頭花蓼有效組分的制備方法與用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種頭花蓼有效組分的制備方法與用途，屬于中藥有效組分提取領(lǐng)域。它的制備過(guò)程包括以下步驟：a、取頭花蓼藥材，加水進(jìn)行提取，得水提取液；b、將所述水提取液上大孔吸附樹脂層析柱；c、上樣后的大孔吸附樹脂層析柱，先用水洗脫，再用70%～95%重量比乙醇洗脫，收集洗脫液Ⅰ；d、將所述洗脫液Ⅰ上聚酰胺層析柱；e、上樣后的聚酰胺層析柱，回收流出液，再用40%～95%重量比乙醇洗脫，收集洗脫液Ⅱ；f、將所述流出液和洗脫液Ⅱ合并后，回收乙醇，濃縮，干燥，即得頭花蓼有效組分。本發(fā)明的有益效果是：利用合理的提取、分離手段，得到具有較強(qiáng)抗菌作用，可用于制備抗感染藥物的頭花蓼有效組分。
【專利說(shuō)明】頭花蓼有效組分的制備方法與用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥有效組分提取領(lǐng)域，具體涉及一種頭花寥有效組分的制備方法與用途。
【背景技術(shù)】
[0002]頭花寥(Polygonum capitatum)又名石莽草、四季紅、紅酸桿、省丁草，屬于寥科(Polygonaceae)寥屬(Polygonum)多年生草本植物，主產(chǎn)貴州，是貴州道地藥材，收載于2003年版《貴州省中藥、民族藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》，具有清熱解毒、散瘀、利尿通淋之功效，臨床上主要用于泌尿系統(tǒng)感染、泌尿系結(jié)石等癥的治療，對(duì)急、慢性尿道炎、膀胱炎、腎盂腎炎有較好療效，臨床使用安全性高(苗藥-頭花寥研究綜述.中國(guó)醫(yī)院用藥評(píng)價(jià)與分析2005,5(6): 383-384)。目前，貴州省已建立規(guī)范化的頭花寥GAP種植基地，以頭花寥為原料藥已開發(fā)并上市了多個(gè)中藥制劑，涉及多家藥品企業(yè)，形成了一個(gè)較大的頭花寥產(chǎn)業(yè)，頭花寥已成為貴州省“六大苗藥”和貴州省中藥現(xiàn)代化重點(diǎn)培育發(fā)展的品種之一。
[0003]現(xiàn)涉及頭花寥的相關(guān)專利和研究報(bào)道已有多個(gè)，有文獻(xiàn)用15倍量55%乙醇對(duì)頭花寥中總黃酮的提取工藝進(jìn)行研究(頭花寥總黃酮提取工藝研究.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20(11):2815-2816)。中國(guó)專利申請(qǐng)公開說(shuō)明書CN1481832A公開了頭花寥水和醇提取物的制備方法和用途；CN1570134A公開了頭花寥及其提取物和制品微生物活性測(cè)定方法；CN102441041公開了頭花寥水提物制備口服制劑的方法；CN102526219公開了一種水提取物用75-85%乙醇提取制備頭花寥提取物的方法；CN202772497公開了一種用50-90%乙醇回流提取制備頭花寥提取物的方法；CN102526218公開了一種水提取物用76-84%乙醇提取制備頭花寥提取物的方法。然而，已有的這些文獻(xiàn)只是針對(duì)頭花寥提取物的制備方法進(jìn)行了研究或應(yīng)用，或者僅對(duì)其中的水提取物用高濃度醇溶液進(jìn)行了提取，而頭花寥的這些提取物所含成分復(fù)雜，往往有效和無(wú)效成分共存，不利于藥效的發(fā)揮。CN101940625公開了一種水或水醇提取物經(jīng)大.孔樹脂水或低濃度醇洗脫后用高濃度醇洗脫獲得的組分的制備方法，具有一定的進(jìn)步性。但是，從我們的研究來(lái)看，本方法不以去除沒(méi)食子酸類和鞣質(zhì)類成分為目的，沒(méi)有相關(guān)的質(zhì)量控制手段，所得組分由于含有鞣質(zhì)類化合物和2%以上的沒(méi)食子酸及其類似物，不利于頭花寥藥效的發(fā)揮，有效組分的制備工藝尚需進(jìn)一步優(yōu)化。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種頭花寥有效組分的制備方法。
