專利名稱：用于檢測和/或鑒定樣品中存在的細菌的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及用于檢測和/或鑒定液體或固體樣品中存在的細菌的方法。本發(fā)明還涉及用于檢測和/或鑒定這類樣品中存在的細菌的裝置。
背景技術：
鑒定食品中的細菌對公眾健康而言必不可少。例如，可以在許多食品中發(fā)現(xiàn)的沙門氏菌屬的細菌是人體中許多疾病的致病原因(傷寒癥、食物中毒)。類似地，分離和鑒定利斯特氏菌屬細菌是監(jiān)測農產品衛(wèi)生和醫(yī)學細菌學的主要責任。因此，在利斯特氏菌屬的細菌中，已知對人體致病的單核細胞增生性利斯特氏菌可以導致利斯特菌病，這種疾病在免疫抑制個體和幼兒中有時是致命的(25-30％的病例)。因此，非常重要的是提供用于檢測污染了這些細菌的可靠而快速的檢測方法，這種檢測方法必須既靈敏又具有特異性。最后，鑒定葡萄球菌屬的細菌也是必不可少的。這些種類中的大部分因創(chuàng)傷或因直接植入醫(yī)療產品而在皮膚損傷情況下成為人體中高危的機會致病菌。此外，金黃色葡萄球菌種類是通常在接受住院護理的患者中發(fā)現(xiàn)的細菌，所述住院護理涉及裝置，諸如注射器或導管。因此，檢測涉及日益增加的醫(yī)院疾病的這種致病菌的存在是非常有利的。
目前存在許多用于檢測細菌的試驗。一般來說，這些檢測試驗需要預富集，包括●恢復步驟，使細菌從因培養(yǎng)誘導的應激狀態(tài)恢復；和●細菌指數(shù)生長步驟，它在最初樣品中存在少量細菌的情況下是必不可少的；和●檢測細菌的步驟，該步驟應優(yōu)選在任意細菌培養(yǎng)物中觀察到的細菌生長峰值時和細菌死亡期出現(xiàn)前進行。
作為用于檢測細菌的方法的標志，可以提及的方法由專利US-A-4,563,418中所述的檢測沙門氏菌屬的方法構成，該方法基于免疫沉淀。在預富集和細菌生長步驟后，即在用沙門氏菌屬預富集的培養(yǎng)基中遷移和與針對沙門氏菌屬的抗體反應后對這些細菌進行檢測。可以提及的方法還可以由也基于免疫沉淀的類似的方法構成，在專利US-A-5,132,229給出了該方法。然而，在這些方法中，使用者必須通過手工操作來實施步驟，即手工將預富集細菌的培養(yǎng)基轉移至遷移凝膠，這可能誘發(fā)問題，特別是污染，而且對操作者的健康也有危害。
還可以提及的一些近期的方法，它們主要基于細菌通過對特別需要檢測的細菌種類具有選擇性的培養(yǎng)基遷移。因此，專利申請EP-A-0.259.116中提供了用于檢測樣品中存在的沙門氏菌屬的方法，該方法包括使存在于預富集的培養(yǎng)基中的沙門氏菌屬遷移至對沙門氏菌屬具有特異性的選擇培養(yǎng)基中。然后沙門氏菌屬遷移至檢測系統(tǒng)，使它們得到檢測，而同樣存在于樣品中的其它細菌被所述的選擇培養(yǎng)基阻止。然而，在該方法中，培養(yǎng)基保持與選擇培養(yǎng)基和檢測系統(tǒng)接觸，構成了這類方法的主題問題。因此，如果樣品被高度污染，那么存在于培養(yǎng)基中的非沙門氏菌屬的細菌可以飽和該選擇培養(yǎng)基，使得該培養(yǎng)基不再起選擇性屏障的作用。在檢測系統(tǒng)中存在的非沙門氏菌屬的細菌可以構成假陽性檢測到檢測系統(tǒng)陽性，而樣品并未污染沙門氏菌屬。此外，如該專利申請中所述的方法可能僅用于能運動的細菌。

發(fā)明內容
本發(fā)明提出了通過特別提供用于檢測和/或鑒定細菌的方法解決現(xiàn)有技術的所有缺陷，該方法對操作者方面、對包括細菌的培養(yǎng)基方面要求最低程度的操作，而同時直接根據(jù)易于在細菌指數(shù)生長期過程中建立的培養(yǎng)基進行快速診斷。
在開始實施步驟前，下列定義能夠更清楚地理解如下本發(fā)明的公開內容。
