專利名稱：：二肽卡斯帕酶抑制劑及其用途的制作方法
背景技術(shù)：
：發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域。具體地講，本發(fā)明涉及作為卡斯帕酶(caspase,cysteineaspartase)有效抑制劑的二肽。本發(fā)明還涉及這些二肽降低或治療編程性細(xì)胞死亡和/或降低白細(xì)胞介素1-β產(chǎn)生的用途。
背景技術(shù)：
：機(jī)體消除不需要的細(xì)胞是通過一種稱為編程性細(xì)胞死亡或細(xì)胞程序性死亡的過程(regulatedcelldeath,programmedcelldeath或apoptosis)。此細(xì)胞死亡作為動(dòng)物發(fā)育及組織內(nèi)穩(wěn)態(tài)和老化的正常方面發(fā)生(Glucksmann.A.,Bio1.Rev.CambridgePhilos.Soc.2659-86(1951)；G1ucksmann,A.,ArchivesdeBiologie76419-437(1965)；E1lis等，Dev.112591-603(1991)；Vaux等，細(xì)胞(Cell)76777-779(1994))。編程性細(xì)胞死亡調(diào)節(jié)細(xì)胞數(shù)目、加速形態(tài)形成、除去有害物或非正常細(xì)胞并消除已完成了其功能的細(xì)胞。此外，編程性細(xì)胞死亡應(yīng)多種生理應(yīng)激狀態(tài)而發(fā)生，例如低氧癥或局部缺血(PCT公開申請(qǐng)WO96/20721)。經(jīng)歷編程性細(xì)胞死亡的細(xì)胞發(fā)生了一些形態(tài)變化，包括細(xì)胞漿和細(xì)胞核膜出現(xiàn)水泡，細(xì)胞皺縮(核質(zhì)和細(xì)胞質(zhì)凝縮)，細(xì)胞器重新定位和收縮，染色質(zhì)凝縮及編程性死亡體的產(chǎn)生(含細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的膜包封顆粒)(Orrenius,S.,J.InternalMedicine237529-536(1995))。編程性細(xì)胞死亡是通過細(xì)胞自殺的內(nèi)部機(jī)制達(dá)到的(Wyllie,A.H.,細(xì)胞死亡中的生物和病理學(xué)，Bowen和Lockshin編輯，ChapmanandHall(1981),pp.9-34)。由于產(chǎn)生內(nèi)部或外部信號(hào)結(jié)果細(xì)胞激活其內(nèi)部編碼的自殺程序。該自殺程序通過激活仔細(xì)調(diào)節(jié)的基因程序進(jìn)行(Wylie等，Int.Rev.Cyt.68251(1980)；El1is等，Ann.Rev.CellBio.7663(1991))。編程性死亡細(xì)胞或細(xì)胞體通常在溶解前由相鄰細(xì)胞或巨噬細(xì)胞識(shí)別和清除。由于此清除機(jī)制，盡管清除了大量細(xì)胞卻不引起炎癥(Orrenius,S.,J.InternalMedicine237529-536(1995))。哺乳動(dòng)物白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)在多種病理過程中扮演了重要角色，包括急性和慢性炎癥以及自身免疫性疾病(Oppenheim,J.H.等，ImmunologyToday,7,45-56(1986))。IL-1是作為與細(xì)胞有關(guān)的前體多肽合成的(前-IL-1)，其不能結(jié)合IL-1受體且沒有生物活性(Mosley等，J.Bio1.Chem.2622941-2944(1987))。通過抑制前體IL-1β向成熟IL-1β的轉(zhuǎn)化，可以抑制白細(xì)胞介素-1的活性。白細(xì)胞介素-1β轉(zhuǎn)化酶(ICE)是負(fù)責(zé)激活白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)的蛋白酶(Thornberry,N.A.等，Nature356768(1992)；Yuan,J.等，Cell75641(1993))。ICE是底物特異性的半胱氨酸蛋白酶，該酶將無活性的前白細(xì)胞介素-1分解而產(chǎn)生成熟的IL-1。編碼ICE和CPP32的基因是哺乳動(dòng)物ICE/Ced-3基因族的成員，其目前至少包括十二個(gè)成員ICE,CPP32/Yama/Apopain.mICE2,ICE4,ICH1,TX/ICH-2,MCH2,MCH3,MCH4,FLICE/MACH/MCH5,ICE-LAP6和ICErelⅢ。此族半胱氨酸蛋白酶的蛋白水解活性似乎對(duì)介導(dǎo)細(xì)胞死亡是關(guān)鍵的，其活化位點(diǎn)(半胱氨酸殘基)對(duì)ICE介導(dǎo)的編程性細(xì)胞死亡是必需的(Miura等，Cell75653-660(1993))。最近將此基因族命名為卡斯帕酶(caspases)(Alnernri,E.S.等，Cell,87,171(1996)和Thornberry,N.A.等，J.Biol.Chem.272，17907-17911(1997))并按照其已知功能將其分為三組。表Ⅰ總結(jié)了這些已知卡斯帕酶。表Ⅰ<tablesid="table1"num="001"><table>Enzyme*組Ⅰ炎癥的遞質(zhì)卡斯帕酶-1(ICE)卡斯帕酶-4(ICErel-Ⅱ，TX，ICH-2)卡斯帕酶-5(ICErel-Ⅲ，TY)組Ⅱ編程性細(xì)胞死亡的效應(yīng)子卡斯帕酶-2(ICH-1，mNEDD2)卡斯帕酶-3(apopain，CPP-32，YAMA)卡斯帕酶-7(Mch-3，ICE-LAP3，CMH-1)組Ⅲ編程性細(xì)胞死亡的激活物卡斯帕酶-6(Mch2)卡斯帕酶-8(MACH，F(xiàn)LICE，Mch5)卡斯帕酶-9(ICE-LAP6，Mch6)卡斯帕酶-10</table></tables>IL-1還是參與介導(dǎo)大量生物反應(yīng)的細(xì)胞因子，包括炎癥、膿毒性休克、傷口愈合、血細(xì)胞生成和某些白血病的發(fā)展(Dinarello,C.A.,Blood771627-1652(1991)；diGiovine等，lmmunologyToday1113(1990))。根據(jù)卡斯帕酶的肽底物結(jié)構(gòu)已制備了多種有效的卡斯帕酶抑制劑。但是，與其體外活性比較，還沒有報(bào)告任何在編程性細(xì)胞死亡的全細(xì)胞模型中具有良好效果的抑制劑(IC50＜1M)(Thomberry,N.A.Chem.Bio1.5R97-103(1998))。因此，需要細(xì)胞死亡抑制劑，其在編程性細(xì)胞死亡的全細(xì)胞模型有效并在編程性細(xì)胞死亡的動(dòng)物模型中具有活性。因此，這些抑制劑可以用作治療劑，以治療編程性細(xì)胞死亡和IL-1的細(xì)胞因子活性起作用的疾病。WO93/05071公開了下式的肽ICE抑制劑Z-Q2-Asp-Q1其中Z是N末端保護(hù)基；Q2是0至4個(gè)氨基酸，使Q2-Asp序列相應(yīng)于序列Ala-Tyr-Val-His-Asp的至少某個(gè)部分；Q1包括負(fù)電性離去基團(tuán)。二肽的實(shí)例為Boc-His-Asp-CH2F，Boc-Tyr-Asp-CH2F，Boc-Phe-Asp-CH2F，Ac-His-Asp-CH2F，Ac-Tyr-Asp-CH2F，Ac-Phe-Asp-CH2F，Cbz-His-Asp-CH2F，Cbz-Tyr-Asp-CH2F及Cbz-Phe-Asp-CH2F。WO96/03982公開了作為ICE抑制劑的下式的天門冬氨酸類似物其中R是H或烷基；R3是離去基團(tuán)如鹵素；R1是雜芳基-CO或氨基酸殘基。美國專利5,585,357公開了作為ICE抑制劑的下式的肽酮其中n是0-2；每個(gè)AA獨(dú)立地是L-纈氨酸或L-丙氨酸；R1選自N-芐氧羰基和其它基團(tuán)組成的基團(tuán)；R8、R9、R10彼此獨(dú)立地是氫原子、低級(jí)烷基和其它基團(tuán)。Revesz等(TetrahedronLett.35,9693-9696,1994)報(bào)告了三肽乙基酯的制備其是相應(yīng)酸的前藥，該酸是有效的ICE抑制劑。本發(fā)明涉及式Ⅰ表示的這些化合物是有效的卡斯帕酶抑制劑的發(fā)現(xiàn)。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的二肽降低、防止或治療其中編程性細(xì)胞死亡是病因或后果的疾病的用途。本發(fā)明用途的實(shí)例包括在病灶局部缺血和腦局部缺血后保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)；治療神經(jīng)變性疾病如早老性癡呆，杭廷頓氏舞蹈病，朊病毒疾病，帕金森氏病，多發(fā)性硬化，肌萎縮外側(cè)硬化，共濟(jì)失調(diào)，毛細(xì)管擴(kuò)張和脊髓延髓萎縮；治療心臟病包括心肌梗塞，充血性心力衰竭和心肌病；治療視網(wǎng)膜病；治療自身免疫性疾病，包括紅斑狼瘡，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，Ⅰ型糖尿病，Sjogren′s綜合征和腎小球性腎炎；治療多囊性腎病和貧血/紅細(xì)胞生成；治療免疫系統(tǒng)疾病，包括AIDS和SCIDS；降低或防止移植中細(xì)胞、組織和器官損害；在工業(yè)生物技術(shù)中降低或防止細(xì)胞系死亡；降低或防止脫發(fā)(掉頭發(fā))；及降低皮膚細(xì)胞的早熟性死亡。本發(fā)明提供了含有降低動(dòng)物中編程性細(xì)胞死亡有效量的式Ⅰ化合物的藥物組合物。本發(fā)明還提供了哺乳動(dòng)物器官或組織的防腐或保存溶液，或哺乳動(dòng)物或酵母細(xì)胞的生長培養(yǎng)基，其中在上述溶液或培養(yǎng)基中含有有效量的式Ⅰ化合物，以降低所述器官、組織或細(xì)胞中的編程性細(xì)胞死亡。發(fā)明詳述本發(fā)明的卡斯帕酶和編程性細(xì)胞死亡的抑制劑為通式Ⅰ的化合物或其藥用鹽或前藥其中R1是N-末端保護(hù)基，包括叔丁氧羰基，乙酰基和芐氧羰基；AA是非天然氨基酸的殘基或-氨基酸，R2是選擇性取代的烷基或H。對(duì)于R2，優(yōu)選的烷基是C1-C6烷基，例如，甲基，乙基，丙基，異丙基，異丁基，戊基和己基；以及取代的C1-C6烷基，例如CH2OCH3和CH2OCOCH3(AM)。本發(fā)明涉及發(fā)現(xiàn)式Ⅰ的化合物是有效的卡斯帕酶抑制劑。