專利名稱：含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的雌馬酚產(chǎn)生微生物的發(fā)酵制品及其制備方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種以活菌的狀態(tài)含有維持了雌馬酚(equol)產(chǎn)生能力的雌馬酚產(chǎn)生微生物的發(fā)酵制品及其制備方法。本發(fā)明還涉及一種組合物，所述組合物含有活菌狀態(tài)的雌馬酚產(chǎn)生微生物、且在保存后也能夠穩(wěn)定地維持該微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力。
背景技術(shù)：
大豆中含有的異黃酮(大豆異黃酮；黃豆苷原(daidzein)、染料木黃酮 (genistein)、黃豆黃素(glycitein))與雌二醇結(jié)構(gòu)類似，具有隨著與雌激素受體(以下記作ER)的結(jié)合而產(chǎn)生的抗雌激素作用及雌激素樣作用。迄今為止，大豆異黃酮的流行病學研究和介入研究提示了利用抗雌激素作用得到的乳癌、前列腺癌等激素依賴性癌的預防效果，或利用雌激素樣作用得到的更年期障礙、絕經(jīng)后的骨質(zhì)疏松癥、高血脂癥的改善效果。近年，指出了上述大豆異黃酮的生理作用的活性本體可能是黃豆苷原的代謝物雌馬酚。S卩，報道了與大豆異黃酮相比，雌馬酚與ER的結(jié)合能力(特別是與ERi3的結(jié)合)強， 向乳房和前列腺組織等目標臟器的移行性非常高(參見非專利文獻1-4)。另外報道了在患者-對照研究中，乳癌、前列腺癌患者中雌馬酚產(chǎn)生者顯著少，還報道了分成雌馬酚產(chǎn)生者和非產(chǎn)生者兩組解析大豆異黃酮對絕經(jīng)后的骨密度、脂質(zhì)代謝的改善效果時，雌馬酚產(chǎn)生者中顯著被改善。雌馬酚由黃豆苷原經(jīng)腸內(nèi)細菌的代謝而產(chǎn)生，但是報道了雌馬酚產(chǎn)生能力具有個體差異，日本人的雌馬酚產(chǎn)生者的比例約為50%。S卩，日本人中有約50%不能產(chǎn)生雌馬酚 (雌馬酚非產(chǎn)生者)，在這些人中，即使攝取大豆或大豆加工食品，也無法享受基于雌馬酚的作用的有用的生理效果。因此認為為了使雌馬酚非產(chǎn)生者呈現(xiàn)基于雌馬酚的作用的有用生理效果，使其攝取活菌狀態(tài)下的雌馬酚產(chǎn)生微生物是有效的。另一方面，已經(jīng)公知雌馬酚產(chǎn)生微生物，例如，由本發(fā)明人等從人的腸內(nèi)分離出了擬桿菌 E-23-15 (FERM BP-6435 號)、鏈球菌 E-23-17 (FERM BP-6436 號)、鏈球菌 A6G225 (FERM BP-6437 號)及乳球菌 20-92 (FERM BP-10036 號)(參見專利文獻 1 及 2)。因此，認為如果能夠提供以活菌的狀態(tài)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的發(fā)酵制品，則可以攝取雌馬酚產(chǎn)生微生物，能夠享受基于雌馬酚產(chǎn)生微生物的有用效果。但是，存在下述問題使用雌馬酚產(chǎn)生微生物、按照通常的方法制備發(fā)酵制品時，該微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力喪失，不能得到以活菌的狀態(tài)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的發(fā)酵制品。進而，還存在下述問題 雌馬酚產(chǎn)生微生物由于低PH條件或需氧保存等，雌馬酚產(chǎn)生能力容易喪失的傾向強，所以即使能夠制造維持了該微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力的發(fā)酵制品，也不能耐受保存，在流通階段雌馬酚產(chǎn)生能力被破壞。以上述的現(xiàn)有技術(shù)作為背景，期望開發(fā)以活菌的狀態(tài)含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的微生物的發(fā)酵制品。專利文獻1 國際公開第99/007392號說明書
專利文獻2 國際公開第2005/000042號說明書非專利文獻 1 :Morito K, HiroseT, Kinjo J, Hirakawa Τ, Okawa Μ,Nohara Τ, Ogawa S, Inoue S, Muramatsu Μ, Masamune Y. Interactionof phytoestrogens with estrogen receptors α and β . Biol Pharm Bu1124(4) :351-356,2001非專禾Ij文獻 2 =Maubach J, Bracke ME, Heyerick A, Depypere HT, Serreyn RF, Mareel MM, Keukeleire DD. Quantitation of soy-derived phytoestrogens in human breast tissue and biological fluids by high-performance liquid chromatography. J Chromatography B 784 :137-144，2003非專利文獻 3 =Morton MS, Chan PSF, Cheng C, Blacklock N, Matos-Ferreira A, Abranches-Monteiro L, Correia R, Lloyd S, Griffiths K. Lignans and isoflavonoids in plasma and prostatic fluid in men Samples from Portugal, Hong Kong, and the United Kingdom. Prostate 32 :122-128,1997非專利文獻4 :Tammy EH, Paul DM, Paul GF, Robert D, Stephen B, Kenneth J, Ray M, Lorraine GO, Kristiina W, Holly MS, Karen JG. Long-term dietary habits affect soy isoflavone metabolism and accumulation in prostatic fluid in caucasian men. J Nutr 135 :1400-1406,200
發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的目的在于提供一種以活菌的狀態(tài)含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的雌馬酚產(chǎn)生微生物的發(fā)酵制品。另外，本發(fā)明的另一個目的在于提供一種含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物，所述組合物以活菌的狀態(tài)含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的雌馬酚產(chǎn)生微生物，并且在保存后也能穩(wěn)定地維持雌馬酚產(chǎn)生能力。本發(fā)明人等為了解決上述課題進行了深入研究，結(jié)果驚訝地發(fā)現(xiàn)通過在使用雌馬酚產(chǎn)生微生物的發(fā)酵中，從母發(fā)酵劑(mother starter)的制備到主發(fā)酵(main fermentation)的各步驟中，根據(jù)使用的原料對發(fā)酵氣氛及pH等進行特別的創(chuàng)新研究，采用可以適用于工業(yè)規(guī)模的方法，可以得到以活菌的狀態(tài)含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的雌馬酚產(chǎn)生微生物的發(fā)酵物。進而，本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)通過向以活菌的狀態(tài)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物中添加抗壞血酸及/或其衍生物，可以得到能夠穩(wěn)定地保持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力、且保存穩(wěn)定性優(yōu)異的含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物。具體而言，本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)如下發(fā)明。(i)第1法的發(fā)酵物的制備方法使用雌馬酚產(chǎn)生微生物，用大豆粉末或豆?jié){作為原料制備發(fā)酵物時，通過以下步驟可以制備以活菌的狀態(tài)含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的微生物的發(fā)酵物(1)使用雌馬酚產(chǎn)生微生物，在黃豆苷原類的存在下、pH5. O以上、厭氧條件下進行發(fā)酵，由此制備母發(fā)酵劑 (mother starter) ； (2)使用上述母發(fā)酵劑，在黃豆苷原類的存在下、pH5. O以上進行發(fā)酵， 由此制備生產(chǎn)用發(fā)酵劑(bulk starter) ； (3)使用上述生產(chǎn)用發(fā)酵劑，在含有大豆粉末或豆?jié){的培養(yǎng)基中發(fā)酵制備發(fā)酵物。(ii)第2法的發(fā)酵物的制備方法使用雌馬酚產(chǎn)生微生物，用乳作為原料制備發(fā)酵物時，通過在黃豆苷原類的存在
