1H)ppm。實施例32-(4-(嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-(嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)煙酸甲酯按照與實施例1a類似的方式，將3.4g氯煙酸甲酯、11.1g碳酸鉀、和4.7g N-(2-嘧啶基)哌嗪二鹽酸鹽在75ml DMF中進(jìn)行反應(yīng)，獲得了4.6g(78％)產(chǎn)物。b)2-(4-(嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)煙酸按照與實施例1b類似的方式，將100ml THF中的4.3g中間體化合物3a與50ml水和10ml甲醇中的1.0g LiOH在室溫反應(yīng)。獲得了6.1g仍然含有鹽的產(chǎn)物，無需純化將其直接用于下一步反應(yīng)。c)2-(4-(嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例1c類似的方式，在4.0g三乙胺和5g硫酸鈉存在下，將3.8g中間體化合物3b置于200ml二氯甲烷和50ml DMF中，并依次用2.0g苯丙氨醇、2.7g EDC和1.8g HOBT處理，獲得了1.5g(28％)產(chǎn)物。d)2-(4-(嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例1d類似的方式，在1.2ml三乙胺存在下，在20mlDMSO中用1.9g SO3-吡啶復(fù)合物將1.3g中間體化合物3c氧化，獲得了0.7g(48％)鹽酸鹽形式的產(chǎn)物。1H NMR(d6-DMSO)δ=2.9(1H)，3.2-3.9(9H)，4.8(1H)，6.7(1H)，7.0-7.4(5H)，7.8(1H)，8.2(1H)，8.3(4H)，9.1(1H)，9.6(1H)ppm。實施例42-(4-芐基哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-芐基哌嗪-1-基)煙酸甲酯按照與實施例1a類似的方式，將3.4g 2-氯煙酸甲酯、5.5g碳酸鉀、和3.5g N-芐基哌嗪在75ml DMF中進(jìn)行反應(yīng)，獲得了6.2g(100％)產(chǎn)物。b)2-(4-芐基哌嗪-1-基)煙酸按照與實施例1b類似的方式，用1.4g LiOH將100ml THF中的6.2g中間體化合物4a水解。獲得了8.70g仍然含有鹽的產(chǎn)物，無需純化將其直接用于下一步反應(yīng)。c)2-(4-芐基哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例1c類似的方式，在5.7g三乙胺和5g硫酸鈉存在下，將5.6g中間體化合物4b置于200ml二氯甲烷和50ml DMF中，并依次用2.9g苯丙氨醇、2.6g HOBT和4.0g EDC處理，獲得了1.0g(12％)產(chǎn)物。d)2-(4-芐基哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例1d類似的方式，在0.8g三乙胺存在下，在20ml DMSO中用1.2g SO3-吡啶復(fù)合物將0.9g中間體化合物4c氧化，獲得了0.7g(72％)鹽酸鹽形式的產(chǎn)物。1H NMR(d6-DMSO)δ=2.8-3.5(8H)，3.6(1H)，3.8(1H)，4.3(2H)，4.7(1H)，6.9-7.8(12H)，8.3(1H)，9.1(1H)，9.7(1H)，11.7(2H)ppm。實施例52-(4-(甲基吡啶-2-基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-(甲基吡啶-2-基)哌嗪-1-基)煙酸甲酯按照與實施例1a類似的方式，在4.2g碳酸鉀存在下，將2.6g 2-氯煙酸甲酯與2.7g 2-甲基吡啶基哌嗪在50ml DMF中進(jìn)行反應(yīng)，獲得了1.7g(36％)產(chǎn)物。b)2-(4-(甲基吡啶-2-基)哌嗪-1-基)煙酸將1.7g中間體化合物5a與20ml 2M NaOH在80℃加熱1小時。一旦所有原料都已溶解，即將該反應(yīng)混合物濃縮，將殘余物用15ml 4M的HCl在二氧雜環(huán)己烷中的溶液處理，除去二氧雜環(huán)己烷后，將殘余物置于甲醇中，濾除沉淀。將濾液用二氯甲烷處理，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，獲得了2.9g仍然含有鹽的產(chǎn)物，無需純化將其直接用于下一步反應(yīng)。c)2-(4-(甲基吡啶-2-基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺在4.5ml三乙胺存在下，將3.0g中間體化合物5b置于50ml二氯甲烷和4ml DMF中，并依次用0.8g苯丙氨醇、0.7g HOBT和1.2g EDC處理，在室溫攪拌12小時。將該反應(yīng)混合物通過薄硅膠層過濾，用2M NaOH將濾液堿化，分離出有機相。將有機相用1H鹽酸溶液萃取，把水相用NaOH中和，并用二氯甲烷萃取。合并有機相，用硫酸鎂干燥，過濾并濃縮，獲得了1.3g(56％)產(chǎn)物。d)2-(4-(甲基吡啶-2-基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例1d類似的方式，在3.7g三乙胺存在下，在30ml二氯甲烷和4ml DMSO中用2.6g SO3-吡啶復(fù)合物將1.3g中間體化合物5c氧化。產(chǎn)物以鹽酸鹽形式沉淀出來，獲得了0.3g(23％)鹽酸鹽形式的產(chǎn)物。1H NMR(d6-DMSO)δ=3.0-3.8(10H)，4.5(3H)，7.0-7.3(4H)，7.4(3H)，7.7(2H)，8.0(2H)，8.4(1H)，8.7(1H)，9.6(1H)ppm。實施例62-(4-(甲基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-(甲基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)煙酸甲酯按照與實施例1a類似的方式，在4.2g碳酸鉀存在下，將2.6g 2-氯煙酸甲酯與2.7g 3-甲基吡啶基哌嗪在50ml DMF中進(jìn)行反應(yīng)，獲得了1.2g(25％)產(chǎn)物。