這些抑制劑減慢或阻斷發(fā)生細(xì)胞、組織或整個(gè)器官損失的多種臨床癥狀和工業(yè)應(yīng)用中細(xì)胞的死亡。因此，本發(fā)明還涉及治療、預(yù)防或減輕編程性細(xì)胞死亡起一定作用的病癥。這些病癥將在下文中詳述。這些方法包括給需要此治療的動(dòng)物以抑制編程性細(xì)胞死亡有效量使用的本發(fā)明的抑制劑或其藥用鹽或其前藥?？梢杂米骺ㄋ古撩敢种苿┑氖舰窕衔锏膬?yōu)選實(shí)施方案為式Ⅱ化合物或其藥用鹽或其前藥其中R1和R2定義如上述式Ⅰ中所述；而R3和R4獨(dú)立地為鹵代烷基，芳基，雜環(huán)基。雜芳基，C1-C10烷基，鏈烯基，炔基，芳烷基，芳烯基，芳炔基和羥基烷基。優(yōu)選R1是叔丁氧羰基，乙酰基或芐氧羰基。優(yōu)選R2是H，Me，Et，t-Bu或AM。優(yōu)選R3是C1-C10烷基，鹵代烷基，芳基或雜芳基，并優(yōu)選R4是Me。可以用作卡斯帕酶抑制劑的式Ⅰ化合物的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是式Ⅲ表示的化合物或其藥用鹽或其前藥，其中R1和R2定義如式Ⅰ中所述；而R5，R6，R7和R8獨(dú)立地為氫，鹵代烷基，芳基，雜環(huán)基，碳環(huán)，雜芳基，C1-C10烷基，鏈烯基，炔基，芳烷基，芳烯基，芳炔基或羥基烷基；條件是R5-R8中至少一個(gè)不是氫原子。優(yōu)選R1是叔丁氧羰基，乙?；蚱S氧羰基。優(yōu)選R2是H,Me,Et,t-Bu或AM。優(yōu)選R5是氫，C1-C10烷基，鹵代烷基，芳基或雜芳基；優(yōu)選R6是氫或Me。優(yōu)選R7是C1-C10烷基，鹵代烷基，芳基或雜芳基；優(yōu)選R8是氫或Me。可以作為卡斯帕酶抑制劑的式Ⅰ化合物的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是式Ⅳ表示的化合物或其藥用鹽或前藥其中R1和R2定義如上述式Ⅰ中所述；而R12是氫原子或C1-C10烷基；B是芳基，雜芳基，飽和或部分不飽和碳環(huán)或飽和或部分不飽和雜環(huán)，其中任何一個(gè)都可以選擇性被一個(gè)或多個(gè)選自如下的基團(tuán)取代氫、鹵素、C1-C6鹵代烷基、C6-C10芳基、C4-C7環(huán)烷基、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C6-C10芳基(C1-C6)烷基、C6-C10芳基(C2-C6)鏈烯基、C6-C10芳基(C2-C6)炔基、C1-C6羥基烷基、硝基、氨基、氰基、C1-C6酰氨基、羥基、C1-C6酰氧基、C1-C6烷氧基、烷基硫基或羧基。優(yōu)選R1是叔丁氧羰基，乙?；蚱S氧羰基。優(yōu)選R2是H,Me,Et,t-Bu或AM。優(yōu)選R12是氫或Me。優(yōu)選B是選擇性取代的苯基，噻吩基，呋喃基，吡啶基，環(huán)己基，環(huán)戊基，環(huán)丁基或環(huán)丙基。可以作為卡斯帕酶抑制劑的式Ⅰ化合物的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是式Ⅴ表示的化合物或其藥用鹽或前藥其中R1、R2和R12定義如上述式Ⅰ和Ⅳ中所述；而R9、R10和R11獨(dú)立地為氫，C1-C10烷基，鹵素，鹵代烷基，選擇性取代的芳基，雜芳基，飽和或部分不飽和碳環(huán)或飽和或部分不飽和雜環(huán)；條件是R9-R11中至少一個(gè)是鹵素，鹵代烷基，雜芳基，飽和或部分不飽和碳環(huán)或飽和或部分不飽和雜環(huán)。優(yōu)選R1是叔丁氧羰基，乙?；蚱S氧羰基。優(yōu)選R2是H,Me,Et,t-Bu或AM。優(yōu)選R12是氫或Me。優(yōu)選R9，R10和R11獨(dú)立地是氫，甲基，氯，氟，氟甲基，二氟甲基，三氟甲基，氯甲基，氯氟甲基，噻吩基，呋喃基，吡啶基，環(huán)己基，環(huán)戊基，環(huán)丁基和環(huán)丙基。優(yōu)選的式Ⅰ的卡斯帕酶和編程性細(xì)胞死亡抑制劑的實(shí)例非限制性地包括Boc-Phg-Asp-fmk，Boc-(2-F-Phg)-Asp-fmk，Boc-(F3-Val)-Asp-fmk，Boc-(3-F-Val)-Asp-fmk，Ac-Phg-Asp-fmk，Ac-(2-F-Phg)-Asp-fmk，Ac-(F3-Val)-Asp-fmk，Ac-(3-F-Val)-Asp-fmk，Z-Phg-Asp-fmk，Z-(2-F-Phg)-Asp-fmk，Z-(F3-Val)-Asp-fmk，Z-Chg-Asp-fmk，Z-(2-Fug)-Asp-fmk，Z-(4-F-Phg)-Asp-fmk，Z-(4-Cl-Phg)-Asp-fmk，Z-(3-Thg)-Asp-fmk，Z-(2-Fua)-Asp-fmk，Z-(2-Tha)-Asp-fmk，Z-(3-Fua)-Asp-fmk，Z-(3-Tha)-Asp-fmk，Z-(3-Cl-Ala)-Asp-fmk，Z-(3-F-Ala)-Asp-fmk，Z-(F3-Ala)-Asp-fmk，Z-(3-F-3-Me-Ala)-Asp-fmk，Z-(3-Cl-3-F-Ala)-Asp-fmk，Z-(2-Me-Val)-Asp-fmk，Z-(2-Me-Ala)-Asp-fmk，Z-(2-i-Pr-β-Ala)-Asp-fmk，Z-(3-Ph-β-Ala)-Asp-fmk，Z-(3-CN-Ala)-Asp-fmk，Z-(1-Nal)-Asp-fmk，Z-Cha-Asp-fmk，Z-(3-CF3-Ala)-Asp-fmk，Z-(4-CF3-Phg)-Asp-fmk，Z-(3-Me2N-Ala)-Asp-fmk，Z-(2-Abu)-Asp-fmk，Z-Tle-Asp-fmk，Z-Cpg-Asp-fmk，Z-Cbg-Asp-fmk，Z-Thz-Asp-fmk，Z-(3-F-Val)-Asp-fmk，及Z-(2-Thg)-Asp-fmk。其中Z是芐氧羰基，BOC是叔丁氧羰基，Ac是乙?；?，Phg是苯基甘氨酸，2-F-Phg是(2-氟苯基)甘氨酸，F(xiàn)3-Val是4,4,4-三氟-纈氨酸，3-F-Val是3-氟-纈氨酸，2-Thg是(2-噻吩基)甘氨酸，Chg是環(huán)己基甘氨酸，2-Fug是(2-呋喃基)甘氨酸，4-F-Phg是(4-氟苯基)甘氨酸，4-Cl-Phg是(4-氯苯基)甘氨酸，3-Thg是(3-噻吩基)甘氨酸，2-Fua是(2-呋喃基)丙氨酸，2-Tha是(2-噻吩基)丙氨酸，3-Fua是(3-呋喃基)丙氨酸，3-Tha是(3-噻吩基)丙氨酸，3-Cl-Ala是3-氯丙氨酸，3-F-Ala是3-氟丙氨酸，F(xiàn)3-Ala是3，3，3-三氟丙氨酸，3-F-3-Me-Ala是3-氟-3-甲基丙氨酸，3-Cl-3-F-Ala是3-氯-3-氟丙氨酸，2-Me-Val是2-甲基纈氨酸，2-Me-Ala是2-甲基丙氨酸，2-i-Pr-β-Ala是3-氨基-2-異丙基丙酸，3-Ph-β-Ala是3-氨基-3-苯基丙酸，3-CN-Ala是3-氰基丙氨酸，1-Nal是3-(1-萘基)-丙氨酸，Cha是環(huán)己基丙氨酸，3-CF3-Ala是2-氨基-4，4，4-三氟丁酸，4-CF3Phg是4-三氟甲基苯基甘氨酸，3-Me2N-Ala是3-二甲基氨基丙氨酸，2-Abu是2-氨基丁酸，Tle是叔-亮氨酸，Cpg是環(huán)戊基甘氨酸，Cbg是環(huán)丁基甘氨酸而Thz是硫代脯氨酸。這些氨基酸衍生物可以是對(duì)映體純的或外消旋混合物。可利用的芳基是C6-C14芳基，特別是C6-C10芳基。典型的C6-C14芳基包括苯基，萘基，菲基，蒽基，茚基，薁基，聯(lián)苯基，亞聯(lián)苯基和芴基?？衫玫沫h(huán)烷基為C3-C8環(huán)烷基。典型的環(huán)烷基包括環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基和環(huán)己基及環(huán)庚基。可利用的飽和或部分飽和碳環(huán)基團(tuán)為定義如上的環(huán)烷基，以及環(huán)烯基，例如，環(huán)戊烯基、環(huán)庚烯基和環(huán)辛烯基?？衫玫柠u素或鹵原子包括氟、氯、溴和碘?？衫玫耐榛ㄖ辨溁蛑ф淐1-C10烷基，更優(yōu)選C1-C6烷基。典型的C1-C10烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、3-戊基、己基和辛基。還包括在本發(fā)明化合物苯環(huán)上的兩個(gè)鄰接位上取代的三亞甲基?？衫玫逆溝┗荂2-C6烯基，優(yōu)選C2-C4烯基。典型的C2-C4烯基包括乙烯基、丙烯基、異丙烯基、丁烯基和仲丁烯基。可利用的炔基為C2-C6炔基，優(yōu)選C2-C4炔基。典型的C2-C4炔基包括乙炔基、丙炔基、丁炔基和2-丁炔基。可利用的芳烷基包括被任何上述C6-C14芳基取代的任何上述C1-C10烷基。有價(jià)值的包括芐基、苯乙基和萘甲基?？衫玫姆蓟┗ū蝗魏紊鲜鯟6-C14芳基取代的任何上述C2-C4鏈烯基?？衫玫姆蓟不ū蝗魏紊鲜鯟6-C14芳基取代的任何上述C2-C4炔基。有價(jià)值的包括苯基乙炔基和苯基丙炔基?？衫玫柠u代烷基包括被一個(gè)或多個(gè)氟、氯、溴或碘原子取代的C1-C10烷基，例如，氟甲基，二氟甲基，三氟甲基，五氟乙基，1，1-二氟乙基，氯甲基，氯氟甲基和三氯甲基。可利用的羥基烷基包括被羥基取代的C1-C10烷基，例如，羥甲基、羥乙基、羥丙基和羥丁基?？衫玫耐檠趸ㄑ踉颖灰粋€(gè)上述C1-C10烷基取代后形成的基團(tuán)?？衫玫耐榱蚧蛟颖灰粋€(gè)上述C1-C10烷基取代后形成的基團(tuán)。還包括亞砜和這些烷硫基的亞砜?？衫玫孽０被鶠榕c氨基氮原子連接的任何C1-C6酰基(烷?；?及芳基取代的C2-C6取代的?；?，例如，乙酰氨基、丙酰氨基、丁酰氨基、戊酰氨基、己酰氨基?？衫玫孽Ｑ趸鶠榕c氧基(-O-)連接的任何C1-C6酰基(烷?；?，例如，乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、己?；??？衫玫陌被?NH2、-NHR14和-NR14R15，其中R14和R15是上述定義的C1-C10烷基或環(huán)烷基?？衫玫娘柡突虿糠诛柡碗s環(huán)基包括四氫呋喃基、吡喃基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、咪唑烷基、咪唑啉基、二氫吲哚基、二氫異吲哚基、奎寧環(huán)基、嗎啉基、異色滿基、色滿基、吡唑烷基和吡唑啉基。