“樣品”是來源于任意類型食品的膳食樣品，還包括來源于生物液體的臨床樣品。這種樣品由此可以為液體或固體，且可以提及的由下列樣品組成，但不限于它們膳食樣品水；飲料，諸如牛奶；果汁；臨床樣品如全血、血漿、尿或糞便；膳食樣品酸牛奶、肉、蛋、蔬菜、蛋黃醬或干酪；魚等；來源于用于動物的食物的膳食樣品，諸如特別是來源于動物肉的樣品。
術語“第一個容器”用以指能夠容納培養(yǎng)基的任意類型的容器，諸如特別是燒瓶、瓶、Stomacher袋等。有利的是這第一個容器可以耐受壓力的變化，特別是在溫度變化過程中的壓力變化。因此，如果第一個容器由固體材料制成(諸如玻璃瓶)，那么對這種第一個容器而言有利的是開口的或安裝了允許壓力變化的閥門。當?shù)谝粋€容器由柔韌材料制成，諸如特別是Stomacher袋，那么它可以是開口的，也可以是封閉的，因為材料的柔韌性允許壓力變化。
術語“培養(yǎng)基”用以指包括細胞存活和生長所需所有成分的培養(yǎng)基。這類培養(yǎng)基是本領域技術人員眾所周知的，本領域技術人員易于選擇最適合于他們需要檢測的細菌所用的培養(yǎng)基。
術語“選擇培養(yǎng)基”用以指能夠選擇應與檢測細菌所用系統(tǒng)反應的細菌的培養(yǎng)基。例如，當需要選擇指定細菌時，選擇培養(yǎng)基包括直接針對可能存在于樣品中的不需要檢測的其它細菌種類的抗生素。選擇培養(yǎng)基的另一個實例在于包括對某些特定細菌具有毒性的化合物。還可以使用對某些細菌具有營養(yǎng)限制的培養(yǎng)基。這類選擇培養(yǎng)基是本領域技術人員眾所周知的，本領域技術人員可以根據(jù)他們所希望分析的樣品和細菌選擇合適的選擇培養(yǎng)基?？梢詫⑦@種選擇培養(yǎng)基與培養(yǎng)基混合或在包括檢測系統(tǒng)的第二個容器中分離。
術語“第二個容器”用以指能夠容納至少一種如下所定義的檢測系統(tǒng)的任意類型的容器。這第二個容器優(yōu)選由足夠硬度的材料制成，這種硬度能夠使在這第二個容器內部溫度下降時保持其體積恒定。這第二個容器可以包括在第一個容器內，使得使用者僅需要一個包括檢測和/或鑒定細菌所需的所有部件的裝置。
術語“檢測系統(tǒng)”用以指能夠顯示出存在指定細菌的系統(tǒng)。這類系統(tǒng)是本領域技術人員眾所周知的且作為舉例可以提及的系統(tǒng)由如下檢測系統(tǒng)構成，它包括基于免疫沉淀檢測的發(fā)色或熒光底物、免疫色譜、pH指示劑、沉淀產物等。這種檢測可以直接、即通過檢測細菌或特別通過檢測由所述細菌釋放的代謝物間接進行。
術語“傳送部件”用以指將第一個容器內包括的液體轉移至第二個容器的任意部件。這種傳送部件與第二個容器之間可以彼此獨立或可以構成單一部件。
因此，本發(fā)明提供了用于檢測和/或鑒定存在于液體或固體樣品中的細菌的方法，其特征在于a.將可能含有所述細菌的樣品置于第一個容器內的液體培養(yǎng)基中；b.提供包括用于檢測所述細菌的至少一種系統(tǒng)的第二個容器；c.在第一個容器與第二個容器之間安裝傳送部件；d.給第二個容器內部施加溫度T1，然后e.給第二個容器內部施加溫度T2；f.溫度T1高于溫度T2，使得將確定體積的培養(yǎng)基從第一個容器轉移至第二個容器；g.在檢測系統(tǒng)內測定存在或不存在細菌和/或鑒定所述細菌。
所述的細菌特別可以為，但不限于葡萄球菌屬、沙門氏菌屬、奈瑟氏球菌屬(niesseria)、軍團桿菌屬、分枝桿菌屬、彎曲桿菌屬、利斯特氏菌屬等。
本發(fā)明優(yōu)選實施方案的傳送部件包括在第一個容器內的至少第一個開口和在第二個容器內的至少第二個開口。
