專利名稱：油脂改良劑及含有油脂改良劑的組合物的制作方法
工業(yè)領(lǐng)域本發(fā)明涉及一種新型油脂改良劑，其含有多不飽和脂肪酸，并且具有包括多不飽和脂肪酸的組織化油脂。
背景技術(shù)：
脂肪如同蛋白質(zhì)和糖類一樣，是一種重要的營養(yǎng)成分，尤其用來作為一種高能量源。然而，由于脂肪含有高熱量(9kcal/g)，因此會造成肥胖，并且是諸如與生活方式有關(guān)的疾病的問題的原因。實(shí)際上，當(dāng)發(fā)現(xiàn)高血脂(高膽固醇血，高甘油三酯血)時(shí)，可采取食療法作為首要的治療方法，并且當(dāng)采用適當(dāng)?shù)氖澄镏委熀瓦\(yùn)動(dòng)治療后，癥狀通常會改善，也可能正?；?。然而，由于脂肪可促進(jìn)食欲，因此現(xiàn)今的人們經(jīng)常食用含大量脂肪的食品，并且在發(fā)達(dá)國家，食品豐富，因此攝取過多的脂肪已成為問題。
更經(jīng)常的，高甘油三酯血是過度飲食、缺乏運(yùn)動(dòng)、肥胖、過多食用酒精的結(jié)果，因此有很多原因會造成高血壓和糖尿病同時(shí)作為并發(fā)癥出現(xiàn)。因此，許多情況下，如有多重危險(xiǎn)因素或很難改善日常生活習(xí)慣，為了預(yù)防局部缺血性心臟病的發(fā)生，而進(jìn)行積極的藥物治療。
關(guān)于治療高甘油三酯血的藥物，有纖維化物(fibrate)型藥物(日本，苯扎貝特)(Bezatol SRR和BezalipR)，并且已知非諾貝特(LipantilR)為第二代纖維化物型藥。這些纖維化物型藥物的主要作用機(jī)理是通過激活細(xì)胞核內(nèi)受體型轉(zhuǎn)錄因子α(PPARα過氧化物酶體增殖子-激活的受體α)介導(dǎo)的。
因此，通過促進(jìn)脂肪酸的β-氧化和降低肝臟的甘油三酯的產(chǎn)生，因而，VLDL-TG的產(chǎn)生受到抑制。此外，PPARα的激活提高LPL活性，以及加快富含甘油三酯的脂蛋白分解代謝。進(jìn)一步，誘導(dǎo)增加apo A I和apo A II的產(chǎn)生，并抑制apo C III的產(chǎn)生。此外，注意到，纖維化物型藥物能夠抑制肝臟中的膽固醇合成，有助于增強(qiáng)對胰島素的敏感性，并且有助于膽汁中膽固醇的排放。因此，纖維化物型藥物可使血清中甘油三酯的濃度減少20-50％，并且使HDL-膽固醇增加10-15％。
至于其它藥物，煙酸制劑(戊四煙酯(PerycitR)和尼可莫爾(CholexaminR))已發(fā)現(xiàn)可用于治療混合型高甘油三酯血和高血糖(伴隨著高甘油三酯血、高膽固醇血和低-HDL-高膽固醇血)。煙堿型藥物主要的作用機(jī)理是通過抑制脂肪酸的合成，抑制脂肪酸移動(dòng)到肝臟中并抑制肝中脂肪酸的酯化而降低肝臟中的甘油三酯。目前，首選使用纖維化物型藥物，但在藥物治療方面，必須注意副作用，如肝功紊亂，腎功紊亂和肌肉組織的病癥。此外，藥物的大多數(shù)副作用是在開始服用的六個(gè)月之內(nèi)顯現(xiàn)，因此，當(dāng)在六個(gè)月期間，或至少三到四個(gè)月內(nèi)，開始服用或增加劑量后，測定藥物的有效性時(shí)，留意副作用發(fā)作是非常重要的。因此，在服藥期間非常小心的關(guān)注是必須的，不可能為了預(yù)防而服用這類藥物。
目前，作為預(yù)防手段已對脂/油的代用品和非吸收性脂/油進(jìn)行了開發(fā)，一個(gè)例子就是蔗糖脂肪酸聚酯(美國專利號3600186)。由于它在體內(nèi)沒有吸收就排放了，因此來源于脂/油的卡路里的量是0kcal/g。然而，脂溶性維生素的吸收受到抑制，并且沒有提供必須的脂肪酸，因此不能夠用來作為常用的脂/油。在這種情況下，近年來已開發(fā)甘油二酯作為提供必須脂肪酸的來源。
甘油二酯中，脂肪酸大多連接在甘油三酯的1，3-位，并且在吸收時(shí)，脂肪酸被對1，3-位特異性的胰脂肪酶切掉，所得甘油酯和脂肪酸從小腸中吸收。然而，它們在小腸的表皮細(xì)胞未重構(gòu)成甘油三酯，而是被門靜脈吸收，直接運(yùn)輸?shù)礁闻K。因此，脂肪的聚集受到抑制。(在甘油三酯的情況中，2-?；鶈胃视王ズ椭舅嵩谛∧c吸收，在小腸的表皮細(xì)胞內(nèi)重新構(gòu)成甘油三酯，與乳糜微滴結(jié)合，隱藏于淋巴中，通過外圍組織循環(huán)。)然而，開發(fā)的脂/油替代物中，沒有一種具有燃燒體內(nèi)脂肪的藥物作用(β-氧化)，并且效果也有限。盡管也開發(fā)了可抑制吸收的胰脂肪酶的抑制劑，但效果同樣是有限的。

發(fā)明內(nèi)容
因此，非常希望能有一種化合物，其具有油脂改良作用，極好地適用于食品中且很少有副作用。
因此，本發(fā)明旨在提供一種油脂改良劑，以及一種具有油脂改良作用的飲料/食品，其含有其中多不飽和脂肪酸連接在該甘油三酯的2-位的甘油三酯，或者多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位的甘油三酯作為活性成分。本發(fā)明也提供它們的制備方法。
更具體地說，本發(fā)明的目的在于提供一種油脂改良劑和具有油脂改良作用的飲料/食品，或者更具體地，起如下作用血液中的中性脂肪(甘油三酯)和/或膽固醇降低，血液中DL-膽固醇增加，貯存的脂肪被燃燒(β-氧化的促進(jìn))，可食性脂肪被燃燒(β-氧化的促進(jìn))，作為細(xì)胞核內(nèi)受體型轉(zhuǎn)錄因子的肝PPARα和/或相關(guān)基因(如肝β-氧化酶基因)的表達(dá)得到提高，脂肪組織的PPARγ和/或相關(guān)基因的表達(dá)受到抑制。該油脂改良劑含有至少一種選自如下的甘油三酯作為活性成分ω-6型、ω-3型或ω-9型多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位上的甘油三酯、和ω-6型、ω-3型或ω-9型多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位上并且具有不小于8個(gè)碳原子飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在該甘油三酯的1，3-位的甘油三酯。本發(fā)明也提供它們的制備方法。
本發(fā)明者們對激活參與油脂代謝的細(xì)胞核內(nèi)受體型(PPAR)的轉(zhuǎn)錄因子的組分進(jìn)行篩選，該激活是治療高甘油三酯血首選的纖維化物型藥物的機(jī)理。眾所周知，脂/油攝取時(shí)，提高了PPARαmRNA的表達(dá)，且有助于脂肪酸和維生素A在小腸的表皮細(xì)胞吸收，同時(shí)在肝中，提高了PPARαmRNA的表達(dá)，且有助于脂肪酸的β-氧化。同樣眾所周知，作為PPAR配體，多不飽和脂肪酸比飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸更有效。因此，本發(fā)明者們著重于把多不飽和脂肪酸作為安全的、激活PPAR的天然組分。
當(dāng)脂/油被吸收時(shí)，連接在1，3-位的脂肪酸被對1，3-位特異性的胰脂肪酶切掉，因而，深入的研究基于這樣假設(shè)而進(jìn)行，即其中多不飽和脂肪酸連接到甘油三酯的1，3-位的甘油三酯是理想的甘油三酯結(jié)構(gòu)。出人意料地發(fā)現(xiàn)，一種多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位的甘油三酯，以及一種多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位的甘油三酯，對于PPAR具有更大的激活作用。由于連接在2-位的多不飽和脂肪酸沒有被對1，3-位特異性的胰脂肪酶切掉，那么可以設(shè)想PPAR幾乎沒有被激活，但是本發(fā)明者們的研究結(jié)果與預(yù)期的相反并被發(fā)現(xiàn)，由此實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明。
因此，本發(fā)明意圖提供一種油脂改良劑，以及一種具有油脂改良作用的飲料/食品，其含有多不飽和脂肪酸連接在該甘油三酯的2-位的甘油三酯，或者多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位的甘油三酯作為活性成分。本發(fā)明也提供它們的制備方法。
更具體地說，本發(fā)明旨在提供一種油脂改良劑和具有油脂改良作用的飲料/食品，或者更具體地，起如下作用血液中的中性脂肪(甘油三酯)和/或膽固醇被降低，血液中HDL-膽固醇增加，貯存的脂肪被燃燒(β-氧化的促進(jìn))，可食性脂肪被燃燒(β-氧化的促進(jìn))，作為細(xì)胞核內(nèi)受體型轉(zhuǎn)錄因子的肝PPARα和/或相關(guān)基因(如肝β-氧化酶基因)的表達(dá)得到提高，脂肪組織PPARγ和/或相關(guān)基因的表達(dá)受到抑制，該油脂改良劑含有至少一種選自如下的甘油三酯組分作為活性成分ω-6型、ω-3型或ω-9型多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位上的甘油三酯，和ω-6型、ω-3型或ω-9型多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位上并且具有不小于8個(gè)碳原子飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在該甘油三酯的1，3-位的甘油三酯。本發(fā)明也提供它們的制備方法。
本發(fā)明能提供一種油脂改良劑，以及一種具有油脂改良作用的飲料/食品，其含有多不飽和脂肪酸連接在該甘油三酯的2-位的甘油三酯，或者多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位的甘油三酯作為活性成分。本發(fā)明也提供它們的制備方法。本發(fā)明尤其適用于現(xiàn)代社會的人類。
附圖簡述

圖1顯示花生四烯酸連接在甘油三酯的2-位的脂/油對大鼠空腸PPAR和相關(guān)基因表達(dá)的影響的測定結(jié)果。結(jié)果以相對值(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，n＝5)表示，其中0％花生四烯酸食品組通過內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)基因18SrRNA的量校正后為1。a-c以不同字母間標(biāo)注的顯著差異(p＜0.05，Tukey)。AOX?；鵆oA氧化酶；CRBP II細(xì)胞視黃醇結(jié)合蛋白；類型II，L-FABP肝型脂肪酸結(jié)合蛋白，I-FABP小腸型脂肪酸結(jié)合蛋白。
