菜和南美洲的馬鈴薯中的重 要有害生物。
[0151] 可以通過(guò)這些具體化合物的發(fā)明的用途控制的線(xiàn)蟲(chóng)包括與農(nóng)業(yè)(該術(shù)語(yǔ)包括使 用于食物和纖維產(chǎn)品的農(nóng)作物生長(zhǎng))、園藝和畜牧、伴侶動(dòng)物、林業(yè)和蔬菜起源的產(chǎn)物儲(chǔ)存 (例如水果、谷粒和木材)關(guān)聯(lián)的那些線(xiàn)蟲(chóng);與疾病傳播(例如病毒傳播)相關(guān)聯(lián)的那些線(xiàn) 蟲(chóng)。
[0152] 根據(jù)本發(fā)明,可施用根據(jù)本發(fā)明的混合物的"有用植物"典型地包括以下植物種 類(lèi):葡萄藤;谷類(lèi)(例如小麥、大麥、黑麥或燕麥);甜菜(比如糖甜菜或飼用甜菜);水果 (比如梨果、核果或軟果,例如蘋(píng)果、梨、李子、桃、扁桃、櫻桃、草莓、覆盆子或黑莓);豆科植 物(比如蠶豆、濱豆、豌豆或大豆);油料植物(比如油菜、芥菜、罌粟、橄欖、向日葵、椰子、 蓖麻油植物、可可豆或落花生);瓜類(lèi)植物(比如嫩萌蘆、黃瓜或甜瓜);纖維植物(比如棉 花、亞麻、大麻或黃麻);柑橘類(lèi)水果(比如橙子、檸檬、葡萄柚或橘子);蔬菜(比如菠菜、萵 苣、蘆筍、卷心菜、胡蘿卜、洋蔥、番茄、馬鈴薯、萌蘆或紅辣椒);樟科(比如鱷梨、肉桂或樟 腦);玉米;煙草;堅(jiān)果;咖啡;甘蔗;茶;藤本植物;啤酒花;榴蓮;香蕉;天然橡膠樹(shù);草皮 或觀賞植物(比如花卉、灌木、闊葉樹(shù)或常綠植物例如針葉樹(shù))。該清單不代表任何限制。
[0153] 術(shù)語(yǔ)"有用植物"應(yīng)當(dāng)理解為還包括由于常規(guī)育種方法或基因工程已經(jīng)使之耐 受除草劑如溴苯腈或多種除草劑類(lèi)別(例如像HPH)抑制劑、乙酰輔酶A羧化酶(ACCase) 抑制劑、ALS抑制劑,例如氟嘧磺隆、氟磺隆和三氟啶磺隆、EPSPS (5-烯醇-丙酮酰-莽 草酸-3-磷酸-合酶)抑制劑、GS(谷氨酰胺合成酶)抑制劑)的有用植物。已經(jīng)通過(guò) 常規(guī)育種方法(突變誘發(fā))變得對(duì)咪唑啉酮例如甲氧咪草煙具有耐受性的作物的一個(gè)實(shí) 例是.Clearfield?夏季油菜(卡諾拉(Canola))。通過(guò)遺傳工程方法而被賦予了對(duì)多種除 草劑或多種除草劑類(lèi)別的耐受性的作物的實(shí)例包括草甘膦和草丁膦抗性玉米品種,它在 BLomidupReady?、Herculex :脅和Libertylink?商標(biāo)名下是可商購(gòu)的。
[0154] 術(shù)語(yǔ)"有用植物"應(yīng)當(dāng)理解為還包括已經(jīng)通過(guò)使用重組DNA技術(shù)而被這樣轉(zhuǎn)化使 其能夠合成一種或多種選擇性作用毒素的有用的植物,這些毒素如已知例如來(lái)自于產(chǎn)毒素 細(xì)菌,尤其是芽孢桿菌屬的那些細(xì)菌。
[0155] 可以由這些轉(zhuǎn)基因植物表達(dá)的毒素包括例如殺昆蟲(chóng)蛋白,例如來(lái)自蠟樣芽孢桿菌 或日本甲蟲(chóng)芽孢桿菌的殺昆蟲(chóng)蛋白;或來(lái)自蘇云金芽孢桿菌的殺昆蟲(chóng)蛋白,例如內(nèi)毒 素,例如 CrylA (b)、CrylA (c)、CrylF、CrylF (a2)、Cry2A (b)、Cry3A、Cry3B (bl)或 Cry9c,或 營(yíng)養(yǎng)期殺昆蟲(chóng)蛋白(Vip),例如Vipl、Vip2、Vip3或Vip3A ;或細(xì)菌性克隆化線(xiàn)蟲(chóng)的殺昆蟲(chóng) 蛋白,例如光桿狀菌屬或致病桿菌屬,例如發(fā)光桿菌、嗜線(xiàn)蟲(chóng)致病桿菌;由動(dòng)物產(chǎn)生的毒素, 例如蝎毒素、蜘蛛毒素、黃蜂毒素以及其他昆蟲(chóng)特異性神經(jīng)毒素;由真菌產(chǎn)生的毒素,例如 鏈霉菌毒素;植物凝血素,例如豌豆凝血素、大麥凝血素或雪花蓮凝血素;凝集素;蛋白酶 抑制劑,例如胰蛋白酶抑制劑、絲氨酸蛋白酶抑制劑、塊莖儲(chǔ)藏蛋白、胱抑素、木瓜蛋白酶抑 制劑;核糖體失活蛋白(RIP),例如蓖麻毒素、玉米-RIP、相思豆毒素、絲瓜毒素、皂草素或 異株瀉根毒蛋白;類(lèi)固醇代謝酶,例如3-羥基類(lèi)固醇氧化酶、蛻皮類(lèi)固酸-UDP-糖基-轉(zhuǎn) 移酶、膽固醇氧化酶、蛻皮激素抑制劑、HMG-C0A-還原酶、離子通道阻斷劑,例如鈉通道或鈣 通道的阻斷劑、保幼激素酯酶、利尿激素受體、芪合成酶、聯(lián)芐合成酶、幾丁質(zhì)酶以及葡聚糖 酶。
[0156] 在本發(fā)明背景下,δ -內(nèi)毒素例如 CrylAb、CrylAc、CrylF、CrylFa2、Cry2Ab、 Cry3A、Cry3Bbl 或 Cry9C,或營(yíng)養(yǎng)期殺昆蟲(chóng)蛋白(Vip),例如 Vipl、Vip2、Vip3 或 Vip3A 應(yīng) 理解為顯然還包括混合型毒素、截短的毒素和經(jīng)修飾的毒素?;旌闲投舅厥峭ㄟ^(guò)那些蛋白 的不同區(qū)域的新組合重組產(chǎn)生的(參見(jiàn),例如W0 02/15701)。截短的毒素的實(shí)例是截短的 CrylA(b),它是以如下所述,來(lái)自先正達(dá)種子公司(Syngenta Seeds SAS)的Btll玉米。在 經(jīng)修飾的毒素的情況下,天然存在的毒素的一個(gè)或多個(gè)氨基酸被置換。在這種氨基酸置換 中,優(yōu)選將非天然存在的蛋白酶識(shí)別序列插入毒素中,例如在Cry3A055的情況下,一種組 織蛋白酶-G-識(shí)別序列被插入Cry3A毒素中(參見(jiàn)W0 03/018810)
[0157] 這樣的毒素或能夠合成這樣的毒素的轉(zhuǎn)基因植物的實(shí)例披露于例如ΕΡ-Α-0 374 753、W0 93/07278、W0 95/34656、EP-A-0 427 529、EP-A-451 878 以及 TO 03/052073 中。
[0158] 用于制備這樣的轉(zhuǎn)基因植物的方法對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員是已知的并且描 述在例如以上提及的公開(kāi)物中。Cryl-型脫氧核糖核酸及其制備例如從W0 95/34656、 ΕΡ-Α-0 367 474、ΕΡ-Α-0 401 979 以及 TO 90/13651 中已知。
[0159] 包括在轉(zhuǎn)基因植物中的毒素使得植物對(duì)有害昆蟲(chóng)有耐受性。這些昆蟲(chóng)可以存在于 任何昆蟲(chóng)分類(lèi)群,但尤其是通常在甲蟲(chóng)(鞘翅目)、雙翅昆蟲(chóng)(雙翅目)以及蝴蝶(鱗翅目) 中發(fā)現(xiàn)。
