專利名稱：頭花蓼及其提取物和制品微生物活性測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域中的中藥生物活性定性定量測定方法，具體而言，本發(fā)明涉及一種用微生物檢定法測定頭花蓼及其提取物生物和制品活性的方法。
微生物檢定法是利用藥物對微生物體的作用以測定其效價或生物活性的方法，它以藥物的藥理作用為基礎(chǔ)，以微生物統(tǒng)計為工具，運用特定的實驗設(shè)計、通過供試品和相應(yīng)的標準品或?qū)φ掌吩谝欢l件下比較產(chǎn)生特定生物反應(yīng)的劑量關(guān)系，來測得供試品的效價。在一定范圍內(nèi)，藥物的劑量和藥理作用間存在著量效關(guān)系，即劑量增大，藥理作用會隨著增強。將劑量和反應(yīng)經(jīng)過適當轉(zhuǎn)換之后，量效關(guān)系可以轉(zhuǎn)化成以反應(yīng)或其函數(shù)為縱坐標、劑量或其函數(shù)為橫坐標的直線關(guān)系。
頭花蓼(Polygonum capitatum Buch-Ham.ex D.Don)，又名四季紅，蓼科蓼屬植物，多年生草本，為苗族常用藥材。在中國的貴州、云南、廣西、四川、西藏、湖北、湖南、江西均有分布，主要生長在山坡、山谷及富含煤層的砂頁巖地帶。頭花蓼主要具有清熱解毒，利尿通淋等功效。始載于1963年《廣西中藥志》第二冊，主要用于風(fēng)濕痛。1977年《中藥大辭典》上冊收載，民間將其用于治療痢疾、腎炎、膀胱炎、尿路結(jié)石等?！顿F州省中藥材質(zhì)量標準》1988年版及《貴州苗族醫(yī)藥研究與開發(fā)》均有收載，以其為原料的熱淋清顆粒劑于2002年進入中國基本用藥目錄。頭花蓼具有抗炎和抗菌等多種活性，其含有的有效成分也非常復(fù)雜，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)頭花蓼中含有黃酮類和沒食子酸等有效成分，但是，由于含有的成分復(fù)雜或者是協(xié)同作用因素，頭花蓼及其提取物的活性與其中的黃酮類或沒食子酸類有效成分沒有明確的量效關(guān)系，因而，通過測定頭花蓼及其提取物中的某個有效成分含量的結(jié)果很難反映被測定物的生物活性，因此，人們客觀上需要一種直接、快速地測定頭花蓼及其提取物的生物活性的方法，本發(fā)明正是為解決該問題而提出的。
因此，本發(fā)明的目的是提供一種測定頭花蓼及其提取物生物活性的方法。
本發(fā)明中所述的頭花蓼及其提取物和制品，包括頭花蓼原藥和用水、75％乙醇和95％乙醇和二氧化碳超臨界條件分別對頭花蓼全草、地上部分、葉、種子、莖和根部分別進行了提取得到的提取物及其制品，本發(fā)明的目的是提供一種方法對頭花蓼及其提取物和制品進行微生物活性測定，以便對它們的效價進行評價。
本發(fā)明涉及的頭花蓼及其提取物和制品可以通過下列方法得到的實施例1制備頭花蓼地上部分水提取物(編號w-2-1)取頭花蓼地上部分220kg，洗凈，加入7倍量水，加熱煮沸1.5小時，過濾，藥渣中加入6倍量水，煮沸1.0小時，過濾。合并濾液，濃縮至相對密度為1.2(20℃)得到浸膏，噴霧干燥得到浸膏粉23kg，收率是10.45％。
采用分光光度計法測定w-2-1中的總黃酮含量，將本發(fā)明的方法制備得到的w-2-1提取物和輔料均勻混和，制粒，干燥，即得到新方法制備的熱淋清顆粒。
實施例2制備頭花蓼全草水提取物(噴霧干燥)(編號w-1-2)根據(jù)與實施例1相同的方法，用頭花蓼全草代替頭花蓼地上部分進行提取。
取w-1-2浸膏粉按實施例1相同的方法，制得樣品(w-1-12)。
實施例3制備頭花蓼全草水提取物(減壓干燥)(編號w-1-3)根據(jù)與實施例2相同的方法，將干燥方法改為減壓干燥。