b)2-(4-(甲基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)煙酸按照與實施例5b類似的方式，用20ml 2M NaOH將1.2g中間體化合物6a在80℃水解，獲得了2.2g仍然含有鹽的產(chǎn)物，無需純化將其直接用于下一步反應(yīng)。c)2-(4-(甲基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例5c類似的方式，在4ml三乙胺存在下，將2.2g中間體化合物6b溶于50ml二氯甲烷和4ml DMF中，并依次用0.6g苯丙氨醇、0.5g HOBT和0.9g EDC處理，獲得了1.7g(42％)產(chǎn)物。d)2-(4-(甲基吡啶-3-基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例1d類似的方式，在6.1ml三乙胺存在下，在6ml DMSO和30ml二氯甲烷中用4.1g SO3-吡啶復(fù)合物將1.7g中間體化合物6c氧化。產(chǎn)物以鹽酸鹽形式沉淀出來，獲得了0.6g(32％)產(chǎn)物。1H NMR(d6-DMSO)δ=3.0-3.6(10H)，4.5(3H)，7.0-7.5(7H)，8.0(1H)，8.2(1H)，8.4(1H)，8.8(1H)，9.0(1H)，9.2(1H)，9.6(1H)ppm。實施例72-(4-(甲基吡啶-4-基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-(甲基吡啶-4-基)哌嗪-1-基)煙酸甲酯按照與實施例1a類似的方式，在4.0g碳酸鉀存在下，將3.7g 2-氯煙酸甲酯與2.5g 4-甲基吡啶-4-基哌嗪在50ml DMF中進(jìn)行反應(yīng)，獲得了2.9g(62％)產(chǎn)物。b)2-(4-(甲基吡啶-4-基)哌嗪-1-基)煙酸按照與實施例5b類似的方式，用20ml 2 M NaOH將2.9g中間體化合物7a在60℃水解，獲得了3.4g仍然含有鹽的產(chǎn)物，無需純化將其直接用于下一步反應(yīng)。c)2-(4-(甲基吡啶-4-基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例5c類似的方式，在4ml三乙胺和分子篩存在下，將3.4g中間體化合物7b置于30ml二氯甲烷中，并依次用1.4g苯丙氨醇、1.1g HOBT和2.0g EDC處理，獲得了3.6g(95％)產(chǎn)物。d)2-(4-(甲基吡啶-4-基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例1d類似的方式，在6ml三乙胺存在下，在11ml DMSO和80ml二氯甲烷中用4.4g SO3-吡啶復(fù)合物將3.6g中間體化合物7c氧化。獲得了0.9g(25％)鹽酸鹽形式的產(chǎn)物。1H NMR(d6-DMSO)δ=2.7-3.9(10H)，4.3-4.6(3H)，7.0(1H)，7.1-7.3(3H)，7.4(1H)，7.8-8.0(2H)，8.3(3H)，9.0(3H)，9.7(1H)ppm。實施例82-(4-芐基高哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-氯煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例1c類似的方式，在13.0g EDC、2.9g HOBT和9.6g三乙胺存在下，在250ml二氯甲烷中用9.7g苯丙氨醇處理10.0g氯煙酸，獲得了17.3g(94％)產(chǎn)物。b)2-(4-芐基高哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺在70ml DMF中，用3.3g芐基高哌嗪、4.8g碳酸鉀、和一鏟尖18-冠-6處理5.0g中間體化合物8a，將該混合物加熱回流2小時。將該反應(yīng)混合物倒入水中，用乙醚萃取。合并有機萃取液，用氯化鈉溶液洗滌，用硫酸鎂干燥并濃縮。進(jìn)行MPLC純化后，獲得了1.0g(13％)產(chǎn)物。c)2-(4-芐基高哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例1d類似的方式，在0.9g三乙胺存在下，在20ml DMSO中用0.7g SO3-吡啶復(fù)合物將1.0g中間體化合物8b氧化。獲得了0.5g(50％)游離堿形式的產(chǎn)物。1H NMR(CDCl3)δ=1.8(2H)，2.6(2H)，2.7(2H)，3.2(2H)，3.3(2H)，3.4(2H)，3.6(2H)，4.9(1H)，6.8(1H)，7.1-7.3(11H)，7.9(1H)，8.3(1H)，9.7(1H)ppm。實施例92-(4-(甲基吡啶-2-基)高哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-(甲基吡啶-2-基)高哌嗪-1-基)煙酸甲酯按照與實施例1a類似的方式，在3.8g碳酸鉀存在下，將2.4g 2-氯煙酸甲酯與2.7g 2-甲基吡啶基高哌嗪在50ml DMF中進(jìn)行反應(yīng)，獲得了3.7g(81％)產(chǎn)物。b)2-(4-(甲基吡啶-2-基)高哌嗪-1-基)煙酸按照與實施例1b類似的方式，用30ml 5M NaOH將3.7g中間體化合物9a在10ml THF中于80℃水解，獲得了3.0g(86％)產(chǎn)物。c)2-(4-(甲基吡啶-2-基)高哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例1c類似的方式，在1.5g三乙胺存在下，將3.0g中間體化合物9b溶于60ml二氯甲烷中，將該溶液依次用1.5g苯丙氨醇、0.4g HOBT和2.0g EDC處理，獲得了2.7g(62％)產(chǎn)物。d)2-(4-(甲基吡啶-2-基)高哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例1d類似的方式，在2.4g三乙胺存在下，在10ml DMSO中用2.9g SO3-吡啶復(fù)合物將2.7g中間體化合物9c氧化，獲得了2.2g(83％)游離堿形式的產(chǎn)物。