[0160] 包括一種或多種編碼殺蟲(chóng)劑抗性并且表達(dá)一種或多種毒素的基因的轉(zhuǎn)基因植 物是已知的并且其中一些是可商購(gòu)的。此類(lèi)植物的實(shí)例是:Yield(iard⑧(玉米品種, 表達(dá) CrylA(b)毒素 );YieldGard RootwornT? (玉米品種,表達(dá) Cry3B(bl)毒素); YieldGardPlus? (玉米品種,表達(dá) CrylA(b)和 Cry3B(bl)毒素);Starlink? (玉米品 種,表達(dá)Cry9(c)毒素 );Herculex I? (玉米品種,表達(dá)CrylF(a2)毒素以及實(shí)現(xiàn)對(duì)除草 劑草丁膦銨的耐受性的酶膦絲菌素 N-乙酰轉(zhuǎn)移酶(PAT));NuC0TN 33B? (棉花品種,表 達(dá)〇5^1厶((3)毒素);13〇1]^31(11@:(棉花品種,表達(dá)〇7]^((3)毒素);13〇1]^31(11麗)(棉花 品種,表達(dá)CrylA (c)和Cry2A (b)毒素);VipCOT? (棉花品種,表達(dá)Vip3A和CrylAb毒 素);Ne釋Leaf? (馬鈴薯品種,表達(dá) Cry3A 毒素);NatiireCMd.? 以及-Protecta Φ.β
[0161] 此類(lèi)轉(zhuǎn)基因作物的其他實(shí)例是:
[0162] 1. Btll 玉米,來(lái)自先正達(dá)種子公司(Syngenta Seeds SAS),Chemin de 1'Hobit 27,F(xiàn)-31 790St. Sauveur,法國(guó),登記號(hào)C/FR/96/05/10。遺傳修飾的玉蜀黍,通過(guò)轉(zhuǎn)基因表 達(dá)截短的CrylA(b)毒素,使之能抵抗歐洲玉米螟(玉米螟和粉莖螟)的侵襲。Btll玉米還 轉(zhuǎn)基因地表達(dá)PAT酶以達(dá)到對(duì)除草劑草丁膦銨鹽的耐受性。
[0163] 2. Btl76 玉米,來(lái)自先正達(dá)種子公司(Syngenta Seeds SAS),Chemin de 1'Hobit 27,F(xiàn)-31 790St. Sauveur,法國(guó),登記號(hào)C/FR/96/05/10。遺傳修飾的玉蜀黍,通過(guò)轉(zhuǎn)基因表 達(dá)CrylA (b)毒素,使之能抵抗歐洲玉米螟(玉米螟和粉莖螟)的侵襲。Btl76玉米還轉(zhuǎn)基 因地表達(dá)PAT酶以達(dá)到對(duì)除草劑草丁膦銨鹽的耐受性。
[0164] 3. MIR604 玉米,來(lái)自先正達(dá)種子公司(Syngenta Seeds SAS),Chemin de 1'Hobit 27,F(xiàn)-31 790St. Sauveur,法國(guó),登記號(hào)C/FR/96/05/10。通過(guò)轉(zhuǎn)基因表達(dá)經(jīng)修飾的Cry3A毒 素使之具有昆蟲(chóng)抗性的玉米。此毒素是通過(guò)插入組織蛋白酶-G-蛋白酶識(shí)別序列而經(jīng)修飾 的Cry3A055。這樣的轉(zhuǎn)基因玉米植物的制備描述于W0 03/018810中。
[0165] 4· Μ0Ν 863 玉米,來(lái)自孟山都公司(Monsanto Europe S. A. ),270_272Avenue de Tervuren,B-1150布魯塞爾,比利時(shí),登記號(hào)C/DE/02/9。MON 863表達(dá)Cry3B(bl)毒素,并 且對(duì)某些鞘翅目昆蟲(chóng)有抗性。
[0166] 5. IPC 531 棉花,來(lái)自孟山都公司 270-272 Avenue de Tervuren,B-1150 布魯塞 爾,比利時(shí),登記號(hào)C/ES/96/02。
