紅臉相關(guān)皮膚病癥，包括酒渣鼻(rosacea)、尋常痤瘡(acne vulgaris)、脂溢性皮炎(seborrheic dermatitis)、光照性皮炎(photodermatitis)、及接觸性皮炎(contact dermatitis)，共有相似的癥狀及可能的病因。這些紅臉相關(guān)病況可包括熱及敏感的感覺、甚至具強(qiáng)烈敏感性的潮紅(flushing)或灼熱感?；加屑t臉相關(guān)皮膚病癥的患者通常表現(xiàn)出對環(huán)境及局部因素的極端敏感性。類固醇引起的酒渣鼻樣皮炎(或類固醇酒渣鼻)是有或沒有毛細(xì)管擴(kuò)張的基于紅斑及水腫的丘疹狀或膿皰性病變，其是由長時間局部施用類固醇至臉部所造成，或是在中止局部施用類固醇后的復(fù)發(fā)病況。

皮膚毒性(dermatologic toxicities)為已知與標(biāo)靶治療或免疫治療有關(guān)的皮膚不良事件，且具有紅臉相關(guān)皮膚病癥的類似癥狀及可能的病因。標(biāo)靶治療如表皮生長因子受體(EGFR)、多酪氨酸激酶(MTK)、MEK、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)以及BRAF的抑制劑可引起毒性，包括丘疹膿皰性疹、斑丘疹、紅疹、毛細(xì)管擴(kuò)張潮紅、甲溝炎及裂傷、毛發(fā)改變、干燥癥、粘膜炎、瘙癢癥以及手足皮膚反應(yīng)(hand-foot skin reaction)，其會發(fā)生在超過90％的患者身上，且也會被諸如金黃色葡萄球菌的細(xì)菌重復(fù)感染(WollenbergA，Kroth J等人，2010；Lacouture M E，Maitland M L等人，2010；Curry J.L.，Torres-Cabala C.A.等人，2014)。此類皮膚毒性的組織病理學(xué)研究顯示炎癥經(jīng)常發(fā)生，且導(dǎo)致痤瘡性皮膚疹。丘疹膿皰性疹更經(jīng)常報道于EGFR抑制劑治療，如西妥昔單抗(cetuximab)(83％的患者)及阿法替尼(afatinib)(90％的患者)；及MEK抑制劑治療，如司美替尼(selumetinib)(93％的患者)及曲美替尼(trametinib)(80％的患者)。斑丘疹較常發(fā)生于PI3K抑制劑治療，如BKM-120(37％的患者)及MK2206(52％的患者)。

小檗堿(Natural Yellow 18，6-二氫-9，10-二甲氧基苯并(g)-1，3-苯并二氧雜環(huán)戊烯并(5，6-a)喹嗪鎓)為存在于藥用植物如黃連(Coptidis rhizome)、黃柏、黃芩、冬青葉十大功勞(Mahonia aquifolium)及小檗屬中的異喹啉生物堿。已發(fā)現(xiàn)小檗堿及其衍生物具有抗微生物及抗瘧疾活性。其可對抗各種病原體，例如真菌、酵母菌、寄生生物、細(xì)菌及病毒。

小檗堿還具有抗炎作用，但其確切機(jī)制仍為未知。

美國專利第6,440,465號涉及以潤膚劑為基質(zhì)的葡萄糖胺的局部用皮膚制劑，其含有小檗堿且用于治療牛皮癬。美國專利申請公開第20050158404號涉及營養(yǎng)品、膳食補(bǔ)充劑或藥物組合物，其含有維生素A、維生素E、硒、維生素B6、鋅、鉻以及藥草來源的小檗堿，以口服施用來治療痤瘡。美國專利第6,974,799號涉及包含三肽(N-棕櫚酰基-Gly-His-Lys)及四肽(N-棕櫚?；?Gly-Gln-Pro-Arg)的局部用組合物，用于治療老化的可見跡象，包括皺紋、肥胖紋、黑眼圈。該制劑可含有額外的成分，包括小檗堿。在這些發(fā)明中，小檗堿作為許多成分之一包含，且其濃度未被指明。

美國專利申請公開第2004/0146539號涉及局部用營養(yǎng)組合物，其具有瘦身及肌膚緊致抗老化益處，可用于治療皮膚老化、皮膚皺紋、皮膚脫皮、痤瘡、酒渣鼻及其它皮膚問題。該發(fā)明的組合物包括選自多種藥劑(包括小檗堿)的抗微生物劑。在這些營養(yǎng)組合物中，小檗堿作為許多成分之一包含，且其濃度未被指明?，F(xiàn)已有用于治療牛皮癬的10％冬青葉十大功勞乳霜(Relieva^TM，Apollo Pharmaceutical Canada Inc)，其含有0.1％小檗堿。