[0005]本發(fā)明的另一目的在于提供上述頭花寥有效組分的用途。
[0006]本發(fā)明的頭花寥有效組分，其制備過(guò)程包括以下步驟:
[0007]a、取頭花寥藥材，加水進(jìn)行提取，得水提取液；
[0008]b、將所述水提取液上大孔吸附樹脂層析柱；
[0009]C、上樣后的大孔吸附樹脂層析柱，先用水洗脫，再用70%?95%重量比乙醇洗脫，收集洗脫液I;[0010]d、將所述洗脫液I上聚酰胺層析柱；
[0011]e、上樣后的聚酰胺層析柱，回收流出液，再用40%?95%重量比乙醇洗脫，收集洗脫液II ；
[0012]f、將所述流出液和洗脫液II合并后，回收乙醇，濃縮，干燥，即得頭花寥有效組分。
[0013]作為優(yōu)選，所述步驟a中加水提取的次數(shù)為I?4次，每次提取的時(shí)間為0.5?4小時(shí)，每次提取的加水量是所述頭花寥藥材重量的5?20倍。
[0014]作為優(yōu)選，所述步驟b中大孔吸附樹脂為D101、D201、H-103、SIP-1300、DU D2、Diaion HP20、HPD100、HPD400、AB-8、MD、DM130、CAD-40、SP820 或 SP700 中的一種。
[0015]作為優(yōu)選，為有效去除沒(méi)食子酸類成分，所述步驟c中用水洗脫上樣后的大孔吸附樹脂層析柱，洗至水洗脫液FeCl3反應(yīng)顯陰性；為有效洗脫黃酮類成分等有效成分，所述步驟c中用70%?95%重量比乙醇洗脫至洗脫液I的鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯陰性。
[0016]作為優(yōu)選，為有效去除鞣質(zhì)類化合物，所述步驟d中聚酰胺為錦綸6、錦綸66、錦綸46、錦綸11或錦綸1010中的一種。
[0017]作為優(yōu)選，為有效洗脫黃酮類成分等有效成分，所述步驟e中用40%?95%重量比乙醇洗脫上樣后的聚酰胺層析柱，洗至洗脫液II的鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯陰性。
[0018]作為優(yōu)選，所述步驟f中濃縮為減壓濃縮或常壓濃縮中的一種；所述步驟f中干燥為減壓干燥、噴霧干燥或冷凍干燥中的一種。
[0019]一種頭花寥有效組分為活性成分制成的藥用制劑，所述頭花寥有效組分加入藥用添加劑按照藥劑學(xué)允許的制備方法制成藥`用制劑。
[0020]一種頭花寥有效組分在制備抗菌藥物中的應(yīng)用。
[0021]進(jìn)一步地，所述抗菌是對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、奇異變形桿菌和銅綠假單胞菌等泌尿系統(tǒng)感染常見(jiàn)菌有抵抗作用。
[0022]本發(fā)明制備頭花寥有效組分中，以最易獲得并最為安全的水作為提取溶劑，通過(guò)兩次操作簡(jiǎn)單的柱色譜后得到頭花寥有效組分。其中，頭花寥的水提取液首先通過(guò)非極性或弱極性大孔吸附樹脂層析柱，在富集黃酮類成分的同時(shí)，去除了沒(méi)食子酸類成分；再上聚酰胺層析柱，經(jīng)40%?95%重量比乙醇洗脫，得到去除鞣質(zhì)含有大量黃酮類成分的有效組分。
[0023]本發(fā)明中，F(xiàn)eCl3反應(yīng)用于定性檢測(cè)水洗脫液中的沒(méi)食子酸類成分是否去除完畢，顯示陰性時(shí)，說(shuō)明已完全去除。鹽酸-鎂粉反應(yīng)用于定性檢測(cè)洗脫液II中的黃酮類成分是否洗脫完畢，顯示陰性時(shí)，說(shuō)明已不含黃酮類成分，洗脫完畢。
[0024]本發(fā)明制備的頭花寥有效組分具有較強(qiáng)的抗菌作用，可用于治療泌尿系統(tǒng)感染等疾病。為了證明本發(fā)明所制備的頭花寥有效組分的活性及制備方法的必要性， 申請(qǐng)人:進(jìn)行了以下的實(shí)驗(yàn)。