4下、厭氧條件下使其發(fā)酵制備母發(fā)酵劑，進而在使用母發(fā)酵劑使乳原料發(fā)酵時，通過在黃豆苷原類的存在下、PH為4. 6以上的條件下進行，可以制備以活菌的狀態(tài)含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的微生物的發(fā)酵物。另外，該發(fā)酵物能夠長期保持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力，且保存穩(wěn)定性也優(yōu)異。進而，通過在酵母提取物的存在下實施從母發(fā)酵劑的制備到乳原料的發(fā)酵所進行的全部發(fā)酵，可以進一步提高雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力的維持和保存穩(wěn)定性。(iii)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物通過向以活菌的狀態(tài)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的發(fā)酵制品中添加抗壞血酸及/或其衍生物，可以提供一種在保存后也不喪失雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力的組合物。本發(fā)明是基于上述的發(fā)現(xiàn)并通過進一步反復改良而完成的。即，本發(fā)明提供下述方案的發(fā)明。項1. 一種發(fā)酵物的制備方法，包括以下步驟步驟(1)，在含有選自黃豆苷原糖苷、黃豆苷原及二氫黃豆苷原中的至少1種黃豆苷原類的培養(yǎng)基中，使用雌馬酚產(chǎn)生微生物，在維持PH5.0以上的狀態(tài)下進行厭氧發(fā)酵，由此制備母發(fā)酵劑；步驟O)，使用上述步驟(1)中所得的母發(fā)酵劑，在含有上述黃豆苷原類的培養(yǎng)基中，在維持PH5.0以上的狀態(tài)下進行發(fā)酵，由此制備生產(chǎn)用發(fā)酵劑；及步驟(3)，使用上述步驟(2)中所得的生產(chǎn)用發(fā)酵劑，在含有大豆粉末及/或豆?jié){的培養(yǎng)基中進行發(fā)酵，由此得到發(fā)酵物。項2.如項1所述的制備方法，其中，雌馬酚產(chǎn)生微生物為乳酸菌。項3.如項1所述的制備方法，其中，雌馬酚產(chǎn)生微生物為格氏乳球菌。項4. 一種發(fā)酵物的制備方法，包括以下步驟步驟(I)，在含有選自黃豆苷原糖苷、黃豆苷原及二氫黃豆苷原中的至少1種黃豆苷原類的培養(yǎng)基中，使用雌馬酚產(chǎn)生微生物進行厭氧發(fā)酵，由此制備母發(fā)酵劑，及步驟(II)，使用上述步驟(I)中得到的母發(fā)酵劑，在含有上述黃豆苷原類及乳的培養(yǎng)基中，在維持PH4. 6以上的狀態(tài)下進行發(fā)酵，由此得到發(fā)酵物。項5.如項4所述的制造方法，其中，使用大豆胚軸提取物作為黃豆苷原類。項6.如項4所述的制備方法，其中，上述步驟(I)及(II)中使用的培養(yǎng)基還含有酵母提取物。項7.如項4所述的制備方法，其中，雌馬酚產(chǎn)生微生物為乳酸菌。項8.如項4所述的制備方法，其中，雌馬酚產(chǎn)生微生物為格氏乳球菌。項9. 一種發(fā)酵制品，含有通過項1 3中任一項所述的制備方法得到的發(fā)酵物。項10. —種發(fā)酵制品，含有通過項4 8中任一項所述的制備方法得到的發(fā)酵物。項11.如項10所述的發(fā)酵制品，其中，pH為4. 6以上。項12. —種含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物，含有(A)活菌狀態(tài)的雌馬酚產(chǎn)生微生物、及⑶選自抗壞血酸、其衍生物、及它們的鹽中的至少1種。項13.如項12所述的組合物，其中，以0. 05 5重量％的配合比例含有上述(B) 成分。
項14.如項12所述的組合物，其中，pH為5. 0以下。項15.如項12所述的組合物，含有使用雌馬酚產(chǎn)生微生物進行發(fā)酵所得的發(fā)酵物作為活菌狀態(tài)的雌馬酚產(chǎn)生微生物。項16.如項12所述的組合物，其中，所述組合物為發(fā)酵大豆飲料或發(fā)酵豆?jié){。項17.如項12所述的組合物，其中，雌馬酚產(chǎn)生微生物為乳酸菌。項18.如項12所述的組合物，其中，雌馬酚產(chǎn)生微生物為格氏乳球菌。項19. 一種雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生性能的維持方法，其特征在于，向含有活菌狀態(tài)的雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物中添加選自抗壞血酸、其衍生物、及它們的鹽中的至少1種。根據(jù)本發(fā)明的制備方法，可以制備以活菌的狀態(tài)含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的雌馬酚產(chǎn)生微生物的發(fā)酵制品，因此在世界范圍內(nèi)首次實現(xiàn)提供以活菌的狀態(tài)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的飲料和食品。另外，即使在需要大量生產(chǎn)的工業(yè)規(guī)模中實施，本發(fā)明的制備方法也維持了雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力并進行發(fā)酵，因此在商業(yè)上的實用性很高、 極為有用。如果能夠提供以活菌的狀態(tài)含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的雌馬酚產(chǎn)生微生物的飲料和食品，則能夠使不能產(chǎn)生雌馬酚的人(雌馬酚非產(chǎn)生者)獲得雌馬酚產(chǎn)生能力，因此根據(jù)本發(fā)明能夠使雌馬酚非生產(chǎn)者享受基于雌馬酚的有效生理活性。另外，根據(jù)本發(fā)明的含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物，可以長期穩(wěn)定地維持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力，具備可以充分耐受流通 銷售的保存穩(wěn)定性。特別是，本發(fā)明的含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物為發(fā)酵大豆飲料或發(fā)酵豆?jié){的形態(tài)時，由于含有以黃豆苷原類為代表的來自大豆的有用成分，同時還含有活菌狀態(tài)的雌馬酚產(chǎn)生微生物，因此也存在雌馬酚產(chǎn)生微生物容易在腸內(nèi)生成雌馬酚的優(yōu)點。


[圖1]為在實施例4中測定的各飲料中所含的格氏乳球菌的活菌數(shù)的結(jié)果。[圖2]為在實施例4中測定的各飲料中所含的格氏乳球菌的雌馬酚產(chǎn)生能力的結(jié)果。
具體實施例方式本發(fā)明中，所謂雌馬酚產(chǎn)生微生物，是指具有同化選自黃豆苷原糖苷、黃豆苷原及二氫黃豆苷原中的至少1種黃豆苷原類產(chǎn)生雌馬酚的能力(代謝活性)的微生物。此處，作為黃豆苷原糖苷，具體地可以舉出黃豆苷、丙二酰黃豆苷、乙酰黃豆苷等。作為本發(fā)明中使用的雌馬酚產(chǎn)生微生物，只要作為食品允許食用并具有雌馬酚產(chǎn)生能力即可，沒有特別限定。例如，已知在下述微生物中存在具有上述能力的微生物格氏乳球菌(Lactococcus Rarvieae)等屬于乳球菌屬的微生物；中間鏈球菌(Streptococcus intermedius)、星座鏈球菌(Streptococcus constellatus)等屬于鏈球菌屬的微生物；粘膜乳桿菌(Lactobacillus mucosae)等屬于乳桿菌屬的微生物；卵形擬桿菌 (Bacteroides ovatus)等屬于擬桿菌屬的微生物；屎腸球菌(Enteroccus faecium)等屬于腸球菌屬的微生物；大芬戈爾德菌(FineROldia magna)等屬于芬戈爾德菌屬的微生物；屬于韋榮氏球菌(Veillonella)屬的微生物；Adlercreutzia equolifaciens等屬于Adlercreutzia屬的微生物；粘液真桿菌(Eubacterium limosum)等屬于真桿菌屬的微生物；Eggerthella hongkongenis等屬于埃格特菌(ERRerthella)屬的微生物；青春雙歧桿菌(Bifidobacterium adolescentis)、短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve) 等屬于雙歧桿菌屬的微生物；屬于史雷克氏菌(Slackia)屬的微生物；屬于不動桿菌屬 (Acinetobacter)屬的微生物等。在雌馬酚產(chǎn)生微生物中，優(yōu)選為乳球菌屬、鏈球菌屬、乳桿菌屬及雙歧桿菌屬等乳酸菌，更優(yōu)選屬于乳球菌屬的乳酸菌，可以特別優(yōu)選舉出格氏乳球菌。雌馬酚產(chǎn)生微生物，例如可以以有無雌馬酚的產(chǎn)生能力作為指標，從人類腸內(nèi)中分離。