1H NMR(CDCl3)δ=1.8(2H)，3.3-3.5(8H)，3.7(2H)，4.6(1H)，6.7(1H)，7.1-7.3(2H)，7.4(3H)，7.7(2H)，8.1(2H)，8.5(2H)，9.6(1H)ppm。實施例102-(4-(甲基吡啶-4-基)高哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-(甲基吡啶-4-基)高哌嗪-1-基)煙酸甲酯按照與實施例1a類似的方式，在3.8g碳酸鉀存在下，將2.4g 2-氯煙酸甲酯與2.6g 4-甲基吡啶基高哌嗪在50ml DMF中進(jìn)行反應(yīng)，獲得了3.9g(88％)產(chǎn)物。b)2-(4-(甲基吡啶-4-基)高哌嗪-1-基)煙酸按照與實施例1b類似的方式，用40ml 5M NaOH將3.9g中間體化合物10a在20ml THF中于80℃水解，獲得了2.7g(70％)產(chǎn)物。c)2-(4-(甲基吡啶-4-基)高哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例1c類似的方式，在1.7g三乙胺存在下，將2.6g中間體化合物10b溶于60ml二氯甲烷中，將該溶液依次用1.3g苯丙氨醇、0.4g HOBT和1.7g EDC處理，獲得了1.7g(46％)產(chǎn)物。d)2-(4-(甲基吡啶-4-基)高哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例1d類似的方式，在1.6g三乙胺存在下，在20ml DMSO中用1.8g SO3-吡啶復(fù)合物將1.7g中間體化合物10c氧化，獲得了1.5g(44％)游離堿形式的產(chǎn)物。1H NMR(CDCl3)δ=1.9(2H)，2.6-2.8(4H)，3.1-3.8(8H)，4.7(1H)，6.8(1H)，7.0-7.4(5H)，8.0(1H)，8.2-8.3(2H)，8.4-8.7(4H)，9.8(1H)ppm。實施例112-(4-(2-吡啶-2-基)-1-乙基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-(2-吡啶-2-基)-1-乙基)哌嗪-1-基)煙酸甲酯按照與實施例1a類似的方式，在4.3g碳酸鉀存在下，將3.3g 2-氯煙酸甲酯與3.0g N-(2-(吡啶-2-基)乙基)哌嗪在20ml丁醇中進(jìn)行反應(yīng)，獲得了3.8g(72％)產(chǎn)物。b)2-(4-(2-吡啶-2-基)乙基)哌嗪-1-基)煙酸按照與實施例5b類似的方式，用20ml 2M NaOH將3.8g中間體化合物11a在60℃水解，獲得了3.6g仍然含有鹽的產(chǎn)物，無需進(jìn)一步純化將其直接用于下一步反應(yīng)。c)2-(4-(2-吡啶-2-基)乙基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例5c類似的方式，在5.1ml三乙胺和分子篩存在下，將3.6 g中間體化合物11b置于50ml二氯甲烷和4ml DMF中，并依次用1.7g苯丙氨醇、1.4g HOBT和2.5g EDC處理，獲得了4.6g(95％)產(chǎn)物。d)2-(4-(2-吡啶-2-基)乙基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例1d類似的方式，在7.6g三乙胺存在下，在30ml二氯甲烷和15ml DMSO中用3.5g SO3-吡啶復(fù)合物將4.6g中間體化合物11c氧化，產(chǎn)物作為鹽酸鹽沉淀出來。獲得了0.9g(20％)鹽酸鹽形式的產(chǎn)物。1H NMR(d6-DMSO)δ=3.0-3.4(8H)，3.4-3.7(4H)，3.9-4.4(3H)，7.1-7.5(5H)，7.8(2H)，7.9(2H)，8.4(3H)，8.8(2H)，9.7(1H)ppm。實施例122-(4-(2-甲氧基芐基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-(2-甲氧基芐基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例8b類似的方式，在5.7g碳酸鉀和一鏟尖18-冠-6存在下，在70ml DMF中將3.0g中間體化合物8a與2.9g N-(2-甲氧基芐基)哌嗪反應(yīng)，獲得了1.3g(27％)產(chǎn)物。b)2-(4-(2-甲氧基芐基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例1d類似的方式，在1.1g三乙胺存在下，在20ml DMSO中用1.2g SO3-吡啶復(fù)合物將1.2g中間體化合物12a氧化，獲得了0.7g(58％)游離堿形式的產(chǎn)物。MSm/e=458(M+)實施例132-(4-(3,4-二氧代亞甲基芐基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-(3,4-二氧代亞甲基芐基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例8b類似的方式，在2.9g碳酸鉀和一鏟尖18-冠-6存在下，在70ml DMF中將3.0g中間體化合物8a與2.3g N-(3,4-二氧代亞甲基芐基)哌嗪反應(yīng)，獲得了1.3g(27％)產(chǎn)物。b)2-(4-(3,4-二氧代亞甲基芐基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例1d類似的方式，在0.5g三乙胺存在下，在20ml DMSO中用0.6g SO3-吡啶復(fù)合物將0.6g中間體化合物13a氧化，獲得了0.3g(55％)游離堿形式的產(chǎn)物。1H NMR(CDCl3)δ=2.3(2H)，2.4(2H)，3.0-3.2(4H)，3.3-3.4(4H)，4.9(1H)，5.9(2H)，6.7(2H)，6.8(1H)，7.1-7.3(7H)，8.4(2H)，9.8(1H)ppm。