專利名稱：5ˊ－核苷酸酶活性測定方法及5ˊ－核苷酸酶診斷試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種測定5′-核苷酸酶活性的方法，同時本發(fā)明還涉及用于實現(xiàn)該方法的5′-核苷酸酶診斷試劑盒，屬于醫(yī)學檢驗測定技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
醫(yī)學研究表明，5′-核苷酸酶(5NT)增高主要見于阻塞性黃膽，也可見于肝癌和肝炎。在膽汁淤積并發(fā)膽管炎、原發(fā)性和繼發(fā)性膽汁性肝硬化和慢性肝炎時，5NT升高率高于堿性磷酸酶；肝腫瘤和肝肉芽腫時5NT升高的敏感性高于堿性磷酸酶。因為5′-核苷酸酶活性無生理性升高，對于診斷嬰幼兒肝病和妊娠性肝功膽汁淤積較堿性磷酸酶不但敏感，而且有特異性。因此測定5′-核苷酸酶的活性對于疾病的診斷具有重要意義。
5′-核苷酸酶的活性測定方法很多，主要有同位素底物法、化學強酸測磷法(1925年)。據(jù)申請人了解，目前國際上普遍采用同位素底物測試法，方法為5′-核苷酸酶作用于H3-dUMP，終止反應(yīng)后，通過離子交換層析柱分析結(jié)果，求得5′-核苷酸酶活性?；蛘呃?′-核苷酸酶作用于單磷酸腺苷后產(chǎn)生無機磷，再用化學強酸法分析無機磷含量得以計算出5′-核苷酸酶的活性。
同位素底物法方法復(fù)雜還有同位素污染，而且需要同位素測定儀，因此難以切實推廣應(yīng)用。無機磷測定法是1925年發(fā)明的方法，準確度不好，強酸污染環(huán)境等等，也不適合推廣應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提出-種可以克服以上現(xiàn)有技術(shù)缺點的5′-核苷酸酶活性的測定方法，同時給出用以實現(xiàn)該方法的5′-核苷酸酶診斷試劑盒。采用該試劑盒中的試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或者半、全自動生化分析儀上進行5′-核苷酸酶活性測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應(yīng)用。
本發(fā)明測定5′-核苷酸酶活性的步驟如下1)、將樣品與主要由腺苷單磷酸、單價磷酸鹽、腺苷脫氨酶、核苷磷酸酶、黃嘌呤氧化酶、過氧化物酶、脲酶、還原型色原體組合組成的試劑混合，使之發(fā)生如下原理的反應(yīng)腺苷單磷酸+水5核苷酸酶腺苷+磷酸根腺苷+水腺苷脫氨酶肌苷+氨離子肌苷+磷酸鹽核苷磷酸酶次黃嘌呤+1-磷酸核糖次黃嘌呤+水+氧黃嘌呤氧化酶尿酸+過氧化氫尿酸+水+氧脲酶尿囊素+過氧化氫2過氧化氫+2還原型色原組合過氧化物酶2吲嗒胺色原或醌亞胺色原+水2)、檢測最終反應(yīng)物在主波長400--600nm吸光度上升的速度，測算出5′-核苷酸酶的活性大小。
通常步驟2)將最終反應(yīng)物置于紫外/可見光分析儀或者半、全自動生化分析儀器下，檢測主波長400--600nm吸光度上升的速度，測算出5′-核苷酸酶的活性大小。
以上樣品與試劑的混合比例按體積為1/10到1/250，以上過程的測定溫度控制在常規(guī)的20℃到50℃范圍，反應(yīng)時間控制在常規(guī)的2-30分鐘。
本發(fā)明應(yīng)用5′-核苷酸酶偶聯(lián)腺苷脫氨酶、核苷磷酸酶、黃嘌呤氧化酶、脲酶、過氧化物酶等酶偶聯(lián)反應(yīng)以及還原型色原體(Chromogen)組合系統(tǒng)，將無色的還原型色原體組合氧化成有顏色的醌亞胺色原(Quioneimine)或者吲嗒胺色原(Indamine)染料，因此測量染料含量的高低(不同染料吸收波長不同，介于400--600nm之間)可以直接反映5′-核苷酸酶活性的大小。這個酶偶聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)的優(yōu)點有(1)它利用將無色的還原型色原體組合氧化成有顏色的醌亞胺色原或者吲嗒胺色原染料來反映5′-核苷酸酶活性，有精確度好的優(yōu)點。(2)這個酶偶聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)組成的反應(yīng)成分都是外加的，不受內(nèi)、外源物質(zhì)的污染，測試結(jié)果精確。