實施例4制備頭花蓼根95％乙醇提取物(編號w-1-4)取頭花蓼根10kg，洗凈，置不銹鋼濃縮罐內(nèi)，加入7.5倍量的95％乙醇，回流提取1.5小時，過濾。藥渣加入7.5倍量95％乙醇，回流提取1.0小時，過濾。合并兩次濾液，濃縮得浸膏，減壓干燥得到提取物0.215kg。
實施例5制備頭花蓼莖95％乙醇提取物(編號w-1-5)根據(jù)與實施例4相同的方法，用頭花蓼莖進行提取。
實施例6制備頭花蓼葉95％乙醇提取物(編號w-1-6)根據(jù)與實施例4相同的方法，用頭花蓼葉進行提取。
實施例7制備頭花蓼種子95％乙醇提取物(編號w-1-7)根據(jù)與實施例4相同的方法，用頭花蓼種子進行提取。
實施例8制備頭花蓼鮮品95％乙醇提粉(編號w-1-8)根據(jù)與實施例4相同的方法，用頭花蓼鮮品進行提取。
實施例9制備頭花蓼鮮品水提粉(編號W-1-9)根據(jù)與實施例3相同的方法，用頭花蓼鮮品進行提取。
實施例10制備頭花蓼全草75％乙醇提取物(編號W-1-10)取頭花蓼全草10kg，洗凈，置不銹鋼濃縮罐內(nèi)，加入7-8倍量75％乙醇，回流提取1.5小時，過濾。藥渣加入5倍量75％乙醇，回流提取1.0小時，過濾。合并兩次濾液，濃縮得浸膏，減壓干燥得到提取物0.694kg。
實施例11制備頭花蓼全草水煎醇沉溶液粉(W-1-14a)和頭花蓼全草水煎醇沉沉淀粉(W-1-14b)取頭花蓼全草10.60kg，洗凈，加入350kg水，加熱煮沸1.5小時，轉(zhuǎn)移上清液，殘渣中加入150kg水，煮沸1.0小時。合并煎煮液，過濾濃縮至相對密度為1.04(24℃)得浸膏16.1kg。加入95％乙醇調(diào)至含醇量為60％，靜至24小時，分取溶液。向沉淀加入95％乙醇調(diào)至含醇量為60％，靜至24小時，分取溶液，合并兩次溶液，揮去乙醇，80℃減壓干燥得頭花蓼全草水煎醇沉溶液粉(W-1-14a)0.755kg；沉淀于80℃減壓干燥得頭花蓼全草水煎醇沉沉淀粉(W-1-14b)0.465kg。
實施例12制備頭花蓼原藥粉二氧化碳超臨界萃取提取物(編號W-1-15a)取頭花蓼原藥粉10kg，洗凈，投入超臨界萃取釜中，對萃取釜和兩個解析釜加熱，對貯罐進行冷卻，當溫度達到預(yù)定的溫度時，打開CO2氣瓶送氣，當壓力達到預(yù)定壓力時，開始循環(huán)萃取，調(diào)節(jié)流量，并加入夾帶劑，恒溫恒壓萃取2小時。將得到的液體減壓濃縮得到浸膏0.135kg。
實施例13制備頭花蓼藥渣二氧化碳超臨界萃取提取物(編號W-1-15b)取頭花蓼藥渣10kg，洗凈，投入超臨界萃取釜中，對萃取釜和兩個解析釜加熱，對貯罐進行冷卻，當溫度達到預(yù)定的溫度時，打開CO2氣瓶送氣，當壓力達到預(yù)定壓力時，開始循環(huán)萃取，調(diào)節(jié)流量，并加入夾帶劑，恒溫恒壓萃取2小時。將得到的液體減壓濃縮得到浸膏0.119kg。
實施例14制備頭花蓼地上部分70％乙醇提取物(編號W-2-2)
取頭花蓼地上部分30kg，洗凈，置不銹鋼濃縮罐內(nèi)，加入8-9倍量70％乙醇，回流提取1.5小時，過濾。藥渣加入4-5倍量70％乙醇，回流提取1.0小時，過濾。藥渣再加入4-5倍量70％乙醇，回流提取1.0小時，過濾。合并三次濾液，濃縮得浸膏，減壓干燥得到提取物3.75kg。
具體而言，本發(fā)明利用微生物檢定方法測定頭花蓼提取物的生物活性。