實施例142-(4-(1-哌啶基)哌啶-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-(1-哌啶基)哌啶-1-基)煙酸甲酯按照與實施例1a類似的方式，在5.5g碳酸鉀和一鏟尖18-冠-6存在下，將3.4g 2-氯煙酸甲酯與3.4g 4-哌啶子基哌啶在75ml DMF中進(jìn)行反應(yīng)，獲得了5.9g(97％)產(chǎn)物。b)2-(4-(1-哌啶基)哌啶-1-基)煙酸按照與實施例1b類似的方式，將100ml THF中的5.5g中間體化合物14a與50ml水和10ml甲醇中的1.3g LiOH反應(yīng)，獲得了8.1g仍然含有鹽的產(chǎn)物，無需純化將其直接用于下一步反應(yīng)。c)2-(4-(1-哌啶基)哌啶-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例1c類似的方式，在5.2g三乙胺和5g硫酸鈉存在下，將7.1g中間體化合物14b置于200ml二氯甲烷和50ml DMF中，并依次用2.6g苯丙氨醇、2.3g HOBT和3-6g EDC處理，獲得了0.7g(10％)產(chǎn)物。d)2-(4-(1-哌啶基)哌啶-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例1d類似的方式，在0.6g三乙胺存在下，在20ml DMSO中用1.0g SO3-吡啶復(fù)合物將0.6g中間體化合物14c氧化，獲得了0.1g(19％)游離堿形式的產(chǎn)物。MSm/e=420(M+)實施例152-(4-(4-N,N-二甲基氨基)芐基高哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(高哌嗪-1-基)煙酸乙酯將10.0g 2-氯煙酸乙酯與21.6g高哌嗪在150ml乙醇中加熱回流2小時。除去溶劑后，將殘余物在氯化鈉溶液和乙酸乙酯之間分配，將水相用乙酸乙酯萃取數(shù)次。合并有機相，用硫酸鎂干燥，濃縮，獲得了11.1g(83％)產(chǎn)物。b)2-(4-(4-N,N-二甲基氨基芐基)高哌嗪-1-基)煙酸乙酯將2.0g中間體化合物18a和1.3g 4-N,N-二甲基氨基苯甲醛置于40ml乙醇中，在室溫用1.1ml硼烷-吡啶復(fù)合物處理。將該混合物在室溫攪拌18小時。除去溶劑后，將殘余物在水和乙酸乙酯之間分配。用2N鹽酸萃取有機相，將水相用乙酸乙酯洗滌2次，并用2N NaOH堿化。用乙酸乙酯萃取產(chǎn)物，合并乙酸乙酯萃取液，用硫酸鎂干燥，濃縮，獲得了2.9g(93％)產(chǎn)物。c)2-(4-(4-N,N-二甲基氨基芐基)高哌嗪-1-基)煙酸將2.8g中間體化合物18b與30ml 5N NaOH在30ml甲醇中于60℃加熱2小時。將溶劑濃縮后，把該混合物用濃鹽酸中和，用乙醇和三乙胺鹽析，濾除鹽，將濾液濃縮，獲得了2.5g(100％)產(chǎn)物。d)2-(4-(4-N,N-二甲基氨基芐基)高哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺將2.3g中間體化合物18c溶于50ml二氯甲烷，依次用0.8g三乙胺、0.6g苯丙氨醇、0.2g HOBT和0.8g EDC處理。將該混合物與分子篩一起在室溫攪拌5小時。將該反應(yīng)混合物用水和2N NaOH洗滌，用1N鹽酸萃取產(chǎn)物。將水相用乙酸乙酯洗滌，用2N NaOH調(diào)節(jié)至pH9。用乙酸乙酯萃取產(chǎn)物。合并有機相，用硫酸鎂干燥，濃縮，獲得了1.2g(69％)產(chǎn)物。e)2-(4-(4-N,N-二甲基氨基芐基)高哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺在1.0g三乙胺和2ml DMSO存在下，將1.2g中間體化合物18d與1.2g SO3-吡啶復(fù)合物和分子篩在40ml二氯甲烷中攪拌。將該反應(yīng)混合物用二氯甲烷稀釋，用氯化鈉溶液洗滌3次，用硫酸鎂干燥并濃縮，獲得了1.1g(97％)產(chǎn)物。1H NMR(CDCl3)δ=1.8(2H)，3.0(6H)，3.1(4H)，3.2(4H)，3.4(2H)，4.4(2H)，4.8(1H)，6.6(3H)，6.8(1H)，7.2(5H)，8.0(1H)，8.2(1H)，8.7(1H)，9.8(1H)ppm。實施例162-(4-(2-氟芐基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(哌嗪-1-基)煙酸乙酯按照與實施例18a類似的方式，將10.0g 2-氯煙酸乙酯與27.8g哌嗪在400ml乙醇中反應(yīng)，獲得了6.9g(54％)產(chǎn)物。b)2-(4-(2-氟芐基)哌嗪-1-基)煙酸乙酯按照與實施例18b類似的方式，將1.0g中間體化合物19a與2-氟苯甲醛和0.5g硼烷-吡啶復(fù)合物在40ml乙醇中反應(yīng)，獲得了1.2g(39％)產(chǎn)物。c)2-(4-(2-氟芐基)哌嗪-1-基)煙酸按照與實施例18c類似的方式，將1.2g中間體化合物19b溶于15ml甲醇，并用30ml 5N NaOH水解，獲得了0.7g(63％)產(chǎn)物。d)2-(4-(2-氟芐基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例18d類似的方式，在0.5g三乙胺存在下，將0.7g中間體化合物19c置于50ml二氯甲烷，依次用0.3g苯丙氨醇、0.5g EDC和0.1g HOBT處理。獲得了0.5g(48％)產(chǎn)物。e)2-(4-(2-氟芐基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例18e類似的方式，在0.4g三乙胺存在下，在40ml二氯甲烷和1ml DMSO中用0.5g SO3-吡啶復(fù)合物將0.5g中間體化合物19d氧化，獲得了0.5g(100％)產(chǎn)物。MSm/e=446(M+)實施例172-(4-苯基哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-苯基哌嗪-1-基)煙酸乙酯按照與實施例1a類似的方式，在2.5g碳酸鉀和一鏟尖18-冠-6存在下，將2.0g 2-氯煙酸乙酯與1.8g苯基哌嗪在40ml丁醇中于80℃反應(yīng)2.5小時，獲得了1.2g(35％)產(chǎn)物。