[0167] 6. 1507玉米,來(lái)自先鋒環(huán)球公司(Pioneer Overseas Corporation)(比利時(shí),布魯 塞爾,Avenue Tedesco,7B_1160),登記號(hào)C/NL/00/10。遺傳修飾的玉米,表達(dá)蛋白質(zhì)CrylF 以實(shí)現(xiàn)對(duì)某些鱗翅目昆蟲(chóng)的抗性和表達(dá)PAT蛋白質(zhì)以實(shí)現(xiàn)對(duì)除草劑草丁膦銨鹽的耐受性。
[0168] 7· NK603XM0N 810玉米,來(lái)自孟山都?xì)W洲公司(Monsanto Europe S.A·),270-272 德特文瑞大街,B-1150布魯塞爾,比利時(shí),登記號(hào)C/GB/02/M3/03。通過(guò)將遺傳修飾的品種 NK 603和Μ0Ν 810雜交,由常規(guī)育種的雜交玉米品種構(gòu)成。NK603XM0N 810玉米轉(zhuǎn)基因表 達(dá)由土壤桿菌屬菌株CP4獲得的CP4 EPSPS蛋白質(zhì),使之耐除草劑Roundup? (含有草甘 膦),以及由蘇云金芽孢桿菌庫(kù)爾斯塔克亞種獲得的CrylA (b)毒素,使之耐某些鱗翅目昆 蟲(chóng),包括歐洲玉米螟。
[0169] 抗昆蟲(chóng)的植物的轉(zhuǎn)基因作物還描述于BATS(生物安全與可持續(xù)發(fā)展中心 (Zentrum filr Biosicherheit und Nachhaltigkeit),BATS 中心(Zentrum BATS),克拉其萬(wàn) 崔舍(01&抑81:抑886)13,巴塞爾(1^861)4058,瑞士)報(bào)告2003中。
[0170] 術(shù)語(yǔ)"有用植物"應(yīng)當(dāng)被理解為還包括已經(jīng)通過(guò)使用重組DNA技術(shù)而被這樣轉(zhuǎn)化 使其能夠合成具有選擇性作用的抗病原物質(zhì)的有用的植物,這些抗病原物質(zhì)例如所謂的 "病程相關(guān)蛋白"(PRP,參見(jiàn)例如ΕΡ-Α-0 392 225)。此類(lèi)抗病原物質(zhì)以及能夠合成此類(lèi)抗病 原物質(zhì)的轉(zhuǎn)基因植物的實(shí)例例如從ΕΡ-Α-0 392 225、W0 95/33818、和ΕΡ-Α-0 353 191是 已知的。生產(chǎn)此類(lèi)轉(zhuǎn)基因植物的方法對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員通常是已知的并且描述于例如 以上提及的公開(kāi)物中。
[0171] 可以通過(guò)這樣的轉(zhuǎn)基因植物表達(dá)的抗致病的物質(zhì)包括,例如離子通道阻斷劑,如 鈉和鈣通道的阻斷劑,例如病毒的KP1,KP4或KP6毒素;芪合酶、聯(lián)芐合酶;幾丁質(zhì)酶;葡聚 糖酶;所謂的"病原相關(guān)蛋白"(PRP,參見(jiàn)例如ΕΡ-Α-0 392 225);通過(guò)微生物產(chǎn)生的抗致病 的物質(zhì),例如植物病原防御中涉及的膚抗生素類(lèi)或雜環(huán)抗生素類(lèi)(參見(jiàn)例如W0 95/33818) 或蛋白質(zhì)或多肽因子(所謂的"植物病害抗性基因",如W0 03/000906所述)。
[0172] 術(shù)語(yǔ)"作物(crop、crops) "、"有用植物"、"作物植物"、"農(nóng)業(yè)植物"、"食品植物"在 此可互換使用。
[0173] 與本發(fā)明有關(guān)的更有興趣的有用植物為谷物;大豆;水稻;油菜;梨果;核果;花 生;咖啡;茶;草莓;草皮;藤本植物及蔬菜,例如番茄、馬鈴薯、萌蘆及萵苣。