對于上述雌馬酚產(chǎn)生微生物，已經(jīng)保藏了由本發(fā)明人等從人類腸內(nèi)分離鑒定的菌，即乳球菌 20-92 (FERM BP-10036 號)、鏈球菌 E-23-17 (FERM BP-6436 號)、鏈球菌 A6G225 (FERM BP-6437號)及擬桿菌屬E-23-15(FERM BP-6435號)，本發(fā)明中可以使用上述保藏菌。另外，作為雌馬酚產(chǎn)生微生物，也可以使用Eubacterium limnosus (ATCC 8486)、埃格特菌屬(KCC10490)、Adlercreutzia equolifaciens (JCM14793)、Eggerthellahongkongenis HKUlO (JCM14552)、青春雙歧桿菌TM-I (FERM P-20325號)、短雙歧桿菌(JCM 1273)、史雷克氏菌 TM30 (FERMAP-20729 號)、革蘭氏陽性菌 do03 (AHU-1763) (FERM AP-20905 號)等。在上述的保藏菌中，本發(fā)明中優(yōu)選使用乳球菌20-92。以下，詳細說明本發(fā)明的發(fā)酵物的制備方法(第1法和第2法)、發(fā)酵制品、及含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物。第1法為以大豆粉末及/或豆?jié){作為原料制備發(fā)酵物的方法，第2法為以乳作為原料制備發(fā)酵物的方法。在本說明書中，所謂母發(fā)酵劑是指由儲用培養(yǎng)物制備的發(fā)酵劑(種菌)，所謂生產(chǎn)用發(fā)酵劑是指使用母發(fā)酵劑制備的發(fā)酵劑(種菌)，在利用主發(fā)酵大量生產(chǎn)發(fā)酵物時作為發(fā)酵劑使用。1.發(fā)酵物的制備方法(第1法)該第1法的發(fā)酵物的制備方法包括下述步驟制備母發(fā)酵劑(以下也記作“母發(fā)酵劑-1”)的步驟(1)；使用母發(fā)酵劑-ι制備生產(chǎn)用發(fā)酵劑(以下也記作“生產(chǎn)用發(fā)酵劑-?！? 的步驟O)；及使用生產(chǎn)用發(fā)酵劑-1，以大豆粉末或豆?jié){作為原料制備發(fā)酵物的步驟(3)。 以下，詳細說明該第1法的發(fā)酵物的制備方法的每個步驟。步驟(1)本發(fā)明中，首先，在含有黃豆苷原類的培養(yǎng)基(以下也記作“母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1”) 中，在維持pH5. O以上的狀態(tài)下，對雌馬酚產(chǎn)生微生物進行厭氧發(fā)酵，由此制備母發(fā)酵劑 (以下也記作“母發(fā)酵劑-1”)(步驟⑴)。母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1以雌馬酚產(chǎn)生微生物可以生長且允許作為食品成分為限，母發(fā)酵劑沒有特別限定，可以根據(jù)最終制備的發(fā)酵物的種類適當設定其組成。母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1中使用的黃豆苷原類包括黃豆苷原糖苷、黃豆苷原及二氫黃豆苷原中的1種或2種以上的黃豆苷原類。作為黃豆苷原糖苷，具體地可以舉出黃豆苷、丙二酰黃豆苷、乙酰黃豆苷等。本發(fā)明中，作為上述黃豆苷原類，可以使用黃豆苷原類的純品、 黃豆苷原類的粗精制品及含有黃豆苷原類的物質(zhì)中的任一種。作為含有黃豆苷原類的物質(zhì)，可以舉出大豆、豆?jié){、大豆胚軸、葛、葛根、紅地球葡萄(red globe grape)、苜蓿及它們的提取物(水、含水酒精等極性溶劑提取物)等。從穩(wěn)定地維持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力的觀點考慮，作為本發(fā)明中使用的黃豆苷原類，優(yōu)選大豆、豆?jié){、大豆胚軸或其提取物，特別優(yōu)選大豆。此處，使用大豆作為黃豆苷原類時，優(yōu)選舉出粉末化后的大豆，更優(yōu)選舉出蒸煮或煮沸并且粉末化后的大豆，特別優(yōu)選舉出在65 105°C下蒸煮或煮沸30秒 30分鐘并粉末化后的大豆。另外，對于粉末化后的大豆的平均粒徑?jīng)]有特別限定，但一般而言，從使制備的發(fā)酵物具備良好的口感的觀點考慮，優(yōu)選中值粒徑約為50μπι左右以下。另外，優(yōu)選粒徑150μπι以上的粒子為10%以下。需要說明的是，上述粒徑使用激光衍射/散射式粒度分布測定裝置進行測定。作為母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1中的黃豆苷原類含有物的配合比例，例如，可以舉出黃豆苷原類的總量為0. 002 0. 04重量％，優(yōu)選為0. 004 0. 02重量％，更優(yōu)選為0. 008 0.012重量％的比例。更具體而言，使用大豆粉末作為黃豆苷原類時，可以舉出母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1中大豆粉末換算成干燥重量時為3 觀重量％，優(yōu)選為5 觀重量％，更優(yōu)選為 7 17重量％的比例。另外，使用大豆胚軸提取物作為黃豆苷原類時，可以舉出母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1中大豆胚軸提取物換算為干燥重量時為0. 005 0. 1重量％，優(yōu)選為0. 01 0. 05 重量％，更優(yōu)選為0. 02 0. 03重量％的比例。通過以上述的配合比例含有黃豆苷原類，可以在不破壞雌馬酚產(chǎn)生能力的情況下使雌馬酚產(chǎn)生微生物增殖，得到母發(fā)酵劑-1。另外，為了促進雌馬酚產(chǎn)生微生物的生長，母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1中可以含有精氨酸等氨基酸、抗壞血酸等維生素類、焦磷酸鐵等微量金屬。母發(fā)酵劑為了使雌馬酚產(chǎn)生微生物的生長良好，優(yōu)選在母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1中添加精氨酸，作為母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1中的精氨酸的配合比例，例如可以舉出為0. 01 1重量％，優(yōu)選為0. 05 0. 3重量％。進而，根據(jù)需要，除上述成分之外，還可以在母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1中添加氮源、碳源等營養(yǎng)素。母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1有時影響發(fā)酵物的味道，因此可以優(yōu)選舉出對發(fā)酵物味道沒有不良影響的培養(yǎng)基。母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1通過混合規(guī)定量的添加成分、根據(jù)需要使其乳化、然后進行殺菌處理而制備。本步驟(1)中，雌馬酚產(chǎn)生微生物的厭氧發(fā)酵可以通過使用氣體容器(gas packs)和厭氧罐的現(xiàn)有的公知方法實施。另外，本步驟(1)中，維持pH為5.0以上、優(yōu)選為5. 5 8.0、更優(yōu)選為6.0 8.0 進行厭氧發(fā)酵。通過如上所述維持PH，可以在不破壞雌馬酚產(chǎn)生能力的情況下使雌馬酚產(chǎn)生微生物增殖，制備母發(fā)酵劑-1，通過該第1法的制備方法最終得到的發(fā)酵物中，可以穩(wěn)定地維持該微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力。上述厭氧發(fā)酵中的PH的控制可以利用公知的方法實施。例如，在使用的培養(yǎng)基中，設定被雌馬酚產(chǎn)生微生物同化的糖類(例如葡萄糖等)的配合比例為0. 5重量％以下、優(yōu)選為0. 4重量％以下、更優(yōu)選為0. 3重量％以下時，即使發(fā)酵進行，PH也不降低，因此可以維持厭氧發(fā)酵中的pH在上述范圍內(nèi)。另外，厭氧發(fā)酵中的pH 的控制也可以通過適當添加PH調(diào)節(jié)劑進行。本步驟(1)中的厭氧發(fā)酵如下實施將雌馬酚產(chǎn)生微生物的種菌接種在母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1上，在該微生物可生長的溫度區(qū)域、優(yōu)選在該微生物的最佳溫度區(qū)域下，使其厭氧發(fā)酵20 96小時，優(yōu)選72 96小時。更具體而言，使用乳酸菌作為雌馬酚產(chǎn)生微生物時，例如可以在35 39°C下進行厭氧發(fā)酵72 96小時。如上所述得到的母發(fā)酵劑-1含有雌馬酚產(chǎn)生微生物，所述雌馬酚產(chǎn)生微生物增殖且為維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的狀態(tài)。如上所述得到的母發(fā)酵劑可以直接供給至接下來的步驟(2)，同時也可以根據(jù)需要，使用該母發(fā)酵劑作為種菌，在與上述條件相同的條件下進一步制備母發(fā)酵劑，在接下來的生產(chǎn)中使用。使用制備的母發(fā)酵劑、在與上述條件相同的條件下再次制備母發(fā)酵劑的步驟可以重復1次或數(shù)次，例如1 10次左右。即使如上所述重復實施發(fā)酵，只要滿足上述條件，則在母發(fā)酵劑-1中就可以以維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的狀態(tài)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物。