附圖1頭花蓼浸膏粉(濃度1.0、6.25、12.5mg生藥/ml)對枯草芽孢桿菌的抑菌作用。(相應(yīng)的抑菌圈分別為8、17、21.0mm)圖2 頭花蓼浸膏粉濃度(mg生藥/ml)與抑菌圈直徑(mm)對枯草芽孢桿菌的線性關(guān)系圖實施例1尋找適合定量檢測頭花蓼提取物的生物活性的微生物檢定菌利用平皿擴散法測定頭花蓼提取物的生物效價設(shè)計6個濃度劑量，分別為1.725、3.5、5、7、10、12.5mg生藥/ml，分別加入含有一定菌量的平皿培養(yǎng)基表面上的牛津小杯內(nèi)，經(jīng)適當溫度培養(yǎng)一定時間后，觀察牛津小杯周圍出現(xiàn)的抑菌圈的清晰度及抑菌圈大小，同時設(shè)立已知標準品(與待檢測品屬同一類性質(zhì))，在一定條件下比較標準品與被檢品兩者對接種細菌的抑菌圈的大小，求得被檢品的效價含量(或其生藥含量)。
步驟如下樣品配制精確稱取一定量的編號為W-1-2頭花蓼提取物粉未，用滅菌水溶解，配制成20mg生藥/ml的溶液，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，取上清液用pH7.8磷酸緩沖液稀釋至1.725、3.5、5、7、10、12.5mg生藥/ml備用。
檢定菌包括金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]或ATCC25923短小芽孢桿菌[CMCC(B)63202]藤黃微球菌[CMCC(B)28001]大腸埃希菌[CMCC(B)44103]枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]菌懸液的制備參閱中華人民共和國藥典2000版附錄XIA。
藥液配制精確稱取頭花蓼浸膏粉(編號W-1-2)(按生藥計算)用滅菌水溶解，配制成20mg生藥/ml的溶液，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，取上清液用pH7.8磷酸緩沖液稀釋至所需濃度(即，倍比稀釋至12.5，6.25，3.125，1.56，0.78，……0.003mg/ml)。
試驗方法1、制備雙碟取直徑90mm，高16-17mm的平底雙碟，分別加入已融化的培養(yǎng)基(按表1)20ml，使在碟底均勻分布，放置平臺上使凝固，作為底層。另取培養(yǎng)基適量加熱融化后，放冷至48-50℃(芽孢桿菌可至60℃)，加入試驗菌懸液適量(0.5％)，使能得到清晰的抑菌圈，搖勻，吸取5ml加入上述底層的雙碟內(nèi)均勻攤布，作為菌層。放置水平臺上冷卻后，在每個雙碟中以等距離均勻安置無菌不銹鋼牛津小管(內(nèi)徑6.0mm±0.1mm，高10.0mm±0.1mm，外徑7.8mm±0.1mm)4個，用陶瓦園蓋復(fù)蓋備用。
2、檢定法于上述牛津小杯內(nèi)分別加入不同濃度的待檢測藥液，置37℃培養(yǎng)18-20小時，牛津小杯周圍產(chǎn)生清晰，邊緣清楚的抑菌圈的細菌可用于做為頭花蓼浸膏的檢測菌。
試驗結(jié)果頭花蓼浸膏粉(編號W-1-2)及沒食子酸對檢定菌的抑菌作用見表1和圖1。
表1頭花蓼浸膏粉(編號W-1-2)對所檢定菌的抑制圈(mm) 由表1可知，頭花蓼浸膏粉及沒食子酸僅對枯草芽孢桿菌敏感，當頭花蓼浸膏粉濃度為12.5、6.25和1.0mg生藥/ml時，抑菌圈清晰，抑菌圈直徑分別為21.0、17、8.0mm；沒食子酸在濃度為5、1.0、0.1mg/ml時，其抑菌圈分別是25、17、0mm。在該濃度下，二者對所試藤黃微球菌、大腸埃希菌無抑菌圈，對短小芽孢桿菌，金黃色葡萄球菌僅呈現(xiàn)8mm的抑菌圈，且抑菌圈周邊模糊不清。表明枯草芽孢桿菌(標準菌株〔CMCC(B)63501〕或ATCC提供菌株)可用作頭花蓼活性測定的生物檢定菌。(見表2，圖1)實施例2用枯草芽孢桿菌CMCC(B)63501作檢定菌，考察頭花蓼浸膏粉對枯草芽孢桿菌的線性關(guān)系以及日內(nèi)、日間的精密度。