本發(fā)明的5′-核苷酸酶診斷試劑盒可以是單劑，包括緩沖液 40--200mmol/l腺苷單磷酸 1--50mmol/l單價磷酸鹽 0.2--10mmol/l腺苷脫氨酶 500--50000U/l核苷磷酸酶 500--50000U/l黃嘌呤氧化酶500--50000U/l過氧化物酶 500--50000U/l脲酶500--50000U/l穩(wěn)定劑 10--80％(總體積)還原型色原體組合0.1--20mmol/l以上還原型色原體組合可以是0.1-20mmol/l的3-甲基-2-苯噻唑酮腙(3-methyl-2-benzothiazolinone-hydrszone簡稱MBTH)或0.1-20mmol/l的4-氨基抗砒(4-aminoantipyrine)與0.1--20mmol/l以下十四種成分之一組合而成石碳酸(phenol)
N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺(N-ethyl-N-(3-sulfopropyl)-m-anisidine簡稱ESPAS)N，N-雙乙基-m-甲苯胺(N，N-Diethyl-m-toluidine)2，4-雙氯石碳酸(2，4-Dichloriphenol)2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸(2，4，6-Tribromo-3-hydroxy-benzenesulfonic acid簡稱TBHB)3，5-雙氯石碳酸磺酸(3，5-Dichlorophenolsulfonic acid)3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸(3，5-Dichloro-2-hydroxy-benzenesulfonicacid簡稱DHBS)N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽(N-ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-m-toluidine sodium簡稱TOOS)仨溴羥基苯甲酸(Tribromohydroxybenzoic acid)雙甲基苯胺(Dimethylaniline簡稱DMA)N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺(N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-m-toluidine簡稱EHSPT)2，2′-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)(2，2′-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)簡稱ABTS4-羥基-3-甲氫基苯甲酸(Vanilic acid(4-hydroxy-3-methoxybenzoic acid)簡稱HMB)3-甲基-乙基-羥基苯胺(3-methyl-ethyl-hydroxyaniline簡稱MEHA)也可以將以上單劑配成如下雙劑，更有利于消除內(nèi)、外源腺苷、肌苷、次黃嘌呤、尿酸的污染試劑I緩沖液 40--200mmol/l
單價磷酸鹽 0.2--10mmol/l腺苷脫氨酶 500--50000U/l核苷磷酸酶 500--50000U/1黃嘌呤氧化酶500--50000U/l過氧化物酶 500--50000U/l脲酶500--50000U/l穩(wěn)定劑 10--80％(總體積)還原型色原體組合(一)0.1--20mmol/l還原型色原體組合(一)可以是0.1-20mmol/l的3-甲基-2-苯噻唑酮腙或0.1-20mmol/l的4-氨基抗砒二者中之一。