步驟{21接著，使用上述步驟(1)中得到的母發(fā)酵劑-1，在含有上述黃豆苷原類的培養(yǎng)基中(以下也記作“生產(chǎn)用發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1”)，在維持PH5.0以上的狀態(tài)下進行發(fā)酵，由此制備生產(chǎn)用發(fā)酵劑-1 (以下也記作“生產(chǎn)用發(fā)酵劑-1”)(步驟O))。生產(chǎn)用發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1為含有上述黃豆苷原類的培養(yǎng)基，以雌馬酚產(chǎn)生微生物可以生長且允許作為食品成分為限，沒有特別限定，可以根據(jù)發(fā)酵物的種類適當設定。生產(chǎn)用發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1通過含有黃豆苷原類，可以在維持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力的狀態(tài)下使其增殖。關于生產(chǎn)用發(fā)酵劑培養(yǎng)基-ι中配合的上述黃豆苷原類的種類及配合比例，與下述的主發(fā)酵用培養(yǎng)基-1相同。另外，生產(chǎn)用發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1中，除上述黃豆苷原類之外，可配合的添加成分的種類及配合比例與上述母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1相同。另外，生產(chǎn)用發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1有時影響發(fā)酵物的味道，因此可以優(yōu)選舉出對發(fā)酵物的味道沒有不良影響的培養(yǎng)基，進而優(yōu)選舉出與上述母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1的組成相同的培養(yǎng)基。生產(chǎn)用發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1可以通過混合規(guī)定量的配合成分、根據(jù)需要使其乳化、然后進行殺菌處理而制備。該步驟O)中，厭氧發(fā)酵通過維持pH為5.0以上，優(yōu)選為5. 5 8.0，更優(yōu)選為 6. 0 8. 0而進行。通過如上所述維持pH，可以在不破壞雌馬酚產(chǎn)生能力的情況下使雌馬酚產(chǎn)生微生物增殖，制備生產(chǎn)用發(fā)酵劑-1，通過該第1法的制備方法最終獲得的發(fā)酵物中， 可以穩(wěn)定地維持該微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力。上述發(fā)酵中的PH的控制可以通過與上述步驟(1)同樣的方法進行。另外，該步驟O)中，發(fā)酵可以在需氧或厭氧中的任一氣氛下進行，但從制備成本的降低、操作簡便性等觀點考慮，優(yōu)選在需氧氣氛下進行。雌馬酚產(chǎn)生微生物在需氧氣氛下容易喪失雌馬酚產(chǎn)生能力，但通過控制培養(yǎng)中的PH條件在特定范圍內(nèi)，即使在需氧氣氛下，也可以維持雌馬酚產(chǎn)生能力。本步驟O)中的發(fā)酵如下實施向生產(chǎn)用發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1中添加例如0. 5 10 容量％左右、優(yōu)選1 5容量％左右的上述步驟(1)中得到的母發(fā)酵劑-1，在該微生物可以生長的溫度區(qū)域、優(yōu)選在該微生物的最佳溫度區(qū)域內(nèi)使其發(fā)酵10 觀小時，優(yōu)選為14 24小時。更具體而言，使用乳酸菌作為雌馬酚產(chǎn)生微生物時，例如，可以在35 39°C下發(fā)酵14 24小時。如上所述得到的生產(chǎn)用發(fā)酵劑-1含有雌馬酚產(chǎn)生微生物，所述雌馬酚產(chǎn)生微生物增殖且為維持雌馬酚產(chǎn)生能力的狀態(tài)。
生產(chǎn)用發(fā)酵劑-1可以被直接供給到接下來的步驟(3)中，但根據(jù)需要，也可以使用生產(chǎn)用發(fā)酵劑-1作為發(fā)酵劑(1次生產(chǎn)用發(fā)酵劑)，再次實施本步驟O)，制備2次生產(chǎn)用發(fā)酵劑，將所述的2次生產(chǎn)用發(fā)酵劑供給到接下來的步驟(3)中。步驟(3)接著，使用上述步驟( 中獲得的生產(chǎn)用發(fā)酵劑-1，在含有大豆粉末及/或豆?jié){的培養(yǎng)基(以下也記作“主發(fā)酵用培養(yǎng)基-1”)中進行發(fā)酵，由此制備發(fā)酵物(步驟(3))。主發(fā)酵用培養(yǎng)基-1為含有大豆粉末及豆?jié){中至少一種的培養(yǎng)基，以雌馬酚產(chǎn)生微生物可以生長且允許作為食品成分為限，沒有特別限定。含有被用作主發(fā)酵用培養(yǎng)基-1的大豆粉末的培養(yǎng)基，具體而言可以舉出含有大豆粉末的水溶液。主發(fā)酵用培養(yǎng)基-ι中使用的大豆粉末，從使味道和口感良好、進而抑制大豆氣味的觀點考慮，優(yōu)選使用實施了利用蒸煮或煮沸的加熱處理的大豆粉末。作為如上所述實施了加熱處理的大豆粉末，具體而言，可以舉出將在65 105°C下蒸煮或煮沸30 秒 30分鐘后的大豆進行粉末化所得的大豆粉末。對于大豆粉末的平均粒徑，沒有特別限定，但一般來說，從使制備的發(fā)酵物具備良好的口感的觀點考慮，優(yōu)選中值粒徑約為50 μ m 左右以下。另外，優(yōu)選粒徑150μπι以上的粒子為10%以下。需要說明的是，上述粒徑使用激光衍射/散射式粒度分布測定裝置進行測定。使用含有大豆粉末的水溶液作為主發(fā)酵用培養(yǎng)基-1時，優(yōu)選向水中添加大豆粉末，使用均化器等進行均質(zhì)化處理。通過如上所述進行均質(zhì)化處理，可以賦予制備的發(fā)酵物優(yōu)異的口感，特別是賦予潤滑的口感。另外，使用含有大豆粉末的水溶液作為主發(fā)酵培養(yǎng)基-1時，對于該水溶液中的大豆粉末的配合比例沒有特別限定，例如，可以舉出大豆粉末換算成干燥重量時為3 觀重量％，優(yōu)選為5 觀重量％，更優(yōu)選為7 17重量％。使用含有豆?jié){的培養(yǎng)基作為主發(fā)酵用培養(yǎng)基-1時，可以直接使用豆?jié){作為主發(fā)酵用培養(yǎng)基-1。豆?jié){的制備方法在該技術(shù)領域是公知的。具體而言，豆?jié){可以如下制備 將脫皮的原料大豆磨碎，將其加入水中進行濕式粉碎，由此制備懸浮液(生豆；豆汁)，根據(jù)需要對該懸浮液進行加熱處理后，通過固液分離處理除去固體成分(豆渣)。另外，主發(fā)酵用培養(yǎng)基-1也可以在上述的組成中進一步含有其他添加成分。由于主發(fā)酵用培養(yǎng)基-1的組成對制備的發(fā)酵物的味道和口感有影響，所以配合的其他添加成分可以根據(jù)制備目標發(fā)酵物的種類適當確定。作為主發(fā)酵用培養(yǎng)基-1中配合的添加成分， 例如可以舉出蔗糖、三氯蔗糖、甜菊等甜味劑；咖啡提取物、紅茶提取物等調(diào)味劑；香料；果汁、水果片、蔬菜汁、蔬菜片等植物來源成分；葡糖酸等酸化劑；鈉、鉀、鈣、鋅、鐵等金屬；抗壞血酸等維生素類等。由于在本步驟(3)的發(fā)酵中沒有必要抑制PH的降低，所以主發(fā)酵用培養(yǎng)基-1中可以含有包括被雌馬酚產(chǎn)生微生物同化的糖類(蔗糖、葡萄糖等)等在內(nèi)的甜味劑和植物來源成分。主發(fā)酵用培養(yǎng)基-1通過混合規(guī)定量的成分、根據(jù)需要使其乳化、然后進行殺菌處理而制備。本步驟(3)中的發(fā)酵，可以向主發(fā)酵用培養(yǎng)基-1中添加例如0. 5 10容量％左右、優(yōu)選1 5容量％左右的上述步驟( 中得到的生產(chǎn)用發(fā)酵劑-1，在該微生物可以生長的溫度區(qū)域、優(yōu)選在該微生物的最佳溫度區(qū)域內(nèi)攪拌或靜置10 觀小時，優(yōu)選14 M小時。更具體而言，使用乳酸菌作為雌馬酚產(chǎn)生微生物時，可以在35 39°C下發(fā)酵14 M小時。本步驟(3)中的主發(fā)酵可以在需氧或厭氧中的任一氣氛下進行，但從制備成本的降低、操作簡便性等觀點考慮，優(yōu)選在需氧氣氛下進行。另外，在本步驟(3)的發(fā)酵中，沒有必要特別控制發(fā)酵中的pH。通常認為隨著本步驟⑶中發(fā)酵的進行，發(fā)酵物中的PH有降低到約5.0以下的傾向。雌馬酚產(chǎn)生微生物通常在需氧氣氛及pH約5.0以下喪失雌馬酚產(chǎn)生能力的傾向增強，但根據(jù)本第1法的制備方法，使用通過上述步驟(1)及( 制備的生產(chǎn)用發(fā)酵劑-1 進行最后階段的發(fā)酵，由此可以制備以活菌的狀態(tài)含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的雌馬酚產(chǎn)生微生物的發(fā)酵物。使用含有大豆粉末的培養(yǎng)基作為主發(fā)酵用培養(yǎng)基-1時，作為發(fā)酵物最終得到了用作飲料和食品的發(fā)酵大豆。另外，使用含有豆?jié){的培養(yǎng)基作為主發(fā)酵用培養(yǎng)基-1時，作為發(fā)酵物最終得到了用作飲料和食品的發(fā)酵豆?jié){。