可利用的雜芳基包括下列中的任何一種噻吩基，苯并[b]噻吩基，萘并[2,3-b]噻吩基，噻蒽基，呋喃基，吡喃基，異苯并呋喃基，色烯基，呫噸基，酚黃質(zhì)基(phenoxanthiinyl)，2H-吡咯基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，噠嗪基，中氮茚基，異吲哚基，3H-吲哚基，吲哚基，吲唑基，嘌呤基，4H-喹嗪基，異喹啉基，喹啉基，酞嗪基，萘啶基，喹唑啉基，噌啉基，蝶啶基，咔唑基，β-咔啉基，菲啶基，吖啶基，白啶基，菲咯啉基，吩嗪基，異噻唑基，吩噻嗪基，異噁唑基，呋咱基，吩噁嗪基，1,4-二氫喹喔啉-2,3-二酮基，7-氨基異香豆素-基，吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮基，1,2-苯并異噁唑-3-基，苯并咪唑基，2-羥吲哚基和2-氧代苯并咪唑基。其中雜芳基在環(huán)中含氮原子，此氮原子可以是N-氧化物的形式，例如，吡啶基N-氧化物，吡嗪基N-氧化物，嘧啶基N-氧化物等。本發(fā)明的某些化合物可以以立體異構(gòu)體包括旋光異構(gòu)體的形式存在。本發(fā)明包括所有立體異構(gòu)體和這些立體異構(gòu)體的外消旋混合物及單個(gè)對(duì)映異構(gòu)體，它們可以按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法分離。藥用加成鹽的實(shí)例包括無機(jī)和有機(jī)酸加成鹽如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、枸櫞酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、扁桃酸鹽及草酸鹽，以及無機(jī)或有機(jī)堿加成鹽如氫氧化鈉、三(羥基甲基)氨基甲烷(TRIS,tromethane)和葡萄糖胺。前藥的實(shí)例包括式Ⅰ-Ⅴ的化合物，其中R2是烷基或取代的烷基如CH2OCH3和CH2OCOCH3(AM酯)。此外，在AA含羧酸基團(tuán)的情況中，R2是H的式Ⅰ-Ⅴ的前藥的實(shí)例包括兩個(gè)羧基中一個(gè)或兩個(gè)被酯化(例如，用C1-C6醇)或?yàn)橄鄳?yīng)的酰胺形式(例如，與C1-C6胺)的化合物。其中R3、R4、R7、R8、R12或B基團(tuán)被羥基、硫基或氨基取代的本發(fā)明化合物的其它前藥包括本發(fā)明化合物的C1-C6酯、硫代酸酯和酰胺。預(yù)計(jì)酯、硫代酸酯和酰胺衍生物比母體化合物更具親脂性，在體內(nèi)會(huì)更容易被細(xì)胞吸收。還預(yù)期酯和硫代酸酯在體內(nèi)被內(nèi)源性酯酶裂解為羥基或巰基取代的母體化合物。本發(fā)明還涉及治療對(duì)抑制哺乳動(dòng)物患有的編程性細(xì)胞死亡有反應(yīng)的疾病。用于本發(fā)明方法中的化合物的特別優(yōu)選的實(shí)例由上述定義的式Ⅰ-Ⅴ代表。本發(fā)明的化合物可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備。具體地講，式Ⅰ-V的化合物可以通過方案1列舉的反應(yīng)制備。中間體1按照Revesz等(TetrahedronLett.35,9693-9696,1994)的方法制備。將中間體1與N-保護(hù)的氨基酸的偶聯(lián)，該氨基酸可以商購或可以由商購的化合物制備，如Z-苯基甘氨酸-OH(Z-Phg-OH)得到酰胺2。用Dess-Martin試劑按照Revesz等(TetrahedronLett.35.9693-9696，1994)的方法將酰胺2氧化得到非對(duì)映異構(gòu)體混合物形式的化合物3。將該酯進(jìn)行催化裂解得到游離酸4。方案1可以用于此方法中的非天然氨基酸的其它實(shí)例非限制性地包括以下化合物的對(duì)映異構(gòu)和外消旋形式2-甲基纈氨酸，2-甲基丙氨酸，(2-異丙基)-β-丙氨酸，苯基甘氨酸，4-甲基苯基甘氨酸，4-異丙基苯基甘氨酸，3-溴代苯基甘氨酸，4-溴代苯基甘氨酸，4-氯苯基甘氨酸，4-甲氧基苯基甘氨酸，4-乙氧基苯基甘氨酸，4-羥基苯基甘氨酸，3-羥基苯基甘氨酸，3,4-二羥基苯基甘氨酸，3,5-二羥基苯基甘氨酸，2,5-二氫苯基甘氨酸，2-氟苯基甘氨酸，3-氟苯基甘氨酸，4-氟苯基甘氨酸，2,3-二氟苯基甘氨酸，2,4-二氟苯基甘氨酸，2,5-二氟苯基甘氨酸，2,6-二氟苯基甘氨酸，3,4-二氟苯基甘氨酸，3,5-二氟苯基甘氨酸，2-(三氟甲基)苯基甘氨酸，3-(三氟甲基)苯基甘氨酸，4-(三氟甲基)苯基甘氨酸，2-(2-噻吩基)甘氨酸，2-(3-噻吩基)甘氨酸，2-(2-呋喃基)甘氨酸，3-吡啶基甘氨酸，4-氟苯基丙氨酸，4-氯苯基丙氨酸，2-溴代苯基丙氨酸，3-溴代苯基丙氨酸，4-溴代苯基丙氨酸，2-萘基丙氨酸，3-(2-喹啉基)丙氨酸，3-(9-蒽基)丙氨酸，2-氨基-3-苯基丁酸，3-氯苯基丙氨酸，3-(2-噻吩基)丙氨酸，3-(3-噻吩基)丙氨酸，3-苯基絲氨酸，3-(2-吡啶基)絲氨酸，3-(3-吡啶基)絲氨酸，3-(4-吡啶基)絲氨酸，3-(2-噻吩基)絲氨酸，3-(2-呋喃基)絲氨酸，3-(2-噻唑基)丙氨酸，3-(4-噻唑基)丙氨酸，3-(1,2,4-三唑-1-基)-丙氨酸，3-(1,2,4-三唑-3-基)-丙氨酸，六氟纈氨酸，4,4,4-三氟纈氨酸，3-氟纈氨酸，5,5,5-三氟亮氨酸，2-氨基-4,4,4-三氟丁酸，3-氯丙氨酸，3-氟丙氨酸，2-氨基-3-氟丁酸，3-氟正亮氨酸，4,4,4-三氟蘇氨酸，L-烯丙基甘氨酸，叔-亮氨酸，炔丙基甘氨酸，乙烯基甘氨酸，S-甲基半胱氨酸，環(huán)戊基甘氨酸，環(huán)己基甘氨酸，3-羥基正纈氨酸，4-氮雜亮氨酸，3-羥基亮氨酸，2-氨基-3-羥基-3-甲基丁酸，4-硫代異亮氨酸，阿雪維菌素，鵝膏蕈氨酸，使君子氨酸，2-二氫茚基甘氨酸，2-氨基異丁酸，2-環(huán)丁基-2-苯基甘氨酸，2-異丙基-2-苯基甘氨酸，2-甲基纈氨酸，2,2-二苯基甘氨酸，1-氨基-1-環(huán)丙烷甲酸，1-氨基-1-環(huán)戊烷甲酸，1-氨基-1-環(huán)己烷甲酸，3-氨基-4,4,4-三氟丁酸，3-苯基異絲氨酸，3-氨基-2-羥基-5-甲基己酸，3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酸，3-氨基-3-(4-溴代苯基)丙酸，3-氨基-3-(4-氯苯基)丙酸，3-氨基-3-(4-甲氧基苯基)丙酸，3-氨基-3-(4-氟苯基)丙酸，3-氨基-3-(2-氟苯基)丙酸，3-氨基-3-(4-硝基苯基)丙酸和3-氨基-3-(1-萘基)丙酸。這些非天然氨基酸可以由下列供應(yīng)商商購，包括Aldrich,Sigma,Fluka,Lancaster,ICN,TCI,AdvancedChemTech,OakwoodProducts,IndofineChemicalCompany,NSCTechnology,PCRResearchChemicals,Bachem,AcrosOrganics,Celgene,BionetResearch,TygerScientific,Tocris,ResearchPlus,AshStevens,Kanto，Chiroscience和PeninsulaLab。下列氨基酸可以按照以下文獻(xiàn)合成3,3,3-三氟丙氨酸(Sakai,T.等，Tetrahedron1996,52,233)及3,3-二氟丙氨酸(D’Orehymont,H.Synthesis1993,10,961)?？梢杂脕泶鎆的其它N-保護(hù)基包括乙?；?Ac)，叔丁氧羰基(Boc)，甲氧基羰基或乙氧基羰基。本發(fā)明的一個(gè)重要方面是發(fā)現(xiàn)了式Ⅰ-Ⅴ的化合物是有效的卡斯帕酶抑制劑。因此，這些抑制劑預(yù)計(jì)可以在發(fā)生細(xì)胞、組織或整個(gè)器官損失的多種臨床病癥中減慢或阻斷細(xì)胞死亡。在局部缺血和興奮毒性的多種病癥中，本發(fā)明的細(xì)胞死亡抑制劑可以用于降低或防止神經(jīng)系統(tǒng)(腦、脊柱和外周神經(jīng)系統(tǒng))的細(xì)胞死亡，這些病癥包括但不限于由于中風(fēng)產(chǎn)生的病灶局部缺血、由于心動(dòng)停止造成的腦局部缺血以及脊柱外傷(Emery等，J.Neurosurgery,89911-920(1998))。一個(gè)特別的用途是治療高危分娩中嬰兒出生期間或溺水期間的氧缺乏。這些細(xì)胞死亡抑制劑還可以用來降低或防止由于外傷造成的神經(jīng)系統(tǒng)中的細(xì)胞死亡(例如，腦外傷)、病毒感染或放射引起的神經(jīng)細(xì)胞死亡(例如，癌癥放療的副作用)。這些細(xì)胞死亡抑制劑還可以用來降低或防止一定范圍的神經(jīng)變性疾病的細(xì)胞死亡，包括但不限于早老性癡呆(Mattson等，BrainPes.807167-176(1998))，杭廷頓氏舞蹈病，帕金森氏病，多發(fā)性硬化，肌萎縮性側(cè)索硬化及脊髓延髓萎縮。本發(fā)明細(xì)胞死亡抑制劑的體內(nèi)神經(jīng)保護(hù)性質(zhì)可以在大鼠暫時(shí)性腦局部缺血模型中檢測(cè)(Xue等，Stroke21166(1990))。本發(fā)明的細(xì)胞死亡抑制劑可以用來降低或防止可能導(dǎo)致心肌死亡的任何病癥中的細(xì)胞死亡(Black等，J.Mo1.Cel.Card.30733-742(1998)和Maulik等，F(xiàn)reeRadic.Biol.Med.24869-875(1998))。這包括由于心肌局部缺血和再灌注、心力衰竭和心肌病引起的心肌梗塞。一個(gè)具體的應(yīng)用是降低或防止在心臟的某些病毒感染中發(fā)生的心肌細(xì)胞死亡。本發(fā)明的細(xì)胞死亡抑制劑的體內(nèi)活性可以用Rodriguez等人描述的“小鼠肝編程性細(xì)胞死亡”模型檢測(cè)(Rodriguez等，J.Exp.Med.,1842067-2072(1996))。在此模型中，用抗Fas抗體靜脈內(nèi)(Ⅳ)處理小鼠，該抗體引起肝臟和其它器官的大量編程性細(xì)胞死亡，導(dǎo)致總體的器官衰竭和死亡。此模型用于間接檢測(cè)本發(fā)明細(xì)胞死亡抑制劑的系統(tǒng)生物利用度，及其體內(nèi)抗編程性細(xì)胞死亡的性質(zhì)。本發(fā)明的細(xì)胞死亡抑制劑因此可以用于降低或防止肝細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡(Jones等，Hepatology271632-42(1998))，如在膿毒病(Jaeschke等，J.Immunol.1603480-3486(1998))及1型遺傳性高酪氨酸血癥(HT1)(Kubo等，Prov.Natl.Acad.Sci.USA,959552-9557(1998)中。