專利名稱：：一種光敏殺蟲劑的生物測定方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及生物測定方法，具體是一種光敏殺蟲劑對農(nóng)業(yè)害蟲觸殺毒性的生物測定方法。
背景技術：
：目前控制農(nóng)業(yè)害蟲危害的主要手段仍然是采用化學殺蟲劑防治，尤其是對于蟲口密度較大的重要危害區(qū)的應急防治更是如此。化學防治雖然具有快速、高效、使用方便等優(yōu)點，但是大范圍長期使用化學農(nóng)藥，已導致農(nóng)業(yè)害蟲產(chǎn)生抗藥性，使化學農(nóng)藥的防治效能降低，加重農(nóng)藥污染等一系列問題。光敏殺蟲劑是一種高效、低毒、廉價、無污染的新型殺蟲劑，因而被認為是一種應用領域廣闊、極具發(fā)展前途的無公害綠色殺蟲劑。任何殺蟲劑投放到田間使用前必須經(jīng)過室內(nèi)的篩選過程，因此探索出簡便實用有效的生物測定方法就成為殺蟲劑防治的基礎。李明等(李明，陳志龍，王建國.卟吩類化合物對果腹果蠅的光活化毒力，中國公共衛(wèi)生，2004，20(9):1027-1028)采用喂食法對果腹果蠅進行了卟吩類光敏殺蟲劑的毒力測定。但果腹果蠅體積較小，對于較大體積的害蟲應該采用何種方法進行光敏殺蟲劑的毒力測定，還應根據(jù)試蟲的特點確定；YINKun等2008年(YINKun，MAEn-bo，XUECh皿-rong，WUHai-hua，GUOYa-ping，ZHANGJian-zhen.InsecticidalActivitiesof5—AminolevulinicAcidonOxyachinensisandEffectonThreeKindsofEnzymes,ScientlaAgriculturaSinica，2008，41(7):2003-2007)采用注射法研究了ALA光敏殺蟲劑對中華稻蝗的毒殺效應，獲得LDs。值為3.61mg/g。該方法不是測定ALA毒性的最適方法，未能真實地測出ALA的有效活性，導致測試出來的劑量大大超過致死劑量，既浪費藥劑，還給害蟲施加了較大的選擇壓力；我們采用了點滴法、浸液法、噴霧法和傳統(tǒng)藥膜法研究了ALA對中華稻蝗的毒性，但這些方法不同濃度間無差異，而且沒有規(guī)律性，均不能準確、真實有效地評價ALA對試蟲的毒性效應，可能原因是這些生物測定法影響了ALA有效作用方式。
發(fā)明內(nèi)容針對以上缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種可較準確測定出光敏殺蟲劑對害蟲的有效劑量的生物測定方法，該方法適合較大體積的害蟲。本發(fā)明提供的一種光敏殺蟲劑的生物測定方法，包括如下步驟(1)配制4-7個不同濃度的光敏殺蟲劑溶液；(2)在4-7個直管容器中分別放置一張與內(nèi)壁面積一致的濾紙；(3)將不同濃度的光敏殺蟲劑溶液分別滴加在上述直管容器中的濾紙上直到飽和，將試蟲置入其中；(4)水平滾動直管，試蟲觸藥后，將試蟲轉(zhuǎn)移至另一容器，然后用燈光照射20min以上，測定試蟲的死亡率，確定光敏殺蟲劑對試蟲的最低有效劑量。3所述試蟲尤其適用于體積較大的害蟲，可以用鑷子或毛筆等器具移入。所述濾紙，其厚度根據(jù)殺蟲劑溶液滴加的量而定。所述直管容器為玻璃直管，其大小視被試害蟲的體積而定。所述燈光為白熾燈光源，光照強度2000-30001x。光照時確保試蟲容器溫度不得超過35°C，防止溫度過高，影響試蟲正常生長發(fā)育。所述光照射是因為光敏殺蟲劑通過滲透作用進入蟲體后，只有在光照下會表現(xiàn)出光敏性從而對害蟲造成光敏毒性。本發(fā)明采用的水平滾動使蟲體全身充分接觸藥劑而發(fā)揮觸殺作用，避免了腿部支撐力較強的害蟲不能與藥膜充分接觸。本發(fā)明采用玻璃直管，玻璃器皿對殺蟲劑溶液的吸附性小，降低濾紙中的殺蟲劑損耗，這樣能使測試出來的致死劑量數(shù)據(jù)準確。本發(fā)明可較準確測定出光敏殺蟲劑對于害蟲的最低有效劑量，尤其適合較大體積的害蟲，既能有效毒殺害蟲，又大大地減輕了藥劑浪費和對環(huán)境污染。