[0025]分別將實(shí)施例中所述水提取物、水提取物中僅除去沒(méi)食子酸類組分的組分、鞣質(zhì)類組分及沒(méi)食子酸類組分及本發(fā)明有效組分進(jìn)行了抗菌研究，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明有效組分的抗菌活性顯著，能夠用于治療泌尿系統(tǒng)感染等疾病。
[0026]本發(fā)明的有益效果在于:
[0027](I)本發(fā)明有效組分制備方法，除了最后一次洗脫液濃縮外均無(wú)需濃縮，可大大提高效率，采用本技術(shù)可獲得以黃酮類成分為主要成分的有效組分，可以用于頭花寥相關(guān)藥理和藥效研究。
[0028](2)本發(fā)明制備方法，利用合理的提取、分離手段，依據(jù)沒(méi)食子酸類化合物、黃酮類化合物和鞣質(zhì)類化合物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及理化性質(zhì)上的差異，去除了頭花寥中沒(méi)食子酸類組分和鞣質(zhì)類組分，大大地提高了藥效。
【具體實(shí)施方式】
[0029]為使本領(lǐng)域技術(shù)人員詳細(xì)了解本發(fā)明的生產(chǎn)工藝和技術(shù)效果，下面以具體的生產(chǎn)實(shí)例來(lái)進(jìn)一步介紹本發(fā)明的應(yīng)用和技術(shù)效果。
[0030]實(shí)施例一:
[0031]將2kg頭花寥粉碎，用10倍量水分別煎煮2次，每次煎煮的時(shí)間為2小時(shí)，合并兩次提取液，得水提取液；
[0032]將水提取液上DlOl大孔吸附樹脂層析柱后，用水洗脫，至水洗脫液FeCl3反應(yīng)顯陰性(TLC (氯仿/甲醇/甲酸=9/1/0.1)，沒(méi)食子酸類成分與FeCl3M藍(lán)黑色)。收集水洗脫液，加入60%重量比乙醇，沉淀水洗脫液中的多糖和蛋白質(zhì)，濃縮，干燥，得沒(méi)食子酸類成分。
[0033]水洗脫完畢后，DlOl大孔吸附樹脂層析柱上余下部分再用80%重量比乙醇洗脫，至鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯陰性(黃酮類成分與鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯紅色)，收集洗脫液I。
[0034]將所述洗脫液I上錦綸6聚酰胺層析柱，回收流出液，再用90%重量比乙醇洗脫，至鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯陰性(黃酮類成分與鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯紅色)，收集洗脫液II ;將所述流出液和洗脫液II合并后，回收乙醇，減壓濃縮，減壓干燥，即得頭花寥有效組分。
[0035]錦綸6聚酰胺層析柱.余下部分用100%丙酮洗脫，收集該洗脫液并回收丙酮，濃縮至浸膏得鞣質(zhì)類組分。
[0036]實(shí)施例二:
[0037]將2kg頭花寥粉碎，用12倍量水分別煎煮3次，每次煎煮的時(shí)間為1.5小時(shí)，合并二次提取液，得水提取液；
[0038]將水提取液上D201大孔吸附樹脂層析柱后，用水洗脫，至水洗脫液FeCl3反應(yīng)顯陰性(TLC (氯仿/甲醇/甲酸=9/1/0.1)，沒(méi)食子酸類成分與FeCl3M藍(lán)黑色)。
[0039]水洗脫完畢后，D201大孔吸附樹脂層析柱上余下部分再用70%重量比乙醇洗脫，至鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯陰性(黃酮類成分與鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯紅色)，收集洗脫液I。
[0040]將所述洗脫液I上錦綸66聚酰胺層析柱，回收流出液，再用95%重量比乙醇洗脫，至鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯陰性(黃酮類成分與鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯紅色)，收集洗脫液II ;將所述流出液和洗脫液II合并后，回收乙醇，減壓濃縮，噴霧干燥，即得頭花寥有效組分。