[0174] 多年生作物應(yīng)被理解為意指柑橘類(lèi)果實(shí)、蘋(píng)果類(lèi)果實(shí)、核果、葡萄藤、茶、扁桃樹(shù)、 堅(jiān)果、咖啡、熱帶果實(shí)、軟果、觀賞植物、草坪和橄欖。
[0175] -年生作物應(yīng)被理解為意指蔬菜、煙草、甜瓜、甜菜、糖甜菜、谷類(lèi)、玉米、棉花、大 豆和馬鈴薯。
[0176] 因此,著眼于施用,柑橘類(lèi)水果應(yīng)被理解為意指例如橙子、克萊門(mén)氏小柑橘、無(wú)核 小蜜橘、檸檬、葡萄柚、金橘、柑桔,另外是蘋(píng)果類(lèi)果實(shí),如蘋(píng)果、梨,但還有核果,例如桃、油 桃、櫻桃、杏子,此外是葡萄藤、橄欖、茶、以及熱帶作物,例如像芒果、木瓜、無(wú)花果、鳳梨、棗 子、香蕉、植蓮果、雞蛋果、柿子、椰子、可可、咖啡、牛油果、蒸枝、西番蓮、番石植、甘鹿,此外 還有扁桃以及堅(jiān)果,例如像榛子、核桃、開(kāi)心果、腰果、巴西果、美洲山核桃、灰胡桃、栗子、山 核桃、澳洲堅(jiān)果、花生,另外還有軟果,例如像黑醋栗、醋栗、覆盆子、黑莓、藍(lán)莓、草莓、紅色 越桔、獼猴桃、蔓越橘。
[0177] 關(guān)于使用,觀賞植物應(yīng)被理解為意指例如切花,例如像玫瑰、香石竹、非洲菊、百合 花、雛菊、菊花、郁金香、水仙花、銀蓮花、嬰栗、孤挺花、大麗花、杜鵲花、馬爾維斯(malves)、 梔子花、大戟類(lèi),此外是例如花壇花、盆栽植物以及灌木,例如像玫瑰、木槿、菊花,此外還有 例如灌木和松柏類(lèi),例如像無(wú)花果樹(shù)、杜鵑花、云杉樹(shù)、樅樹(shù)、松樹(shù)、紫杉、杜松樹(shù),但還有草 坪,例如像高爾夫球場(chǎng)草坪、花園草坪。
[0178] 關(guān)于使用,蔬菜被理解為意指例如果實(shí)類(lèi)蔬菜和花序類(lèi)蔬菜,例如燈籠椒、辣椒、 番茄、茄子、黃瓜、南瓜、綠皮南瓜、蠶豆、攀爬植物以及四季豆、豌豆、洋薊、玉米;但還有葉 類(lèi)蔬菜,例如頭形萵苣、菊苣、苣荬菜、不同類(lèi)型的水芹、芝麻菜,野苣(lamb's lettuce)、冰 山生菜、韭蔥、菠菜、唐萵苣;此外是塊莖蔬菜、根類(lèi)蔬菜以及莖類(lèi)蔬菜,例如塊根芹/芹菜、 甜菜根、胡蘿卜、蘿卜、山葵、雅蔥、蘆筍、用于人類(lèi)消費(fèi)的甜菜、棕櫚芯、竹筍,此外還有鱗莖 類(lèi)蔬菜,例如洋蔥、韭蔥、茴香、蒜;此外是蕓苔屬蔬菜例如花椰菜、西蘭花、甘藍(lán)、紅甘藍(lán)、包 心菜、羽衣甘藍(lán)、皺葉甘藍(lán)、球芽甘藍(lán)、大白菜。
[0179] 關(guān)于在谷類(lèi)作物中使用,谷類(lèi)應(yīng)被理解為意指例如小麥、大麥、黑麥、燕麥、小黑 麥,但還有玉米和粟。
[0180] 對(duì)于使用根據(jù)本發(fā)明的化合物,特別優(yōu)選的是來(lái)自以下家族的靶線(xiàn)蟲(chóng),優(yōu)選地發(fā) 現(xiàn)于以下提及的作物/有用植物:
[0181] 短體線(xiàn)蟲(chóng)科,
[0182] 短尾穿孔線(xiàn)蟲(chóng)(Radopholus brevicaudatus)、卡文內(nèi)斯穿孔線(xiàn)蟲(chóng)(Radopholus cavenessi)、克拉魯斯穿孔線(xiàn)蟲(chóng)(Radopholus clarus)、奇特羅穿孔線(xiàn)蟲(chóng)(Radopholus citrophilus)、缺刻穿孔線(xiàn)蟲(chóng)(Radopholus crenatus)、不等穿孔線(xiàn)蟲(chóng)(Radopholus