圖2顯示花生四烯酸連接在甘油三酯2-位的脂/油對大鼠肝PPAR和相關(guān)基因表達(dá)的影響的測定結(jié)果。結(jié)果以相對值(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，n＝5)表示，其中0％生生四烯酸食品組通過內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)基因18SrRNA的量校正后為1。a、b以不同字母間標(biāo)注的顯著差異(p＜0.05，Tukey)。L-FABP肝型脂肪酸結(jié)合蛋白，AOX?；鵆oA氧化酶；UCP-2去偶蛋白，F(xiàn)AS脂肪酸合成酶。
圖3顯示花生四烯酸連接在甘油三酯2-位的脂/油對大鼠附睪PPAR和相關(guān)基因表達(dá)的影響的測定結(jié)果。結(jié)果以相對值(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，n＝5)表示，其中0％花生四烯酸食品組通過內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)基因18SrRNA的量校正后為1。a-c在不同字母標(biāo)注的顯著差異(p＜0.05，Tukey)。aP2細(xì)胞特異性的脂肪酸結(jié)合蛋白，UCP-2去偶蛋白，AOX?；鵆oA氧化酶；FAS脂肪酸合成酶。
圖4顯示含有花生四烯酸的結(jié)構(gòu)化油脂對大鼠肝PPAR和相關(guān)基因表達(dá)的影響的測定結(jié)果。結(jié)果以相對值(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，n＝5)表示，其中0％花生四烯酸食品組通過內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)基因18SrRNA的量校正后為1。a-c以不同字母標(biāo)注的顯著差異(p＜0.05，Tukey)。L-FABP；肝型脂肪酸結(jié)合蛋白，I-FABP小腸型脂肪酸結(jié)合蛋白，UCP-2去偶蛋白。
圖5顯示含有花生四烯酸的結(jié)構(gòu)化油脂對大鼠附睪白色脂肪組織PPAR和相關(guān)基因表達(dá)的影響的測定結(jié)果。結(jié)果以相對值(平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，n＝5)表示，其中0％花生四烯酸食品組通過內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)基因18SrRNA的量校正后為1。a、b以不同字母標(biāo)注的顯著差異(p＜0.05，Tukey)。
本發(fā)明的實(shí)施方式本發(fā)明涉及一種油脂改良劑，以及一種具有油脂改良作用的飲料/食品，其含有多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位的甘油三酯，或者多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位的甘油三酯作為活性成分。本發(fā)明也提供它們的制備方法。
為了預(yù)防和改善的目的，本發(fā)明的化合物，以及一種含有所述化合物的組合物作為具有油脂改良作用的飲料/食品、保健食品、功能食品、特定保健食品、嬰兒食品、老年人食品、藥物、準(zhǔn)藥物等等是有效的，更具體地，其作用如下中性脂肪(甘油三酯)和/或膽固醇被降低，血液中HDL-膽固醇增加，貯存的脂肪被燃燒(β-氧化的促進(jìn))和可食性脂肪被燃燒(β-氧化的促進(jìn))，并且鑒于機(jī)理，在水平方面，是細(xì)胞核內(nèi)受體型轉(zhuǎn)錄因子的PPARα和/或相關(guān)基因(例如?；鵆oA氧化酶和其它β-氧化體系中的酶以及一種未偶合蛋白(如UCP-2))的表達(dá)得到提高，脂肪酸合成酶(FAS)基因的表達(dá)受到抑制，并且在脂肪細(xì)胞中，PPARγ和/或相關(guān)基因(如脂肪細(xì)胞特異性的脂肪酸結(jié)合蛋白(aP2)和未偶合蛋白(UCP-2))的表達(dá)受到抑制，?；鵆oA氧化酶和其它β-氧化體系中的酶和/或一種未偶合蛋白(如UCP-2)基因的表達(dá)得到提高，脂肪酸合成酶(FAS)基因的表達(dá)受到抑制。
本發(fā)明的化合物能夠利用多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位的甘油三酯，或者多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位的甘油三酯。
連接在2-位的多不飽和脂肪酸的具體實(shí)例是ω-6型不飽和脂肪酸(例如9，12-十八碳二烯酸(亞油酸)18:2ω6、6，9，12-十八碳三烯酸(γ-亞麻酸)18:3ω6、8，11，14-二十碳三烯酸(雙高-γ-亞麻酸)20:3ω6、5，8，11，14-二十碳四烯酸(花生四烯酸)20:4ω6、7，10，13，16-二十二碳四烯酸22:4ω6或4，7，10，13，16-二十二碳五烯酸22:5ω6)、ω-3型不飽和脂肪酸(例如9，12，15-十八碳二烯酸(α-亞油酸)18:3ω3、6，9，12，15-十八碳四烯酸(硬脂四烯酸)18:4ω3、11，14，17-二十碳三烯酸(雙高-α-亞麻酸)20:3ω3、8，11，14，17-二十碳四烯酸20:4ω3、5，8，11，14，17-二十碳五烯酸20:5ω3、7，10，13，16，19-二十二碳五烯酸22:5ω3或4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸22:6ω3)和ω-9型不飽和脂肪酸(如6，9-十八碳二烯酸18:2ω9、8，11-二十碳二烯酸20:2ω9或5，8，11-二十碳三烯酸(蜜糖酸(mead acid))20:3ω9)。但它們是非限制性的并且可以任意使用，只要它是具有不少于18個(gè)碳且不少于2個(gè)雙鍵的多不飽和脂肪酸。連接在1，3-位的飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸的實(shí)例是辛酸(羊脂酸)8:0、癸酸(山羊酸)10:0、十二烷酸(月桂酸)12:0、十四烷酸(豆蔻酸)14:0、十六烷酸(棕櫚酸)16:0、十八烷酸(硬脂酸)18:0、9-十八烷酸(油酸)18:1ω9、二十烷酸20:0和二十二烷酸22:0，盡管它們是非限制的并且可以任意使用，只要它是具有不少于8個(gè)碳的飽和脂肪酸或單不飽和脂肪酸。顯然，連接在1，3-位的脂肪酸相同或者以混合形式使用都行。
具體化合物是如下甘油三酯1，3-二棕櫚酰基-2-花生四烯?；视王?16:0-20:4ω6-16:0)、1，3-二棕櫚?；?2-5，8，11，14，17-二十碳五烯?；视王?16:0-20:5ω3-16:0)、1，3-二棕櫚酰基-2-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯?；视王?16:0-22:6ω3-16:0)、1，3-二棕櫚?；?2-雙高-γ-亞麻?；视王?16:0-20:3ω6-16:0)、1，3-二棕櫚?；?2-蜜糖?；视王?16:0-20:3ω9-16:0)、1，3-二羊脂?；?2-花生四烯?；视王?8:0-20:4ω6-8:0)、1，3-二羊脂?；?2-5，8，11，14，17-二十碳五烯酰基甘油酯(8:0-20:5ω3-8:0)、1，3-二羊脂?；?2-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯?；视王?8:0-22:6ω3-8:0)、1，3-二羊脂?；?2-雙高-γ-亞麻?；视王?8:0-20:3ω6-8:0)、1，3-二羊脂酰基-2-蜜糖?；视王?8:0-20:3ω9-8:0)、1，3-二油酰基-2-花生四烯?；视王?18:1ω9-20:4ω6-18:1ω9)、1，3-二油?；?2-5，8，11，14，17-二十碳五烯?；视王?18:1ω9-20:5ω3-18:1ω9)、1，3-二油?；?2-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酰基甘油酯(18:1ω9-22:6ω3-18:1ω9)、1，3-二油?；?2-雙高-γ-亞麻?；视王?18:1ω9-20:3ω9-18:1ω9)和/或1，3-二油酰基-2-蜜糖?；视王?18:1ω9-20:3ω9-18:1ω9)。盡管它們是非限制性的但是可以任意使用，只要它是多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位的甘油三酯，或者是高度飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位的甘油三酯。
本發(fā)明的有效組分之一是高度飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在該甘油三酯的1，3-位的甘油三酯，并且可以通過以下方式制備。
因而，多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位的甘油三酯的一個(gè)具體制備方法是在含有多不飽和脂肪酸作為構(gòu)成脂肪酸并且含有飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸的脂/油(甘油三酯)存在的情況下使僅作用于甘油三酯的1，3-位的酯鍵的脂肪酶作用。
用作原料的脂/油(甘油三酯)是含有ω-6型多不飽和脂肪酸、ω-3型多不飽和脂肪酸和/或ω-3型多不飽和脂肪酸作為構(gòu)成脂肪酸的甘油三酯。當(dāng)多不飽和脂肪酸與構(gòu)成甘油三酯的所有脂肪酸之間的比例高時(shí)，酶反應(yīng)的溫度是30-50℃，或者優(yōu)選40-50℃，它高于常規(guī)為20-30℃的酶反應(yīng)溫度，為了防止由于未反應(yīng)的脂/油(原料甘油三酯和1，3-位的一種脂肪酸變?yōu)轱柡椭舅岷?或單-不飽和脂肪酸的甘油三酯)增多造成的反應(yīng)產(chǎn)率降低。
特異性地作用于甘油三酯的1，3-位的酯鍵的脂肪酶的實(shí)例是由諸如根霉屬、根毛霉屬和曲霉屬等微生物產(chǎn)生的脂肪酶以及豬的胰脂肪酶。關(guān)于脂肪酶，可以使用市售的。其實(shí)例是rhizopus delemar的脂肪酶(Tanabe Seiyaku制造的Talipase)、米赫根毛霉的脂肪酶(Novo Nordisk制造的Ribozyme IM)和黑曲霉的脂肪酶(Amano Seiyaku制造的脂肪酶A)。盡管它們是非限制性的，但是可以任意使用脂肪酶，只要它是對1，3-位特異性的脂肪酶。