試劑II緩沖液 40--200mmol/l腺苷單磷酸 1--50mmol/l穩(wěn)定劑 10--50mmol/l還原型色原體組合(二)0.1--20mmo l/l還原型色原體組合(二)可以是0.1--20mmol/l以下十四種成分之一石碳酸、N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺、N，N-雙乙基-m-甲苯胺、2，4-雙氯石碳酸、2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸、3，5-雙氯石碳酸磺酸、3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸、N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽、仨溴羥基苯甲酸、雙甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺、2，2′-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)、4-羥基-3-甲氧基苯甲酸、3-甲基-乙基-羥基苯胺。
雙劑的配方不僅限于上述配方，還原型色原體組合(一)及(二)可以互換位置。如此可以形成多種配方，不一一詳述。
還可以將試劑配成如下三試劑，不但更有利于消除內(nèi)、外源腺苷、肌苷、次黃嘌呤、尿酸的污染，還更有利于試劑的穩(wěn)定試劑I緩沖液 40--200mmol/l單價磷酸鹽 0.2--10mmol/l穩(wěn)定劑 10--80％(總體積)還原型色原體組合(一)0.1--20mmol/l還原型色原體組合(一)可以是0.1-20mmol/l的3-甲基-2-苯噻唑酮腙或0.1-20mmol/l的4-氨基抗砒二者中之一。
穩(wěn)定劑 10--50mmol/l試劑II緩沖液 40--200mmol/l腺苷脫氨酶 500--50000U/l核苷磷酸酶 500--50000U/l黃嘌呤氧化酶500--50000U/l過氧化物酶 500--50000U/l脲酶500--50000U/l穩(wěn)定劑 10--80％(總體積)試劑III緩沖液 40--200mmol/l腺苷單磷酸 1--50mmol/l穩(wěn)定劑 10--50mmol/l還原型色原體組合(二)0.1--20mmol/l還原型色原體組合(二)可以是0.1--20mmol/l以下十四種成分之一石碳酸、N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺、N，N-雙乙基-m-甲苯胺、2，4-雙氯石碳酸、2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸、3，5-雙氯石碳酸磺酸、3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸、N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽、仨溴羥基苯甲酸、雙甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺、2，2′-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)、4-羥基-3-甲氧基苯甲酸、3-甲基-乙基-羥基苯胺。
三劑的配方不僅限于上述配方，還原型色原體組合(一)及(二)可以分開放在試劑I或III的任何位置。其中的試劑I的成分，單價磷酸鹽可以放在試劑II中，試劑II的成分，核苷磷酸酶、黃嘌呤氧化酶、過氧化物酶、脲酶、等也可以放在試劑I中，如此可以形成多種配方，不一一詳述。
緩沖劑可以是三(羧甲基)氨基甲烷一鹽酸(Tris-HCl)緩沖液、磷酸鹽(Phosphate)緩沖液、三乙醇胺(Triethanolamine)緩沖液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇(2-Amino-2-methyl-1-propanol)緩沖液或雙甘氨肽(Glycylglycine)緩沖液等。
此外，為了減少各試劑成分之間的交叉影響、保持試劑的穩(wěn)定性，以便長期儲存，以上單劑、雙劑的試劑I、試劑II或三劑的試劑I、試劑II、試劑III中通常加入穩(wěn)定劑10-80％或者10-50mmol/l，穩(wěn)定劑可以是乙二醇、丙二醇、甘油、聚糖、聚醇、硫酸胺、鹽或腺苷二磷酸等中的一種或一種以上。
實驗表明，從測定結(jié)果的準確性和配制成本的經(jīng)濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下配方成分關(guān)系的本發(fā)明5′-核苷酸酶診斷試劑盒較為理想緩沖液 80--120mmol/l腺苷單磷酸 1--5mmol/l單價磷酸鹽 2--8mmol/l腺苷脫氨酶 5000--12000U/l