美國專利申請公開第2012/0165357號公開了使用小檗堿治療各種紅臉相關(guān)皮膚病癥，但其未公開任何具體的據(jù)發(fā)現(xiàn)可有效治療具體病況的小檗堿制劑。此外，已知小檗堿不能輕易有效地穿透皮膚，且因此可能迅速地釋放至組織中，導(dǎo)致短暫的效果。

因此，仍需要開發(fā)新的有效的小檗堿制劑，以用于治療各種紅臉相關(guān)皮膚病癥。

發(fā)明概述

本發(fā)明提供用于治療和/或預(yù)防紅臉相關(guān)皮膚病癥的藥物組合物。所提供的制劑為以乳霜為基質(zhì)(即乳霜)的制劑或以凝膠為基質(zhì)的制劑。

特別地，本發(fā)明提供一種包含小檗堿的藥物組合物，其中所述組合物是包含水相和油相的乳霜制劑。

在一種實施方案中，小檗堿在所提供的乳霜制劑中的濃度為0.01％至10％，優(yōu)選為0.01％至1％w/w，優(yōu)選為0.01％至0.3％w/w，更優(yōu)選為0.1％至0.2％w/w，再更優(yōu)選為0.1％至0.15％w/w，最優(yōu)選為約0.12％w/w。

本申請中的所有w/w量是指占制劑總重量的重量。

本發(fā)明的藥物組合物可進(jìn)一步包含穿透促進(jìn)劑。

在一種實施方案中，所述穿透促進(jìn)劑為陰離子穿透促進(jìn)劑。

在另一種實施方案中，所述穿透促進(jìn)劑包括及甘油。

在一種實施方案中，小檗堿為所提供制劑中的唯一的藥物活性成分。

在一種實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物的pH值為約4至約7，更優(yōu)選為約5.5。

在一種優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明提供一種包含小檗堿作為唯一藥物活性成分的藥物組合物，其中所述小檗堿的濃度為0.1％至0.2％w/w，其中所述組合物為包含水相和油相的乳霜制劑，其中所述組合物包含穿透促進(jìn)劑、防腐劑及穩(wěn)定劑，且其中所述組合物的pH值為約4至約7。

在再一種更優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明提供一種包含小檗堿作為唯一藥物活性成分的藥物組合物，其中所述小檗堿的濃度為約0.12％w/w，其中所述組合物為包含水相和油相的乳霜制劑，其中所述組合物包含穿透促進(jìn)劑、防腐劑及穩(wěn)定劑，且其中所述組合物的pH值為約5.5。

在另一種實施方案中，本發(fā)明提供一種包含小檗堿的藥物組合物，其中所述組合物為以凝膠為基質(zhì)的制劑，其中所述組合物包含陰離子穿透促進(jìn)劑。

在一種優(yōu)選實施方案中，所述陰離子穿透促進(jìn)劑包括十二烷基硫酸鈉(SDS)。

在一種實施方案中，在本發(fā)明所提供的以凝膠為基質(zhì)的藥物組合物中，約90％的小檗堿的平均粒徑小于10微米。

在另一種實施方案中，在本發(fā)明所提供的以凝膠為基質(zhì)的藥物組合物中，約50％的小檗堿的平均粒徑小于4微米。

在一種實施方案中，小檗堿在所提供的以凝膠為基質(zhì)的制劑中的濃度為0.01％至0.3％w/w，更優(yōu)選為0.1％至0.2％w/w，再更優(yōu)選為0.1％至0.15％w/w，最優(yōu)選為約0.12％w/w。

本發(fā)明還提供治療紅臉相關(guān)皮膚病癥的方法，包括向需要其的患者施用藥學(xué)有效量的本發(fā)明的藥物組合物。

在一種實施方案中，所述紅臉相關(guān)皮膚病癥選自酒渣鼻、尋常痤瘡、脂溢性皮炎、光照性皮炎、接觸性皮炎、類固醇引起的酒渣鼻樣皮炎以及表皮生長因子受體(EGFR)抑制劑引起的皮膚病癥。