本第1法的制備方法適用于制備發(fā)酵大豆飲料和食品，即，制造使含有大豆粉末的培養(yǎng)基發(fā)酵所得的發(fā)酵物。如上所述得到的發(fā)酵物以活菌的形式含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的雌馬酚產(chǎn)生微生物。2.發(fā)酵物的制備方法(第2法)本第2法的發(fā)酵物的制備方法包括制備母發(fā)酵劑(以下也記作“母發(fā)酵劑_2”) 的步驟(I)和使用母發(fā)酵劑_2、以乳作為原料進行發(fā)酵的步驟(II)。以下，詳細說明本發(fā)明的制備方法的每個步驟。步驟(I)本發(fā)明中，首先，通過在含有黃豆苷原類的培養(yǎng)基(以下記作“母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2”)中對雌馬酚產(chǎn)生微生物進行厭氧發(fā)酵，制備母發(fā)酵劑(步驟(I))。母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2以含有黃豆苷原類、且雌馬酚產(chǎn)生微生物可以生長、并且允許作為食品成分為限，對其組成沒有特別限定，可以根據(jù)發(fā)酵物的種類適當設定。關于母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2中使用的黃豆苷原類，與上述第1法的母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1 中使用的黃豆苷原類相同，但在本第2法的制備方法中，從穩(wěn)定地維持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力的觀點考慮，優(yōu)選大豆胚軸或其提取物，特別優(yōu)選大豆胚軸的提取物。母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2中配合的上述黃豆苷原類的配合比例，與上述第1法中使用的母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1相同。另外，母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2除上述成分之外，還可以含有其他添加成分。母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2中可以配合的其他添加成分的種類及配合比例，與上述第1法中使用的母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-1相同。特別是，優(yōu)選在母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2中含有酵母提取物、酵母水解物等來自酵母的成分、乳清水解物、酪蛋白水解物等發(fā)酵促進劑。該第2法的制備方法中，來自酵母的成分、 特別是酵母提取物能夠有效地發(fā)揮穩(wěn)定地維持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力的作用。向母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2中添加酵母提取物時，作為其配合比例，可以舉出通常為0.0125 重量％以上，優(yōu)選為0.05 1重量％，更優(yōu)選為0. 1 0.2重量％。酵母提取物的濃度滿足上述范圍時，在最終制備的發(fā)酵物中，也可以長期穩(wěn)定地維持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力。
母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2有時影響最終制備的發(fā)酵物的味道，因此優(yōu)選可以舉出對發(fā)酵物的味道沒有不良影響的培養(yǎng)基，例如除上述成分之外，可以舉出含有乳及根據(jù)需要含有乳脂肪含有成分的培養(yǎng)基。母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2中配合的乳及含有乳脂肪成分的種類及配合比例，與下述的發(fā)酵用培養(yǎng)基-2相同。作為母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2的一個優(yōu)選例，可以舉出與步驟(II)中使用的主發(fā)酵用培養(yǎng)基-2的組成相同的培養(yǎng)基。母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2通過混合規(guī)定量的添加成分、根據(jù)需要使其乳化、然后進行殺菌處理來制備。在本步驟(I)中，雌馬酚產(chǎn)生微生物的厭氧發(fā)酵可以通過使用氣體容器和厭氧罐的現(xiàn)有的公知方法實施。另外，本步驟(I)中，優(yōu)選維持厭氧發(fā)酵中的PH為4. 6以上、優(yōu)選為5.0 7.0、更優(yōu)選為5. 5 6. 5。通過如上所述維持pH，可以增強本發(fā)明的效果，即，在不破壞雌馬酚產(chǎn)生能力的情況下使雌馬酚產(chǎn)生微生物增殖、并且在制備后也穩(wěn)定地維持該微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力。上述厭氧發(fā)酵中的PH的控制可以通過與上述第1法的步驟(1)同樣的方法進行。本步驟(I)中的厭氧發(fā)酵如下實施將雌馬酚產(chǎn)生微生物的種菌接種在母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2上，在該微生物可以生長的溫度區(qū)域、優(yōu)選在該微生物的最佳溫度區(qū)域下使其厭氧發(fā)酵20 觀小時，優(yōu)選22 沈小時。更具體而言，使用乳酸菌作為雌馬酚產(chǎn)生微生物時，例如可以在35 39°C下厭氧發(fā)酵22 沈小時。如上所述得到的母發(fā)酵劑-2包含雌馬酚產(chǎn)生微生物，所述雌馬酚產(chǎn)生微生物增殖且為維持雌馬酚產(chǎn)生能力的狀態(tài)。步驟(II)接著，使用上述步驟(I)中得到的母發(fā)酵劑_2，在維持pH4. 6以上的狀態(tài)下使含有上述黃豆苷原類的培養(yǎng)基(以下記作“主發(fā)酵用培養(yǎng)基_2”)發(fā)酵(以下也記作“主發(fā)酵”) (步驟(II))。本步驟(II)中，可以向主發(fā)酵用培養(yǎng)基-2中添加上述步驟(I)中得到的母發(fā)酵劑-2進行主發(fā)酵，但大量生產(chǎn)發(fā)酵乳制品時，可以使用該母發(fā)酵劑-2進一步制備生產(chǎn)用發(fā)酵劑(以下也記作“生產(chǎn)用發(fā)酵劑_2”)，將生產(chǎn)用發(fā)酵劑-2添加到主發(fā)酵用培養(yǎng)基中進行主發(fā)酵。生產(chǎn)用發(fā)酵劑-2的制備中使用的培養(yǎng)基(以下記作“生產(chǎn)用發(fā)酵劑培養(yǎng)基_2”)， 可以使用含有上述黃豆苷原類的培養(yǎng)基。如上所述，通過配合黃豆苷原類，可以在維持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力的狀態(tài)下使其增殖。生產(chǎn)用發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2中配合的上述黃豆苷原類的種類及配合比例，與上述母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2相同。另外，生產(chǎn)用發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2以含有上述黃豆苷原類、雌馬酚產(chǎn)生微生物可以生長、且允許作為食品成分為限，沒有特別限定，可以根據(jù)發(fā)酵物的種類適當設定。生產(chǎn)用發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2中，對于除上述黃豆苷原類之外可以配合的添加成分的種類及配合比例，與上述母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2相同。需要說明的是，為了穩(wěn)定地維持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力，生產(chǎn)用發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2中也優(yōu)選含有來自酵母的成分、特別是酵母提取物。另外，生產(chǎn)用發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2有時對發(fā)酵物的味道有影響，因此優(yōu)選含有乳、及根據(jù)需要含有的乳脂肪含有成分。