核苷磷酸酶 5000--12000U/l黃嘌呤氧化酶5000--12000U/l過氧化物酶 5000--12000U/l脲酶5000--12000U/l穩(wěn)定劑 10--50％(總體積)或10--50mmol/l還原型色原體組合0.1--10mmol/l由于本發(fā)明是完全利用酶學方法，酶解反應(yīng)具有特異性高的特點，不易受到內(nèi)、外源其他物質(zhì)的干擾。酶法方法簡便、易于操作。酶解反應(yīng)的特異性促使測試結(jié)果精確。酶解反應(yīng)都是在緩沖液條件下進行，沒有污染環(huán)境問題。酶法方法不需要特殊、額外的儀器，測試成本低廉。因此可以保證具有較高的測試準確性，更便于推廣應(yīng)用。
此外，本發(fā)明的顯著特色之一是可以消除內(nèi)、外源腺苷、肌苷、次黃嘌呤、尿酸的污染，消除內(nèi)、外源腺苷、肌苷、次黃嘌呤、尿酸的作用發(fā)生在整個反應(yīng)時間段的前半部分，在后半段時間受污染的內(nèi)、外源腺苷、肌苷、次黃嘌呤、尿酸已經(jīng)被消耗殆盡，而在后半段時間測試5′-核苷酸酶活性所需要的腺苷都是產(chǎn)生于5′-核苷酸酶的活性。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例子對本發(fā)明作進一步的說明。
實施例一(單劑)本實施例的5′-核苷酸酶診斷試劑盒包括緩沖液 80mmol/l腺苷單磷酸 1mmol/l單價磷酸鹽 2mmol/l
腺苷脫氨酶 5000U/l核苷磷酸酶 5000U/l黃嘌呤氧化酶5000U/l過氧化物酶 5000U/l脲酶5000U/l穩(wěn)定劑 50％(總體積)4-氨基抗砒 2mmol/l石碳酸 10mmol/l在全自動生化分析儀上設(shè)定溫度37℃，反應(yīng)時間10分鐘，測試主波長495-505nm，測試副波長600nm以上，被測5′-核苷酸酶樣品與試劑的體積比例為1/25，反應(yīng)方向為正反應(yīng)，延遲時間1分鐘，檢測時間2分鐘。
加入樣品和試劑后，使之混合，發(fā)生以下反應(yīng)腺苷單磷酸+水5核苷酸酶腺苷+磷酸根腺苷+水腺苷脫氨酶肌苷+氨離子肌苷+磷酸鹽核苷磷酸酶次黃嘌呤+1-磷酸核糖次黃嘌呤+水+氧黃嘌呤氧化酶尿酸+過氧化氫尿酸+水+氧脲酶尿囊素+過氧化氫2過氧化氫+2還原型色原組合過氧化物酶2吲嗒胺色原或醌亞胺色原+水將最終反應(yīng)物置于生化分析儀器下，檢測主波長495-505nm吸光度上升的速度，從而測算出5′-核苷酸酶的活性大小。
本實施例應(yīng)用5′-核苷酸酶偶聯(lián)腺苷脫氨酶、核苷磷酸酶、黃嘌呤氧化酶、脲酶、過氧化物酶等酶偶聯(lián)反應(yīng)以及還原型色原體組合系統(tǒng)，將無色的還原型色原體組合氧化成有顏色的醌亞胺色原或者吲嗒胺色原，因此測量染料含量的高低(不同染料吸收波長不同，介于400--600nm之間)可以直接反映5′-核苷酸酶活性的大小。
具體測定步驟為腺苷單磷酸+水5核苷酸酶腺苷+磷酸根腺苷+水腺苷脫氨酶肌苷+氨離子肌苷+磷酸鹽核苷磷酸酶次黃嘌呤+1-磷酸核糖次黃嘌呤+水+氧黃嘌呤氧化酶尿酸+過氧化氫尿酸+水+氧脲酶尿囊素+過氧化氫2過氧化氫+2還原型色原組合過氧化物酶2吲嗒胺色原或醌亞胺色原+水將最終反應(yīng)物置于生化分析儀器下，檢測主波長546nm吸光度上升的速度，從而測算出5′-核苷酸酶的活性大小。
各反應(yīng)步驟的反應(yīng)時間控制在15分鐘。
實施例三(三劑)本實施例的5′-核苷酸酶診斷試劑為三劑，有試劑I緩沖液 120mmol/l單價磷酸鹽 8mmol/l穩(wěn)定劑 50mmol/l3-甲基-2-苯噻唑酮腙 2mmol/l試劑II緩沖液 120mmol/l腺苷脫氨酶 12000U/l核苷磷酸酶 12000U/l黃嘌呤氧化酶12000U/l過氧化物酶 12000U/l脲酶12000U/l穩(wěn)定劑 50％(總體積)試劑III
緩沖液 120mmol/l腺苷單磷酸 5mmol/l穩(wěn)定劑 50mmol/l雙甲基苯胺 2mmol/l在全自動生化分析儀上設(shè)定溫度25℃，反應(yīng)時間20分鐘，測試主波長578nm，測試副波長700nm以上，被測5′-核苷酸酶樣品與試劑的體積比例為1/25，反應(yīng)方向為正反應(yīng)，延遲時間1分鐘，檢測時間2分鐘。