b)2-(4-苯基哌嗪-1-基)煙酸按照與實施例18c類似的方式，用30ml 5M NaOH將1.2g中間體化合物20a在30ml甲醇中水解，獲得了1.8g粗產(chǎn)物，無需進(jìn)一步純化將其直接用于下一步反應(yīng)。c)2-(4-苯基哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例18d類似的方式，在0.8g三乙胺存在下，將1.8g中間體化合物20b置于50ml二氯甲烷中，并依次用0.6g苯丙氨醇、0.8g EDC和0.2g HOBT處理，獲得了1.1g(72％)產(chǎn)物。d)2-(4-苯基哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例18e類似的方式，在1.1g三乙胺存在下，在40ml二氯甲烷和2ml DMSO中用1.2g SO3-吡啶復(fù)合物將1.1g中間體化合物20c氧化，獲得了0.8g(72％)產(chǎn)物。MSm/e=414(M+)實施例182-(4-(甲基吡啶-2-基)高哌嗪-1-基)煙酸N-(1-氨基甲?；?1-氧代-3-苯基丙-2-基)酰胺a)2-(4-(甲基吡啶-2-基)高哌嗪-1-基)煙酸N-(1-氨基甲?；?1-醇-3-苯基丙-2-基)酰胺按照與實施例18d類似的方式，在1.9g三乙胺存在下，將1.8g中間體化合物9b置于50ml二氯甲烷中，并依次用1.1g 3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酰胺鹽酸鹽、1.2g EDC和0.3g HOBT處理，獲得了0.5g(18％)產(chǎn)物。b)2-(4-(甲基吡啶-2-基)高哌嗪-1-基)煙酸N-(1-氨基甲酰基-1-氧代-3-苯基丙-2-基)酰胺按照與實施例18e類似的方式，在0.4g三乙胺存在下，在40ml二氯甲烷和2.5ml DMSO中用0.4g SO3-吡啶復(fù)合物將0.5g中間體化合物21a氧化，獲得了0.2g(54％)產(chǎn)物。MSm/e=486(M+)實施例192-(4-(4-甲氧基芐基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-(4-甲氧基芐基)哌嗪-1-基)煙酸乙酯按照與實施例18b類似的方式，將2.0g中間體化合物19a與6.0ml茴香醛和1.1ml硼烷-吡啶復(fù)合物在40ml乙醇中反應(yīng)，獲得了3.0g(94％)產(chǎn)物。b)2-(4-(4-甲氧基芐基)哌嗪-1-基)煙酸按照與實施例18c類似的方式，用25ml 5M NaOH將1.5g中間體化合物22a在10ml甲醇中水解，獲得了1.6g(61％)產(chǎn)物。c)2-(4-(4-甲氧基芐基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例18d類似的方式，在1.4ml三乙胺存在下，將1.0g中間體化合物22b置于50ml二氯甲烷中，并依次用0.5g苯丙氨醇、0.8g EDC和0.5g HOBT處理，獲得了1.2g(88％)產(chǎn)物。d)2-(4-(4-甲氧基芐基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例18e類似的方式，在2.1ml三乙胺存在下，在50ml二氯甲烷和3.5ml DMSO中用3.0g SO3-吡啶復(fù)合物將1.2g中間體化合物22c氧化，獲得了0.5g(46％)產(chǎn)物。MSm/e=458(M+)實施例202-(4-(4-甲氧基芐基)高哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-(4-甲氧基芐基)高哌嗪-1-基)煙酸乙酯按照與實施例18b類似的方式，將2.5g中間體化合物18a與1.4ml茴香醛和1.3ml硼烷-吡啶復(fù)合物在30ml乙醇中反應(yīng)，獲得了3.6g(98％)產(chǎn)物。b)2-(4-(4-甲氧基芐基)高哌嗪-1-基)煙酸按照與實施例18c類似的方式，用20ml 5M NaOH將3.6g中間體化合物23a在10ml甲醇中水解，獲得了2.9g(87％)產(chǎn)物。c)2-(4-(4-甲氧基芐基)高哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例18d類似的方式，在1.75g三乙胺存在下，將1.3g中間體化合物23b置于50ml二氯甲烷中，并依次用0.6g苯丙氨醇、0.9g EDC和0.6g HOBT處理，獲得了1.3g(69％)產(chǎn)物。d)2-(4-(4-甲氧基芐基)高哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例18e類似的方式，在2.1ml三乙胺存在下，在50ml二氯甲烷和3.5ml DMSO中用3.0g SO3-吡啶復(fù)合物將1.2g中間體化合物23c氧化，獲得了0.6g(46％)產(chǎn)物。MSm/e=472(M+)實施例212-(4-(4-正丁氧基芐基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-(4-正丁氧基芐基)哌嗪-1-基)煙酸乙酯按照與實施例18b類似的方式，將2.4g中間體化合物19a與2.1ml 4-丁氧基苯甲醛和1.3ml硼烷-吡啶復(fù)合物在30ml乙醇中反應(yīng)，獲得了3.5g(89％)產(chǎn)物。b)2-(4-(4-正丁氧基芐基)哌嗪-1-基)煙酸按照與實施例18c類似的方式，用15ml 5M NaOH將3.5g中間體化合物24a在30ml甲醇中水解，獲得了3.2g(97％)產(chǎn)物。c)2-(4-(4-正丁氧基芐基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例18d類似的方式，在1.9ml三乙胺存在下，將1.5g中間體化合物24b置于50ml二氯甲烷中，并依次用0.7g苯丙氨醇、1.0g EDC和0.7g HOBT處理，獲得了1.3g(62％)產(chǎn)物。d)2-(4-(4-正丁氧基芐基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例18e類似的方式，在2.1ml三乙胺存在下，在40ml二氯甲烷和3.5ml DMSO中用2.0g SO3-吡啶復(fù)合物將1.3g中間體化合物24c氧化，獲得了0.8g(52％)產(chǎn)物。