附圖簡述

圖1所示為6種經(jīng)測試的小檗堿制劑的累積小檗堿穿透量(ng/cm²)vs時間的繪圖。

圖2所示為3種小檗堿凝膠懸浮制劑(G22、G23和G24)的累積小檗堿穿透量(ng/cm²)vs時間的繪圖。

圖3所示是顯示雙側(cè)皮膚活組織切片的蘇木素和曙紅(H&E)染色的圖片，該切片來自接受阿法替尼治療且于其臉部一側(cè)局部施用凝膠制劑(G23)的患者的鼻唇溝。

圖4所示是顯示雙側(cè)皮膚活組織切片的H&E染色的圖片，該切片來自接受阿法替尼治療且于其臉部另一側(cè)局部施用媒介物凝膠(不含小檗堿的G23)的患者的鼻唇溝。

發(fā)明詳述

依據(jù)進(jìn)行治療的特定病癥，小檗堿可有效地穿透皮膚是很重要的。小檗堿為親水性化合物(擴(kuò)散系數(shù)為1.07)，這使得小檗堿難以穿透角質(zhì)層(SC)以到達(dá)目標(biāo)位置，例如紅臉相關(guān)皮膚病癥或標(biāo)靶治療引起的皮膚毒性可能發(fā)生的真皮層或表皮層。此外，小檗堿相當(dāng)易溶(溶解度為1.57mg/ml)，因此會快速地釋放至目標(biāo)細(xì)胞中，導(dǎo)致短暫的效果。

因此，本發(fā)明提供具有改善的小檗堿穿透率的藥物組合物，其用于治療和/或預(yù)防紅臉相關(guān)皮膚病癥。所提供的制劑為以乳霜為基質(zhì)(即乳霜)的制劑或以凝膠為基質(zhì)的制劑。

特別地，本發(fā)明提供一種包含小檗堿的藥物組合物，其中所述組合物為包含水相和油相的乳霜制劑。

由于本發(fā)明的乳霜制劑可促進(jìn)小檗堿穿透進(jìn)入皮膚，相對少量的小檗堿即足以實現(xiàn)所預(yù)期的治療效果。在一種實施方案中，小檗堿在所提供的乳霜制劑中的濃度為0.01％至10％w/w，優(yōu)選為0.01％至1％w/w，優(yōu)選為0.01％至0.3％w/w，更優(yōu)選為0.1％至0.2％w/w，再更優(yōu)選為0.1％至0.15％w/w，最優(yōu)選為約0.12％w/w，以制劑的總重量計。

本發(fā)明的藥物組合物可進(jìn)一步包含穿透促進(jìn)劑。

在一種實施方案中，所述穿透促進(jìn)劑為陰離子穿透促進(jìn)劑。例如，該陰離子穿透促進(jìn)劑可包括十二烷基硫酸鈉(SDS)。

在另一種實施方案中，該穿透促進(jìn)劑包括及甘油。本發(fā)明的乳霜制劑優(yōu)選包含及甘油作為穿透促進(jìn)劑。當(dāng)在非乳霜制劑中使用相同穿透促進(jìn)劑時，其不導(dǎo)致改善的穿透率，表明對于以乳霜為基質(zhì)的制劑存在某些獨特之處。

在一種實施方案中，小檗堿為所提供的制劑中的唯一的藥物活性成分。

在一種實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物的pH值為約4至約7，更優(yōu)選為約5.5。

在一種優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供一種包含小檗堿作為唯一藥物活性成分的藥物組合物，其中所述小檗堿的濃度為0.1％至0.2％w/w，其中所述組合物為包含水相和油相的乳霜制劑，其中所述組合物包含穿透促進(jìn)劑、防腐劑及穩(wěn)定劑，且其中所述組合物的pH值為約4至約7。

在再一種更優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供一種包含小檗堿作為唯一藥物活性成分的藥物組合物，其中所述小檗堿的濃度為約0.12％w/w，其中所述組合物為包含水相和油相的乳霜制劑，其中所述組合物包含穿透促進(jìn)劑、防腐劑及穩(wěn)定劑，且其中所述組合物的pH值為約5.5。

非常令人驚訝且出乎意料地發(fā)現(xiàn)，相比于非乳霜小檗堿制劑，本發(fā)明的乳霜制劑具有更優(yōu)異的穿透率。

在另一種實施方案中，本發(fā)明提供一種包含小檗堿的藥物組合物，其中所述組合物為以凝膠為基質(zhì)的制劑，其中所述組合物包含陰離子穿透促進(jìn)劑。

在一種優(yōu)選實施方案中，所述陰離子穿透促進(jìn)劑包含十二烷基硫酸鈉(SDS)。包括SDS作為陰離子穿透促進(jìn)劑使得所提供的以凝膠為基質(zhì)的制劑呈疏水性(分配系數(shù)為50.1)并具有顯著更低的約0.011mg/ml的溶解度，使得小檗堿可緩慢釋放至目標(biāo)細(xì)胞，導(dǎo)致延長的釋放曲線。