顯然可以理解，第一個容器與第二個容器之間的轉移不會自發(fā)地發(fā)生。例如，第一個容器中的第一個開口應位于第二個容器中的第二個開口下，以便防止重力導致的任何自發(fā)轉移。當傳送部件為防止第一個容器與第二個容器之間因簡單毛細管作用而發(fā)生任何自發(fā)轉移的非毛細管時，也可以防止自發(fā)轉移。這種導管的內徑特別可以為在0.1-5mm，優(yōu)選0.5-2mm。
優(yōu)選第二個容器界定第二個開口與檢測系統(tǒng)之間的第一個空氣體積和/或傳送部件界定第一個開口與第二個開口之間的第二個空氣體積。如果第二個容器在傳送部件的第二個開口與檢測系統(tǒng)之間包括選擇培養(yǎng)基，那么優(yōu)選將空氣體積界定在傳送部件的第二個開口與選擇培養(yǎng)基之間。
按照本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，第二個容器和傳送部件由在溫度變化時保持體積恒定的足夠硬度的材料制成。因此，當溫度從T1改變至T2時，第一個空氣體積和/或第二個空氣體積如通過經(jīng)歷壓力下降而抽吸肺樣起作用。
按照本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，T1為20-45℃，且更優(yōu)選30-42℃；T2為4-30℃，優(yōu)選13-18℃。
在步驟f)中，轉移的確定體積特別取決于施加的溫差且還取決于第二個空氣體積。轉移的確定體積特別可以在100-1000μl且優(yōu)選400-600μl。因此，作為舉例，當溫差(T2-T1)為22℃且T1＝15℃和T2＝37℃時，350μl的體積從第一個容器中被轉移至第二個容器。也能夠進行幾次步驟d)-f)，以便在幾個階段轉移確定的體積用于檢測細菌。
在步驟g)中，對細菌存在或不存在進行測定和/或鑒定取決于所用的檢測系統(tǒng)。
按照本發(fā)明實施方案的變化形式，在步驟a)-步驟b)之間進行預富集步驟，即增加需要檢測的細菌數(shù)量。這類預富集步驟是本領域技術人員眾所周知的，本領域技術人員易于根據(jù)他們希望檢測的細菌采用該步驟。
按照本發(fā)明的特定實施方案，第二個容器包括在第一個容器中。
本發(fā)明還涉及檢測和/或鑒定存在于液體或固體樣品中的細菌的方法，其特征在于a.如上所述將可能含有所述細菌的樣品置于第一個容器內的液體培養(yǎng)基中；
b.如上所述提供包括用于檢測所述細菌的至少一種系統(tǒng)的第二個容器；c.如上所述在第一個容器與第二個容器之間安裝傳送部件；d.給第一個容器內部施加溫度T1，然后e.給第一個容器內部施加溫度T2；f.溫度T1低于溫度T2，使得將確定體積的培養(yǎng)基從第一個容器轉移至第二個容器；g.在檢測系統(tǒng)內測定存在或不存在細菌和/或鑒定所述細菌。
按照本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，第二個容器與傳送部件由在溫度變化時足以保持恒定體積的硬度的材料制成。
本發(fā)明還涉及檢測和/或鑒定樣品中的細菌的裝置，包括●包括至少一種檢測系統(tǒng)的第二個容器；和●第一個容器與第二個容器之間的至少一種傳送部件，所述的傳送部件包括在第一個容器中的至少第一個開口和在第二個容器中的至少第二個開口。
按照本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，第二個容器界定第二個開口與檢測系統(tǒng)之間的第一個空氣體積和/或傳送部件界定第一個開口與第二個開口之間的第二個空氣體積。特別將所述的在壓力下降時如抽吸肺起作用的第一個和第二個空氣體積空氣體積施加給第二個容器。按照本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，第一個容器與傳送部件由在溫度變化時足以保持恒定體積的硬度的材料制成。