樣品配制方法精密稱取頭花蓼浸膏粉(編號W-1-2)適量，用滅菌注射用水溶解后，離心，3000轉(zhuǎn)/分鐘，10分鐘。再用pH7.8磷酸緩沖液稀釋成1.725、3.5、5、7、10、12.5mg生藥/ml的溶液，按中國藥典2000版二部附錄XI A抗生素微生物檢定法分別測定其抑菌圈的大小，求出頭花蓼浸膏粉濃度與抑菌圈直徑的回歸方程以及相應(yīng)的系數(shù)，并繪制其直角坐標圖。
按下列回歸方程進行線性回歸，繪制濃度與抑菌圈直徑的線性關(guān)系圖。
Y(抑菌圈)＝a+bx(濃度)(a為回歸直線在Y軸上的截距，b是回歸直線的斜率)試驗結(jié)果試驗結(jié)果見表2和圖2。
由表2可見頭花蓼浸膏粉在1.725～12.5mg生藥/ml濃度范圍內(nèi)，濃度與其抑菌圈具有較好的線性關(guān)系，回歸方程為Y(抑菌圈)＝11.8273+0.8875X(濃度)，相關(guān)系數(shù)r＝0.9945。
根據(jù)回歸方程即可在直角坐標系中，繪制出標準曲線(見圖2)。有了標準曲線后，可用于檢測未知生物效價(或含量)的頭花蓼提取物和不同工藝、不同藥用部位提取物的較確切的生物效價(或含量)。即在測得頭花蓼提取物的抑菌圈后，可在標準曲線中查找到相應(yīng)的藥物含量。
沒食子酸濃度為0.1、1和5.0mg/ml時對于枯草芽孢桿菌也呈現(xiàn)抑菌圈，抑菌圈直徑分別為0、17、25mm。在無頭花蓼標準品時，表明沒食子酸可用于頭花蓼提取物的檢測參照物。
表2頭花蓼浸膏粉(編號W-1-2)對枯草芽孢桿菌的線性關(guān)系

以上試驗表明本發(fā)明用抗生素微生物檢測方法，可定性定量地測定出頭花蓼及其不同藥用部位和不同提取工藝得到的提取物和制品的生物活性效價含量。
實施例3用枯草芽孢桿菌作為檢定菌，考察頭花蓼浸膏粉在一定濃度范圍內(nèi)抑菌作用的精密度。
樣品配制精密稱取頭花蓼浸膏粉(編號W-1-2)，配制成1.56、3.12、6.25、12.5(mg生藥/ml)四個濃度(配制方法同實施例1和2)。測定方法測定方法同實施例1和2。每個濃度平行測3次(即每個濃度測三個雙碟中的抑菌圈大小，計算其平均值)。分別于日內(nèi)不同時間(上、下午)；日間不同時間(不同天)測定其抑菌圈大小，并進行統(tǒng)計學(xué)分析日內(nèi)、日間有無顯著性差異。以考察方法的精密度。
試驗結(jié)果試驗結(jié)果見表3。
表3 頭花蓼浸膏粉微生物檢測方法精密度考察結(jié)果日內(nèi) 日內(nèi)頭花蓼濃度(mg生檢定菌抑菌1圈(mm)P值 抑菌圈(mm)P值藥/ml)上午 下午 第1次 第2次 第3次枯草芽孢桿菌 12.521.51 22.30 22.51 22.63 23.1022.28 21.50523.28 23.23 23.6221.60 21.20 22.80 22.20 22.7021.80±0.42 21.52±0.68 ＞0.05 22.86±0.39 22.68±0.52 23.14±0.46＞0.056.2519.76 18.92 19.76 19.33 20.0418.88 19.02 19.20 18.60 19.3519.25 19.12 20.00 19.56 18.6019.30±0.44 19.02±0.10 ＞0.05 19.65±0.41 19.16±0.50 19.33±0.72＞0.0053.1215.65 16.01 15.98 15.92 16.4016.20 15.98 15.20 15.55 16.0315.21 16.12 16.24 15.85 15.7015.69±0.50 16.04±0.07 ＞0.05 15.81±0.54 15.77±0.20 16.04±0.35＞0.051.5613.0 12.40 12.23 12.92 13.0012.85 12.30 11.95 13.02 12.9812.15 11.90 12.60 12.60 13.1012.67±0.45 12.20±0.26 ＞0.05 12.26±0.33 12.85±0.22 13.03±0.06＞0.05