作為生產(chǎn)用發(fā)酵劑培養(yǎng)基_2，優(yōu)選舉出對發(fā)酵物的味道沒有不良影響的培養(yǎng)基， 更優(yōu)選舉出與主發(fā)酵用培養(yǎng)基-2的組成相同的培養(yǎng)基。生產(chǎn)用發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2通過混合規(guī)定量的配合成分、根據(jù)需要使其乳化、然后進行殺菌處理而制備。為了制備生產(chǎn)用發(fā)酵劑_2，可以向生產(chǎn)用發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2中添加例如約為1 10容量％、優(yōu)選約為1 5容量％的上述步驟(I)中得到的母發(fā)酵劑_2，在該微生物的可生長的溫度區(qū)域、優(yōu)選在該微生物的最佳溫度區(qū)域內(nèi)使其發(fā)酵20 觀小時，優(yōu)選22 沈小時。更具體而言，使用乳酸菌作為雌馬酚產(chǎn)生微生物時，例如在35 39°C下發(fā)酵22 26小時。生產(chǎn)用發(fā)酵劑-2的制備中，發(fā)酵可以在需氧或厭氧中的任一氣氛下進行，但從制備成本的減少、操作簡便性等觀點考慮，優(yōu)選在需氧氣氛下進行。另外，在生產(chǎn)用發(fā)酵劑-2的制備中，對于發(fā)酵中的PH沒有特別限定，但例如優(yōu)選維持為PH4. 6以上，優(yōu)選為5. 0 7. 0，更優(yōu)選為5. 5 6. 5。通過如上所述維持pH，可以在不破壞雌馬酚產(chǎn)生能力的情況下使雌馬酚產(chǎn)生微生物增殖。上述發(fā)酵中的PH控制，可以利用與上述步驟(I)同樣的方法進行。生產(chǎn)用發(fā)酵劑-2可以直接供給到接下來的主發(fā)酵中，根據(jù)需要，也可以使用生產(chǎn)用發(fā)酵劑-2作為發(fā)酵劑(1次生產(chǎn)用發(fā)酵劑)，在與制備生產(chǎn)用發(fā)酵劑-2時的條件相同的條件下再次實施發(fā)酵，制備2次生產(chǎn)用發(fā)酵劑，將該2次生產(chǎn)用發(fā)酵劑供給到接下來的主發(fā)酵中。本步驟(II)中使用的主發(fā)酵用培養(yǎng)基-2以含有上述黃豆苷原類及乳、雌馬酚產(chǎn)生微生物可以生長、且允許作為食品成分為限，沒有特別的限定。主發(fā)酵用培養(yǎng)基-2使用的黃豆苷原類與上述第1法的母發(fā)酵劑用培養(yǎng)基-1中使用的黃豆苷原類相同，但該第2法的制備方法中，從穩(wěn)定地維持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力的觀點考慮，優(yōu)選為大豆胚軸或其提取物，特別優(yōu)選為大豆胚軸的提取物。主發(fā)酵用培養(yǎng)基-2中配合的上述黃豆苷原類的配合比例與上述母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2相同。另外，作為主發(fā)酵用培養(yǎng)基-2中使用的乳，只要是允許作為食品的乳即可，例如可以舉出牛奶、山羊奶、羊奶等動物奶；脫脂奶；將脫脂奶粉或全奶粉溶解所得的復原乳寸。另外，主發(fā)酵用培養(yǎng)基-2中，為了改善制備的發(fā)酵物的味道，主發(fā)酵用培養(yǎng)基-2 中可以含有新鮮奶油、黃油等乳脂肪含有成分。作為上述乳脂肪含有成分的配合比例，換算成乳脂肪的量，可以舉出通常為0. 1 4. 5重量％，優(yōu)選為0. 5 4. 2重量％，更優(yōu)選為 1. 0 3. 5重量％。另外，主發(fā)酵用培養(yǎng)基-2中，除上述成分之外可以配合的添加成分的種類及配合比例與上述母發(fā)酵劑培養(yǎng)基-2相同。需要說明的是，為了穩(wěn)定地維持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力，主發(fā)酵用培養(yǎng)基-2中也優(yōu)選含有來自酵母的成分，特別是酵母提取物。主發(fā)酵用培養(yǎng)基-2通過混合規(guī)定量的乳、上述黃豆苷原類、及根據(jù)需要的其他添加成分，根據(jù)需要使其乳化，然后進行殺菌處理而制備。本步驟(II)中的主發(fā)酵可以如下進行向主發(fā)酵用培養(yǎng)基-2中添加例如約1 10容量％、優(yōu)選約1 5容量％上述步驟(I)中得到的母發(fā)酵劑-2或上述生產(chǎn)用發(fā)酵劑_2，在該微生物可以生長的溫度區(qū)域、優(yōu)選在該微生物的最佳溫度區(qū)域內(nèi)攪拌或靜置 20 28小時、優(yōu)選為22 沈小時。更具體而言，使用乳酸菌作為雌馬酚產(chǎn)生微生物時，可以在；35 39°C下發(fā)酵22 洸小時。本步驟(II)中的主發(fā)酵可以在需氧或厭氧中的任一氣氛下進行，但從制備成本的減少、操作簡便性等觀點考慮，優(yōu)選在需氧氣氛下進行。另外，在本步驟(II)中的主發(fā)酵中，維持發(fā)酵中的pH為4. 6以上，優(yōu)選為5.0 7. 0，更優(yōu)選為5. 5 6. 5。通過如上所述維持pH，可以在不破壞雌馬酚產(chǎn)生能力的情況下使雌馬酚產(chǎn)生微生物增殖，且制備后也能夠穩(wěn)定地維持該微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力。上述發(fā)酵中的PH的控制可以通過與上述步驟(I)相同的方法進行。本第2法的制備方法中，制備發(fā)酵乳作為發(fā)酵物。在該發(fā)酵物中以不喪失雌馬酚產(chǎn)生能力的活菌狀態(tài)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物。3.發(fā)酵制品進而，本發(fā)明提供一種含有使用上述第1法及第2法得到的發(fā)酵物的發(fā)酵制品。 即，使用上述第1法及第2法得到的發(fā)酵物，可以直接或根據(jù)需要配合下述的添加成分并作為發(fā)酵制品被提供，所述添加成分例如為蔗糖、三氯蔗糖、甜菊等甜味劑；咖啡提取物、紅茶提取物等調(diào)味劑；香料；大豆粉末、大豆片、果汁、水果片、蔬菜汁、蔬菜片等來自植物的成分；鈉、鉀、鈣、鋅、鐵等金屬；抗壞血酸等維生素；膠凝劑；葡糖酸等穩(wěn)定劑；水等稀釋劑等。 特別優(yōu)選提供上述第1法中得到的發(fā)酵物作為與含有大豆粉末的水溶液混合所得的發(fā)酵制品。在主發(fā)酵制品中，對于利用上述第1法及第2法得到的發(fā)酵物的配合比例沒有特別限定，可以舉出例如為5 100重量％，優(yōu)選為10 100重量％。對于主發(fā)酵制品的PH沒有特別限定。例如，重視長期穩(wěn)定地維持發(fā)酵制品中的雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力時，優(yōu)選將PH調(diào)節(jié)為4. 6以上，優(yōu)選為5. 0 7. 0，更優(yōu)選為5. 5 6. 5。另一方面，由于擔心在中性區(qū)域中雜菌繁殖而重視抑制雜菌繁殖時，優(yōu)選將PH調(diào)節(jié)為5. 0以下，優(yōu)選為4. 0 4. 8，更優(yōu)選為4. 2 4. 6。主發(fā)酵制品的形態(tài)根據(jù)制備時使用的主發(fā)酵培養(yǎng)基的種類、采用上述第1法或第 2法得到的發(fā)酵物的種類、發(fā)酵物中配合的添加成分的種類等確定，可以為液態(tài)、半固態(tài)、固態(tài)、凝膠狀中的任一種。作為主發(fā)酵制品形態(tài)的優(yōu)選例，可以舉出發(fā)酵大豆飲料和食品、發(fā)酵豆?jié){飲料和食品、發(fā)酵乳等。此處，發(fā)酵乳中包括酸奶(硬型、軟型、飲料型)、乳酸菌飲料寸。由于主發(fā)酵制品中以活菌的狀態(tài)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物，因此優(yōu)選在低溫下流通、銷售。由于主發(fā)酵制品以活菌的狀態(tài)含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的雌馬酚產(chǎn)生微生物， 所以能夠?qū)崿F(xiàn)基于該微生物的各種生理活性和藥理活性。因此，除一般的飲料和食品之外， 主發(fā)酵制品還能夠用作特定保健用飲料和食品、營養(yǎng)補充飲料和食品、功能性飲料和食品、 病人用飲料和食品等。例如，主發(fā)酵制品被攝取，在腸內(nèi)可以通過雌馬酚產(chǎn)生微生物的作用生成雌馬酚， 可以有效地享有基于雌馬酚的生理活性，因此在以下的用途中有用例如更年期障礙、骨質(zhì)疏松癥、前列腺增生、代謝癥候群等疾病和癥狀的預防或改善、血中膽固醇值的降低、美白、 痤瘡的改善、調(diào)整腸道、改善肥胖及利尿等。其中，主發(fā)酵制品對中老年女性中的癥狀不定的自訴或絕經(jīng)伴有的癥狀(例如骨質(zhì)疏松癥、更年期障礙等)的預防或改善特別有用。主發(fā)酵乳制品的每日的攝取量根據(jù)主發(fā)酵乳制品中的雌馬酚產(chǎn)生微生物的菌數(shù)、 攝取者的年齡和體重、攝取次數(shù)等而不同，例如，作為成人每1日的攝取量，可以舉出相當于主發(fā)酵制品10 500g的量。4.含有雌馬酚產(chǎn)牛微牛物的組合物通過向以活菌的狀態(tài)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物中添加選自抗壞血酸、其衍生物、及它們的鹽中的至少1種，在低PH條件或需氧保存條件下也可以穩(wěn)定地保持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力，即使長期保存，也可以抑制該組合物中雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力的喪失。因此，本發(fā)明進而提供了一種含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物 (以下有時也簡單記作“本組合物”)，所述組合物含有活菌狀態(tài)的雌馬酚產(chǎn)生微生物(以下有時也簡單記作“(A)成分”)以及選自抗壞血酸、其衍生物及它們的鹽中的至少1種(以下有時也簡單記作“ (B)成分”)。