按照本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，第一個容器中的第一個開口的位置低于第二個容器中的第二個開口，以特別防止因重力而在第一個容器與第二個容器之間發(fā)生任何的轉移。
按照本發(fā)明的另一個實施方案，第一個容器中的第一個開口與第二個容器中的第二個開口構成相同的開口。在該實施方案中，傳送部件限于這一相同開口。
按照本發(fā)明的特定實施方案，傳送部件為非毛細管，以特別防止因簡單毛細管作用而在第一個容器與第二個容器之間發(fā)生任何轉移。
按照本發(fā)明的特定實施方案，如上所述的裝置還包括含有培養(yǎng)基的第一個容器。按照本發(fā)明的特定實施方案，第二個容器包括在第一個容器中。優(yōu)選第一個容器為Stomacher袋。這種Stomacher袋可以在放置膳食樣品的培養(yǎng)基與傳送部件之間包括過濾器，以防止膳食樣品的任何部分阻塞第一個開口并防止培養(yǎng)基從第一個容器轉移至第二個容器。
最后，為了實施如上所述的方法，本發(fā)明涉及用于檢測和/或鑒定細菌的試劑盒。
將附圖作為解釋性實施例給出且實際上絕不起限定作用。它們能夠更清楚地理解本發(fā)明。


附圖1表示如實施例1中提供的本發(fā)明的第一個實施方案。第一個容器(1)為包括培養(yǎng)基(2)的Stomacher袋，其中放置了可能含有需要檢測和/或鑒定的細菌的樣品。第二個容器(4)包括檢測系統(tǒng)(6)，它是包括指示劑的選擇性液體培養(yǎng)基，所述的指示劑在存在欲檢測的細菌和/或鑒定的細菌時形成沉淀。這第二個容器與浸入包括樣品的培養(yǎng)基(2)的傳送部件(3)連接。該傳送部件包括在第一個容器(1)中的第一個開口(7)和在第二個容器(4)中的第二個開口(8)。在第二個開口(8)與檢測系統(tǒng)(6)之間界定了第一個空氣體積(9)。在第二個開口(8)與第一個開口(7)之間的傳送部件(3)內界定了第二個空氣體積(16)。
附圖2表示如實施例2中提供的本發(fā)明的另一個實施方案。第一個容器(1)為包括培養(yǎng)基(2)的開口容器，其中放置了需要分析的樣品。傳送部件(3)與附圖1的傳送部件(3)類似。第二個容器(4)包括如附圖1中所述的第一個空氣體積(9)和浸入了選擇培養(yǎng)基(5)的纖維素柱(10)。將為被動固定在無菌紙片上的顯色底物的檢測系統(tǒng)(6)置于纖維素柱(10)頂部。
附圖3表示如實施例3中提供的發(fā)現(xiàn)檢測能運動的細菌中的優(yōu)選應用的本發(fā)明的另一個實施方案。第一個容器(1)為包括培養(yǎng)基(2)的開口容器，其中放置了需要分析的樣品。傳送部件(3)與附圖1的傳送部件(3)類似。第二個容器(4)包括如附圖1中所述的第一個空氣體積(9)、半固體培養(yǎng)基(5)和為被動固定在無菌紙片上的顯色底物的檢測系統(tǒng)(6)。在轉移步驟后，圓柱體(11)促使能運動的細菌通過選擇培養(yǎng)基遷移，此后達到檢測系統(tǒng)。
附圖4表示如實施例4中提供的本發(fā)明的另一個實施方案。第一個容器(1)為包括培養(yǎng)基(2)的開口容器，其中放置了需要分析的樣品。傳送部件(3)與附圖1的傳送部件(3)類似。第二個容器(4)包括如附圖1中所述的第一個空氣體積(9)和檢測系統(tǒng)(6)，其中檢測系統(tǒng)(6)為本領域技術人員眾所周知的免疫色譜條，它包括含有標記的抗細菌抗體綴合物的第一部分(12)和為色譜膜的第二部分(13)，在色譜膜(13)上能夠檢測到第一種信號(14)和第二種信號(15)，第一種信號的特征在于存在需要檢測細菌的抗細菌抗體，第二種信號的特征在于存在陽性對照。盡管細菌是不能運動的，但是吸收紙(17)能夠使它們遷移。