MSm/e=500(M+)實施例223-(4-芐基哌嗪-1-基)苯甲酸N-(1-氨基甲酰基-1-氧代-3-苯基丙-2-基)酰胺a)3-(4-芐基哌嗪-1-基)苯甲酸將1.5g 3-芐基哌嗪-1-基苯基腈在14ml濃鹽酸中加熱回流2小時。在冷卻至室溫過程中，沉淀出1.7g(100％)產(chǎn)物，將其抽濾并用水充分洗滌。b)3-(4-芐基哌嗪-1-基)苯甲酸N-(1-氨基甲?；?1-醇-3-苯基丙-2-基)酰胺按照與實施例1c類似的方式，在2.9ml三乙胺存在下，將1.5g中間體化合物26a置于50ml DMF中，并依次用0.7g HOBT、1.2g 3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酰胺鹽酸鹽、和1.1g EDC處理，獲得了1.7g(71％)產(chǎn)物。c)3-(4-芐基哌嗪-1-基)苯甲酸N-(1-氨基甲?；?1-氧代-3-苯基丙-2-基)酰胺按照與實施例1d類似的方式，將1.5g中間體化合物26b溶于30ml DMSO中，并在2ml三乙胺存在下用1.5g SO3-吡啶復(fù)合物將其氧化，獲得了0.5g(33％)產(chǎn)物。MSm/e=470(M+)實施例232-(4-(2-萘基甲基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-丁氧基羰基哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例1c類似的方式，將13g 2-(4-丁氧基羰基哌嗪-1-基)煙酸溶于150ml二氯甲烷和14.7ml三乙胺中，并依次用6.4g苯丙氨醇、1.9g HOBT和8.11g EDC處理，獲得了16.7g(90％)產(chǎn)物。b)2-(哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺將16.7g中間體化合物27a溶于300ml二氯甲烷中，并用30ml濃三氟乙酸處理。將該混合物在室溫攪拌1.5小時。將該反應(yīng)混合物倒入冰水中，堿化，并用二氯甲烷萃取。合并有機相，用硫酸鎂干燥并濃縮，獲得了12.8g(98％)產(chǎn)物。c)2-(4-(2-萘基甲基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺將1.9g中間體化合物27b置于75ml乙醇中，并用1.3g 2-α-溴甲基萘和0.8g碳酸鉀處理。將該混合物在室溫攪拌18小時。將該反應(yīng)混合物濃縮，把殘余物在乙酸乙酯和水之間分配，將有機相用硫酸鎂干燥并濃縮，獲得了2.3g(86％)產(chǎn)物。d)2-(4-(2-萘基甲基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例1d類似的方式，在1.7ml三乙胺存在下，在25mlDMSO中用1.5g SO3-吡啶復(fù)合物將1.5g中間體化合物27c氧化，獲得了0.9g(59％)產(chǎn)物。MSm/e=478(M+)實施例242-(4-(2-甲苯基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-(2-甲苯基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例27c類似的方式，將2.0g中間體化合物27置于100ml乙醇中，并用1.1g 2-(溴甲基)甲苯和0.8g碳酸鉀處理，獲得了1.6g(62％)產(chǎn)物。b)2-(4-(2-甲苯基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例1d類似的方式，在1.7ml三乙胺存在下，在25mlDMSO中用1.0g SO3-吡啶復(fù)合物將1.4g中間體化合物28a氧化，獲得了0.7g(48％)產(chǎn)物。MSm/e=460(M++H2O)實施例252-(4-(3-甲苯基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-(3-甲苯基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例27c類似的方式，將2.0g中間體化合物29b置于80ml乙醇中，并用1.1g 3-(溴甲基)甲苯和0.8g碳酸鉀處理，獲得了1.8g(70％)產(chǎn)物。b)2-(4-(3-甲苯基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例1d類似的方式，在2.0ml三乙胺存在下，在25mlDMSO中用1.2g SO3-吡啶復(fù)合物將1.6g中間體化合物29a氧化，獲得了0.4g(26％)產(chǎn)物。MSm/e=442(M+)實施例262-(4-(4-甲苯基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-(4-甲苯基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例27c類似的方式，將1.6g中間體化合物27b置于80ml乙醇中，并用1.1g 4-(溴甲基)甲苯和0.8g碳酸鉀處理，獲得了1.8g(69％)產(chǎn)物。b)2-(4-(4-甲苯基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例1d類似的方式，在2.0ml三乙胺存在下，在25mlDMSO中用1.2g SO3-吡啶復(fù)合物將1.6g中間體化合物30a氧化，獲得了0.7g(46％)產(chǎn)物。MSm/e=460(M++H2O)實施例272-(4-(4-甲氧基羰基芐基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺a)2-(4-(4-甲氧基羰基芐基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醇-2-基)酰胺按照與實施例27c類似的方式，將2.5g中間體化合物27b置于100ml乙醇中，并用1.7g溴甲基苯甲酸甲酯和1.0g碳酸鉀處理，獲得了1.9g(54％)產(chǎn)物。