具體實施例方式中華稻蝗是水稻產(chǎn)區(qū)的重要害蟲之一，近年來其發(fā)生頻繁，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來了嚴重為害。本發(fā)明以中華稻蝗作為試蟲，采用ALA光敏殺蟲劑對中華稻蝗進行生物測定。實施例1步驟1:用無菌水配制4個不同濃度的光敏殺蟲劑溶液，如表1，另加1個無菌水對照，配制好的藥液加進小玻璃瓶中，用記號筆標記對照和光敏殺蟲劑溶液濃度。步驟2:選用口徑周長10.5cm、高10cm的玻璃直管，按照相應的長度和寬度裁剪5張濾紙。步驟3:將厚度為lmm的濾紙巻進玻璃直管中，用移液器吸取1.5ml不同濃度的藥液分別加到4個直管中的濾紙上，旋轉(zhuǎn)玻璃直管以促進藥液迅速均勻地滲透整個濾紙，對照組加入相同量的無菌水。用鑷子將中華稻蝗置入上述玻璃直管中，用尼龍紗布封緊管口。步驟4:水平滾動直管8min，讓蟲體各部位充分均勻地粘附上藥液而發(fā)揮其觸殺作用。每個施藥容器大約取35頭試蟲，每個濃度設三個重復。觸藥后，將試蟲移進內(nèi)有新鮮麥苗的100ml燒杯中，置暗室中17『，然后用60W(光照強度約20001x)的白熾燈從燒杯頂部照射試蟲，1盞燈照4個燒杯(光源中心距燒杯垂直距離為10cm)，2h后停止光照。記錄死亡蟲數(shù)，判斷死亡標準為，用毛筆輕觸蟲體，不能爬行視為死亡。記錄相應濃度下的蟲子總數(shù)、活蟲數(shù)和死蟲數(shù)。求出毒力回歸方程和LC5。，計算各處理的中子的死亡率并應用SPSS軟件分析不同濃度之間的差異顯著性，結果見表1。a置暗室中17h原因是ALA光敏殺蟲劑是原卟啉IX合成的前體物質(zhì)，ALA通過滲透作用進入蟲體后，轉(zhuǎn)化為原卟啉IX，暗室喂養(yǎng)過稱是為了原卟啉IX在體內(nèi)富集，富集的原卟啉IX只有在光照下會表現(xiàn)出光敏性從而對害蟲造成光敏毒性。表1中華稻蝗2齡若蟲在不同濃度ALA處理下的毒性測定4<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>可以看出，采用本發(fā)明處理中華稻蝗的死亡率隨處理濃度的提高而增加，能真實反映ALA光敏殺蟲劑的實際殺蟲活性，能準確測定出藥劑對于試蟲的最低有效劑量，既能有效毒殺害蟲，又大大地減輕了藥劑浪費和農(nóng)業(yè)環(huán)境污染。權利要求一種光敏殺蟲劑的生物測定方法，其特征在于(1)配制4-7個不同濃度的光敏殺蟲劑溶液；(2)在4-7個直管容器中分別放置一張與內(nèi)壁面積一致的濾紙；(3)將不同濃度的光敏殺蟲劑溶液分別滴加在上述直管容器中的濾紙上直到飽和，將試蟲置入其中；(4)水平滾動直管，試蟲觸藥后，將試蟲轉(zhuǎn)移至另一容器，然后用燈光照射20min以上，測定試蟲的死亡率，確定光敏殺蟲劑對試蟲的最低有效劑量。2.如權利要求1所述的光敏殺蟲劑的生物測定方法，其特征在于，所述試蟲是體積較大的害蟲。3.如權利要求1所述的光敏殺蟲劑的生物測定方法，其特征在于，所述直管容器為玻璃直管。4.如權利要求1所述的光敏殺蟲劑的生物測定方法，其特征在于，所述燈光為白熾燈光，光照強度2000-30001x。全文摘要本發(fā)明涉及一種光敏殺蟲劑對農(nóng)業(yè)害蟲的生物測定方法。是在直管容器中放置一張與其內(nèi)壁面積一致的、光敏殺蟲劑處理達到飽和的濾紙，將所試害蟲置入其中，水平滾動直管，試蟲觸藥后用光照射，以測定害蟲的死亡率。本發(fā)明提供的方法適用于所有具有觸殺性光敏殺蟲劑，對體積較大的農(nóng)業(yè)害蟲均能夠進行有效的生物測定，可準確測定出藥劑對于害蟲的最低有效劑量，既能有效毒殺害蟲，又能有效地減輕藥劑浪費。文檔編號G01N33/00GK101776672SQ20091026393公開日2010年7月14日申請日期2009年12月25日優(yōu)先權日2009年12月25日發(fā)明者張建珍,楊美玲,郭亞平,陰琨,馬恩波申請人:山西大學