附圖5表示本發(fā)明的另一個實施方案。第一個容器(1)為包括培養(yǎng)基(2)的生物分析管，其中放置了需要分析的樣品。第二個容器(4)包括如附圖1中所述的第一個空氣體積(9)和檢測系統(tǒng)(6)以及選擇培養(yǎng)基(5))。在該實施方案中，第一個容器(1)中的第一個開口與第二個容器(4)中的第二個開口構成相同的開口傳送部件(3)限于這一相同開口。該開口必須不能使第一個容器與第二個容器之間發(fā)生自發(fā)性的培養(yǎng)基的轉移。
提供下列實施例僅作為解釋目的，且實際上絕不起限定作用。它們有助于更清楚地理解本發(fā)明。
實施例1-包括指示劑的液體選擇培養(yǎng)基上金黃色葡萄球菌的檢測在本實施例中使用如附圖1中所示用于檢測和/或鑒定存在于樣品中的細菌的裝置檢測金黃色葡萄球菌。為了這一目的，將225ml培養(yǎng)基(2)(蛋白胨水，bioMérieux，ref42043)與25ml牛奶一起導入為S tomacher袋的第一個容器(1)，并按照本領域技術人員所公知的常規(guī)方案給該混合物接種3×104個金黃色葡萄球菌細胞。如上所述使用培養(yǎng)基和牛奶，但不接種金黃色葡萄球菌獲得對照組試驗結果。將25ml注射器的上部用作包括13ml第一個空氣體積(9)的第二個容器(4)。使用選擇培養(yǎng)基(5)(Qi-Staph，bioMérieux)并將3ml這種選擇培養(yǎng)基引入第二個容器(4)。在本實施例中，檢測系統(tǒng)(6)為使存在的金黃色葡萄球菌出現(xiàn)黑色沉淀的指示劑化合物(亞碲酸鉀)。在本實施例中所用的傳送部件(3)為導管，它具有1mm內徑和12mm長度，其中4cm透入第二個容器(4)，如附圖1中所示。該傳送部件(3)包括浸入培養(yǎng)基(2)的第一個開口(7)和進入第二個容器(4)的第二個開口(8)。在本實施例中，第二個容器恰好包括一個開口，它相當于所述傳送部件(3)的第二個開口(8)且結果是構成了除開口(8)外的封閉室。如附圖1中所示，在Stomacher袋中放置有第二個容器(4)和傳送部件(3)。這使得能夠分離污染的培養(yǎng)基。
通過將完整的裝置置于37℃下的保溫箱內1小時使包括細菌的培養(yǎng)基(2)在第一個容器(1)與第二個容器(4)之間獲得轉移。這種溫育使培養(yǎng)基得到預富集?？梢愿鶕?jù)樣品的污染情況進行或長或短的溫育。然后第二個容器(4)內部處于溫度T1＝37℃。然后將完整裝置放置在溫度15℃下1小時，使得第二個容器(4)內部處于溫度T2＝15℃。裝置溫度的降低誘導第二個容器(4)中的壓力下降，使得確定體積的培養(yǎng)基(600μl)從第一個容器(1)中轉移至第二個容器(4)。然后使完整的裝置保持在37℃下18小時，以便使細菌代謝底物，從而在檢測系統(tǒng)(6)內誘導出現(xiàn)沉淀。應注意在第二個容器中(4)中，選擇培養(yǎng)基(5)的水平不會達到傳送部件(3)與第二個容器(5)之間的第二個開口(8)在抽吸過程中，包括抽吸的金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基(2)被截留在第二個容器(4)內部且不能反向流入第一個容器(1)，此時第二個容器(40)內部的溫度再次增加。在該溫育結束時，在檢測系統(tǒng)內出現(xiàn)沉淀，證實當給培養(yǎng)基和牛奶接種這些細菌時存在金黃色葡萄球菌。在對照試驗中未觀察到沉淀。
實施例2-纖維素柱上鼠傷寒沙門氏菌的檢測第一個容器(1)與實施例1中所述相同，但可以為任意類型的第一個容器。在本實施例中，給溶解了25g奶粉(商購)的225ml BPW(蛋白胨水)中接種3×102個鼠傷寒沙門氏菌細胞。在本實施例中所用的第二個容器(4)和傳送部件(3)如附圖2中所示。如實施例1中所述進行對照試驗。