inaequalis)、伊納尼斯穿孔線(xiàn)蟲(chóng)(Radopholus inanis)、錘形穿孔線(xiàn)蟲(chóng)(Radopholus capitatus)、中間穿孔線(xiàn)蟲(chóng)(Radopholus intermedius)、光滑穿孔線(xiàn)蟲(chóng)(Radopholus laevis)、里托愛(ài)麗絲穿孔線(xiàn)蟲(chóng)(Radopholus litoralis)、瑪格尼格蘭斯穿孔線(xiàn)蟲(chóng) (Radopholus magniglans)、梅加多魯斯穿孔線(xiàn)蟲(chóng)(Radopholus megadorus)、納蒂沃爾斯 穿孔線(xiàn)蟲(chóng)(Radopholus nativus)、尼奧相似穿孔線(xiàn)蟲(chóng)(Radopholus neosimilis)、尼日穿 孔線(xiàn)蟲(chóng)(Radopholus nigeriensis)、直肌穿孔線(xiàn)蟲(chóng)(Radopholus rectus)、羅頓穿孔線(xiàn)蟲(chóng) (Radopholus rotundisemenus)、據(jù)齒狀穿孔線(xiàn)蟲(chóng)(Radopholus serratus)、相似穿孔線(xiàn)蟲(chóng) (Radopholus similis)、三線(xiàn)穿孔線(xiàn)蟲(chóng)(Radopholus trilineatus))、特里范瑟絲穿孔線(xiàn) 蟲(chóng)(Radopholus triversus)、瓦克斯穿孔線(xiàn)蟲(chóng)(Radopholus vacuus)、瓦閃德伊穿孔線(xiàn)蟲(chóng) (Radopholus vangundyi)、威泰克斯普拉尼穿孔線(xiàn)蟲(chóng)(Radopholus vertexplanus)、威廉姆 斯穿孔線(xiàn)蟲(chóng)(Radopholus williamsi)
[0183] 于柑橘類(lèi)水果、熱帶果實(shí)中,例如香蕉、咖啡、椰子、鱷梨;茶、觀賞植物、草坪
[0184] 咖啡短體線(xiàn)蟲(chóng)、草莓偽短體線(xiàn)蟲(chóng)、全體短體線(xiàn)蟲(chóng)、傷殘短體線(xiàn)蟲(chóng)、穿刺短體線(xiàn)蟲(chóng)、最 短尾短體線(xiàn)蟲(chóng)
[0185] 于熱帶水果中,例如香蕉、咖啡、鳳梨;堅(jiān)果,例如核桃、扁桃;觀賞植物例如玫瑰;
[0186] 另外特別優(yōu)選的是
[0187] 美洲劍線(xiàn)蟲(chóng)、異尾劍線(xiàn)蟲(chóng)、劍線(xiàn)蟲(chóng)指數(shù)
[0188] 于作物中如葡萄藤、軟果,例如草莓;觀賞植物,例如玫瑰;核果
[0189] 長(zhǎng)針線(xiàn)蟲(chóng)
[0190] 于作物中如軟果,例如草莓;灌木、多年生作物
[0191] 南方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)、北方根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)、花生根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)、爪哇根結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)
[0192] 于作物中如葡萄藤、花生、甘蔗、番茄
[0193] 半穿