具體測定步驟為腺苷單磷酸+水5核苷酸酶腺苷+磷酸根腺苷+水腺苷脫氨酶肌苷+氨離子肌苷+磷酸鹽核苷磷酸酶次黃嘌呤+1-磷酸核糖次黃嘌呤+水+氧黃嘌呤氧化酶尿酸+過氧化氫尿酸+水+氧脲酶尿囊素+過氧化氫2過氧化氫+2還原型色原組合過氧化物酶2吲嗒胺色原或醌亞胺色原+水將最終反應(yīng)物置于生化分析儀器下，檢測主波長578nm吸光度上升的速度，從而測算出5′-核苷酸酶的活性大小。
各反應(yīng)步驟的反應(yīng)時間控制在10分鐘。
實施例四本實施例的5′-核苷酸酶診斷試劑有試劑I緩沖液 120mmol/l單價磷酸鹽 6mmol/l腺苷脫氨酶 12000U/l
核苷磷酸酶 12000U/l黃嘌呤氧化酶12000U/l過氧化物酶 12000U/l脲酶12000U/l穩(wěn)定劑 50％(總體積)4-氨基抗砒 1mmol/l試劑II緩沖液 120mmol/l腺苷單磷酸 2mmol/l穩(wěn)定劑 20mmol/l雙甲基苯胺 2mmol/l測定5′-核苷酸酶活性時，溫度控制在30，反應(yīng)時間10分鐘，測試主波長578nm，測試副波長700nm以上，被測5′-核苷酸酶樣品與試劑的體積比例為1/25，反應(yīng)方向為正反應(yīng)，延遲時間1分鐘，檢測時間2分鐘。
加入樣品和試劑后，使之混合，發(fā)生以下反應(yīng)腺苷單磷酸+水5核苷酸酶腺苷+磷酸根腺苷+水腺苷脫氨酶肌苷+氨離子肌苷+磷酸鹽核苷磷酸酶次黃嘌呤+1-磷酸核糖次黃嘌呤+水+氧黃嘌呤氧化酶尿酸+過氧化氫尿酸+水+氧脲酶尿囊素+過氧化氫2過氧化氫+2還原型色原組合過氧化物酶2吲嗒胺色原或醌亞胺色原+水將最終反應(yīng)物置于生化分析儀器下，檢測主波長578nm吸光度上升的速度，從而測算出5′-核苷酸酶的活性大小。
各反應(yīng)步驟的反應(yīng)時間控制在5分鐘。
總之，實驗證明，采用本發(fā)明的測定方法完全可以通過紫外/可見光分析儀或者半、全自動生化分析儀器得出所需的測定結(jié)果，并且靈敏度高、精確度好，不受內(nèi)、外源物質(zhì)的污染。
權(quán)利要求
1.一種5′-核苷酸酶活性測定方法，步驟如下1)、將樣品與主要由腺苷單磷酸、單價磷酸鹽、腺苷脫氨酶、核苷磷酸酶、黃嘌呤氧化酶、過氧化物酶、脲酶、還原型色原體組合組成的試劑混合，使之發(fā)生如下方法原理的反應(yīng)腺苷單磷酸+水5核苷酸酶腺苷+磷酸根腺苷+水腺苷脫氨酶肌苷+氨離子肌苷+磷酸鹽核苷磷酸酶次黃嘌呤+1-磷酸核糖次黃嘌呤+水+氧黃嘌呤氧絲酶尿酸+過氧化氫尿酸+水+氧脲酶尿囊素+過氧化氫2過氧化氫+2還原型色原組合過氧化物酶2吲嗒胺色原或醌亞胺色原+水2)、檢測最終反應(yīng)物在主波長400-600nm吸光度上升的速度，測算出5′-核苷酸酶的活性大小。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述5′-核苷酸酶活性測定方法，其特征在于所述步驟2)為將最終反應(yīng)物置于紫外/可見光分析儀或者半、全自動生化分析儀下，檢測主波長400-600nm吸光度上升的速度，測算出5′-核苷酸酶的活性大小。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述5′-核苷酸酶活性測定方法，其特征在于溫度控制在20℃到50℃范圍，反應(yīng)時間控制在2-30分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述5′-核苷酸酶活性測定方法，其特征在于被測5′-核苷酸酶樣品與試劑的比例控制在1/10到1/250。
5.一種5′-核苷酸酶診斷試劑盒，由以下成分組成緩沖液 40--200mmol/l腺苷單磷酸 1--50mmol/l單價磷酸鹽 0.2--10mmol/l腺苷脫氨酶 5000--500000U/l核苷磷酸酶 500--50000U/l黃嘌呤氧化酶 500--50000U/l過氧化物酶 500--50000U/l脲酶 500--50000U/l穩(wěn)定劑 10--80％(總體積)還原型色原體組合 0.1--20mmol/l