本組合物中，作為雌馬酚產(chǎn)生微生物，可以使用分離或粗精制的雌馬酚產(chǎn)生微生物的活菌，或者也可以使用利用雌馬酚產(chǎn)生微生物使其發(fā)酵所得的發(fā)酵物。本組合物中含有的雌馬酚產(chǎn)生微生物的濃度沒有特別限定，作為一個例子可以舉出為 IX IO5 101QCFU/g，優(yōu)選為 1父106 10"^"8，更優(yōu)選為 IXlO7- 1010CFU/go為了穩(wěn)定地保持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力，在本組合物中配合(B)成分。(B)成分中，關于抗壞血酸的衍生物沒有特別的限定，只要為通過酯鍵或醚鍵鍵合有取代基、且允許作為食品成分的衍生物即可，作為具體例，可以舉出抗壞血酸-2，6-二棕櫚酸酯、抗壞血酸-6-硬脂酸酯、抗壞血酸-2-磷酸酯、抗壞血酸-2-硫酸酯、抗壞血酸-2-葡糖苷、抗壞血酸葡糖胺、抗壞血酸-6-棕櫚酸酯、L-抗壞血酸四異棕櫚酸酯、抗壞血酸四2-己基癸酸酯等。另外，作為抗壞血酸及它的衍生物的鹽沒有特別限定，只要允許作為食品成分即可，例如可以舉出鈉等堿金屬鹽。(B)成分中，作為優(yōu)選例可以舉出抗壞血酸及其鹽。本組合物中，(B)成分可以單獨使用1種，也可以組合2種以上進行使用。作為本組合物中的上述⑶成分的配合比例，可以舉出通常為0. 05 5重量％， 優(yōu)選為0. 05 2重量％，更優(yōu)選為0. 1 2. 0重量％。通過滿足上述的配合比例，可以穩(wěn)定地保持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力。關于本組合物的pH沒有特別限定，可以根據(jù)本組合物的種類等適當設定。從抑制本組合物中雜菌繁殖的觀點考慮，優(yōu)選將PH調(diào)節(jié)為5. 0以下，優(yōu)選為4. 0 4. 8，更優(yōu)選為 4. 2 4. 6是理想的。通常，雌馬酚產(chǎn)生微生物在pH5. 0以下的環(huán)境下，喪失雌馬酚產(chǎn)生能力的傾向變強，不能穩(wěn)定地維持雌馬酚產(chǎn)生能力，但根據(jù)本組合物，通過抗壞血酸及/或其衍生物的作用，即使在PH5.0以下的條件下，也可以穩(wěn)定地維持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力。本組合物中，根據(jù)需要可以含有下述添加成分蔗糖、三氯蔗糖、甜菊等甜味劑； 咖啡提取物、紅茶提取物等調(diào)味劑；香料；果汁、水果片、蔬菜汁、蔬菜片等來自植物的成分；鈉、鉀、鈣、鋅、鐵等金屬；胡蘿卜素等維生素；膠凝劑；葡糖酸等穩(wěn)定劑；水等稀釋劑等。此處，為了不損害保存穩(wěn)定性，本組合物中配合的添加成分優(yōu)選為不被雌馬酚產(chǎn)生微生物同化的物質(zhì)。關于本組合物的形態(tài)也沒有特別限制，可以為液態(tài)、半固態(tài)、固態(tài)、凝膠狀等中的任一種。作為本組合物的優(yōu)選形態(tài)，可以舉出在利用雌馬酚產(chǎn)生微生物進行發(fā)酵所得的發(fā)酵物中配合抗壞血酸及/或其衍生物、并且根據(jù)需要配合了其他添加成分所得的發(fā)酵制品。此處，作為利用雌馬酚產(chǎn)生微生物進行發(fā)酵所得的發(fā)酵物，可以優(yōu)選舉出通過上述第1 法及第2法制備的發(fā)酵物。另外，作為該發(fā)酵制品，具體而言，可以舉出發(fā)酵大豆飲料和食品、發(fā)酵豆?jié){飲料和食品、發(fā)酵乳等。此處，發(fā)酵乳中包括酸奶(硬型、軟型、飲料型)、乳酸菌飲料等。上述的發(fā)酵制品中，可以優(yōu)選舉出發(fā)酵大豆飲料和食品及發(fā)酵豆?jié){飲料和食品， 更優(yōu)選舉出發(fā)酵大豆飲料和食品。另外，作為本組合物的其他優(yōu)選形態(tài)，可以舉出含有分離或粗精制的雌馬酚產(chǎn)生微生物的活菌、抗壞血酸及/或其衍生物、可食用載體及根據(jù)需要添加的其他添加成分的組合物。此處，作為可食用的載體，例如可以舉出含有大豆粉末的水溶液、豆?jié){、水、可食用凝膠、乳、各種鹽溶液等。由于本組合物中以活菌的狀態(tài)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物，所以優(yōu)選在低溫下流通、銷售。由于本組合物以作為活菌且維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的狀態(tài)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物，所以可以實現(xiàn)基于該微生物的各種生理活性和藥理活性。因此，本組合物可以在藥物或飲料和食品的領域中使用。在飲料和食品領域中使用本組合物時，除一般的飲料和食品之外，本組合物還可以作為特定保健用飲料和食品、營養(yǎng)補充飲料和食品、功能性飲料和食品、病人用飲料和食品等被提供。例如，本組合物被攝取，可以在腸內(nèi)通過雌馬酚產(chǎn)生微生物的作用生成雌馬酚，可以使人們有效地享受基于雌馬酚的生理活性和藥理活性，因此在藥物或飲料和食品的領域中，優(yōu)選用于尋求享受雌馬酚作用的人。具體而言，本組合物在下述用途中有用例如更年期障礙、骨質(zhì)疏松癥、前列腺增生、代謝癥候群等疾病和癥狀的預防或改善；血中膽固醇值的降低；美白；痤瘡的改善；調(diào)整腸道；改善肥胖及利尿等。其中，本組合物對中老年女性中的癥狀不定的自訴或絕經(jīng)伴有的癥狀(例如骨質(zhì)疏松癥、更年期障礙等)的預防或改善特別有用。關于本組合物的每1日的攝取量，根據(jù)本組合物中的雌馬酚產(chǎn)生微生物的菌數(shù)、 攝取者的年齡或體重、攝取次數(shù)等而不同，例如作為成人每1日的攝取量，可以舉出相當于本組合物10 500g的量。另外，如上所述，通過向以活菌的狀態(tài)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物中添加上述(B)，可以穩(wěn)定地保持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力，即使長期保存，也能夠抑制雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力的喪失。因此，本發(fā)明進而也提供了維持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力的方法，其特征在于，向含有活菌狀態(tài)的雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物中添加選自抗壞血酸、其衍生物及它們的鹽中的至少1種。雌馬酚產(chǎn)生能力可以按照下述的實施例中記載的方法測定。對于該保存穩(wěn)定化方法的具體實施方式
，可以引用上述關于含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物所記載的內(nèi)容。實施例
以下，基于實施例等詳細地說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不限定于所述的實施例。以下的實施例及比較例中使用的大豆粉末通過以下方法制備。大豆粉末溶液的制備剝皮，平均分成兩份，然后對脫皮大豆進行蒸煮處理。蒸煮處理是向脫皮大豆連續(xù)供給蒸汽直到達到100°c的溫度，從達到100°C的時刻開始在100°C下保持140秒鐘。接下來，將蒸煮處理后的大豆通過輥碾機的輥之間，成為薄片狀。之后，在80°c下對薄片狀的大豆進行熱風干燥，將其干燥至水分含量為3 6%左右，用風動磨頭將其粉碎，由此得到大豆粉末。進行采用風動磨頭的粉碎，使直徑150 μ m以上的粉碎粒子為10%以下。接著，向溶解了適量的碳酸氫鈉及檸檬酸三鈉的水中添加規(guī)定量的上述得到的大豆粉末，使其分散溶解，膨潤15分鐘以上。接著，在95°C下加熱所得溶液10分鐘，提取大豆粉末中的水溶性成分，進而使大豆粉末中含有的L0X、胰蛋白酶抑制劑等酶失活。加熱后，保持80°C以上的溫度并添加適量的檸檬酸，使pH回到中性。之后，使用均質(zhì)機(GAULIN公司制LAB40)，在200-1000kgf/cm2范圍的條件下進行均質(zhì)化處理，由此制備大豆粉末溶液(換算成干燥重量則含有14重量％的大豆粉末)。實施例1 利用第1法的發(fā)酵大豆食品的制備及發(fā)酵大豆食品的評價1.發(fā)酵大豆食品的制備使用具有雌馬酚產(chǎn)生能力的格氏乳球菌(乳球菌20-92株，F(xiàn)ERM BP-10036號)， 在以下的條件下，進行母發(fā)酵劑的制備、生產(chǎn)用發(fā)酵劑的制備、主發(fā)酵、及向容器中的填充?！茨赴l(fā)酵劑的制備〉對IOOml含有80重量％大豆粉末溶液(以干燥重量計含有14%大豆粉末)、0. 1 重量％葡萄糖、0.1重量％ L-精氨酸、余量為精制水的溶液(pH 7.48)進行高壓釜殺菌 (121°C，15分鐘)，制備母發(fā)酵劑培養(yǎng)基。在該發(fā)酵劑培養(yǎng)基中接種乳球菌20-92株的種菌， 使用feis Pack在37°C下進行厭氧培養(yǎng)96小時，由此制備母發(fā)酵劑(pH6. 64)?！瓷a(chǎn)用發(fā)酵劑的制備〉對5L含有80重量％大豆粉末溶液(以干燥重量計含有14%的大豆粉末)、0. 1 重量％葡萄糖、0.1重量％ L-精氨酸、余量為精制水的溶液(pH 7.48)進行高壓釜殺菌 (121°C，15分鐘)，制備生產(chǎn)用發(fā)酵劑培養(yǎng)基。