至于以上脂肪酶的使用方式，使用一種固定于固定化載體上從而賦予酶耐熱性的脂肪酶是可取的，這是因?yàn)闉榱颂岣叻磻?yīng)效率的目的該反應(yīng)在不低于30℃，優(yōu)選不低于40℃的溫度下進(jìn)行。至于固定化載體，可以列舉一種離子交換樹脂載體，它是高度多孔的樹脂，具有不小于約100的孔徑，如Dowex MarathonWBA(商標(biāo)；Dow Chemical)。
將1份該固定化載體懸浮于0.5-20重量份的對1，3-位特異性的脂肪酶水溶液中，接著在攪拌下逐漸向該懸液中加入2-5份冷丙酮(如-80℃)，因而形成沉淀。可通過真空干燥該沉淀來制備固定化酶。
在一種較簡單的方法中，將0.05-0.4份的對1，3-位特異性的脂肪酶與1份固定化載體溶解在最少量水中，在攪拌下將其與固定化載體混合，將該混合物真空干燥制備固定化酶。該操作的結(jié)果，約90％的脂肪酶加載到載體上，但產(chǎn)品本身完全沒有顯示出轉(zhuǎn)酯化活性。因而，當(dāng)將加入1-10％(w/v)的水，或者優(yōu)選加入1-3％的水的底物(包括原料脂/油和中鏈脂肪酸)進(jìn)行預(yù)處理時(shí)，可以最有效地活化該固定化酶，并且該固定化酶可用于生產(chǎn)。
某些類型的酶中，添加到本反應(yīng)體系中的水的量非常重要。因而，當(dāng)不含水時(shí)，轉(zhuǎn)酯化反應(yīng)幾乎不能夠進(jìn)行，而當(dāng)水的量過多時(shí)，發(fā)生水解并且甘油酯的回收率降低(當(dāng)發(fā)生水解時(shí)，產(chǎn)生甘油二酯和甘油單酯)。然而，當(dāng)在這種情況下使用經(jīng)預(yù)處理活化的固定化酶時(shí)，加入到本反應(yīng)體系的水的量就不再重要了，甚至在根本沒有水的體系中，轉(zhuǎn)酯化反應(yīng)也能夠有效進(jìn)行。因此當(dāng)適當(dāng)選擇這類酶制劑時(shí)也可以省略預(yù)處理。
當(dāng)使用該耐熱性固定化酶本身并且升高酶促反應(yīng)溫度時(shí)，現(xiàn)在可以有效地生產(chǎn)飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在1，3-位并且高度飽和脂肪酸連接在2-位上的甘油三酯，即使在含有具有對對1，3-位特異性的脂肪酶低的反應(yīng)性的多不飽和脂肪酸的脂/油(甘油三酯)的情況下也不降低反應(yīng)性。
用作原料的脂/油(甘油三酯)是含有ω-6型多不飽和脂肪酸、ω-3型多不飽和脂肪酸和/或ω-3型多不飽和脂肪酸作為構(gòu)成脂肪酸的甘油三酯，并且ω-6型多不飽和脂肪酸是構(gòu)成脂肪酸的甘油三酯的實(shí)例是夜櫻草油(9，12-十八碳二烯酸(亞油酸)和6，9，12-十八碳三烯酸(γ-亞麻酸))和琉璃苣油(9，12-十八碳二烯酸(亞油酸)和6，9，12-十八碳三烯酸(γ-亞麻酸))。此外，一種有效地制備其中5，8，11，14-二十碳四烯酸(花生四烯酸)和8，11，14-二十碳三烯酸(雙高-γ-亞麻酸)是構(gòu)成脂肪酸的甘油三酯的方法由本發(fā)明者們開發(fā)(P86-0087；JP-A-5-91887)，這種脂/油也可用作酶促反應(yīng)的原料脂/油。
在有ω-9型多不飽和脂肪酸是構(gòu)成脂肪酸的甘油三酯的情況下，一種有效地制備其中6，9-十八碳二烯酸18:3ω9、8，11-二十碳二烯酸20:2ω9或5，8，11-二十碳三烯酸(蜜糖酸)20:3ω9是構(gòu)成脂肪酸的甘油三酯的方法由本發(fā)明者們開發(fā)(JP-A-5-91888、10-57085和5-91886)，這種脂/油也可用作酶促反應(yīng)的原料脂/油。
在有ω-3型多不飽和脂肪酸是構(gòu)成脂肪酸的甘油三酯的情況下，可以使用魚油如金槍魚、鰹、沙丁魚、鯖、太平洋刀魚、鱈、墨魚和馬鯖作為酶促反應(yīng)的原料脂/油。在魚油中，與甘油三酯連接的所有脂肪酸并不總是ω-3型多不飽和脂肪酸，而是在某些情況下，ω-6型多不飽和脂肪酸作為構(gòu)成脂肪酸連接。從鱗蝦和海藻如綠藻和藍(lán)藻中提取的脂/油也可用作酶促反應(yīng)的原料脂/油。
也可以使用公知產(chǎn)生其中4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸22:6ω3是構(gòu)成脂肪酸的甘油三酯的微生物，例如屬于crypthecodenium屬、thraustochytorium屬、schizochytrium屬、ulkenia屬、Japonochytorium屬或Haliphthoros屬的微生物的培養(yǎng)技術(shù)制備的脂/油作為酶促反應(yīng)的原料脂/油。
作為是原料的飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸，可以使用從植物脂/油提取的飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸，以及具有8-12個(gè)碳的中鏈脂肪酸作為酶促反應(yīng)的原料。此外，該原料可以作為脂肪酸、脂肪酸鹽、脂肪酸的醇酯和/或甘油三酯經(jīng)過反應(yīng)。
本發(fā)明的活性成分是其中多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位的并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位的甘油三酯，已知辛酸(羊脂酸)8:0和9-十八烷酸(油酸)18:1ω9提高PPAR基因的表達(dá)，并且這類脂肪酸連接在1，3-位的甘油三酯可以是有效的油脂改良劑。
通過酶法制備的甘油三酯不能夠給予100％具有油脂改良作用的甘油三酯，其中多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位，但從本發(fā)明主旨來看，顯然含有不小于5mol％，優(yōu)選不小于10mol％，更優(yōu)選不小于20mol％，最優(yōu)選含有不小于30mol％所述甘油三酯的脂/油(甘油三酯)也是具有油脂改良作用的甘油三酯。
順便提一下，顯然多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位的甘油三酯的制備方法并不限于酶促合成，可以使用包括化學(xué)合成的任意方法。
在具有油脂改良作用的組合物的制備方法中，可以將多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位的甘油三酯，單獨(dú)或結(jié)合地，與食品原料混合，其中所述食品原料中基本上不含，或者如果含有的話其量也很少，多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位的甘油三酯。這里，術(shù)語“少量”是指即使飲料/食品的原料中含有多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位的甘油三酯，當(dāng)含有該甘油三酯的食品組合物被人體攝取時(shí)，其量仍然低于本發(fā)明在之后提到的多不飽和脂肪酸的每日攝取量。
本發(fā)明的化合物是一種甘油三酯，它的使用不受限制。該化合物可作為食品、飲料、藥物和準(zhǔn)藥物的原料及其添加劑使用。它的使用目的及用量根本不受限制。
除了常規(guī)食品之外，食品組合物的實(shí)例還包括功能食品、營養(yǎng)補(bǔ)充劑、早產(chǎn)兒的配方奶、嬰兒配方奶、嬰兒食品、孕婦和產(chǎn)婦食品以及老年人食品。含有脂/油的食品的實(shí)例是本身含有脂/油的天然食品，如肉、魚和堅(jiān)果；烹飪時(shí)添加脂/油的食品，例如湯；使用脂/油作為加熱介質(zhì)的食品，例如油炸餅；脂/油食品如黃油；加工時(shí)添加脂/油的加工食品，例如餅干；和整理過程中噴涂脂/油的食品，例如硬質(zhì)餅干。也可以添加到農(nóng)作物食品、發(fā)酵食品、家畜食品、海產(chǎn)食品或不含有脂/油的飲料中。此外，功能食品、藥品和準(zhǔn)藥品的形式也可以接受，并且它可以是加工形式例如腸道營養(yǎng)劑、粉劑、顆粒、含片、口服液、懸劑、乳劑及糖漿。
除了本發(fā)明的有效成分之外，本發(fā)明的組合物可以含有飲料/食品、藥物或準(zhǔn)藥物中常用的各種載體和添加劑。尤其優(yōu)選含有抗氧化劑，以免本發(fā)明的有效組分氧化?？寡趸瘎┑睦邮翘烊怀煞郑缟宇?，黃酮衍生物、葉甜素、曲酸、沒食子酸衍生物、兒茶素、蜂斗酸、棉酚、吡嗪衍生物、芝麻酚、愈創(chuàng)酚、愈創(chuàng)酸、對呋喃酸、去甲二氫愈創(chuàng)酸、甾醇類、萜烯類、核酸堿類、類胡蘿卜素類和木酚素類以及由棕櫚酸抗壞血酸酯、硬脂酸抗壞血酸酯、丁基羥基茴香醚(BHA)，二丁基羥基甲苯(BHT)、單叔丁基氫醌(TBHQ)和4-羥甲基-2，6-二叔丁基苯酚(HMBP)代表的合成物。生育酚類的例子有α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、ε-生育酚、ξ-生育酚、η-生育酚和生育酚酯(如生育酚乙酸酯)。類胡蘿卜素的例子有β-胡蘿卜素、角黃素和蝦青素。
除了本發(fā)明的有效成分外，本發(fā)明的組合物可以含有載體如各種載體、膨脹劑、稀釋劑、填充劑、分散劑、賦形劑、粘合溶劑(如水、乙醇和植物油)、助溶劑、緩沖劑、促溶劑、膠凝劑、懸浮劑、小麥粉、米粉、淀粉、玉米淀粉、多糖、乳蛋白、膠原、大米油和卵磷脂，以及添加劑如維生素化合物、甜味劑、有機(jī)酸、著色劑、香味劑、防濕劑、纖維、電解質(zhì)、礦物質(zhì)、營養(yǎng)劑、抗氧化劑、防腐劑、芳香劑、增濕劑和天然食品提取物和植物提取物，且不限于此。
盡管本發(fā)明的化合物是甘油三酯的形式，但是活性物質(zhì)是連接在甘油三酯2-位的多不飽和脂肪酸，它是細(xì)胞核內(nèi)受體型(PPAR)的轉(zhuǎn)錄因子的配體。已報(bào)道在Kanto地區(qū)每日從食品中攝取的花生四烯酸的量為0.14g，在Kansai地區(qū)為0.19-0.20g(Shishitsu Eiyogaku，4，73-82，1995)，并且該相應(yīng)量或更大量可以是花生四烯酸攝取量的尺度。
因此，花生四烯酸連接在甘油三酯2-位的甘油三酯，或者花生四烯酸連接在甘油三酯2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯1，3-位的甘油三酯，每日的攝取量對于成年人(例如體重60kg的人)來說以花生四烯酸的量計(jì)是0.001-20g，優(yōu)選0.01-10g，更優(yōu)選0.05-5g或最優(yōu)選0.1-2g。已報(bào)道5，8，11，14，17-二十碳五烯酸20:5ω3、7，10，13，16，19-二十二碳五烯酸22:5ω3以及4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸22:6ω3的每日攝取量，在Kanto地區(qū)分別是0.15、0.05和0.27-0.37，在Kansai地區(qū)分別是0.35、0.12-0.14和0.69-0.82，并且該相應(yīng)量或更大量可以是花生四烯酸攝取量的尺度。