b)2-(4-(4-甲氧基羰基芐基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺按照與實施例1d類似的方式，在1.0ml三乙胺存在下，在5ml DMSO中用0.6g SO3-吡啶復(fù)合物將0.9g中間體化合物31a氧化，獲得了0.1g(15％)產(chǎn)物。MSm/e=485(M+-1)下述實施例是按照與實施例1-27類似的方式合成的實施例282-(4-甲基吡啶-3-基)高哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺MSm/e=443(M+)實施例292-(4-芐基哌嗪-1-基)煙酸N-(1-氨基甲酰基-1-氧代-3-苯基丙-2-基)酰胺二鹽酸鹽MSm/e=471(M+)實施例302-(4-芐基哌嗪-1-基)苯甲酸N-(1-氨基甲?；?1-氧代-3-苯基丙-2-基)酰胺MSm/e=470(M+)實施例312-(4-芐基哌嗪-1-基)煙酸N-(1-氨基甲酰基-1-氧代己-2-基)酰胺MSm/e=437(M+)實施例322-(4-芐基哌嗪-1-基)吡啶-4-甲酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺MSm/e=428(M+)實施例332-(4-芐基哌嗪-1-基)煙酸N-(N-(2-哌啶-1-基-1-乙基)-1-氨基甲?；?1-氧代-3-苯基丙-2-基)酰胺MSm/e=582(M+)實施例342-(4-芐基哌嗪-1-基)煙酸N-(N-(2-哌啶-1-基-1-乙基)-1-氨基甲?；?1-氧代-3-苯基丙-2-基)酰胺MSm/e=584(M+)實施例352-(4-芐基哌嗪-1-基)煙酸N-(N-(2-吡啶-2-基-1-乙基)-1-氨基甲?；?1-氧代-3-苯基丙-2-基)酰胺MSm/e=576(M+)實施例362-(4-芐基哌嗪-1-基)煙酸N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)-1-丙基)-1-氨基甲?；?1-氧代-3-苯基丙-2-基)酰胺MSm/e=611(M+)實施例372-(4-芐基哌嗪-1-基)煙酸N-(N-(3-(N,N-二乙基氨基-1-丙基)-1-氨基甲?；?1-氧代-3-苯基丙-2-基)酰胺MSm/e=584(M+)實施例382-((3-N,N-二甲基氨基甲基吡啶-2-基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺×3富馬酸MSm/e=500(M++1)實施例392-(4-苯基哌嗪-1-基)苯甲酸N-(1-氨基甲?；?1-氧代-3-苯基丙-2-基)酰胺MSm/e=456(M+)實施例405-硝基-2-(4-苯基哌嗪-1-基)苯甲酸N-(1-氨基甲酰基-1-氧代-3-苯基丙-2-基)酰胺MSm/e=501(M+)實施例412-(4-芐基哌嗪-1-基)-5-硝基苯甲酸N-(1-氨基甲?；?1-氧代-3-苯基丙-2-基)酰胺MSm/e=515(M+)實施例422-(3-苯基吡咯烷-1-基)煙酸N-(1-氨基甲?；?1-氧代-3-苯基丙-2-基)酰胺1H-NMR(CF3COOD)δ=2.0-2.7(2H)；3.0(1H)；3.3-4.0(6H)；5.9(1H)；6.9(1H)，7.0-7.4(10H) and7.9(2H)ppm實施例432-(4-(4-(N,N-二甲基氨基)芐基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺MSm/e=471實施例442-(4-(3-(2-(N,N-二乙基氨基)-1-乙基吡啶-2-基)哌嗪-1-基)煙酸N-(1-氨基甲酰基-1-氧代-3-苯基丙-2-基)酰胺1H-NMR(Methanol-D4)δ=1.4(6H)；3.0-4.0(17H)；4.5(2H)；7.0-7.5(7H)；8.0-9.0(5H)實施例454-(4-芐基哌嗪-1-基)煙酸N-(1-氨基甲?；?1-氧代-3-苯基丙-2-基)酰胺MSm/e=471實施例462-(4-(吡啶-2-基)哌嗪-1-基)煙酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺MSm/e=415實施例472-(4-(吡啶-2-基)哌嗪-1-基)煙酸N-(1-氨基甲?；?1-氧代-3-苯基丙-2-基)酰胺1H-NMR(DMSO-D6)δ=2.9-4.1(10H)；5.5(1H)；6.7-8.2(14H)；9.1(1H)實施例482-(4-芐基哌嗪-1-基)煙酸N-(戊-1-醛-2-基)酰胺1H-NMR(CDCl3)δ=1.0-2.0(7H)；2.7-3.8(8H)；4.8(1H)；7.3-8.4(8H)；9.7(2H)實施例492-(4-芐基哌嗪-1-基)煙酸N-(3-(吲哚-3-基)丙-1-醛-2-基)酰胺1H-NMR(CDCl3)δ=2.0-3.5(12H)；5.0(1H)；7.3-8.0(13H)；8.4(2H)；9.6-9.8(2H)實施例502-(4-(甲基吡啶-2-基)高哌嗪-1-基)煙酸N-(3-(吲哚-3-基)丙-1-醛-2-基)酰胺1H-NMR(CDCl3)δ=1.7(2H)；2.6-3.7(12H)；5.0(1H)；6.8-8.6(14H)；9.8(1H)實施例512-(4-芐基哌嗪-1-基)吡啶-4-甲酸N-(1-氨基甲?；?1-氧代-3-苯基丙-2-基)酰胺MSm/e=471實施例522-(4-甲基哌嗪-1-基)喹啉-4-甲酸N-(1-氨基甲?；?1-氧代-3-苯基丙-2-基)酰胺1H-NMR(D2O)δ=2.8(1H)；3.0(3H)；3.2-4.5(9H)；6.7-7.8(10H)實施例532-(4-芐基高哌嗪-1-基)吡啶-4-甲酸N-(3-苯基丙-1-醛-2-基)酰胺MSm/e=442
表
權(quán)利要求