本發(fā)明的細(xì)胞死亡抑制劑還可以用于治療肝炎(Suzuki，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.217450-454(1998))。本發(fā)明的細(xì)胞死亡抑制劑可以用于降低和防止視網(wǎng)膜神經(jīng)元的細(xì)胞死亡(Kermer等，J.Neurosci.184656-4662(1998)和Miller等，Am.J.Vet.Res.59149-152(1998))，其可發(fā)生于眼內(nèi)壓增高(如青光眼)或與老年有關(guān)的視網(wǎng)膜病(如老年性視斑的生成)的疾病中。這些抑制劑還可以用來治療視網(wǎng)膜的遺傳性退化疾病，如視網(wǎng)膜炎色素沉著。本發(fā)明的細(xì)胞死亡抑制劑還可以用來降低或防止腎中的細(xì)胞死亡。這包括腎淀粉樣變性病(Hiraoka等，NipponJinzoGakkaiShi,40276-83(1998))，急性腎衰竭(Lieberthal等，SeminNephro1．18505-518(1998))，環(huán)孢菌素A引起的鼠小管上皮細(xì)胞死亡(Ortiz等，KidneyInternationalSupp.68S25-S29(1998))和HIV引起的腎病(Conaldi等，J.Clin．Invest.l022041-2049(1998))。本發(fā)明的細(xì)胞死亡抑制劑還可以用于降低或防止由于慢性酒精攝入引起的口腔粘膜的細(xì)胞死亡(Slomiany等，Biochem.Mol.Int.451199-1209(1998))。本發(fā)明的細(xì)胞死亡抑制劑還可以用于降低或防止植物的細(xì)胞死亡(Richberg等，Curr.Opin.PlantBiol.1480-485(1998))，例如由于病原體引起的植物細(xì)胞死亡(Pozo等，Curr.Bio1.81129-1132(1998)和Greenberg等，Cell,77551-563(1994))。本發(fā)明的細(xì)胞死亡抑制劑還可以用于將低或防止由于放射和紫外照射引起的細(xì)胞死亡(Sheikh等，Oncogene,172555-2563(1998))。本發(fā)明的細(xì)胞死亡抑制劑還可以用于降低或防止骨髓發(fā)育不良綜合征(MDS)中骨髓細(xì)胞的編程性死亡(Mundle等，Am.J.Hemato1.6036-47(1999))。本發(fā)明的細(xì)胞死亡抑制劑還可以用于免疫系統(tǒng)的細(xì)胞的提前死亡，并特別用于治療免疫缺陷病，例如獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)、嚴(yán)重的合并免疫缺陷綜合征(SCIDS)和相關(guān)疾病。這些細(xì)胞死亡抑制劑還可以用于治療放射引起的免疫抑制。人器官和組織移植是器官衰竭的常用治療手段。但是，在移植過程中，供體的器官或組織有細(xì)胞死亡的危險(xiǎn)，因?yàn)樵谝浦步o宿主前其缺乏正常的血液供應(yīng)。通過給供體器官或組織輸注細(xì)胞死亡抑制劑，或者通過給器官/組織保存介質(zhì)直接加入細(xì)胞死亡抑制劑，可以處理此局部缺血狀態(tài)。細(xì)胞死亡抑制劑也可以用于降低或防止已移植后供體器官/組織的細(xì)胞死亡，以保護(hù)其不受宿主免疫細(xì)胞的作用，這些免疫細(xì)胞通過靶向的編程性細(xì)胞死亡殺死它們的靶細(xì)胞。細(xì)胞死亡抑制劑的這種細(xì)胞保護(hù)作用還可以用來防止用于體外受精的人或動(dòng)物精子或卵細(xì)胞的死亡。這些抑制劑可以用于細(xì)胞收集過程中并也可以用在保存介質(zhì)中。哺乳動(dòng)物細(xì)胞系、昆蟲細(xì)胞和酵母細(xì)胞常用來生產(chǎn)大量的重組蛋白質(zhì)(如抗體、酶或激素)以用于工業(yè)或醫(yī)藥業(yè)。由于生長條件、所表達(dá)的重組分子的特性(一些是有毒的)以及其它一些未知的因素，一些這樣的細(xì)胞系壽命有限。工業(yè)用細(xì)胞系的壽命通過在生長培養(yǎng)基中以濃度為1-100M加入這些細(xì)胞死亡抑制劑可以得以延長?？刂祁^發(fā)生長和脫落的因素在很大程度上是未知的。但是，一些證據(jù)表明毛囊退化(稱作毛發(fā)生長中期)可能部分是由于編程性細(xì)胞死亡引起的。因此，應(yīng)注意到本發(fā)明的細(xì)胞死亡抑制劑可以用于治療由于不同病癥引發(fā)的脫發(fā)，包括但不限于男性禿頂、放射誘發(fā)的或化療引起的脫發(fā)及由于情緒緊張引起的脫發(fā)。還有證據(jù)表明編程性細(xì)胞死亡在毛發(fā)顏色的損失中起作用。因此，應(yīng)注意到本發(fā)明的細(xì)胞死亡抑制劑還可以用于治療或防止毛發(fā)的早生華發(fā)的現(xiàn)象。在接觸高水平的輻射、熱或化學(xué)品后，可能發(fā)生皮膚上皮細(xì)胞的死亡。應(yīng)考慮到本發(fā)明的細(xì)胞死亡抑制劑可以用來治療、降低或防止此類皮膚損傷。在一個(gè)具體的應(yīng)用中，這些細(xì)胞死亡抑制劑可以作為局部制劑(如軟膏)的一部分施用，來治療急性過度暴曬和防止皮膚的起泡和剝落。Go1dberg等(NatureGenetics13442-449(1996))最近報(bào)告huntingtin，一種Huntington舞蹈病(HD)基因的蛋白產(chǎn)物，可以被CPP32而不是ICE裂解。HD進(jìn)行的突變是HD基因的5′末端的CAG三核苷酸的擴(kuò)展。此三核苷酸擴(kuò)展超過36個(gè)重復(fù)單位就與HD的臨床表象有關(guān)。CAG擴(kuò)展促進(jìn)了CPP32裂解huntingtin，于是與CPP32在HD的編程性細(xì)胞死亡中的作用有聯(lián)系。具有CPP32抑制活性的本發(fā)明化合物可用于阻斷CPP32引起的編程性細(xì)胞死亡，因此可用于預(yù)防和治療HD及其它以三核苷酸重復(fù)單位的擴(kuò)展為特征的疾病如肌強(qiáng)直性營養(yǎng)不良、脆性X精神阻滯、脊髓延髓肌肉萎縮、Ⅰ型脊髓小腦atoxia和Dentato-Rubropallidoluysian萎縮。本發(fā)明范圍內(nèi)的組合物包括含達(dá)到其目的的有效量的本發(fā)明的化合物。盡管個(gè)體需要因人而異，確定每個(gè)組份的有效量的最佳范圍是本領(lǐng)域技術(shù)人員的一般知識(shí)。一般來說，這些化合物可以以劑量每天0.0025至50mg/kg接受治療的哺乳動(dòng)物體重，或用量相當(dāng)?shù)钠渌幱名}，給哺乳動(dòng)物如人口服，以治療編程性細(xì)胞死亡介導(dǎo)的疾病，例如，神經(jīng)元細(xì)胞死亡、心臟病、視網(wǎng)膜病、多囊性腎病和免疫系統(tǒng)疾病。優(yōu)選口服約0.01至約10mg/kg以治療或預(yù)防這些疾病。對(duì)于肌注，劑量一般約是口服劑量的一半。例如，為了治療或預(yù)防神經(jīng)元細(xì)胞死亡，適宜的肌注劑量應(yīng)是約0.0025至約25mg/kg，且首選約0.01至約5mg/kg。單位口服劑量可包括約0.01至約50mg，優(yōu)選約0.1至約10mg的化合物。此單位劑量可以以一片或多片每天一次或多次給藥，其中每片含約0.1至約10，便利的是約0.25至50mg的化合物或其溶劑化物。在局部制劑中，該化合物的濃度可以是約0.01至100mg每克載體。除了以粗原料的形式使用此化合物，本發(fā)明的化合物可以作為藥劑的一部分，該藥劑含有適宜的藥用載體，包括有利于將這些化合物加工為可以藥用的這些制劑的賦形劑和輔劑。優(yōu)選這些制劑，特別是可以口服并可以用于優(yōu)選的給藥類型的制劑，如片劑、糖衣丸、膠囊，以及可以直腸給藥的制劑如栓劑，以及注射或口服給藥的適宜的溶液劑，含約0.01至99％，優(yōu)選約0.25至75％的活性化合物(一種或多種)，以及賦形劑。也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)的是本發(fā)明化合物的無毒藥用鹽。通過將本發(fā)明特定的細(xì)胞死亡抑制劑的溶液與藥用無毒酸如鹽酸、富馬酸、馬來酸、琥珀酸、乙酸、枸櫞酸、酒石酸、碳酸、磷酸、草酸等的溶液混合形成酸加成鹽。通過將本發(fā)明特定細(xì)胞死亡抑制劑的溶液與藥用無毒堿如氫氧化鈉、氫氧化鉀、膽堿氫氧化物、碳酸鈉、Tris等的溶液混合形成堿加成鹽。本發(fā)明的藥物組合物可以給任何可能得益于本發(fā)明化合物有益作用的哺乳動(dòng)物使用。這些動(dòng)物中最重要的是哺乳動(dòng)物，例如，人，雖然本發(fā)明不打算受此限制。本發(fā)明的藥物組合物可以通過可達(dá)到其預(yù)期目的的任何方式給藥。例如，可以通過非腸道、皮下的、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、透皮、頰部、鞘內(nèi)、顱內(nèi)或局部途徑給藥?；蛘撸？梢酝ㄟ^口服給藥。給藥劑量將依賴于患者的年齡、健康狀況及體重，目前使用的治療類型、治療頻率(如果治療)及需要達(dá)到作用的特性。本發(fā)明的藥物制劑以已知方式制備，例如，通過常規(guī)混合、制粒、糖衣、溶解或凍干手段。因此，口服用藥物制劑可以通過將活性化合物與固體賦形劑混合，選擇性地研磨所得混合物并在加入適宜輔劑(如果需要或必要)后加工此顆粒的混合物，得到片劑或糖衣丸芯。具體地講，適宜的賦形劑是填充劑如糖類，如乳糖或蔗糖、甘露醇或山梨醇、纖維素制劑和/或磷酸鈣，如磷酸三鈣或磷酸氫鈣，以及粘合劑如淀粉糊，如玉米淀粉、小麥淀粉、水稻淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羥丙甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要，可以加入崩解劑如上述淀粉及羧甲基淀粉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或藻酸或其鹽，如藻酸鈉。輔劑首選是助流劑和潤滑劑，例如，硅石，滑石，硬脂酸或其鹽，如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣和/或聚乙二醇。如果適當(dāng)，可以給糖衣丸芯提供抗胃液的適宜的包衣。為此，可以使用濃的糖溶液，其中可以選擇性含有阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化鈦、涂漆溶液及適宜的有機(jī)溶劑或溶劑混合物。為了制備抗胃液的包衣，使用適宜的纖維素制劑如乙?；w維素鄰苯二甲酸酯或羥丙甲基纖維素鄰苯二甲酸酯?？梢越o片劑或糖衣丸包衣中加入染料或色素，例如，為了定性或?yàn)榱舜_定活性化合物劑量的組成?？