當(dāng)多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位的甘油三酯，或者多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯1，3-位的甘油三酯和含有所述甘油三酯的脂/油(甘油三酯)實(shí)際用于飲料/食品中時(shí)，與食品混合的多不飽和脂肪酸的絕對量也是重要的。
然而，與飲料/食品混合的絕對量也隨將要混合的飲料/食品的攝取量的不同而有所不同，因此以多不飽和脂肪酸的量計(jì)，它以不小于0.003％重量，優(yōu)選不小于0.03％重量，更優(yōu)選不小于0.3％重量的量混合。此外，當(dāng)花生四烯酸連接在甘油三酯的2-位的甘油三酯，或者花生四烯酸連接在甘油三酯的2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位的甘油三酯混合時(shí)，其用量不小于0.001％重量，優(yōu)選不小于0.01％重量，更優(yōu)選不小于0.1％重量。
當(dāng)本發(fā)明的組合物用作藥物時(shí)，它是通過制藥領(lǐng)域常見的方法制得的，如日本藥典所提到的方法或類似方法。
當(dāng)本發(fā)明的組合物用作藥物時(shí)，組合物中有效成分的混合量沒有特別的限制，只要能達(dá)到發(fā)明目的，可以使用適當(dāng)?shù)幕旌媳取?br> 當(dāng)本發(fā)明的組合物用作藥物時(shí)，優(yōu)選以單劑量形式給藥，尤其優(yōu)選口服。本發(fā)明組合物的劑量可以依據(jù)年齡、體重、癥狀、給藥頻率等等的不同而有所差異，例如推薦，多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位的甘油三酯，或者多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位的甘油三酯，以多不飽和脂肪酸的量計(jì)，對成年人(約60kg)每日給藥量通常為約0.001-20g，優(yōu)選約0.01-10g，更優(yōu)選約0.05-5g，最優(yōu)選約0.1-2g，每日分成1-3次。
實(shí)施例現(xiàn)在通過以下實(shí)施例更具體地闡述本發(fā)明，但是本發(fā)明不限于下述實(shí)施例。
實(shí)施例1、花生四烯酸連接在甘油三酯的2-位的甘油三酯的制備方法使用Mortierella alpine作為產(chǎn)花生四烯酸的微生物。在10-kL培養(yǎng)容器中制備含有1.8％葡萄糖、3.1％脫脂大豆粉、0.1％大豆油、0.3％KH2PO4、0.1％Na2SO4、0.05％CaCl2.2H2O和0.05％MgCl2.6H2O的培養(yǎng)基(6kL)，將最初pH調(diào)整至6.0。將預(yù)培養(yǎng)的溶液(30L)接種并在溫度為26℃、通風(fēng)量為360m3/hour和容器內(nèi)部壓力為200kPa的條件下于攪拌下充氣培養(yǎng)8天。調(diào)整攪拌以保持溶解的氧的濃度為10-15ppm。
至于葡萄糖濃度，通過流下法使得在培養(yǎng)基中的濃度在1-2.5％的范圍內(nèi)直到第四天，之后將其保持在0.5-1％(％上文所指的重量(w/v)％)。培養(yǎng)結(jié)束之后，過濾并干燥回收含有花生四烯酸是構(gòu)成脂肪酸的甘油三酯的細(xì)胞，并用己烷從所得細(xì)胞中提取脂/油，并經(jīng)過用于食用脂/油的純化步驟(脫膠、脫酸、脫臭和脫色)，得到150kg含花生四烯酸的甘油三酯(其中花生四烯酸連接在甘油三酯的任意位置)。將所得脂/油(甘油三酯)變成甲基酯，所得脂肪酸甲酯通過氣相色譜分析，得出花生四烯酸在所有脂肪酸中的比例為40.84％。
順便提一下，棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、γ-亞麻酸和雙高-γ-亞麻酸分別是11.63％、7.45％、7.73％、9.14％、2.23％和3.27％。順便提一下，在甘油三酯的2-位的多不飽和脂肪酸的比例，通過常規(guī)分析為91.5％，而花生四烯酸為64.7％。進(jìn)一步，將上面含有花生四烯酸的脂/油(甘油三酯)變成乙基酯，并將含有40％花生四烯酸乙酯的脂肪酸乙酯混合物經(jīng)過常規(guī)高效液相色譜，分離并純化99％花生四烯酸乙酯。所得花生四烯酸乙酯經(jīng)過常規(guī)皂化反應(yīng)，制備游離態(tài)花生四烯酸。
實(shí)施例2、飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸(X)連接在甘油三酯的1，3-位并且多不飽和脂肪酸(P)連接在甘油三酯的2-位的甘油三酯(XPX)和多不飽和脂肪酸(P)連接在甘油三酯的1-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸(X)連接在甘油三酯的2，3-位的甘油三酯(PXX)或者多不飽和脂肪酸(P)連接在甘油三酯的3-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸(X)連接在甘油三酯的1，2-位的甘油三酯(XXP)的化學(xué)合成8A8(1，3-二辛酰基-2-花生四烯?；视王?的合成將二羥基丙酮二聚物(1g，0.05mmol)溶解在20ml二氯甲烷中，然后向其中加入3.5ml(2.2mmol)正辛酸和70mg二甲基氨基苯，并在用冰冷卻下加入4.6g(1.2mmol)的WS-DCC。2小時(shí)后，混合物經(jīng)濃縮并用乙酸乙酯萃取，萃取物連續(xù)用水、1N鹽酸和飽和鹽水溶液清洗。經(jīng)無水硫酸鎂干燥后，在真空下濃縮，所得殘留物用冷己烷結(jié)晶，得到3g(8.7mmol)的1，3-二辛?；趸?產(chǎn)率79％)。
將該辛酸酯(10.8g，31.5mmol)溶解在120ml的THF中，加入8ml水，在冰凍下將該混合物劇烈攪拌，逐步向其中加入1.2g(31.7mmol)硼氫化鈉，用乙酸使pH至中性。添加結(jié)束之后，加入用1N鹽酸使其略微帶酸性的水，混合物用乙酸乙酯萃取，用水和飽和鹽水溶液清洗萃取物，經(jīng)無水硫酸鎂干燥并在真空下濃縮。將所得油狀物溶解在100ml二氯甲烷中，然后向其中加入300mg二甲基氨基苯和8g(26.4mmol)花生四烯酸，并用冰將該混合物冷卻。再向其中加入WS-DCC(6.5g，34.4mmol)，接著攪拌1小時(shí)。
反應(yīng)溶液經(jīng)濃縮并用乙酸乙酯萃取，萃取物用水、1N鹽酸和飽和鹽水溶液連續(xù)地清洗。然后經(jīng)無水硫酸鎂干燥冰在真空下濃縮，所得殘留物經(jīng)過使用己烷-乙酸乙酯(9∶1)的硅膠層析，得到13.5g(產(chǎn)率68％)的8A8油狀物。PMR(CDCl3)δ0.8-1.0(9H，m)；1.2-1.4(22H，m)；1.6-1.8(6H，m)；2.0-2.2(4H，m)；2.3-2.4(6H，m)；2.7-2.9(6H，m)；4.14(2H，q)；4.29(2H，q)；5.2-5.5(9H，m)。
88A(1(3)，2-二辛?；?3(1)-花生四烯酰基甘油酯的合成將(RS)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊環(huán)-4-甲醇(5g，37.8mmol)溶解在50ml的DMF中，并在用冰冷卻下將1.6g(39.7mmol)的60％氫化鈉的油分散液逐步添加。結(jié)束之后，將混合物攪拌10分鐘，并向其中滴入4.5ml(37.8mmol)芐基溴。之后，將混合物攪拌5小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束之后，加入水，用乙酸乙酯萃取混合物，并用水和飽和鹽水溶液洗滌萃取物。經(jīng)無水硫酸鎂將其干燥并在真空下濃縮，所得油狀物經(jīng)過使用己烷-乙酸乙酯(9∶1)的硅膠層析，獲得6.5g(產(chǎn)率77％)的油狀1(3)，2-異亞丙基-3(1)-芐氧基甘油酯。將該物質(zhì)(5.6g，25.2mmol)溶解在30ml乙酸中，加入30ml水并使混合物在60℃下反應(yīng)1小時(shí)。
在真空下將反應(yīng)溶液濃縮之后，用乙酸乙酯萃取殘留物并用碳酸氫鈉的飽和水溶液和飽和鹽水溶液清洗萃取物。經(jīng)無水硫酸鎂將其干燥后，在真空下濃縮，得到3.9g的油狀物(產(chǎn)率85％)。將該產(chǎn)物(3.8g，20.9mmol)溶解在40ml二氯甲烷中，加入6.9ml(43.9mmol)正辛酸和150mg二甲基氨基苯，并在用冰冷卻下加入8.7g(46mmol)的WS-DCC。2小時(shí)后，將混合物濃縮并用乙酸乙酯萃取，用水、0.5N氫氧化鈉和鹽水溶液連續(xù)清洗萃取物。經(jīng)無水硫酸鎂將其干燥并在真空下濃縮，得到9.9g油狀物。將其溶解在100ml THF-25ml乙酸中，然后加入1.3g 10％鈀-碳，并在有氫的條件下使反應(yīng)進(jìn)行一整夜。在過濾掉催化劑后，濾液經(jīng)真空濃縮并用乙酸乙酯萃取，萃取物用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水溶液清洗。
經(jīng)無水硫酸鎂干燥后，在真空下濃縮，并將所得殘留物經(jīng)過使用己烷-乙酸乙酯(9∶1)的硅膠層析，得到6g脫芐基化產(chǎn)物(產(chǎn)率83％)。將該脫芐基化產(chǎn)物(136mg，0.39mmol)溶解在3ml二氯甲烷中，加入100mg(0.33mmol)花生四烯酸和3mg二甲基氨基苯，并在用冰冷卻下加入90mg(0.48mmol)的WS-DCC。2小時(shí)后，將混合物濃縮，用乙酸乙酯萃取，用水、1N鹽酸和飽和鹽水溶液連續(xù)清洗萃取物。經(jīng)無水硫酸鎂干燥后，將其在真空下濃縮，并且所得殘留物經(jīng)過使用己烷-乙酸乙酯(9∶1)的硅膠層析，得到180mg的油狀物(產(chǎn)率74％)。
PMR(CDCl3)δ0.8-1.0(9H，m)；1.2-1.4(22H，m)；1.5-1.8(6H，m)；2.0-2.2(4H，m)；2.3-2.4(6H，m)；2.7-2.9(6H，m)；4.1-4.2(2H，m)；4.28(2H，q)；5.3-5.5(9H，m).