[0041]實(shí)施例三:
[0042]將2kg頭花寥粉碎，用8倍量水分別煎煮3次，每次煎煮的時(shí)間為2小時(shí)，合并三次提取液，得水提取液；
[0043]將水提取液上AB-8大孔吸附樹脂層析柱后，用水洗脫，至水洗脫液FeCl3反應(yīng)顯陰性(TLC (氯仿/甲醇/甲酸=9/1/0.1)，沒(méi)食子酸類成分與FeCl3M藍(lán)黑色)。
[0044]水洗脫完畢后，AB-8大孔吸附樹脂層析柱上余下部分再用95%重量比乙醇洗脫，至鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯陰性(黃酮類成分與鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯紅色)，收集洗脫液I。[0045]將所述洗脫液I上錦綸11聚酰胺層析柱，回收流出液，再用60%重量比乙醇洗脫，至鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯陰性(黃酮類成分與鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯紅色)，收集洗脫液II ;將所述流出液和洗脫液II合并后，回收乙醇，減壓濃縮，噴霧干燥，即得頭花寥有效組分。
[0046]為研究水提取物、水提取物中僅除去沒(méi)食子酸類組分的組分、鞣質(zhì)類組分及沒(méi)食子酸類組分及本發(fā)明有效組分的抗菌作用，本實(shí)驗(yàn)采用紙片瓊脂擴(kuò)散法檢測(cè)其提取物和各組分對(duì)泌尿系統(tǒng)感染常見(jiàn)菌的抗菌作用。
[0047]實(shí)驗(yàn)材料
[0048]1、實(shí)驗(yàn)用菌:金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌、奇異變形桿菌。
[0049]2、試驗(yàn)菌液的制備:MHA平皿上挑取菌落接種在5mLMH肉湯培養(yǎng)基中，經(jīng)36°C培養(yǎng)4?5小時(shí)，比濁至0.5麥?zhǔn)蠁挝?約含I?2X 108CFU/mL)。
[0050]3、含藥紙片的制備:將待檢藥液分別加入30張無(wú)菌小圓濾紙片(直徑6mm)中，
0.3mL/ UII。
[0051]實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
[0052]實(shí)驗(yàn)方法:
[0053]紙片瓊脂擴(kuò)散法。從MHA平皿上挑取金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌、奇異變形桿菌菌落分別接種于5mLMH肉湯培養(yǎng)基中于36°C培養(yǎng)4?5h,比池至0.5麥?zhǔn)蠁挝?約含I?2X 108CFU/mL)。將比濁好的菌液`接種于置于平皿中的MHA培養(yǎng)基上，每一種菌株接種三個(gè)平皿。接種后的平皿置室溫片刻，待稍干后用無(wú)菌眼科鑷將含藥紙片貼于瓊脂表面。各紙片中心距離>24mm，紙片與平皿內(nèi)緣距離>15mm，將平皿置于36°C培養(yǎng)18?24h，測(cè)量抑菌圈的大小。
[0054]結(jié)果:
[0055]結(jié)果見(jiàn)表I。沒(méi)食子酸類組分的抗菌活性最弱(在所測(cè)條件下沒(méi)有活性)。并且，水提取物中僅去除沒(méi)食子酸類后組分對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌和奇異變形桿菌的抗菌活性比水提取物的強(qiáng)；本發(fā)明有效組分的抗菌活性明顯高于水提取物僅去除沒(méi)食子酸類后組分以及鞣質(zhì)類組分的抗菌活性，說(shuō)明鞣質(zhì)類組分和沒(méi)食子酸類組分混合于水提取物種，不利于頭花寥的抗菌作用。相較于鞣質(zhì)組分而言，本發(fā)明有效組分的抗菌作用更強(qiáng)。
[0056]表I本發(fā)明所制備的各組分對(duì)受試菌株的抑菌圈直徑(mm)