梢钥诜褂玫钠渌巹┌ㄍ迫肱浜?pushfit)的明膠膠囊及明膠和增塑劑如甘油或山梨醇制成的密封軟膠囊。推入配合的膠囊可以含有顆粒形式的活性化合物，其可以與填充劑如乳糖，粘合劑如淀粉和/或潤滑劑如滑石或硬脂酸鎂以及選擇性存在的穩(wěn)定劑混合。在軟膠囊中，活性化合物優(yōu)選溶解于或懸浮于適宜的液體中，如脂肪油或液體石蠟。此外，可以加入穩(wěn)定劑?？梢灾蹦c使用的可能的藥劑包括，例如，栓劑，其由一種或多種活性化合物與栓劑基質(zhì)混合組成。適宜的栓劑基質(zhì)為，例如，天然或合成甘油三酯或石蠟烴。此外，還可以使用明膠直腸用膠囊，其由活性化合物與基質(zhì)組成?？赡艿幕|(zhì)包括，例如，液體甘油三酯，聚乙二醇或石蠟烴。非腸道給藥的適宜的制劑包括水溶形式的活性化合物(例如水溶性鹽和堿溶液)的水溶液。此外，可以使用作為適當(dāng)?shù)挠托宰⑸浠鞈覄┑幕钚曰衔锏膽腋∫?。適宜的親脂性溶劑或載體包括脂肪油，例如，芝麻油或合成脂肪酸酯，例如，油酸乙酯或甘油三酯，或聚乙二醇400(這些化合物溶解于PEG400中)。含水注射混懸劑可以含有增加此混懸劑粘度的物質(zhì)，例如，羧甲基纖維素鈉、山梨醇和/或葡聚糖。此混懸劑還可以選擇性地含有穩(wěn)定劑。按照本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明的化合物用于局部或非腸道制劑中并用于治療皮膚損傷，例如，由于接觸高水平的輻射，包括紫外線輻射、熱或化學(xué)品引起的。在這些組合物中還可以摻入對(duì)皮膚具有治療作用的一種或多種其它物質(zhì)。因此，該化合物還可以含有一種或多種能夠增加皮膚中cAMP水平的化合物。適宜的化合物包括含量為約0.1％的腺苷或核酸水解產(chǎn)物，及含量為約0.5-5％的罌粟堿，這兩個(gè)含量都是基于此組合物的重量。還適合含有的是β-腎上腺素能激動(dòng)劑如含量為約0.1-2％的異丙腎上腺素或含量為約0.1-1％的cAMP，兩個(gè)含量也都是基于此組合物的重量?？梢該饺氡景l(fā)明組合物中的另類活性組份的其它適宜類型包括已知對(duì)皮膚具有有利作用的任何化合物。這些化合物包括視黃醇類衍生物如含量為約0.003-0.3％(重量)的維生素A，及苯并二氫吡喃醇如含量為約0.1-10％(重量)的維生素E或其衍生物，二者都是基于此組合物的重量。此外，抗炎劑和皮膚角質(zhì)層增生劑可以摻混在化妝組合物中。典型的抗炎劑是皮質(zhì)類固醇如含量為約0.25-5％(重量)的氫化可的松或其乙酸酯，或皮質(zhì)類固醇如含量為約0.025-0.5％(重量)的地塞米松，二者都是基于此組合物的重量。典型的皮膚角質(zhì)層增生劑是含量為約0.1-20％(重量)煤焦油或含量約0.05-2％(重量)的蒽地酚，二者都是基于此組合物的重量。通過選擇適當(dāng)?shù)妮d體，本發(fā)明的局部組合物優(yōu)選配制為油、霜、洗劑、軟膏等。適當(dāng)?shù)妮d體包括植物油或礦物油，白凡士林(白軟石蠟)，支鏈脂肪或油，動(dòng)物脂肪及高分子量醇(碳原子數(shù)大于12)。優(yōu)選的載體是活性物質(zhì)能溶解于其中的那些。還可以加入乳化劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑和抗氧化劑，如果需要還可以加入著色劑或香料。此外，這些局部制劑中可以使用透皮促進(jìn)劑。這些促進(jìn)劑的實(shí)例請(qǐng)見美國專利3989816和4444762。優(yōu)選用礦物油、自身乳化的蜂蠟和水的混合物配制霜?jiǎng)谠摶旌衔镏谢旌狭巳芙庥谛×康挠腿缧尤视椭械幕钚越M份。此霜?jiǎng)┑牡湫蛯?shí)例是含約40份水、約20份蜂蠟、約40份礦物油和約1份杏仁油的制劑。通過將活性組份在植物油如杏仁油中的溶液與溫?zé)岬能浭灮旌喜⒆屍淅鋮s可以配制軟膏。此軟膏的典型實(shí)例是含約30％杏仁油和約70％(重量)白軟石蠟的制劑。通過將活性組份溶解于適宜的高分子量醇如丙二醇或聚乙二醇中，可以方便地制備洗劑。此外，這些組合物可以含有其它藥用制劑、生長因子、傷口密封劑、載體等本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的試劑。本發(fā)明的組合物給已患有皮膚損傷如燒傷的溫血?jiǎng)游锶缛耸褂茫溆昧孔阋宰層线^程進(jìn)行得比患者不治療時(shí)更快。此用途的有效量將依賴于皮膚損傷的嚴(yán)重性及接受治療的患者的總體健康狀況。如果需要，則調(diào)整長時(shí)間內(nèi)的維持劑量。對(duì)于獸用，如果需要可以使用較高的劑量。在動(dòng)物患毛發(fā)生長降低的情況下，本發(fā)明的組合物以足以增加毛發(fā)生長速度的用量使用。此用途的有效量將依賴于毛發(fā)生長降低的程度，及接受治療的對(duì)象的總體健康水平。如果需要，則調(diào)整長時(shí)間內(nèi)的維持劑量。對(duì)于獸用，如果需要可以使用較高的劑量。當(dāng)這些化合物給植物使用時(shí)，它們可以給植物的葉和/或莖和/或花施用，例如通過噴霧。這些化合物可以以特定的形式噴霧，或溶解于或懸浮于適當(dāng)?shù)妮d體中，例如，在水或油－水乳液中。這些化合物還可以與植物的土壤混合。在此實(shí)施方案中，這些化合物通過植物的根吸收。下列實(shí)施例是本發(fā)明方法和組合物的舉例說明而不是對(duì)其進(jìn)行限制。對(duì)臨床治療中常見的且本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的多種條件和參數(shù)的其它適當(dāng)修改和適應(yīng)性改變，包括在本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍內(nèi)。實(shí)施例1Z-[(S)-Phg]-Asp-fmk步驟A.Z-(S)-苯基甘氨酸室溫下，向(S)-(+)-苯基甘氨酸(2.0g,13.2mmol)的2N氫氧化鈉水溶液(30mL)中加入氯甲酸芐基酯(2.3mL,16.2mmo1)。將所得溶液室溫下攪拌5小時(shí)，并酸化至pH=1。過濾收集所得白色固體，用水洗滌并真空干燥并得到標(biāo)題化合物(2.5g,8.8mmol,67％)。1HNMR(CDCl3)δ8.05(d,J=8.4,1H),7.40-7.28(m,10H)，5.12(d,J=8.4,1H)。步驟B.5-氟-3-[Z-(S)-苯基-Gly-酰氨基]-4-羥基戊酸叔丁基酯向Z-(S)-苯基甘氨酸(205mg,0.72mmol)的THF(10mL)溶液中加入1-(2-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDCI)(148mg,0.77mmol)，1-羥基苯并三唑水合物(HOBT)(112mg,0.73mmol)和二甲基氨基吡啶(DMAP)(61mg,0.50mmol)。將所得混合物室溫下攪拌5分鐘，然后向其中加入3-氨基-5-氟-4羥基戊酸叔丁基酯(98mg,0.47mmol)的THF(5mL)溶液。將所得混合物室溫下攪拌3天。將THF真空蒸發(fā)得到殘余物，將此殘余物溶解于50mL乙酸乙酯。用2NHCl、飽和NaHCO3、鹽水洗滌此溶液，用硫酸鈉干燥，真空濃縮并將此殘余物通過閃式色譜純化(EtOAc/己烷6/5)得到標(biāo)題化合物，為無色油狀物(200mg,0.42mmol,90％)。1HNMR(CDCl3)δ7.36-7.26(m,10H),6.74-6.49(m,1H),5.98(m,1H),5.14-5.02(m,3H),4.50-3.91(m,4H),2.68-2.51(m,2H),1.41-1.33(m,9H)。步驟C.Z-[(S)-Phg]-Asp(Ot-Bu)-fmk向Dess-Martin全碘烷(0.67g,1.59mmol)的二氯甲烷(15mL)懸浮液中加入5-氟-3-(Z-苯基-Gly-酰氨基)-4-羥基戊酸叔丁基酯(150mg,0.32mmol)的二氯甲烷溶液(5mL)。將此混合物回流20小時(shí)，冷卻至室溫，并加入含1.0g硫代硫酸鈉的25mL飽和碳酸氫鈉水溶液。將所得混合物攪1小時(shí)，用1∶1己烷/EtOAc(3×25mL)萃取。將合并的有機(jī)相用水和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥并真空濃縮得到標(biāo)題化合物，為潮濕的白色固體(140mg,0.30mmol,94％)。1HNMR(CDCl3)δ7.37-7.31(m,10H),6.84(d,J=6.9,1H),6.03-5.96(m,1H),5.23-4.65(m,6H),3.03-2.58(m,2H),1.40,1.29(2s,9H)。步驟D.Z-[(S)-Phg]-Asp-fmk向Z-[(S)-Phg]-Asp(Ot-Bu)-fmk(140mg,0.30mmol)的5mL二氯甲烷溶液中，加入1mL的TFA。將所得溶液室溫下攪拌1小時(shí)。真空蒸發(fā)溶劑得到殘余物，將此殘余物通過閃式色譜(丙酮)純化，得到標(biāo)題化合物，為白色固體(110mg,0.26mmol，87％)。1HNMR(DMSO-d6)δ8.80(m,1H),8.00(s,1H),7.97-7.67(m,1H),7.47-7.20(m.10H),5.26-4.94(m,2H),5.03(s,2H),4.54(s,1H),2.68-2.56(m,2H)。實(shí)施例2Z-(2-Me-Val)-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的四步反應(yīng)由DL-2-甲基纈氨酸制備此標(biāo)題化合物。1HNMR(DMSO-d6)δ8.00(brs,1H),7.35(s,5H),4.99(s,2H),5.10-4.53(m,3H),2.88-2.48(m,2H),1.95(s,1H),1.30,1.27(2s,3H),0.86-0.80(m,6H)。實(shí)施例3Z-(2-Me-Ala)-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的三步反應(yīng)由Z-DL-2-甲基丙氨酸制備此標(biāo)題化合物。1HNMR(DMSO-d6)δ8.00(brs,1H),7.35(s,5H),4.99(s,2H),5.10-4.53(m,3H),2.88-2.48(m,2H),1.95(s,1H),1.30．1.27(2s,3H),0.86-0.80(m,6H)。實(shí)施例4Z-(2-異丙基-β-Ala)-Asp-fmk步驟A．2-異丙基氰基乙酸乙酯將氰基乙酸乙酯(2.0mL,18.7mmol)，K2CO3(4.0g,28.9mmol)和2-碘代丙烷(3.2mL,32.0mmol)在丙酮(30mL)中的混合物回流48小時(shí)。