PAP(1，3-二棕櫚?；?2-花生四烯?；视王?、PPA(1(3)，2-二棕櫚?；?3(1)-花生四烯?；视王?和8P8(1，3-二辛?；?2-花生四烯?；视王?也可以用制備8A8和88A的同樣方法制得。
實(shí)施例3、含有不少于5％的中鏈脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位并且花生四烯酸連接在甘油三酯的2-位的甘油三酯(8A8)的甘油三酯的制備將離子交換樹脂載體(Dowex Marathon WBA；Dow Chemical；商標(biāo))(100g)懸浮在80ml的12.5％Rhizopus delemar脂肪酶(Talipase Powder；TanabeSeiyaku)水溶液中，真空下干燥，得到固定化脂肪酶。
之后，使用80g實(shí)施例1制備的含有40％重量花生四烯酸的甘油三酯(TGA40S)、160g辛酸、12g上述固定化脂肪酶和4.8ml水在30℃、攪拌(130rpm)下反應(yīng)48小時(shí)。反應(yīng)完成后，除去反應(yīng)液，得到已活化的固定化脂肪酶。
然后將該固定化脂肪酶(Rhizopus delemar脂肪酶；載體Dowex MarathonWBA，商標(biāo))(10g)填充到配備有夾套的玻璃柱(1.8×12.5cm；容積31.8ml)中，將實(shí)施例1制備的TGA 40S與辛酸以1∶2混合的混合脂/油以預(yù)定流速(4ml/hour)流入柱中，連續(xù)反應(yīng)，得到400g反應(yīng)脂/油。同時(shí)，柱的溫度保持在40-41℃。由所得反應(yīng)脂/油，未反應(yīng)的辛酸和游離脂肪酸通過分子蒸餾以及接著經(jīng)過用于食用脂/油的純化步驟(脫膠、脫酸、脫臭和脫色)除去，得到含有8A8的脂/油(甘油三酯)。
當(dāng)檢測通過氣相色譜和高效液相色譜制得的含8A8的脂/油(甘油三酯)中8A8的比例時(shí)，為31.6％(順便提一下，8P8、8O8、8L8、8G8和8D8的比例分別為0.6、7.9、15.1、5.2和4.8％)。
連接在甘油三酯的2-位的脂肪酸P、O、L、G和D分別是棕櫚酸、油酸、亞油酸、γ-亞麻酸和雙高-γ-亞麻酸，而8P8是1，3-辛?；?2-棕櫚?；?甘油酯，8O8是1，3-辛?；?2-油?；?甘油酯，8L8是1，3-辛酰基-2-亞油?；?甘油酯，8G8是1，3-辛?；?2-γ-亞麻?；?甘油酯和8D8是1，3-辛酰基-2-雙高-γ-亞麻?；?甘油酯。順便提一下，所得含8A8的脂/油(甘油三酯)經(jīng)過常規(guī)高效液相色譜分離和純化96mol％的8A8。
實(shí)施例4、花生四烯酸連接在甘油三酯的2-位的脂/油調(diào)節(jié)油脂代謝基因的表達(dá)使用大鼠測定實(shí)施例1制備的花生四烯酸連接在甘油三酯的2-位的脂/油(含有花生四烯酸的脂/油)對油脂代謝涉及的基因的表達(dá)的影響。將6周齡的SD品種的雄性大鼠分為四組。將實(shí)施例1制備的含花生四烯酸的脂/油與牛脂、橄欖油和玉米油適當(dāng)混合，制備四種表1所示的花生四烯酸含量不同的脂/油(0％AA、14.6％AA、26.8％AA和37.7％AA)，并將表2所示的試驗(yàn)食品(0％AA、1％AA、2.5％AA和5％AA)給予2周。本實(shí)驗(yàn)的食品是通過這樣的方式制得的花生四烯酸在實(shí)驗(yàn)食品中的比例為0、1、2.5和5％，并且除花生四烯酸之外的主要脂肪酸在試驗(yàn)食品中的比例幾乎是相同的(表3)。
食物的攝取是通過成雙-喂養(yǎng)進(jìn)行的，并且每天測定體重。使用瓊脂制備實(shí)驗(yàn)食品，使得每日攝取的能量在每個(gè)試驗(yàn)食品組中相同。攝取試驗(yàn)食品兩周后，將大鼠斷頭宰殺，收集到的空腸用冰冷二乙基焦碳酸酯處理過的生理鹽水溶液灌注，以去除其中的內(nèi)容物，從中除掉水，再測定空腸重量。至于肝和附睪白色脂肪組織，測定整個(gè)組織的重量。此外，根據(jù)chomezynski等的方法，從每100mg中心空腸、肝和附睪白色脂肪組織中萃取和制備總RNA并用于基因表達(dá)的測定。此外，收集斷頭宰殺后的血液，并用測定試劑盒(分別使用甘油三酯E-Test Wako和總膽固醇E-Test Wako)，來將血清部分中的甘油三酯濃度和總膽固醇濃度定量。
從各個(gè)組織中萃取的總RNA(10μg或30μg)，經(jīng)過使用1％的含2.2M甲醛凝膠的瓊脂糖凝膠電泳，再通過20×SSC緩沖器轉(zhuǎn)移到一個(gè)尼龍膜(Hybond N+；Amersham)上過夜。轉(zhuǎn)移總RNA的膜，在42℃下使用Ultrahyb雜交溶液(Ambion)預(yù)雜交2小時(shí)，然后在42℃下使用用32P標(biāo)記的每一cDNA探針經(jīng)隨機(jī)引物法雜交不短于16小時(shí)。
雜交完成后，使用清洗液I(2×SSPE，0.5％SDS)，在42℃下將膜孵化10分鐘(兩次)，然后使用清洗液III(0.1×SSPE，0.5％SDS)在42℃下孵化15分鐘(一次)，并清洗薄膜。清洗薄膜的表面用1-2天曝光于成像底片(Fuji PhotoFilm)上，并使用生物顯像分析儀BAS 200(Fuji Photo Film)分析薄膜上mRNA信號的強(qiáng)度。
每個(gè)測量結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，所得數(shù)據(jù)是通過分散分析測定的，并將因此標(biāo)注顯著差異的結(jié)果根據(jù)Tukey經(jīng)過多組測定。風(fēng)險(xiǎn)率不大于5％的被認(rèn)為是顯著的。
表1、四種具有不同花生四烯酸含量的脂/油的脂肪酸組合物

DGLA雙高-γ-亞麻酸DGLA雙高-γ-亞麻酸表2.實(shí)驗(yàn)食品的成分組成

表3、試驗(yàn)食品中每種脂肪酸的比例(％)

DGLA雙高-γ-亞麻酸DGLA雙高-γ-亞麻酸表4顯示了攝取實(shí)驗(yàn)食品2周后對組織重量和油脂血清濃度的影響。相應(yīng)于內(nèi)臟脂肪的附睪白色脂肪組織的重量隨試驗(yàn)食品中花生四烯酸的量降低，并且在5％AA實(shí)驗(yàn)食品中，該降低是顯著的。此外，血清中總膽固醇和甘油三酯濃度相對于試驗(yàn)食品中的花生四烯酸量顯著降低。血清甘油三酯濃度的降低尤其明顯，并且在1％AA食品組中，該降低量是0％AA食品組的53％。順便提一下，在提高花生四烯酸的本試驗(yàn)條件下，沒有觀察到因產(chǎn)生過量花生糖苷(eiconoside)引發(fā)的異常癥狀如炎癥，并且證實(shí)只要花生四烯酸以甘油三酯的構(gòu)成脂肪酸攝取就根本不存在問題。
表4、攝取實(shí)驗(yàn)食品對大鼠的體重增加、相對組織重量和血清油脂濃度的影響

ab在不同字母之間標(biāo)注的顯著差異(p＜0.05)
在大鼠空腸中，PPARαmRNA的表達(dá)量，在2.5％和5％AA食品組中增加到約1.5-至1.7-倍的程度(圖1)。另一方面，空腸中PPARδmRNA的表達(dá)量隨飼料中花生四烯酸含量而降低。此外，空腸中CRBP II、L-FABP、I-FABP和AOXmRNA(是PPARα的靶基因)的表達(dá)量隨攝取的花生四烯酸含量而增加。由于空腸中吸收的視黃醇是一種疏水性營養(yǎng)素，因此它大多數(shù)與結(jié)合蛋白結(jié)合存在于細(xì)胞質(zhì)中。細(xì)胞中結(jié)合視黃醇的II型蛋白質(zhì)(CRBP II)在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸和視黃醇的酯化方面起著重要作用。
因此，顯然，花生四烯酸通過增加PPARαmRNA的表達(dá)量并增加空腸CRBP IImRNA的表述量，來有效地介導(dǎo)脂溶性維生素的吸收和代謝。從以上結(jié)果可以清楚地看出，攝入小腸內(nèi)的花生四烯酸，其功能是直接作為PPARα的主要配體，或者作為類花生酸類的前體。
在肝中，PPARαmRNA的表述量在1％AA食品組和2.5％AA食品組中增加，然而在5％AA食品組中降低。然而，L-FABP、AOX和UCP-2mRNA(是PPARα的靶基因)的表達(dá)量隨花生四烯酸的量而增加，并且在5％AA食品組中顯示最高值。盡管它與PPARαmRNA的變化圖譜不同，可以說如下結(jié)果花生四烯酸以安全且有效的方式激活PPARα并調(diào)節(jié)基因表達(dá)，直到其數(shù)量達(dá)到2.5％。從以上可以清楚地看出，脂肪酸合成體系的抑制(不通過PPAR)和伴隨PPARα的表達(dá)量增加的脂肪酸分解體系的促進(jìn)(通過PPAR)是以基因水平控制的，并且血液中甘油三酯的濃度得到降低。
在附睪白色脂肪組織中，PPARα和PPARδmRNA的表達(dá)量隨花生四烯酸的量而顯著降低。此外，脂肪細(xì)胞特異性的脂肪酸結(jié)合蛋白(aP2)mRNA的表達(dá)量也隨濃度而降低。已知PPARδ參與脂肪細(xì)胞分化和誘導(dǎo)并促進(jìn)脂肪聚集在白色脂肪組織中，并且通過攝取花生四烯酸使得附睪脂肪組織重量減少(表4)，從而抑制白色脂肪細(xì)胞的數(shù)量和大小，或者換句話說，脂肪細(xì)胞的分化和老化是通過降低PPARδmRNA的表達(dá)量。另一方面，白色脂肪組織AOX mRNA的表達(dá)量隨花生四烯酸的量增加而增加，并因此也觀察到脂肪酸分解體系的促進(jìn)。