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述5′-核苷酸酶診斷試劑盒，其特征在于所述試劑配成單劑、雙劑或三劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述5′-核苷酸酶診斷試劑盒，其特征在于所述穩(wěn)定劑為乙二醇、丙二醇、甘油、聚糖、聚醇、硫酸銨、鹽或腺苷二磷酸中的至少一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述5′-核苷酸酶診斷試劑盒，其特征在于所述緩沖劑為三(羧甲基)氨基甲烷一鹽酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液、三乙醇胺緩沖液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖液或雙甘氨肽緩沖液中的一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述5′-核苷酸酶診斷試劑，其特征在于所述還原型色原體為0.1-20mmol/l的3-甲基-2-苯噻唑酮腙與0.1-20mmol/l以下十四種成分之一組合而成石碳酸、N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺、N，N-雙乙基-m-甲苯胺、2，4-雙氯石碳酸、2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸、3，5-雙氯石碳酸磺酸、3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸、N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽、仨溴羥基苯甲酸、雙甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺、2，2′-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)、4-羥基-3-甲氧基苯甲酸、3-甲基-乙基-羥基苯胺。
10.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述5′-核苷酸酶診斷試劑，其特征在于所述還原型色原體組合為由0.1-20mmol/l的4-氨基抗砒與0.1-20mmol/l以下十四種成分之一組合而成石碳酸、N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺、N，N-雙乙基-m-甲苯胺、2，4-雙氯石碳酸、2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸、3，5-雙氯石碳酸磺酸、3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸、N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽、仨溴羥基苯甲酸、雙甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺、2，2′-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)、4-羥基-3-甲氧基苯甲酸、3-甲基-乙基-羥基苯胺。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種測定5′－核苷酸酶活性的方法，同時本發(fā)明還涉及5′－核苷酸酶診斷試劑盒，屬于醫(yī)學檢驗測定技術(shù)領(lǐng)域。該試劑盒包括緩沖液、腺苷單磷酸、單價磷酸鹽、腺苷脫氨酶、核苷磷酸酶、黃嘌呤氧化酶、過氧化物酶、脲酶、穩(wěn)定劑、還原型色原體組合，通過將樣品與試劑按一定的體積比混合，使之發(fā)生酶偶聯(lián)反應(yīng)，再將最終反應(yīng)物置于生化分析儀下，檢測主波長吸光度變化的情況(速度)，從而測算出5′－核苷酸酶的活性大小。采用本發(fā)明完全可以通過生化分析儀器得出所需的測定結(jié)果，并且靈敏度高、精確度好，不受內(nèi)外源物質(zhì)的污染，便于推廣應(yīng)用。
文檔編號C12Q1/32GK1749409SQ200410041970
公開日2006年3月22日 申請日期2004年9月14日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月14日
發(fā)明者王爾中 申請人:王爾中