將其用1∶1已烷/EtOAc(120mL)稀釋，用水和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥并真空濃縮，得到標(biāo)題化合物，為淡黃色油狀物(2.7g,17.4mmol,93％)。1HNMR(CDCl3)δ4.27(q,J=7.2,2H),3.39(d,J=5.7,1H),2.42(m,1H),1.32(t,J=7.2,3H),1.13(d,J=7.2,3H),1.10(d,J=6.6,3H)。步驟B.3-氨基-2-異丙基丙酸鹽酸鹽將2-異丙基氰基乙酸乙酯(2.7g,17.4mmol)，濃HCl(3.0mL)和PtO2(107mg)在乙醇(50mL)中的混合物在氫氣氛(48.5psi)下?lián)u動(dòng)24小時(shí)。濾掉催化劑。將此濾液真空濃縮至約5mL，并加入2NHCl(15mL)。將所得溶液用1∶1己烷/EtOAc(2×25mL)洗滌。然后，將所得水溶液回流24小時(shí)，冷卻至室溫，用1∶1己烷/EtOAc(25mL)洗滌，真空濃縮得到產(chǎn)物，為粘稠液體(1.8g,10.7mmol,61％)。1HNMR(DMSO-d6)δ12.74(s,1H),8.03(s,2H),3.01-2.79(m,2H),2.55-2.48(m,1H),2.00(m,1H),0.90-0.87m,6H)。然后，按照實(shí)施例1描述的四步反應(yīng)由3-氨基-2-異丙基丙酸鹽酸鹽(2-異丙基-β-丙氨酸)制備此標(biāo)題化合物。1HNMR(DMSO-D6)δ8.33(brs,1H),7.31(s,5H),7.21(brs,1H),4.98(s,2H),5.22-4.97(m,1H),4.64-4.50(m,1H),3.16(m,2H),2.62(m,2H),2.25(m,1H),1.70(m,1H),0.89-0.82(m,6H)。實(shí)施例5Z-(F3-Val)-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的四步反應(yīng)由4,4,4-三氟-DL-纈氨酸(F3-Val)制備此標(biāo)題化合物。1HNMR(DMSO-d6)δ12.53(brs,1H),8.74-7.76(m,2H),7.34(s,5H),5.24-4.32(m,4H),5.05(s,2H),2.92-2.58(m,3H),1.24-0.85(m,3H)。實(shí)施例6Z-(2-Thg)-Asp-fmk按照實(shí)施例1的四步反應(yīng)由2-噻吩基-DL-甘氨酸(2-Thg)制備此標(biāo)題化合物。1HNMR(DMSO-d6)δ8.80(m,1H),8.08(brs,1H),7.45-6.94(m,8H),5.51(d,J=7.8,1H),5.04(s,2H),5.20-4.80(m,2H),4.55(m,1H),2.62(m,2H)。實(shí)施例7Z-(2-F-Phg)-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的四步反應(yīng)由2-氟苯基-DL-甘氨酸(2-F-Phg)制備此標(biāo)題化合物。1HNMR(DMSO-d6)δ12.45(brs,1H),8.73(s,1H),8.10(s,1H),7.33-7.16(m,9H),5.46(d,J=6.9,1H),5.04(s,2H),5.20-4.32(m,3H),2.70-2.40(m,2H)。實(shí)施例8Z-(L-2-Tha)-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的四步反應(yīng)由3-(2-噻吩基)-L-丙氨酸(2-Tha)制備此標(biāo)題化合物。1HNMR(DMSO-d6)δ8.62(brs,1H),7.65(s,1H),7.33-6.90(m,7H),4.99(s,2H),5.20-4.85(m,1H),4.85(brs,1H),4.23(brs,1H),3.19-2.96(m,3H),2.66(brs,2H)。實(shí)施例9Z-[(R)-Phg]-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由(R)-苯基甘氨酸((R)-Phg)制備此標(biāo)題化合物，為白色固體。1HNMR(DMSO-d6)δ8.80(s,1H),8.00(m,1H),7.39-7.33(m,10H),5.27(m,1H),5.03(s,2H),4.55(s,1H)。實(shí)施例10Z-(3-Ph-β-Ala)-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由(DL)-3-氨基-3-苯基丙酸(3-ph-β-Ala)制備此標(biāo)題化合物，為白色固體。1HNMR(DMSO-d6)δ8.54(s,1H),7.92(m,1H),7.30(m,10H),5.04-4.45(m,6H),2.60-2.58(m,2H)。實(shí)施例11Z-(4-Cl-Phg)-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由(DL)-2-(4-氯苯基)甘氨酸(4-Cl-Phg)制備此標(biāo)題化合物，為棕色固體。1HNMR(DMSO-d6)δ8.78(s,1H),8.06(m,1H),7.40-7.33(m,9H),5.28-5.26(m,2H),5.03(s,2H),4.54(s,1H),2.64(m,2H)。實(shí)施例12Z-(4-F-Phg)-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由(DL)-2-(4-氟苯基)甘氨酸(4-F-Phg)制備此標(biāo)題化合物，為棕色固體(109mg,0.25mmol。1HNMR(DMSO-d6)δ8.04(s,1H),7.93(s,1H),7.43-7.33(m,9H),5.27(m,2H),5.07(s,2H),4.54(s,1H),2.88-2.72(m,2H)。實(shí)施例13Z-[(L)-2-Thg]-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由(L)-(2-噻吩基)甘氨酸((L)-2-Thg)制備此標(biāo)題化合物，為棕色固體。1HNMR(DMSO-d6)δ8.80(s,1H),8.10(s,1H),7.87-7.85(m,1H),7.34(m,5H),7.05-6.97(m,2H),5.51-5.49(m,1H),5.05(s,2H),4.74(s,2H),4.59-4.56(m,1H),2.78-2.65(m,2H)。實(shí)施例14Z-(3-Thg)-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由(DL)-(3-噻吩基)甘氨酸(3-Thg)制備此標(biāo)題化合物，為固體。1HNMR(DMSO-d6)δ8.79(s,1H),8.00(s,1H),7.34(m,5H),7.13(s,1H),5.33(m,2H),5.04(s,2H),4.56-4.36(m,1H),2.70-2.59(m,2H)。實(shí)施例15Z-[(L)-3-Thg]-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由(L)-(3-噻吩基)甘氨酸((L)-3-Thg)制備此標(biāo)題化合物，為固體。1HNMR(DMSO-d6)δ8.77(s,1H),7.99(s,1H),7.34(m,5H),7.14(s,1H),5.33(m,1H),5.04(s,2H),4.56(m,1H)。實(shí)施例16Z-[(L)-3-CN-Ala]-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由(L)-3-氰基-丙氨酸((L)-3-CN-Ala)制備此標(biāo)題化合物，為棕色固體。1HNMR(DMSO-d6)δ8.59(s,1H),7.97-7.82(m,1H),7.34(m,5H),5.06(s,2H),4.54(s,1H),4.38(s,1H),2.93-2.81(m,2H),2.61(m,2H)。實(shí)施例17Z-[(L)-1-Nal]-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由(L)-3-(1-萘基)-丙氨酸制備此標(biāo)題化合物，為棕色固體。1HNMR(DMSO-d6)δ8.19-8.17(m,1H),7.93-7.29(m,14H),4.92(s,2H),4.61-4.36(s,3H),3.45(m,2H),2.72(m,2H)。實(shí)施例18Z-[(L)-Cha]-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由(L)-3-環(huán)己基丙氨酸制備此標(biāo)題化合物，為棕色固體。1HNMR(DMSO-d6)δ7.33(m,5H),5.02(s,2H),4.02(s,1H),2.73(m,2H),1.61-1.12(m,13H)。實(shí)施例19Z-[(L)-3-Cl-Ala]-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由(L)-3-氯丙氨酸制備此標(biāo)題化合物，為棕色固體。1HNMR(DMSO-d6)δ7.92(s,1H),7.63(s,1H),7.34(m,5H),5.04(s,2H),2.72(m,2H)。實(shí)施例20Z-(3-F-Ala)-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由(DL)-3-氟丙氨酸制備此標(biāo)題化合物，為棕色固體。1HNMR(DMSO-d6)δ7.95-7.66(m,1H),7.35(m,5H),5.05(s,2H),4.63-4.47(m,1H)。實(shí)施例21Z-(3-CF3-Ala)-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由2-氨基-4，4，4-三氟丁酸(3-CF3-Ala)制備此標(biāo)題化合物，為棕色固體。1HNMR(DMSO-d6)δ7.86-7.84(d,1H),7.62-7.59(d,1H),7.34(m,5H),5.05(s,2H),4.57(s,1H),2.72-2.65(m,2H)。實(shí)施例22Z-(4-CF3-Phg)-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由4-三氟甲基苯基甘氨酸(4-CF3-Phg)制備此標(biāo)題化合物，為固體。