實(shí)施例5、通過含花生四烯酸的結(jié)構(gòu)化油脂調(diào)節(jié)油脂代謝基因表達(dá)使用大鼠研究實(shí)施例2中化學(xué)合成的花生四烯酸作為構(gòu)成脂肪酸的結(jié)構(gòu)化油脂對油脂代謝涉及的基因的表達(dá)的影響。在棕櫚酸(P)連接在甘油三酯的1，2，3-位的PPP、棕櫚酸連接在甘油三酯的2-位并且花生四烯酸連接在甘油三酯的3-位的PPA與棕櫚酸連接在甘油三酯的2，3(1)-位并且花生四烯酸連接在甘油三酯的1(3)-位的APP的相同量的混合物(化學(xué)合成，是相同量PPA與APP的混合物，并且為了方便起見下文中諸如相同量的混合物稱之為PPA)和棕櫚酸連接在甘油三酯的1，3-位并且花生四烯酸連接在甘油三酯的2-位的PAP(它們是結(jié)構(gòu)化油脂的實(shí)例)之間比較這些效果。
將5周齡的SD品種的雄性大鼠分成4組，每組5只大鼠，用標(biāo)準(zhǔn)固體飼料使大鼠適應(yīng)1周，再攝取混合有10％的含花生四烯酸的結(jié)構(gòu)化油脂(PPA或PAP)的實(shí)驗(yàn)食品(10％PPA和10％PAP；表5)2周。在對照組中，使用混合有PPP的實(shí)驗(yàn)食品(10％PPP)。攝取該食品時(shí)進(jìn)行成雙-喂養(yǎng)，并且每天測定體重。實(shí)驗(yàn)食品用瓊脂制成，以使每日攝取能量在各個(gè)食品組中相同。
攝取試驗(yàn)食品兩周后，將大鼠斷頭宰殺，根據(jù)與實(shí)施例4相同的方法，收集每個(gè)組織，萃取總RNA，然后通過RNA印跡法分析基因表達(dá)。
表5、實(shí)驗(yàn)食品的組分組成

每種飼料添加有0.25g/kg膳食的α-生育酚。
表6顯示了攝取實(shí)驗(yàn)食品2周后對組織重量和血清油脂濃度的影響。在10％PPP食品組中，血清甘油三酯濃度顯著高，而在10％PPA和10％PAP食品組中，與低-脂食品組相比差異不顯著。盡管將相同的10％脂/油添加到低-脂食品(2.4％玉米油)中，血清甘油三酯顯著降低顯示當(dāng)與甘油三酯相連的一種脂肪酸用花生四烯酸代替時(shí)與低-脂食品組類似的值。至于血清總膽固醇濃度，注意與10％PPP食品組相比，在10％PPA和10％PAP食品組中的值較低。
表6、攝取實(shí)驗(yàn)食品對大鼠的體重增加、相對組織重量和血清油脂濃度的影響

a、b在不同字母之間觀察的顯著差異(p＜0.05)顯示了結(jié)構(gòu)化油脂對空腸中PPAR靶基因的表達(dá)的影響(圖4)。從PPA，通過對1，3-位特異性的胰脂肪酶的作用，棕櫚酸和花生四烯酸每一分子被解離和吸收，并且具有特別強(qiáng)烈的PPAR配體活性的花生四烯酸在小腸中起PPARα配體的作用，并且因此與為對照組的PPP食品組相比，在10％PPA食品組中PPAR的靶基因的表達(dá)量增加。另一方面，當(dāng)考慮到已解離的兩個(gè)棕櫚酸分子和一個(gè)2-花生四烯酰基單甘酯(2-AG)分子產(chǎn)生于PAP并且加入到小腸的表皮細(xì)胞時(shí)，假定由于棕櫚酸作為PPAR配體作用很小，那么與為對照組的PPP食品組相比，在10％PAP食品組中對PPAR的靶基因的表達(dá)幾乎沒有影響。然而，結(jié)果完全相反，與10％PPA食品組相似或者甚至大于它。
在PAP食品組中，肝的PPARαmRNA的表達(dá)量顯著增加(圖5)。在空腸中，發(fā)現(xiàn)通過對1，3-位特異性的脂肪酶的作用連接花生四烯酸的單甘油酯(2-AG)的顯著作用，并證實(shí)在肝中也獲得同樣的效果。2個(gè)棕櫚酸分子和1個(gè)2-AG分子加入到小腸的表皮細(xì)胞，重構(gòu)成甘油三酯(在這種情況下，盡管有存在于小腸表皮細(xì)胞的其它內(nèi)部脂肪酸連接在1，3-位的可能性，但是保留連接在2-位的花生四烯酸)，加入到乳糜微滴中，與淋巴腺分泌和血流一起轉(zhuǎn)移到周圍組織，并最終加入到肝中。
PAP顯著增加肝中PPARα的表達(dá)量的結(jié)果顯示花生四烯酸連接在2-位的甘油三酯結(jié)構(gòu)保留在肝部并獲得該功能，并證實(shí)花生四烯酸，即多不飽和脂肪酸連接在2-位的重要性。與脂/油載荷為2.4％的低-脂食品相比，PPP、PPA和PAP食品中結(jié)構(gòu)化油脂載荷為10％(總脂/油載荷為12.4％)不是過度脂肪載荷，因此盡管血清甘油三酯濃度和血清總膽固醇濃度在PPA和PAP之間沒有差異，但是在基因表達(dá)水平存在清楚差異，由此顯然，在過量油脂載荷中，PAP(多不飽和脂肪酸連接在2-位的甘油三酯)顯著降低血清油脂濃度。
實(shí)施例6、通過含有花生四烯酸的結(jié)構(gòu)化油脂來降低血清油脂的作用在高-脂食品中研究實(shí)施例2化學(xué)合成的花生四烯酸對構(gòu)成脂肪酸的血清油脂降低作用的影響。使用PPP、PPA和PAP與實(shí)施例5中相同的結(jié)構(gòu)化油脂以及辛酸(8)連接在甘油三酯的1，3-位且棕櫚酸連接到甘油三酯2位的8P8、辛酸連接在甘油三酯的1，2-位并且花生四烯酸連接在甘油三酯的3-位的88A與辛酸連接在甘油三酯的2，3-位并且花生四烯酸連接在甘油三酯的1-位的A88的相同量的混合物(同樣量的88A與A88的混合物是通過化學(xué)合成制備的；為了方便起見這種相同量的混合物在后面稱之為88A)和辛酸連接在甘油三酯的1，3-位并且花生四烯酸連接在甘油三酯的2-位的8A8比較這些效果。
將5周齡的SD品種的雄性大鼠分成8組，每組5只大鼠，用標(biāo)準(zhǔn)固體飼料使大鼠適應(yīng)水土1周，再攝取表7和表8所示的實(shí)驗(yàn)食品(普通、高-TG，7.5％PPP、7.5％PAP、7.5％PPA、7.5％8P8、7.5％8A8和7.5％88A)2周。順便提一下，高-脂食品的條件是使飼料中脂油的比例為20％，使用富含飽和脂肪酸的牛脂作為基礎(chǔ)并混合2％玉米油以免必須脂肪酸的缺乏。在對照組中，使用與18％8P8(20％，由于添加2％玉米油)混合的實(shí)驗(yàn)食品(高-TG食品，20％脂/油食品)。
攝取試驗(yàn)食品兩周后，將大鼠斷頭宰殺，并使用測定試劑盒來定量血清部分的甘油三酯濃度和總膽固醇濃度(分別使用甘油三酯E-Test Wako和總膽固醇E-Test Wako)。
表7.實(shí)驗(yàn)食品的組分組成

表8.實(shí)驗(yàn)食品的組分組成

攝取實(shí)驗(yàn)食品2周后對組織重量和血清油脂濃度的影響如表9所示。血清甘油三酯濃度在高-甘油三酯食品組中表現(xiàn)出明顯高的值。盡管為對照組的7.5％PPP食品組根本未顯示變化，但是7.5％PPA食品組和7.5％PAP食品組明顯降低了血清甘油三酯。至于PAP和PPA的效果，7.5％PAP食品組顯示出明顯低的值。在辛酸是構(gòu)成脂肪酸的結(jié)構(gòu)化油脂組(7.5％8P8、7.5％8A8和7.5％88A)中也顯示了類似的結(jié)果。已證實(shí)，當(dāng)使用中鏈脂肪酸作為構(gòu)成脂肪酸時(shí)，可以顯著提高降低血清甘油三酯的效果。在血清總膽固醇濃度方面也發(fā)現(xiàn)類似的結(jié)果。
已知不僅花生四烯酸而且多不飽和脂肪酸都會通過PPAR調(diào)節(jié)血清甘油三酯濃度和血清膽固醇濃度，并且顯然，像在花生四烯酸連接在2-位的情況下，在多不飽和脂肪酸連接在2-位的結(jié)構(gòu)化油脂中獲得類似的結(jié)果。
表9.實(shí)驗(yàn)食品的攝取對血清油脂濃度的影響

a、b在不同字母之間觀察的顯著差異(p＜0.05)實(shí)施例7、與脂/油(花生四烯酸連接在甘油三酯的2-位的甘油三酯)混合的膠囊的制備的實(shí)施例將明膠(100重量份)和35重量份甘油三酯，作為食品添加劑，溶解在50-60℃的水中，制備粘度為2000厘泊的明膠薄膜。然后把實(shí)施例1制備的花生四烯酸連接在甘油三酯的2-位的脂/油(甘油三酯)與0.05％重量的維生素E油混合，制備內(nèi)容物1。維生素E油(0.05％重量)與實(shí)施例3制備的包含32mol％的8A8脂肪(甘油三酯)混合，制備內(nèi)容物2。使用內(nèi)容物1和2，通過常規(guī)方法進(jìn)行膠囊成型和干燥，制備每個(gè)含200mg內(nèi)容物的軟膠囊。
實(shí)施例8.攝取花生四烯酸連接在甘油三酯的2-位的脂肪(甘油三酯)后的人血清油脂改良作用本發(fā)明是在仔細(xì)考慮到Helsinki宣言精神后，才對人體進(jìn)行的測試。首先，進(jìn)行同意參加測試的解釋，并對同意的八個(gè)人在1個(gè)月內(nèi)服用6種實(shí)施例7制備的花生四烯酸連接在甘油三酯的2-位的脂/油膠囊(80mg/膠囊，以花生四烯酸計(jì))。在膠囊攝取前后，收集血液并分析血液生化標(biāo)記。
測試結(jié)果如表10所示。通過攝取膠囊，血清甘油三酯濃度明顯降低。盡管血清膽固醇濃度明顯升高，那也不是由于為壞膽固醇的LDL-膽固醇濃度增加，而是由于為好膽固醇的HDL-膽固醇濃度明顯升高。從以上證實(shí)花生四烯酸連接在甘油三酯的2-位的脂/油改善了血清油脂。
表10.攝取花生四烯酸連接在甘油三酯的2-位的脂/油的膠囊之前和之后的生理測試結(jié)果

a、b在不同字母之間觀察的顯著差異(p＜0.05)實(shí)施例9、攝取含8A8的可食性脂/油膠囊后人血清甘油三酯的降低作用與實(shí)施例8相同地進(jìn)行同意參加測試的解釋，并對同意的八個(gè)人在1個(gè)月內(nèi)服用3種實(shí)方施例7制備的含有8A8的可食性脂/油膠囊(72mg/膠囊，以花生四烯酸計(jì))。在膠囊攝取前后，分析血清甘油三酯濃度，由此顯示從162±29.3顯著降低至83.3±14.9。