就選擇培養(yǎng)基(5)而言，將0.5毫升含有20μg新生霉素的BPW培養(yǎng)基浸入2cm長和0.7cm直徑的纖維素柱(10)。將該纖維素柱(10)放置在第二個容器(4)內部，但不與傳送部件(3)的第二個開口(8)接觸。在本實施例中，第二個容器(4)恰好包括一個開口，它相當于所述傳送部件(3)的第二個開口(8)，結果是構成了除開口(8)外的封閉室。在這一纖維素柱(10)頂部沉積的是檢測系統(tǒng)(6)，它是被動固定在5mm直徑無菌紙片(Whatman 2Chr，ref3030917)上的顯色底物，即合并了氮藍四唑(Sigma，N6639)的5-溴-6-氯-3-吲哚氧基辛酸酯(magentaC8)。如實施例1中所述，通過將完整裝置置于37℃下1小時且然后在15℃下1小時使包括細菌的培養(yǎng)基(2)在第一個容器(1)與第二個容器(4)之間進行轉移。在轉移結束時，與纖維素柱接觸的細菌擴散至柱頂，到達檢測系統(tǒng)，在這里它們代謝底物，從而形成黑色沉淀。15小時后觀察到了陽性結果。在對照試驗中結果為陰性。
實施例3-半固體選擇培養(yǎng)基上能運動的鼠傷寒沙門氏菌的檢測第一個容器(1)與實施例1中所述相同，但可以為任意類型的第一個容器。在本實施例中，給溶解了25g奶粉(商購)的225ml BPW(蛋白胨水)中接種3×102個鼠傷寒沙門氏菌細胞。在本實施例中所用的第二個容器(4)和傳送部件(3)如附圖3中所示。如實施例1中所述進行對照試驗。
將3ml半固體培養(yǎng)基(API M-培養(yǎng)基，bioMérieux，ref50120)放置在第二個容器(4)內部并作為包括40μg/ml新生霉素的選擇培養(yǎng)基(5)使用，選擇培養(yǎng)基(5)水平不會達到傳送部件(3)與第二個容器(5)之間的第二個開口(8)。如附圖3中所示，第二個開口(8)與檢測系統(tǒng)(6)被圓柱體(11)隔開，促使細菌通過選擇培養(yǎng)基(5)遷移，這意味著僅抗性和能運動的細菌到達檢測系統(tǒng)(6)。該檢測系統(tǒng)(6)為如實施例2中所述的顯色底物。通過將完整裝置置于37℃下1小時然后在15℃下1小時，使沙門氏菌屬按照與實施例1類似的方式從第一個容器轉移至第二個容器。
在轉移結束時，通過將完整裝置維持在37℃下16小時，包括能運動的細菌的確定體積的培養(yǎng)基(150μl)與選擇培養(yǎng)基(5)接觸且細菌通過它遷移至達檢測系統(tǒng)(6)。在該溫育結束時，紙片顯黑色證實存在沙門氏菌屬，它最初存在于培養(yǎng)基中。在對照試驗中沒有觀察到顯色。
實施例4-通過免疫色譜法檢測單核細胞增生性利斯特氏菌第一個容器(1)與實施例1中所述相同，但可以為任意類型的第一個容器。在本實施例中，給250ml培養(yǎng)基(2)(trypcase大豆肉湯，bioMérieux，ref44011；6％酵母)接種3×107cfu/ml的單核細胞增生性利斯特氏菌4b。在本實施例中所用的第二個容器(4)和傳送部件(3)如附圖4中所示。按照類似的方式進行對照試驗，但不接種細菌。
將為本領域技術人員眾所周知的免疫色譜法條的檢測系統(tǒng)(6)放置在第二個容器(4)內部。如實施例1中所述進行對照試驗。
通過在溫度T1＝30℃下將完整裝置溫育1小時然后在溫度T2＝15℃下溫育45分鐘，使單核細胞增生性利斯特氏菌從第一個容器(1)轉移至第二個容器(4)。在轉移結束時，能夠檢測到第一種信號(14)和第二種信號(15)，第一種信號(14)的特征在于通過與特異性抗體反應證實有存在于單核細胞增生性利斯特氏菌鞭毛中的蛋白質存在，第二種信號(15)的特征在于存在陽性對照且使用抗來自小鼠的IgG的抗體獲得。在對照試驗中，僅能夠觀察到第二種信號。