1HNMR(DMSO-d6)δ8.86(s,1H),8.18(s,1H),7.70-7.64(m,4H),7.34(m,5H),5.42(s,1H),5.04(s,2H),4.55(s,1H).實(shí)施例23Z-(3-Me2N-Ala)-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由(DL)-二甲基氨基-丙氨酸(3-Me2N-Ala)制備此標(biāo)題化合物，為固體。1HNMR(DMSO-d6)δ7.40-7.34(m,5H),5.06-4.99(m,3H),4.57-4.37(m,1H),2.60(s,10H)。實(shí)施例24Z-[3-F-3-Me-Ala]-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由2-氨基-3-氟丁酸(3-F-3-Me-Ala)制備此標(biāo)題化合物，為固體。1HNMR(DMSO-d6)δ8.54(s,1H),7.74-7.68(m,1H),7.34(m,5H),5.03(s,2H),4.54(s,lH),2.55(m,2H),1.39-1.22(m,3H)。實(shí)施例25Z-[(L)-Chg]-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由(L)-環(huán)己基甘氨酸((L)-Chg)制備此標(biāo)題化合物，為黃色固體。1HNNM(DMSO-d6)δ8.38(s,1H),7.33(m,5H),5.00(s,2H),4.56-4.44(m,1H),3.86-3.80(m,1H),2.67(m,2H),1.62-1.56(m,11H)。實(shí)施例26Z-(2-Fug)-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由2-呋喃基-Gly制備此標(biāo)題化合物。1HNMR(DMSO-d6)δ8.59(brs,1H),8.09-7.47(m,3H),7.32-7.26(m,5H),6.94(m,1H),6.41-6.33(m,2H),5.36(m,1H),5.20-4.95(m,2H),5.04(s,2H),5.46(m,1H),2.56-2.40(m,2H)。實(shí)施例27Z-(3-F-Val)-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由3-氟-Val制備此標(biāo)題化合物。1HNMR(DMSO-d6)δ8.57(brs,1H),7.85-7.57(m,1H),7.39(s,5H),7.08(s,2H),4.59(m,1H),4.33(m,1H),2.65(m,2H),1.35(d,J=21.9,6H)。實(shí)施例28Z-(2-Abu)-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由2-氨基丁酸(Abu)制備此標(biāo)題化合物，為白色固體。1HNMR(DMSO-d6),δO.831(t,3H,J=7),1.60(m,2H),2.90(m,1H),4.47(m,1H),5.01(m,2H),5.20(m,1H),7.34(s,5H),7.48(m,1H),8.23(m,1H)。實(shí)施例29Z-Tle-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由叔－亮氨酸(T1e)制備此標(biāo)題化合物。1HNMR(DMSO-d6)δ8.51(brs,1H),7.36(brs,5H),5.04(brs,2H),5.30-4.95(m,2H),4.63(brs,1H),3.89(s,1H),2.80-2.50(m,2H),0.91(s,9H)。實(shí)施例30Z-Cpg-Asp-fmk按照實(shí)施例1描述的4步反應(yīng)由環(huán)戊基甘氨酸(Cpg)制備此標(biāo)題化合物。1HNMR(DMSO-d6)δ7.37-7.28(m,5H),6.85(d,J=7.5,1H),5.12-5.03(m,2H),5.09(s,2H),4.84(brs,1H),4.07(m,1H),2.90-2.75(m,2H),2.28(m,1H),1.80-1.30(m,8H)。實(shí)施例31酶活性Cbz-Phg-Asp-fmk作為卡斯帕酶-3(CPP32)抑制劑的活性在熒光酶檢測(cè)中檢測(cè)。用桿狀病毒作為載體在昆蟲宿主細(xì)胞(sf9細(xì)胞)中表達(dá)DNA克隆編碼這些酶來制備重組卡斯帕酶-3蛋白質(zhì)。見Webb,N.R.等，“用重組桿狀病毒表達(dá)蛋白質(zhì)”，Techniques2173-188(1990)。用連接產(chǎn)生熒光的離去基團(tuán)的合成肽底物檢測(cè)酶活性。用此酶裂解合成底物產(chǎn)生熒光信號(hào)，此信號(hào)在分光熒光計(jì)中或在熒光檢測(cè)微量板讀數(shù)器中讀取。用下列緩沖條件檢測(cè)卡斯帕酶-3活性100mMHEPESpH7.5,含10％蔗糖，1％CHAPS?？ㄋ古撩?3的肽底物是Asp-Glu-Val-Asp-AMC。在K2濃度為5μM使用底物。此酶活性的檢測(cè)一般在30℃下進(jìn)行30分鐘。表Ⅱ列出了Cbz-Phg-Asp-fmk和其它二肽作為卡斯帕酶-3抑制劑的IC50。表Ⅱ.作為卡斯帕酶-3抑制劑的二肽的活性<tablesid="table2"num="002"><table>名稱卡斯帕酶-3IC50(μM)z-[(S)-Phg]-Asp-fmk0.10Z-(2-Me-Val)-Asp-fmk2.3Z-(2-Me-Ala)-Asp-fmk1.4Z-(2-i-Pr--Ala)-Asp-fmk1.4Z-(F3-Val)-Asp-fmk0.60Z-(2-Thg)-Asp-fmk0.28Z-(2-F-Phg)-Asp-fmk0.36z-(L-Tha)-Asp-fmk0.15Z-[(R)-Phg]-Asp-fmk0.39Z-(2-Fug)-Asp-fmk0.44Z-(3-Ph--Ala)-Asp-fmk4.7Z-(4-Cl-Phg)-Asp-fmk0.27Z-(4-F-Phg)-Asp-fmk1.2Z-[(L)-Chg]-Asp-fmk0.10Z-(3-F-Val)-Asp-fmk0.44Z-[(L)-2-Thg]-Asp-fmk0.51Z-(3-Thg)-Asp-fmk0.34Z-[(L)-3-Thg]-Asp-fmk0.26Z-[(L)-3-CN-Ala]-Asp-fmk0.53Z-[(L)-1-Nal]-Asp-fmk1.0Z-[(L)-3-Cl-Ala]-Asp-fmk1.0Z-[(L)-Chg]-Asp-fmk0.90Z-(3-F-Ala)-Asp-fmk0.9Z-(3-CF3-Ala)-Asp-fmk2.6Z-(4-CF3-Phg)-Asp-fmk1.2Z-(3-Me2N-Ala]-Asp-fmk9.6Z-(3-F-3-Me-Ala)-Asp-fmk0.48Z-2-Abu-Asp-fmk0.10</table></tables>實(shí)施例32體內(nèi)活性檢測(cè)Cbz-Phg-Asp-fmk作為抗由抗-Fas抗體(克隆Jo2)引起的小鼠死亡的保護(hù)劑(Rodriguez,Ⅰ.等，J.Exp.Med.1842067-2072(1996))。使用重16-20g的SwissWebster雌性小鼠。隨意攝取食物和水。以6μg/小鼠(80μl)使用純化的倉鼠抗小鼠Fas單克隆抗體(克隆Jo2，商購)在硫酸鹽緩沖液中的1mg/ml溶液。將Cbz-Phg-Asp-fmk溶解于0.05MTris堿中，用HCl將該Tris調(diào)節(jié)至pH8.5。將濃度為1-10mg/ml的Cbz-Phg-Asp-fmk以單劑量靜脈內(nèi)以1-5μl/g體重的量快速濃注。5組小鼠注射以6μg的Fas抗體/每只小鼠?？贵w注射后5分鐘，小鼠接受Tris載體對(duì)照或1,2.5,10或50mg/kg的Cbz-Phg-Asp-fmk。在24小時(shí)內(nèi)觀察小鼠的存活情況。表Ⅲ列出了用Cbz-Phg-Asp-fmk處理的小鼠的存活百分率。表Ⅲ.在一段時(shí)間內(nèi)由于使用Cbz-Phg-Asp-fmk的存活率表Ⅲ結(jié)果表明本發(fā)明的化合物是抗Fas引起的小鼠死亡的有效抑制劑。以上已對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了充分描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解在不影響本發(fā)明或其任何實(shí)施方案的范圍的前提下，在較大范圍或相同范圍的條件、制劑和其它參數(shù)下，可以同樣實(shí)施。本文中引用的所有專利和公開物全部整體引入本文作為參考。序列表&lt;110&gt;CytoviaInc．&lt;120&gt;二肽卡斯帕酶抑制劑及其用途&lt;130&gt;1735.001CN01&lt;140&gt;US09/270，735&lt;141&gt;1999-03-16&lt;150&gt;US60/078，051&lt;151&gt;1998-03-16&lt;160&gt;2&lt;170&gt;PatentInVer.2.1&lt;210&gt;1&lt;211&gt;5&lt;212&gt;PRT&lt;213&gt;人工序列&lt;220&gt;&lt;223&gt;人工序列的描述肽&lt;400&gt;1AlaTyrValHisAsp15&lt;210&gt;2&lt;211&gt;4&lt;212&gt;PRT&lt;213&gt;人工序列&lt;220&gt;&lt;223&gt;人工序列的描述肽&lt;400&gt;2AspGluValAsp權(quán)利要求1．通式Ⅰ的化合物或其藥用鹽或前藥其中R1是N-末端保護(hù)基；AA是非天然氨基酸的殘基或-氨基酸，R2是選擇性取代的烷基或H。2．權(quán)利要求1的化合物，其中R1是叔丁氧羰基，乙?；蚱S氧羰基。3．權(quán)利要求1的化合物，其中R2是H、Me或乙酰氧基甲基。4．權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物為式Ⅱ化合物或其藥用鹽或其前藥其中R1是N-末端保護(hù)基；R2是選擇性取代的烷基或H；而R3和R4獨(dú)立地為鹵代烷基，芳基，雜芳基，C1-C10烷基，鏈烯基，炔基，芳烷基，芳烯基，芳炔基和羥基烷基。5．權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物為式Ⅲ表示的化合物或其藥用鹽或其前藥，其中R1是N-末端保護(hù)基；R2是選擇性取代的烷基或H；而R5，R6，R7和R8獨(dú)立地為氫，鹵代烷基，芳基，雜環(huán)基，雜芳基，C1-C10烷基，鏈烯基，炔基，芳烷基，芳烯基，芳炔基或羥基烷基；條件是R5-R8中至少一個(gè)不是氫原子。