在該發(fā)酵劑培養(yǎng)基中接種上述得到的母發(fā)酵劑并使其為1容量％，在37°C、需氧條件下進行靜置培養(yǎng)15小時，由此得到生產(chǎn)用發(fā)酵劑 (ρΗ6· 72)?！粗靼l(fā)酵〉在95°C下，使用雙管式殺菌機，對200L含有50重量％大豆粉末溶液(以干燥重量計含有14%的大豆粉末)、6重量％胡蘿卜汁(宮崎縣農(nóng)協(xié)果汁)、6重量％南瓜糊(長野三洋食品)、余量為精制水的溶液(PH 6. 78)殺菌30秒鐘，制備主發(fā)酵用培養(yǎng)基。在殺菌后回收的主發(fā)酵用培養(yǎng)基中接種4L上述得到的生產(chǎn)用發(fā)酵劑，在37°C、需氧條件下進行靜置培養(yǎng)15小時，由此得到發(fā)酵大豆液(ρΗ4· 56)。<副原料混合、向容器中的填充>在95°C下，使用雙管式殺菌機，對800L含有65重量％大豆粉末溶液(以干燥重量計含有14%的大豆粉末)、7. 4重量％砂糖、1. 0重量％膠凝劑制劑TO25M(新田明膠制)、 0. 8重量％葡糖酸、0. 4重量％香料、0. 1重量％ L-抗壞血酸、余量為精制水的溶液進行殺菌30秒鐘，得到副原料溶液。在37 40°C下，將80重量份上述副原料溶液和20重量份上述得到的發(fā)酵大豆液混合。維持混合液的溫度，向聚乙烯杯(總?cè)萘?30ml、口徑71mm)中無菌地填充IOOg溶液，用鋁蓋密封。將填充物放入5°C的冰箱中，使其冷卻固化，得到含有格氏乳球菌活菌的發(fā)酵大豆食品。2.各種評價將上述得到的放入容器的發(fā)酵大豆食品在10°C下保存3周。在剛制備后、1周后、 2周后及3周后測定發(fā)酵大豆食品的pH，進而采用以下的方法評價發(fā)酵大豆食品中含有的格氏乳球菌的菌數(shù)及發(fā)酵大豆食品中含有的格氏乳球菌有無雌馬酚產(chǎn)生能力。另外，對于上述制備的母發(fā)酵劑、生產(chǎn)用發(fā)酵劑及主發(fā)酵后的發(fā)酵物，也同樣地測定格氏乳球菌的菌數(shù)及各自中含有的格氏乳球菌的雌馬酚產(chǎn)生能力。<格氏乳球菌的菌數(shù)的測定>格氏乳球菌的活菌數(shù)的測定如下進行使用加入了 BCP的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基 (日水制藥株式會社制)在37°C下進行傾注培養(yǎng)72小時，測量生長的菌落數(shù)。<格氏乳球菌的雌馬酚產(chǎn)生能力有無的測定>向5ml以10μ g/ml的濃度含有黃豆苷原的改良GAM肉湯(日水制藥株式會社制) 中添加200μ 1發(fā)酵大豆食品，用氣體容器在37°C下進行厭氧培養(yǎng)96小時。接著，將得到的培養(yǎng)液進行HPLC分析，對培養(yǎng)液中的雌馬酚量進行定量。利用HPLC的分析如下實施。首先，向5. Oml乙酸乙酯中加入0. 5ml培養(yǎng)液進行浸透提取，將得到的提取液在3000rpm下離心10分鐘，利用離心蒸發(fā)器來蒸發(fā)上清液，從而對溶劑進行減壓干燥。接下來，將得到的固體用1. Oml溶劑(流動相A/流動相B = 50/50)再溶解，用作HPLC的樣品。HPLC的分析使用D7000系列(日立制作所制)，色譜柱使用CapcellPack UGL205 μ m4. 6Φ X250mm(資生堂制)。對于流動相，使用以8 2的比例混合有0.05%磷酸緩沖液(含有EDTA)和乙酸乙酯-甲醇(1 10)所得的溶液作為流動相A，以含有2%乙酸乙酯的甲醇作為流動相 B。使用梯度法，設定流速為1.0ml/分鐘。使用SPD-10AVP UV-VIS檢測器檢測，檢測波長為 254nm 和 ^Onm。<格氏乳球菌的菌數(shù)及雌馬酚產(chǎn)生能力的測定結(jié)果>結(jié)果示于表1。該結(jié)果表明如果母發(fā)酵劑、生產(chǎn)用發(fā)酵劑的pH為5以上，則即使主發(fā)酵后的發(fā)酵物、發(fā)酵大豆食品的pH為4. 6以下，也能夠制備含有保持了雌馬酚產(chǎn)生能力的格氏乳球菌的發(fā)酵大豆食品。需要說明的是，也確認了發(fā)酵大豆食品中的格氏乳球菌的菌數(shù)本身很少受到PH或雌馬酚產(chǎn)生能力的影響，可以長期保持恒定。[表1]
權(quán)利要求
1.一種發(fā)酵物的制備方法，包括以下步驟步驟(1)，在含有選自黃豆苷原糖苷、黃豆苷原及二氫黃豆苷原中的至少1種黃豆苷原類的培養(yǎng)基中，使用雌馬酚產(chǎn)生微生物，在維持PH5. 0以上的狀態(tài)下進行厭氧發(fā)酵，由此制備母發(fā)酵劑；步驟0)，使用所述步驟(1)中所得的母發(fā)酵劑，在含有所述黃豆苷原類的培養(yǎng)基中， 在維持pH5. O以上的狀態(tài)下進行發(fā)酵，由此制備生產(chǎn)用發(fā)酵劑；及步驟(3)，使用所述步驟O)中所得的生產(chǎn)用發(fā)酵劑，在含有大豆粉末及/或豆?jié){的培養(yǎng)基中進行發(fā)酵，由此得到發(fā)酵物。
2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其中，雌馬酚產(chǎn)生微生物為乳酸菌。
3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其中，雌馬酚產(chǎn)生微生物為格氏乳球菌。
4.一種發(fā)酵物的制備方法，包括以下步驟步驟(I)，在含有選自黃豆苷原糖苷、黃豆苷原及二氫黃豆苷原中的至少1種黃豆苷原類的培養(yǎng)基中，使用雌馬酚產(chǎn)生微生物進行厭氧發(fā)酵，由此制備母發(fā)酵劑，及步驟(II)，使用所述步驟(I)中得到的母發(fā)酵劑，在含有所述黃豆苷原類及乳的培養(yǎng)基中，在維持PH4. 6以上的狀態(tài)下進行發(fā)酵，由此得到發(fā)酵物。
5.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其中，使用大豆胚軸提取物作為黃豆苷原類。
6.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其中，所述步驟(I)及(II)中使用的培養(yǎng)基還含有酵母提取物。
7.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其中，雌馬酚產(chǎn)生微生物為乳酸菌。
8.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其中，雌馬酚產(chǎn)生微生物為格氏乳球菌。
9.一種發(fā)酵制品，含有通過權(quán)利要求1 3中任一項所述的制備方法得到的發(fā)酵物。
10.一種發(fā)酵制品，含有通過權(quán)利要求4 8中任一項所述的制備方法得到的發(fā)酵物。
11.如權(quán)利要求10所述的發(fā)酵制品，其中，pH為4.6以上。
12.—種含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物，含有(A)活菌狀態(tài)的雌馬酚產(chǎn)生微生物、及 (B)選自抗壞血酸、其衍生物、及它們的鹽中的至少1種。
13.如權(quán)利要求12所述的組合物，其中，以0.05 5重量％的配合比例含有所述(B) 成分。
14.如權(quán)利要求12所述的組合物，其中，pH為5.0以下。
15.如權(quán)利要求12所述的組合物，含有使用雌馬酚產(chǎn)生微生物進行發(fā)酵所得的發(fā)酵物作為活菌狀態(tài)的雌馬酚產(chǎn)生微生物。
16.如權(quán)利要求12所述的組合物，其中，所述組合物為發(fā)酵大豆飲料或發(fā)酵豆?jié){。
17.如權(quán)利要求12所述的組合物，其中，雌馬酚產(chǎn)生微生物為乳酸菌。
18.如權(quán)利要求12所述的組合物，其中，雌馬酚產(chǎn)生微生物為格氏乳球菌。
19.一種維持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力的方法，其特征在于，向含有活菌狀態(tài)的雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物中添加選自抗壞血酸、其衍生物、及它們的鹽中的至少全文摘要
本發(fā)明的目的在于提供一種以活菌的狀態(tài)含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的雌馬酚產(chǎn)生微生物的發(fā)酵制品。使用雌馬酚產(chǎn)生微生物，以大豆粉末或豆?jié){作為原料制備發(fā)酵物時，通過以下步驟可以制備以活菌的狀態(tài)含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的微生物的發(fā)酵物(1)使用雌馬酚產(chǎn)生微生物，在黃豆苷原類的存在下、pH5.0以上、厭氧條件下進行發(fā)酵，由此制備母發(fā)酵劑；(2)使用上述母發(fā)酵劑，在黃豆苷原類的存在下、pH5.0以上進行發(fā)酵，由此制備生產(chǎn)用發(fā)酵劑；(3)使用上述生產(chǎn)用發(fā)酵劑，在含有大豆粉末或豆?jié){的培養(yǎng)基中發(fā)酵制備發(fā)酵物。
文檔編號A23C9/123GK102159092SQ200980136848
公開日2011年8月17日 申請日期2009年9月18日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月19日
發(fā)明者上野友美, 久米村惠, 內(nèi)山成人, 森久子, 磯野義員, 遠藤理惠子, 阿比留康弘 申請人:大塚制藥株式會社, 大塚食品株式會社