參照1.第一個容器2.包括樣品的培養(yǎng)基3.傳送部件4.第二個容器5.選擇培養(yǎng)基6.檢測系統(tǒng)7.第一個開口8.第二個開口9.第一個空氣體積10.纖維素柱11.圓柱體12.第一部分13.第二部分14.第一種信號15.第二種信號16.第二個空氣體積17.吸收紙
權利要求
1.用于檢測和/或鑒定存在于液體或固體樣品中的細菌的方法，其特征在于a.將可能含有所述細菌的樣品置于第一個容器(1)中的液體培養(yǎng)基(2)中；b.提供包括用于檢測所述細菌的至少一種系統(tǒng)(6)的第二個容器(4)；c.在第一個容器(1)與第二個容器(4)之間安裝傳送部件(3)；d.給第二個容器(4)內部施加溫度T1，然后e.給第二個容器(4)內部施加溫度T2；f.溫度T1高于溫度T2，使得將確定體積的培養(yǎng)基(2)從第一個容器(1)轉移至第二個容器(4)；g.在檢測系統(tǒng)(6)內測定存在或不存在細菌和/或鑒定所述細菌。
2.權利要求1的方法，其特征在于傳送部件(3)包括在第一個容器(1)中的至少第一個開口(7)和在第二個容器(4)中的至少第二個開口(8)。
3.權利要求2的方法，其特征在于第二個容器(4)界定第二個開口(8)與檢測系統(tǒng)(6)之間的第一個空氣體積(9)和/或傳送部件(3)界定第一個開口(7)與第二個開口(8)之間的第二個空氣體積(16)。
4.權利要求1-3中任意一項的方法，其特征在于T1為25-45℃，優(yōu)選30-42℃。
5.權利要求1-4中任意一項的方法，其特征在于T2優(yōu)選為4-24℃，優(yōu)選13-18℃。
6.用于檢測和/或鑒定存在于液體或固體樣品中的細菌的方法，其特征在于a.將可能含有所述細菌的樣品置于第一個容器(1)中的液體培養(yǎng)基(2)中；b.提供包括用于檢測所述細菌的至少一種系統(tǒng)(6)的第二個容器(4)；c.在第一個容器(1)與第二個容器(4)之間安裝傳送部件(3)；d.給第一個容器(1)內部施加溫度T1，然后e.給第一個容器(1)內部施加溫度T2；f.溫度T1低于溫度T2，使得將確定體積的培養(yǎng)基(2)從第一個容器(1)轉移至第二個容器(4)；g.在檢測系統(tǒng)(6)內測定存在或不存在細菌和/或鑒定所述細菌。
7.用于檢測和/或鑒定樣品中的細菌的裝置，包括·包括至少一種檢測系統(tǒng)(6)的第二個容器(4)；和·第一個容器(1)與第二個容器(4)之間的至少一種傳送部件(3)，所述的傳送部件包括在第一個容器(1)中的至少第一個開口(7)和在第二個容器(4)中的至少第二個開口(8)。
8.權利要求7的裝置，其特征在于第二個容器(4)界定第二個開口(8)與檢測系統(tǒng)(6)之間的第一個空氣體積(9)和/或傳送部件(3)界定第一個開口(7)與第二個開口(8)之間的第二個空氣體積(16)。
9.權利要求7或8的裝置，其特征在于傳送部件(3)為非毛細管導管。
10.權利要求7-9中任意一項的裝置，其特征在于第二個容器(4)包括在第一個容器(1)中。
11.用于實施權利要求1-6中任意一項所述方法的檢測和/或鑒定細菌的試劑盒。
全文摘要
本發(fā)明涉及檢測和/或鑒定存在于液體或固體樣品中的細菌的方法，其特征在于將含有所述細菌的樣品置于第一個容器內的液體培養(yǎng)基中；提供包括至少一種檢測系統(tǒng)的第二個容器；在第一個與第二個容器之間安裝傳送部件；給第二個容器內部施加溫度T1，然后給第二個容器內部施加溫度T2；溫度T1大于溫度T2，使得確定體積的培養(yǎng)基從第一個容器轉移至第二個容器；在檢測系統(tǒng)中測定存在或不存在細菌和/或鑒定所述細菌。
文檔編號C12M1/34GK1768150SQ200480008625
公開日2006年5月3日 申請日期2004年4月2日 優(yōu)先權日2003年4月7日
發(fā)明者J·V·梅卡德爾巴迪亞, B·科蘭, V·阿特拉舍 申請人:拜奧默里克斯公司