6．權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物是式Ⅳ表示的化合物或其藥用鹽或前藥其中R1是N-末端保護(hù)基；R2是選擇性取代的烷基或H；而R12是氫原子或C1-C10烷基；B是芳基，雜芳基，飽和或部分不飽和碳環(huán)或飽和或部分不飽和雜環(huán)，其可以選擇性被一個(gè)或多個(gè)選自如下的基團(tuán)取代氫、鹵素、C1-C6鹵代烷基、C6-C10芳基、C4-C7環(huán)烷基、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C6-C10芳基(C1-C6)烷基、C6-C10芳基(C2-C6)鏈烯基、C6-C10芳基(C2-C6)炔基、C1-C6羥基烷基、硝基、氨基、氰基、C1-C6酰氨基、羥基、C1-C6酰氧基、C1-C6烷氧基、烷基硫基或羧基。7．權(quán)利要求6的化合物，其中R1是叔丁氧羰基、乙?；蚱S氧羰基。8．權(quán)利要求6的化合物，其中R2是H、Me或乙酰氧基甲基。9．權(quán)利要求6的化合物，其中B是選擇性取代的苯基或環(huán)己基。10．權(quán)利要求6的化合物，其中R12是H。11．權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物是式Ⅴ表示的化合物或其藥用鹽或前藥其中R1是N-末端保護(hù)基；R2是選擇性取代的烷基或H；R12是氫原子或C1-C10烷基；R9、R10和R11獨(dú)立地為氫，C1-C10烷基，鹵素，鹵代烷基，芳基，雜芳基，飽和或部分不飽和碳環(huán)或飽和或部分不飽和雜環(huán)；條件是R9-R11中至少一個(gè)是鹵素，鹵代烷基，雜芳基，飽和或部分不飽和碳環(huán)或飽和或部分不飽和雜環(huán)。12．權(quán)利要求11的化合物，其中R1是叔丁氧羰基，乙?；蚱S氧羰基。13．權(quán)利要求11的化合物，其中R2是H，Me或乙酰氧基甲基。14．權(quán)利要求11的化合物，其中R12是H。15．權(quán)利要求11的化合物，其中R12和R9是H，R10是烷基或鹵代烷基，而R11是三氟甲基。16．權(quán)利要求11的化合物，其中R12是H，R9和R10獨(dú)立地是氫、烷基或鹵代烷基，而R11是F或雜芳基。17．權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物選自Boc-Phg-Asp-fmk，Boc-(2-F-Phg)-Asp-fmk，Boc-(F3-Val)-Asp-fmk，Boc-(3-F-Val)-Asp-fmk，Ac-Phg-Asp-fmk，Ac-(2-F-Phg)-Asp-fmk，Ac-(F3-Val)-Asp-fmk，Ac-(3-F-Val)-Asp-fmk，Z-Phg-Asp-fmk，Z-(2-F-Phg)-Asp-fmk，Z-(F-Val)-Asp-fmk，Z-Chg-Asp-fmk，Z-(2-Fug)-Asp-fmk，Z-(4-F-Phg)-Asp-fmk，Z-(4-Cl-Phg)-Asp-fmk，Z-(3-Thg)-Asp-fmk，Z-(2-Fua)-Asp-fmk，Z-(2-Tha)-Asp-fmk，Z-(3-Fua)-Asp-fmk，Z-(3-Tha)-Asp-fmk，Z-(3-Cl-Ala)-Asp-fmk，Z-(3-F-Ala)-Asp-fmk，Z-(F3-Ala)-Asp-fmk，Z-(3-F-3-Me-Ala)-Asp-fmk，Z-(3-Cl-3-F-Ala)-Asp-fmk，Z-(2-Me-Val)-Asp-fmk，Z-(2-Me-Ala)-Asp-fmk，Z-(2-i-Pr-β-Ala)-Asp-fmk，Z-(3-Ph-β-Ala)-Asp-fmk，Z-(3-CN-Ala)-Asp-fmk，Z-(1-Nal)-Asp-fmk，Z-Cha-Asp-fmk，Z-(3-CF3-Ala)-Asp-fmk，Z-(4-CF3-Phg)-Asp-fmk，Z-(3-Me2N-Ala)-Asp-fmk，Z-(2-Abu)-Asp-fmk，Z-Tle-Asp-fmk，Z-Cpg-Asp-fmk，Z-Cbg-Asp-fmk，Z-Thz-Asp-fmk，Z-(F3-Val)-Asp-fmk，及Z-Thg-Asp-fmk。18．藥物組合物，其中含有權(quán)利要求1的化合物和藥用載體。19．抑制細(xì)胞或組織的細(xì)胞死亡的方法，包括讓所述細(xì)胞或組織接觸有效量的權(quán)利要求1的化合物。20．治療或改善動(dòng)物的中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)、視網(wǎng)膜神經(jīng)元、心肌或免疫系統(tǒng)細(xì)胞的細(xì)胞死亡的方法，包括給需要此治療或改善的動(dòng)物使用有效量的權(quán)利要求1的化合物。21．權(quán)利要求20的方法，其中所述細(xì)胞死亡在中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)中，并且是由于下列原因之一(a)選自由于中風(fēng)產(chǎn)生的病灶局部缺血和由于心動(dòng)停止造成的腦局部缺血的局部缺血和興奮毒性病癥；(b)外傷；(c)病毒感染；(d)輻射誘發(fā)的神經(jīng)細(xì)胞死亡；(e)選自早老性癡呆，杭廷頓氏舞蹈病，帕金森氏病，朊病毒疾病，多發(fā)性硬化，肌萎縮性側(cè)索硬化及脊髓延髓萎縮；或(f)脊柱損傷。22．權(quán)利要求20的方法，其中所述細(xì)胞死亡在中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)，并是由于特定基因的三核苷酸重復(fù)單位的擴(kuò)展。23．權(quán)利要求20的方法，其中所述細(xì)胞死亡是由于杭廷頓氏舞蹈病。24．權(quán)利要求20的方法，其中細(xì)胞死亡是在心肌組織中，并是由于心肌梗塞、心力衰竭、心肌病或心臟的病毒感染。25．權(quán)利要求20的方法，其中所述細(xì)胞死亡在視網(wǎng)膜神經(jīng)元中，并是由于增高的眼內(nèi)壓、老年視斑變性或視網(wǎng)膜炎色素沉著。26．權(quán)利要求20的方法，其中所述細(xì)胞死亡是在免疫系統(tǒng)中，并是由于選自如下的免疫缺乏病獲得性免疫缺陷綜合征、嚴(yán)重的合并性免疫缺陷綜合征及輻射引起的免疫抑制。27．權(quán)利要求20的方法，其中所述細(xì)胞死亡是由于選自如下的自身免疫病紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和Ⅰ型糖尿病。28．權(quán)利要求20的方法，其中所述的細(xì)胞死亡是由于Ⅰ型糖尿病。29．治療或預(yù)防動(dòng)物的多囊性腎病、腎淀粉樣變性、急性腎衰竭、環(huán)孢菌素A引起的鼠小管上皮細(xì)胞死亡、HIV引起的腎病或貧血/紅細(xì)胞生成的方法，包括給需要此治療或預(yù)防的動(dòng)物使用有效量的權(quán)利要求1的化合物。30．防止哺乳動(dòng)物器官或組織由于缺乏正常的血液供應(yīng)導(dǎo)致的細(xì)胞死亡的方法，包括給所述器官或組織接觸有效量的權(quán)利要求1的化合物。31．權(quán)利要求30的方法，其中所述器官或組織在給哺乳動(dòng)物移植前存在于保存介質(zhì)中。32．權(quán)利要求30的方法，其中所述接觸包括將所述化合物輸注入此器官或組織，或?qū)⑺銎鞴倩蚪M織在含所述化合物的保存介質(zhì)中浸浴。33．在供者的器官或組織移植進(jìn)入宿主后，降低或防止由于宿主免疫細(xì)胞的作用而導(dǎo)致的細(xì)胞死亡的方法，包括給需要的所述宿主使用有效量的權(quán)利要求1的化合物。34．降低或防止體外受精過程中所用哺乳動(dòng)物精子或卵子死亡的方法，包括讓所述精子或卵子接觸有效量的權(quán)利要求1的化合物。35．延長哺乳動(dòng)物或酵母細(xì)胞系壽命的方法，包括讓所述細(xì)胞系接觸權(quán)利要求1的化合物。36．權(quán)利要求35的方法，其中所述接觸包括在細(xì)胞生長培養(yǎng)基中含有所述化合物。37．治療或改善哺乳動(dòng)物脫發(fā)或早生華發(fā)的方法，包括讓需要的哺乳動(dòng)物的所述毛發(fā)或毛囊接觸權(quán)利要求1所述的化合物。38．權(quán)利要求37的方法，其中治療的是脫發(fā)，且所述脫發(fā)是由于男性禿頂、輻射、化療或情緒緊張引起的。39．治療或改善由于接觸高水平的輻射、熱或化學(xué)品引起的哺乳動(dòng)物皮膚損傷的方法，包括給需要的哺乳動(dòng)物的皮膚施用權(quán)利要求1的化合物。40．權(quán)利要求39的方法，其中所述化合物是作為軟膏的一部分施用的。41．權(quán)利要求39的方法，其中所述皮膚損傷是由于急性暴曬造成的，其中所述治療降低皮膚的起泡和剝落。42．治療或改善動(dòng)物膿毒病的方法，包括給需要的動(dòng)物使用有效量的權(quán)利要求1的化合物。43．治療或改善動(dòng)物肝炎的方法，包括給需要的動(dòng)物使用有效量的權(quán)利要求1的化合物。44．治療或改善遺傳性1型高酪氨酸血癥的方法，包括給需要的動(dòng)物使用有效量的權(quán)利要求1的化合物。45．治療或改善慢性酒精攝入引起的動(dòng)物口腔粘膜細(xì)胞死亡的方法，包括給需要的動(dòng)物使用有效量的權(quán)利要求1的化合物。46．治療或改善植物或花細(xì)胞死亡的方法，包括給需要的所述植物或花使用有效量的權(quán)利要求1的化合物。47．治療或改善輻射或紫外照射引起的動(dòng)物細(xì)胞死亡的方法，包括給需要的動(dòng)物使用有效量的權(quán)利要求1的化合物。48．治療或改善骨髓發(fā)育不良綜合征(MDS)中的骨髓細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡的方法，包括給需要的動(dòng)物使用有效量的權(quán)利要求1所述的化合物。全文摘要本發(fā)明涉及通式(Ⅰ)表示的新的二肽:其中R文檔編號(hào)C07K5/065GK1297354SQ99805211公開日2001年5月30日申請(qǐng)日期1999年3月16日優(yōu)先權(quán)日1998年3月16日發(fā)明者蔡遂雄,J·德魯,王炎,E·韋伯申請(qǐng)人:西托維亞公司