實(shí)施例10.脂肪輸液制劑的用途將實(shí)施例3制備的含96％8A8的脂/油(甘油三酯)(400g)、48g純蛋黃卵磷脂、20g油酸、100g甘油酯和40ml 0.1N氫氧化鈉混合，均質(zhì)，然后向其中加入注射用蒸餾水，制備4升。使用高壓噴霧乳化機(jī)進(jìn)行乳化，制備油脂乳劑。將每200ml油脂乳劑裝入塑料袋中，用121℃高壓蒸汽殺菌20分鐘，制得脂肪輸液制劑。
實(shí)施例11.果汁的用途將β-環(huán)糊精(2g)加到20ml 20％乙醇水溶液中，向其中加入100mg實(shí)施例1制備的花生四烯酸連接在甘油三酯2-位的脂/油(與0.05％維生素E混合)，并將該混合物在50℃下孵化2小時(shí)。冷卻到室溫后(約1小時(shí))，再在攪拌下于4℃下孵化10小時(shí)。所得沉淀物通過離心分離回收，用正己烷洗滌并冷凍干燥，得到1.8g含有花生四烯酸連接在甘油三酯的2-位的脂/油的環(huán)糊精內(nèi)容復(fù)合物。用10升果汁與1g該粉均勻混合，制備包含花生四烯酸連接在甘油三酯的2-位的脂/油的果汁。
權(quán)利要求
1.一種油脂改良劑，含有多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位的甘油三酯。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油脂改良劑，其中該改良劑含有多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位的甘油三酯。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的油脂改良劑，其中多不飽和脂肪酸是ω-6型不飽和脂肪酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意項(xiàng)所述的油脂改良劑，其中ω-6型不飽和脂肪酸是花生四烯酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意項(xiàng)所述的油脂改良劑，其中改良劑含有一種通過微生物培養(yǎng)制備的脂/油，所述微生物能夠產(chǎn)生花生四烯酸連接在甘油三酯的2-位上的甘油三酯。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任意項(xiàng)所述的油脂改良劑，其中權(quán)利要求5所述的微生物屬于被孢霉屬的微生物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的油脂改良劑，其中多不飽和脂肪酸是ω-3型不飽和脂肪酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的油脂改良劑，其中多不飽和脂肪酸是ω-9型不飽和脂肪酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意項(xiàng)所述的油脂改良劑，其中ω-6型多不飽和脂肪酸是9，12-十八碳二烯酸(亞油酸)18:2ω6、6，9，12-十八碳三烯酸(γ-亞麻酸)18:3ω6、8，11，14-二十碳三烯酸(雙高-γ-亞麻酸)20:3ω6、5，8，11，14-二十碳四烯酸(花生四烯酸)20:4ω6、7，10，13，16-二十二碳四烯酸22:4ω6或4，7，10，13，16-二十二碳五烯酸22:5ω6。
10.根據(jù)權(quán)利要求1、2或7所述的油脂改良劑，其中ω-3型不飽和脂肪酸是9，12，15-十八碳三烯酸(α-亞麻酸)18:3ω3、6，9，12，15-十八碳四烯酸(硬脂四烯酸)18:4ω3、11，14，17-二十碳三烯酸(雙高-α-亞油酸)20:3ω3、8，11，14，17-二十碳四烯酸20:4ω3、5，8，11，14，17-二十碳五烯酸20:5ω3、7，10，13，16，19-二十二碳五烯酸22:5ω3或4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸22:6ω3。
11.根據(jù)權(quán)利要求1、2或8所述的油脂改良劑，其中ω-9型不飽和脂肪酸是6，9-十八碳二烯酸18:2ω9、8，11-二十碳二烯酸20:2ω9或5，8，11二十碳三烯酸(蜜糖酸)20:3ω9。
12.根據(jù)權(quán)利要求2所述的油脂改良劑，其中飽和脂肪酸或單不飽和脂肪酸選自辛酸(羊脂酸)8:0、癸酸(山羊酸)10:0、十二烷酸(月桂酸)12:0、十四烷酸(豆蔻酸)14:0、十六烷酸(棕櫚酸)16:0、十八烷酸(硬脂酸)18:0、9-十八烷酸(油酸)18:1ω9、二十烷酸20:0和二十二烷酸22:0，并且連接在1-和3-位上的脂肪酸相同或不同。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-12任意項(xiàng)所述的油脂改良劑，其中甘油三酯選自1，3-二棕櫚?；?2-花生四烯?；视王?16:0-20:4ω6-16:0)、1，3-二棕櫚酰基-2-5，8，11，14，17-二十碳五烯酰基甘油酯(16:0-20:5ω3-16:0)、1，3-二棕櫚?；?2-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯?；视王?16:0-22:6ω3-16:0)、1，3-二棕櫚?；?2-雙高-γ-亞麻?；视王?160-20:3ω6-16:0)、1，3-二棕櫚?；?2-蜜糖?；视王?16:0-20:3ω9-16:0)、1，3-二羊脂?；?2-花生四烯?；视王?8:0-20:4ω6-8:0)、1，3-二羊脂酰基-2-5，8，11，14，17-二十碳五烯?；视王?8:0-20:5ω3-8:0)、1，3-二羊脂酰基-2-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酰基甘油酯(8:0-22:6ω3-8:0)、1，3-二羊脂?；?2-雙高-γ-亞麻酰基甘油酯(8:0-20:3ω6-8:0)、1，3-二羊脂酰基-2-蜜糖?；视王?8:0-20:3ω9-8:0)、1，3-二油?；?2-花生四烯?；视王?18:1ω9-20:4ω6-18:1ω9)、1，3-二油酰基-2-5，8，11，14，17-二十碳五烯?；视王?18:1ω9-20:5ω3-18:1ω9)、1，3-二油?；?2-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酰基甘油酯(18:1ω9-22:6ω3-18:1ω9)、1，3-二油酰基-2-雙高-γ-亞麻?；视王?18:1ω9-20:3ω9-18:1ω9)和/或1，3-二油?；?2-蜜糖酰基甘油酯(18:1ω9-20:3ω9-18:1ω9)。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油脂改良劑，其中它降低血液中的中性脂肪(甘油三酯)和/或膽固醇。
15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油脂改良劑，其中它提高血液中的HDL-膽固醇。
16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油脂改良劑，其中它燃燒所貯存的脂肪。
17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油脂改良劑，其中它燃燒可食性脂肪。
18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油脂改良劑，其中它通過細(xì)胞核內(nèi)受體型轉(zhuǎn)錄因子(PPAR)介導(dǎo)。
19.根據(jù)權(quán)利要求1或14所述的油脂改良劑，其中PPAR是肝臟的PPARα，并且提高PPARα和/或相關(guān)基因表達(dá)。
20.根據(jù)利要求1、18或19所述的油脂改良劑，其中相關(guān)基因是肝的β-氧化基因。
21.根據(jù)權(quán)利要求1、18或19所述的油脂改良劑，其中PPAR是脂肪組織的PPARγ并抑制PPARγ和/或相關(guān)基因表達(dá)。
22.一種具有油脂改良作用的組合物，它含有多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位的甘油三酯。
23.一種如權(quán)利要求22所述的具有油脂改良作用的組合物，其中該組合物含有多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在該甘油三酯的1，3-位的甘油三酯。
24.根據(jù)權(quán)利要求22或23所述的組合物，其中多不飽和脂肪酸ω-6型不飽和脂肪酸。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的組合物，其中ω-6不飽和脂肪酸是花生四烯酸。
26.根據(jù)權(quán)利要求22-25任意項(xiàng)所述的組合物，其中組合物含有一種通過微生物培養(yǎng)制備的脂/油，所述微生物能夠產(chǎn)生花生四烯酸連接在甘油三酯的2-位上的甘油三酯。
27.根據(jù)權(quán)利要求22-26任意項(xiàng)所述的組合物，其中權(quán)利要求26所述的微生物屬于被孢霉屬的微生物。
28.根據(jù)權(quán)利要求22或23所述的組合物，其中多不飽和脂肪酸是ω-3型不飽和脂肪酸。
29.根據(jù)權(quán)利要求22或23所述的組合物，其中多不飽和脂肪酸是ω-9型不飽和脂肪酸。