[0057]
【權(quán)利要求】
1.一種頭花寥有效組分的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: a、取頭花寥藥材，加水進(jìn)行提取，得水提取液； b、將所述水提取液上大孔吸附樹脂層析柱； C、上樣后的大孔吸附樹脂層析柱，先用水洗脫，再用70%?95%重量比乙醇洗脫，收集洗脫液I ; d、將所述洗脫液I上聚酰胺層析柱； e、上樣后的聚酰胺層析柱，回收流出液，再用40%?95%重量比乙醇洗脫，收集洗脫液II ； f、將所述流出液和洗脫液II合并后，回收乙醇，濃縮，干燥，即得頭花寥有效組分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的頭花寥有效組分的制備方法，其特征在于:所述步驟a中加水提取的次數(shù)為I?4次，每次提取的時(shí)間為0.5?4小時(shí)，每次提取的加水量是所述頭花寥藥材重量的5?20倍。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的頭花寥有效組分的制備方法，其特征在于:所述步驟b中大孔吸附樹脂為 D101、D201、H-103、SIP-1300、Dl、D2、Diaion HP20、HPD100、HPD400、AB-8、MD、DM130、CAD-40、SP820 或 SP700 中的一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的頭花寥有效組分的制備方法，其特征在于:所述步驟c中用水洗脫上樣后的大孔吸附樹脂層析柱，洗至水洗脫液FeCl3反應(yīng)顯陰性；所述步驟c中用70%?95%重量比乙醇洗脫至洗脫液I的鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯陰性。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的頭花寥有效組分的制備方法，其特征在于:所述步驟d中聚酰胺為錦綸6、錦綸66、錦綸46、錦綸11或錦綸1010中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的頭花寥有效組分的制備方法，其特征在于:所述步驟e中用40%?95%重量比乙醇洗脫上樣后的聚酰胺層析柱，洗至洗脫液II的鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯陰性。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的頭花寥有效組分的制備方法，其特征在于:所述步驟f中濃縮為減壓濃縮或常壓濃縮中的一種；所述步驟f中干燥為減壓干燥、噴霧干燥或冷凍干燥中的一種。
8.一種利用權(quán)利要求1-7中任意一項(xiàng)所述的頭花寥有效組分為活性成分制成的藥用制劑，其特征在于:所述頭花寥有效組分加入藥用添加劑按照藥劑學(xué)允許的制備方法制成藥用制劑。
9.一種利用權(quán)利要求1-7中任意一項(xiàng)所述的頭花寥有效組分在制備抗菌藥物中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述頭花寥有效組分在制備抗菌藥物中的應(yīng)用，其特征在于:所述抗菌是對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、奇異變形桿菌和銅綠假單胞菌有抵抗作用。
【文檔編號(hào)】A61K36/704GK103432214SQ201310407743
【公開日】2013年12月11日 申請(qǐng)日期:2013年9月9日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月9日
【發(fā)明者】廖尚高, 王永林, 關(guān)煥玉, 劉俊宏, 李勇軍, 孫佳, 王正, 蘭燕宇, 王愛(ài)民, 鄭林, 黃勇 申請(qǐng)人:貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院