由表3可見，本方法檢測頭花蓼浸膏粉對枯草芽孢桿菌日內(nèi)、日間的抑菌作用均無顯著性差異(P＞0.05)，說明本檢測方法基本可靠。
試驗表明本發(fā)明使用枯草芽孢桿菌作檢定菌，根據(jù)微生物檢定法，檢測頭花蓼及其不同藥用部位和不同提取工藝得到的提取物和制品的生物活性(有效成分含量)是可行的。在確定其生物活性成分含量后，可采用抗菌藥物體內(nèi)外抗菌試驗方法，對不同提取工藝樣品的藥用質(zhì)量和藥效作出評判。
實施例4以頭花蓼浸膏粉(W-1-2)作為標準品，以枯草芽孢桿菌作為檢測菌，制備W-1-2的標準曲線。
檢測菌枯草芽孢桿菌(Bactillus Stilis)63501培養(yǎng)基蛋白胨5g，磷酸二氫甲3g，磷酸氫二甲7g，牛肉浸出粉3g，枸櫞酸鈉10g，水1000ml，加熱溶解后調(diào)pH至6.5-6.6，加1.4％的瓊脂粉，115℃滅菌30分鐘。
磷酸緩沖液pH7.8，磷酸氫二鉀5.59g，磷酸二氫鉀0.41g，蒸餾水1000ml樣品(W-1-2)制備精密稱取適量，用pH7.8緩沖液稀釋成10mg/ml溶液，用超聲波振蕩15分鐘，然后用離心機3000轉(zhuǎn)/秒離心10分鐘，取其上清夜放置于冰箱備用，使用時用pH7.8緩沖液稀釋至所需濃度。
采用1∶0.7的劑量比值，將頭花蓼浸膏粉(W-1-2)精密配置成以下濃度100000，70000，49000，34300，24010，16807mg/ml。
實驗結(jié)果結(jié)果見表4。
表4頭花蓼浸膏粉(W-1-2)對枯草芽孢桿菌的抑菌作用結(jié)果

將以上實驗結(jié)果帶入回歸方程，得截距a＝-0.4844，n＝6(即共測6個濃度劑量)。直線斜率b＝12.55，相關(guān)系數(shù)r＝0.9969表明頭花蓼浸膏粉(W-1-2)在100mg/ml-16.807mg/ml(劑間距比為1∶0.7)范圍內(nèi)呈直線相關(guān)關(guān)系。結(jié)果表明采用微生物法檢測頭花蓼不同工藝及制劑的生藥含量是可行的。
實施例5頭花蓼浸膏粉(W-1-2)作標準品，采用二劑量法測定有糖型頭花蓼浸膏粉生藥含量。
樣品配制分別精密稱取頭花蓼浸膏粉(W-1-2)和有糖型頭花蓼浸膏粉，配制成100mg生藥/ml和50mg生藥/ml濃度。
中心濃度100mg/50mg。
實驗操作1、傾倒平板下層10ml，上層5ml2、標準的稱量生藥含量為8.72mg/mg

將50ml容量瓶中放入30ml PH7.8磷酸緩沖液。在超聲波中振蕩15-30分鐘，然后再用PH7.8磷酸緩沖液稀釋至刻度，搖勻，在離心機中3000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，取出上清液，稀釋至100mg/ml和50mg/ml備用。
3、檢測樣品(有糖型頭花蓼浸膏粉顆粒劑)配制精密稱取顆粒劑適量(1981.2mg生藥/mg)。放入50ml容量瓶中，先加30ml PH7.8磷酸緩沖液。在超聲波中振蕩15-30分鐘，然后再用PH7.8磷酸緩沖液稀釋至刻度，搖勻，在離心機中3000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，取出上清液，稀釋至100mg/ml和50mg/ml備用。
實驗結(jié)果結(jié)果見表5。
表5有糖型頭花蓼浸膏粉(W-1-2)對枯草芽孢桿菌CMCC63501的抑菌作用 根據(jù)下列公式計算其生藥含量生藥含量＝V/n×100％×估計含量[V＝(樣品高劑量抑菌圈-標準品高劑量抑菌圈)+(樣品低劑量抑菌圈-標準品低劑量抑菌圈)]。