30.根據(jù)權(quán)利要求22-24任意項(xiàng)所述的組合物，其中ω-6型不飽和脂肪酸是9，12-十八碳二烯酸(亞油酸)18:2ω6、6，9，12-十八碳三烯酸(γ-亞麻酸)18:3ω6、8，11，14-二十碳三烯酸(雙高-γ-亞麻酸)20:3ω6、5，8，11，14-二十碳四烯酸(花生四烯酸)20:4ω6、7，10，13，16-二十二碳四烯酸22:4ω6或4，7，10，13，16-二十二碳五烯酸22:5ω6。
31.根據(jù)權(quán)利要求23所述的組合物，其中ω-3型不飽和脂肪酸是9，12，15-十八碳二烯酸(α-亞油酸)18:3ω3、6，9，12，15-十八碳四烯酸(硬脂四烯酸)18:4ω3、11，14，17-二十碳三烯酸(雙高-α-亞油酸)20:3ω3、8，11，14，17-二十碳四烯酸20:4ω3、5，8，11，14，17-二十碳五烯酸20:5ω3、7，10，13，16，19-二十二碳五烯酸22:5ω3或4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸22:6ω3。
32.根據(jù)權(quán)利要求29所述的組合物，其中ω-9型不飽和脂肪酸是6，9-十八碳二烯酸18:2ω9、8，11-二十碳二烯酸20:2ω9或5，8，11-二十碳三烯酸(蜜糖酸)20:3ω9。
33.根據(jù)權(quán)利要求23所述的組合物，其中飽和脂肪酸或單不飽和脂肪酸選自辛酸(羊脂酸)8:0、癸酸(山羊酸)10:0、十二烷酸(月桂酸)12:0、十四烷酸(豆蔻酸)14:0、十六烷酸(棕櫚酸)16:0、十八烷酸(硬脂酸)18:0、9-十八烷酸(油酸)18:1ω9、二十烷酸20:0和二十二烷酸22:0，并且連接在1-和3-位上的脂肪酸相同或不同。
34.根據(jù)權(quán)利要求22-33任意項(xiàng)所述的組合物，其中甘油三酯選自1，3-二棕櫚?；?2-花生四烯?；视王?16:0-20:4ω6-16:0)、1，3-二棕櫚?；?2-5，8，11，14，17-二十碳五烯?；视王?16:0-20:5ω3-16:0)、1，3-二棕櫚酰基-2-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酰基甘油酯(16:0-22:6ω3-16:0)、1，3-二棕櫚?；?2-雙高-γ-亞麻?；视王?16:0-20:3ω6-16:0)、1，3-二棕櫚?；?2-蜜糖?；视王?16:0-20:3ω9-16:0)、1，3-二羊脂?；?2-花生四烯?；视王?8:0-20:4ω6-8:0)、1，3-二羊脂酰基-2-5，8，11，14，17-二十碳五烯酰基甘油酯(8:0-20:5ω3-8:0)、1，3-二羊脂?；?2-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯?；视王?8:0-22:6ω3-8:0)、1，3-二羊脂酰基-2-雙高-γ-亞麻?；视王?8:0-20:3ω6-8:0)、1，3-二羊脂酰基-2-蜜糖?；视王?8:0-20:3ω9-8:0)、1，3-二油?；?2-花生四烯?；视王?18:1ω9-20:4ω6-18:1ω9)、1，3-二油?；?2-5，8，11，14，17-二十碳五烯?；视王?18:1ω9-20:5ω3-18:1ω9)、1，3-二油?；?2-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯?；视王?18:1ω9-22:6ω3-18:1ω9)、1，3-二油酰基-2-雙高-γ-亞麻?；视王?18:1ω9-20:3ω6-18:1ω9)和/或1，3-二油?；?2-糖蜜酰基甘油酯(18:1ω9-20:3ω9-18:1ω9)、和/或1，3-二油?；?2-蜜糖酰基甘油酯(18:1ω9-20:3ω9-18:1ω9)。
35.根據(jù)權(quán)利要求22所述的組合物，其中它降低血液中的中性脂肪(甘由三酯)和/或膽固醇。
36.根據(jù)權(quán)利要求22所述的組合物，其中它提高血液中的HDL-膽固醇。
37.根據(jù)權(quán)利要求22所述的組合物，其中它燃燒所貯存的脂肪。
38.根據(jù)權(quán)利要求22所述的細(xì)合物，其中它燃燒可食性脂肪。
39.根據(jù)權(quán)利要求22所述的組合物，其中它通過細(xì)胞核內(nèi)受體型轉(zhuǎn)錄因子(PPAR)介導(dǎo)。
40.根據(jù)權(quán)利要求22或38所述的組合物，其中PPAR是肝臟的PPARα，并且提高PPARα和/或相關(guān)基因表達(dá)。
41.根據(jù)權(quán)利要求22、23或39所述的組合物，其中相關(guān)基因是肝的β-氧化基因。
42.根據(jù)權(quán)利要求22或38所述的組合物，其中PPAR是脂肪組織的PPARγ和抑制劑PPARγ和/或相關(guān)基因表達(dá)。
43.根據(jù)權(quán)利要求1-41任意項(xiàng)所述的組合物，其中它是一種食品細(xì)合物或藥物組合物。
44.一種食品組合物，含有多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位的甘油三酯，其方式使得該多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯2-位上的甘油三酯對于成年人來說以多不飽和脂肪酸的量計(jì)每日攝取量是0.001-20克。
45.根據(jù)權(quán)利要求43所述的食品組合物，其中該組合物含有多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位的甘油三酯，其方式使得該多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位的甘油三酯對于成年人來說以多不飽和脂肪酸的量計(jì)每日攝取量是0.001-20克。
46.根據(jù)權(quán)利要求43或44所述的組合物，其含有甘油三酯，其中花生四烯酸連接在該甘油三酯的2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位，所述花生四烯酸連接在甘油三酯2-位和飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位的甘油三酯，對于成年人來說，每日攝取量以花生四烯酸量計(jì)為0.001-20克。
47.根據(jù)權(quán)利要求43或45所述的食品組合物，其中組合物含有基于其重量不小于0.001％的甘油三酯，其中甘油三酯選自1，3-二棕櫚?；?2-花生四烯酰基甘油酯(16:0-20:4ω6-16:0)、1，3-二棕櫚?；?2-5，8，11，14，17-二十碳五烯?；视王?16:0-20:5ω3-16:0)、1，3-二棕櫚?；?2-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酰基甘油酯(16:0-22:6ω3-16:0)、1，3-二棕櫚?；?2-雙高-γ-亞麻?；视王?16:0-20:3ω6-16:0)、1，3-二棕櫚酰基-2-蜜糖?；视王?16:0-20:3ω9-16:0)、1，3-二羊脂酰基-2-花生四烯?；视王?8:0-20:4ω6-8:0)、1，3-二羊脂酰基-2-5，8，11，14，17-二十碳五烯?；视王?8:0-20:5ω3-8:0)、1，3-二羊脂?；?2-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯?；视王?8:0-22:6ω3-8:0)、1，3-二羊脂?；?2-雙高-γ-亞麻酰基甘油酯(8:0-20:3ω6-8:0)、1，3-二羊脂酰基-2-蜜糖?；视王?8:0-20:3ω9-8:0)、1，3-二油?；?2-花生四烯酰基甘油酯(18:1ω9-20:4ω6-18:1ω9)、1，3-二油?；?2-5，8，11，14，17-二十碳五烯?；视王?18:1ω9-20:5ω3-18:1ω9)、1，3-二油酰基-2-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯?；视王?18:1ω9-22:6ω3-18:1ω9)、1，3-二油?；?2-雙高-γ-亞麻?；视王?18:1ω9-20:3ω6-18:1ω9)和/或1，3-二油?；?2-糖蜜?；视王?18:1ω9-20:3ω9-18:1ω9)、和/或1，3-二油酰基-2-蜜糖酰基甘油酯(18:1ω9-20:3ω9-18:1ω9)。
48.根據(jù)權(quán)利要求43-46任意項(xiàng)所述的組合物，其中食品組合物是功能性食品，營養(yǎng)補(bǔ)給劑，指定健康食品或老年人食品。
49.一種具有油脂改良功能的組合物的制備方法，它是一種食品組合物的制備方法，特征在于，將多不飽和脂肪酸連接在該甘油三酯的2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位上的甘油三酯，單獨(dú)或結(jié)合地，與食品原料混合，其中所述食品原料中基本上不含，或者如果含有的話其量也很少，多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2-位并且飽和脂肪酸和/或單不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的1，3-位的甘油三酯。
全文摘要
一種油脂改良劑，含有多不飽和脂肪酸連接在甘油三酯的2－位的甘油三酯。
文檔編號A23L1/30GK1767769SQ20048000846
公開日2006年5月3日 申請日期2004年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月27日
發(fā)明者秋元健吾, 深見治一, 合田敏尚 申請人:三得利株式會社