1．通式Ⅰ雜環(huán)取代酰胺、其互變異構(gòu)體和異構(gòu)體、對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體、以及生理可接受鹽， 其中各變量具有下述含義A是哌嗪、高哌嗪、六氫氮雜、哌啶或吡咯烷，其中所述雜環(huán)還可攜帶基團(tuán)R5，B是苯基、吡啶、嘧啶、吡嗪或噠嗪環(huán)，R1和R2獨立地為氫、支鏈或直鏈C1-C6-烷基、支鏈或直鏈O-C1-C6-烷基、OH、Cl、F、Br、I、CF3、NO2、NH2、CN、COOH、COO-C1-C4-烷基、NHCO-C1-C4-烷基、NHCO-苯基、CONHR9、NHSO2-C1-C4-烷基、NHSO2-苯基、SO2-C1-C4-烷基和SO2-苯基，并且R1和R2可以一起形成還可攜帶1個或2個取代基R6的-CH=CH-CH=CH-鏈，R3是還可攜帶下述基團(tuán)的支鏈或直鏈C1-C6-烷基S-CH3、環(huán)己基、環(huán)戊基、環(huán)庚基、苯基、吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、吡唑基、吲哚基、噻吩基或萘基環(huán)，其中所述環(huán)被最多2個R7取代，R7是氫、支鏈或直鏈C1-C4-烷基、O-C1-C4-烷基、OH、Cl、F、Br、I、CF3、NO2、NH2、CN、COOH、COO-C1-C4-烷基、CONHR9、NHCO-C1-C4-烷基、NHCO-苯基、NHSO2-C1-C4-烷基、NHSO2-苯基、SO2-C1-C4-烷基和SO2-苯基，R4是氫、-COR8，其中R8可以是-OR9和-NR9R10，R5是氫、可攜帶取代基R11的支鏈或直鏈C1-C6-烷基，或者R5是可攜帶1個或2個取代基R6的苯基、吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、吡唑基、萘基、噻吩基、哌啶基、吡咯烷基或咪唑基環(huán)，R6是氫、支鏈或直鏈C1-C6-烷基、支鏈或直鏈O-C1-C6-烷基、OH、Cl、F、Br、I、CF3、NO2、NH2、CN、COOH、COO-C1-C4-烷基、或C1-C4-烷基-NR9R13，或者兩個R6可一起形成橋OC(R9)2O，R9是氫、支鏈和直鏈C1-C6-烷基，R10是氫、支鏈或直鏈C1-C6-烷基，該C1-C6-烷基可被攜帶R12的苯基環(huán)和被下列各式 取代，R11可以是可攜帶1個或2個取代基R6的苯基、吡啶基、嘧啶基、萘基、噻吩基、呋喃基、噠嗪基、吡嗪基、吡唑基、吡咯基或咪唑基環(huán)，R12是氫、支鏈或直鏈C1-C6-烷基、支鏈或直鏈O-C1-C6-烷基、OH、Cl、F、Br、I、CF3、NO2、NH2、CN、COOH、COO-C1-C4-烷基，R13是氫、C1-C4-烷基鏈和C0-C4-烷基苯基，其中該苯基環(huán)還可攜帶1個或2個基團(tuán)R12，X是0、1或2。
2．權(quán)利要求1的式Ⅰ雜環(huán)取代酰胺，其中R4是氫。
3．權(quán)利要求1的式Ⅰ雜環(huán)取代酰胺，其中R4是CONR9R10。
4．權(quán)利要求1的式Ⅰ雜環(huán)取代酰胺，其中B是吡啶或苯基，且R4是氫。
5．權(quán)利要求1的式Ⅰ雜環(huán)取代酰胺，其中B是吡啶或苯基，且R4是CONR9R10。
6．權(quán)利要求1的式Ⅰ雜環(huán)取代酰胺，其中A是哌嗪，B是吡啶或苯基，且R4是氫。
7．權(quán)利要求1的式Ⅰ雜環(huán)取代酰胺，其中A是哌嗪，B是吡啶或苯基，且R4是CONR9R10。
8．權(quán)利要求1的式Ⅰ雜環(huán)取代酰胺，其中A是哌嗪，B是鄰位取代的吡啶或苯基，且R4是氫。
9．權(quán)利要求1的式Ⅰ雜環(huán)取代酰胺，其中A是哌嗪，B是鄰位取代的吡啶或苯基，且R4是CONR9R10。
10．權(quán)利要求1-8任一項的式Ⅰ雜環(huán)取代酰胺在控制疾病中的應(yīng)用。
11．權(quán)利要求1-8任一項的式Ⅰ雜環(huán)取代酰胺作為半胱氨酸蛋白酶抑制劑的應(yīng)用。
12．權(quán)利要求9的應(yīng)用，其中所述應(yīng)用是作為半胱氨酸蛋白酶例如鈣蛋白酶和組織蛋白酶B和L的抑制劑的應(yīng)用。
13．權(quán)利要求1-8任一項的式Ⅰ雜環(huán)取代酰胺在制備用于治療其中鈣蛋白酶活性增加的疾病的藥物中的應(yīng)用。
14．權(quán)利要求1-8任一項的式Ⅰ雜環(huán)取代酰胺在制備用于治療神經(jīng)變性疾病和神經(jīng)元損傷的藥物中的應(yīng)用。
15．權(quán)利要求12的應(yīng)用，其中所述應(yīng)用是在治療由局部缺血、創(chuàng)傷或大量出血引起的神經(jīng)變性疾病和神經(jīng)元損傷中的應(yīng)用。
16．權(quán)利要求12的應(yīng)用，其中所述應(yīng)用是在治療腦中風(fēng)和顱腦創(chuàng)傷中的應(yīng)用。
17．權(quán)利要求12的應(yīng)用，其中所述應(yīng)用是在治療阿爾茨海默氏病和亨廷頓氏舞蹈病中的應(yīng)用。
18．權(quán)利要求1-8任一項的式Ⅰ雜環(huán)取代酰胺在制備用于治療下述疾病的藥物中的應(yīng)用心臟局部缺血后的心臟損傷、血管閉塞后的損傷和再灌注、腎局部缺血后的腎臟損傷、骨骼肌損傷、肌肉營養(yǎng)不良、由于平滑肌細(xì)胞增殖所導(dǎo)致的損傷、冠狀血管痙攣、腦血管痙攣、眼睛內(nèi)障、和血管成形術(shù)后的血流再狹窄。
19．權(quán)利要求1-8任一項的式Ⅰ雜環(huán)取代酰胺在制備用于治療腫瘤和腫瘤轉(zhuǎn)移的藥物中的應(yīng)用。
20．權(quán)利要求1-8任一項的式Ⅰ雜環(huán)取代酰胺在制備用于治療其中白細(xì)胞介素-1水平增加的疾病的藥物中的應(yīng)用。
21．權(quán)利要求1-8的應(yīng)用，其中所述應(yīng)用用于治療炎癥和風(fēng)濕性疾病。
22．用于口服給藥、非胃腸道給藥和腹膜內(nèi)給藥的藥物制劑，所述藥物制劑每一單位劑量包含至少一種權(quán)利要求1-8任一項的式Ⅰ雜環(huán)取代酰胺和常規(guī)藥物輔料。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式Ⅰ雜環(huán)取代酰胺、其互變異構(gòu)體和異構(gòu)體、對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體、以及生理可接受鹽,其中各變量具有權(quán)利要求1中所給出的意義,所述化合物適于作為酶抑制劑,尤其是半胱氨酸蛋白酶例如鈣蛋白酶和組織蛋白的酶抑制劑。
文檔編號C07D401/14GK1297441SQ99805242
公開日2001年5月30日 申請日期1999年4月20日 優(yōu)先權(quán)日1998年4月20日
發(fā)明者W·盧比施, A·梅勒, H·J·特雷貝爾, M·克諾普 申請人:Basf公司