得V＝-7+(-5)＝-12[W＝(標準品高劑量抑菌圈-標準品低劑量抑菌圈)+(樣品高劑量抑菌圈-樣品低劑量抑菌圈)]W＝24+22＝46效價含量＝V/W×100％×估計含量有糖型頭花蓼效價83.46％×1981.2＝1654ug/mg即有糖型頭花蓼浸膏生藥含量為1654ug/mg實施例6采用劑量法用W-1-2做標準品檢測無糖型頭花蓼浸膏的生藥含量。
樣品配制分別精密稱取頭花蓼浸膏粉(W-1-2)和無糖型頭花蓼浸膏粉，配制成100mg生藥/ml和50mg生藥/ml濃度，測定方法同實施例4和5。
中心濃度100mg/50mg。
實驗操作
1、傾倒平板下層10ml，上層5ml2、標準的稱量生藥含量為8.72mg/mg 將50ml容量瓶中放入30ml PH7.8磷酸緩沖液。在超聲波中振蕩15-30分鐘，然后再用PH7.8磷酸緩沖液稀釋至刻度，搖勻，在離心機中3000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，取出上清液，稀釋至100mg/ml和50mg/ml備用。
3、檢測樣品(無糖型頭花蓼浸膏粉顆粒劑)配制精密稱取顆粒劑適量(1981.2mg生藥/mg)。放入50ml容量瓶中，先加30ml PH7.8磷酸緩沖液。在超聲波中振蕩15-30分鐘，然后再用PH7.8磷酸緩沖液稀釋至刻度，搖勻，在離心機中3000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，取出上清液，稀釋至100mg/ml和50mg/ml備用。
實驗結(jié)果結(jié)果見表6。
表6有糖型頭花蓼浸膏對枯草芽孢桿菌CMCC63501的抑菌作用 無糖型頭花蓼浸膏粉生藥含量計算公式同實施例5得V＝5+8.5＝-13.5
W＝25+22.5＝47.5121.8％×2001.3＝2437u/mg即無糖型頭花蓼浸膏生藥含量為2437ug/mg
權(quán)利要求
1.一種測定頭花蓼及其提取物和制品生物活性的方法，包括如下步驟a.樣品配制精確稱取一定量的頭花蓼或其提取物和其制品，用滅菌水溶解，配制成20mg/ml的溶液，離心3000轉(zhuǎn)/分鐘，10分鐘，取上清液用pH7.8磷酸緩沖液稀釋至1.725、3.5、5、7、10、12.5mg/ml備用；b.測定枯草芽孢桿菌，制備含適當菌量的雙碟，測出不同濃度頭花蓼樣品在檢定菌中的抑菌圈直徑，根據(jù)以下回歸方程進行線性回歸，由測量得到的抑菌圈直徑Y(jié)計算出檢測樣品中的頭花蓼生藥含量Y(抑菌圈)＝11.8273+0.8875X(濃度)
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中受試枯草芽孢桿菌是標準菌株CMCC(B)63501或ATCC提供菌株。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種測定頭花蓼及其提取物和制品生物活性的方法，包括步驟a.樣品配制精確稱取一定量的頭花蓼或其提取物和其制品，用滅菌水溶解，配制成一定濃度的溶液，離心，取上清液用pH7.8磷酸緩沖液稀釋至所需濃度備用；b.測定制備含枯草芽孢桿菌適當菌量的雙碟，測出不同濃度頭花蓼樣品在檢定菌中的抑菌圈直徑，根據(jù)回歸方程進行線性回歸，由測量得到的抑菌圈直徑Y(jié)計算出檢測樣品中的頭花蓼生藥含量。
文檔編號C12Q1/18GK1570134SQ0314638
公開日2005年1月26日 申請日期2003年7月11日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月11日
發(fā)明者梁斌, 王子厚, 李孟林, 張麗艷, 莊鎮(zhèn)華, 榮祖元, 張淑華, 葉曉鳴 申請人:貴州威門藥業(yè)股份有限公司