在本發(fā)明中發(fā)現(xiàn)，在pH值為4至7時，小檗堿在SDS存在下的溶解度為0.01至0.06mg/ml，即，是小檗堿水中溶解度(1.57mg/mL)的1/150至1/25，且在pH值為5.5時，溶解度相對較低。

令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，在所有經(jīng)測試的穿透促進(jìn)劑(SDS、甘油、丙二醇、PEG400、乙醇及)中，在以凝膠為基質(zhì)的制劑中添加SDS導(dǎo)致最強(qiáng)的穿透率增強(qiáng)以及真皮層及表皮層中小檗堿的局部濃度增加。

在一種實施方案中，在本發(fā)明所提供的以凝膠為基質(zhì)的藥物組合物中，約90％的小檗堿的平均粒徑小于10微米。

在另一種實施方案中，在本發(fā)明所提供的以凝膠為基質(zhì)的藥物組合物中，約50％的小檗堿的平均粒徑小于4微米。

還令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，在以凝膠為基質(zhì)的制劑中，SDS的量與穿透率之間呈正相關(guān)，且小檗堿的尺寸與穿透率之間呈負(fù)相關(guān)。

由于本發(fā)明的以凝膠為基質(zhì)的制劑可促進(jìn)小檗堿穿透進(jìn)入皮膚，相對少量的小檗堿即足以實現(xiàn)所預(yù)期的治療效果。在一種實施方案中，小檗堿在所提供的以凝膠為基質(zhì)的制劑中的濃度為0.01％至0.3％w/w，更優(yōu)選為0.1％至0.2％w/w，再更優(yōu)選為0.1％至0.15％w/w，最優(yōu)選為約0.12％w/w，以該制劑的總重量計。

本發(fā)明還提供治療紅臉相關(guān)皮膚病癥的方法，包括向需要其的患者施用藥學(xué)有效量的本發(fā)明的藥物組合物。

在一種實施方案中，所述紅臉相關(guān)皮膚病癥選自酒渣鼻、尋常痤瘡、脂溢性皮炎、光照性皮炎、接觸性皮炎、類固醇引起的酒渣鼻樣皮炎以及表皮生長因子受體(EGFR)抑制劑引起的皮膚病癥。

本發(fā)明還提供治療和/或預(yù)防標(biāo)靶治療引起的皮膚毒性的方法，包括向需要其的患者施用藥學(xué)有效量的本發(fā)明的藥物組合物。

在一種實施方案中，所述標(biāo)靶治療選自EGFR、多酪氨酸激酶(MTK)、MEK、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)以及BRAF的抑制劑；且所述標(biāo)靶治療引起的皮膚毒性選自丘疹膿皰性疹、斑丘疹、紅疹、毛細(xì)管擴(kuò)張潮紅、甲溝炎及裂傷、毛發(fā)改變、干燥癥、粘膜炎、瘙癢癥以及手足皮膚反應(yīng)。

小檗堿于表皮層、真皮層及接收器(指的是與皮膚接觸的裝有PBS的容器)中的濃度由以下方式測量。Franz擴(kuò)散池裝置(Franz diffusion cell setup)實質(zhì)上是兩個夾子之間夾住的一片皮膚。將藥物施用于皮膚的一側(cè)(頂部)，并于該裝置的接收部分(底部)測量藥物濃度。

如本文所用，術(shù)語“穿透率”是指自施用制劑至皮膚上一段時間后，存在于每克表皮層或真皮層組織中的小檗堿的量，或存在于接收器中的每平方厘米皮膚的小檗堿的量。

在接收器中所測得的藥物的量指示穿透皮膚的角質(zhì)層、表皮層及真皮層區(qū)域的總量。本發(fā)明的藥物組合物具有改善的穿透率，且優(yōu)選的穿透率范圍如下：

表皮層：每克組織0.4至4000微克小檗堿；

真皮層：每克組織0.003至30微克小檗堿；

接收器：每1×1平方厘米皮膚0.0001至1微克小檗堿。

下表1列舉可用于本發(fā)明組合物中的各種成分。但此列舉僅供用于例示目的，而非用于限制本發(fā)明的范圍。此外，不同成分/賦形劑可能以多于一種的方式起作用，例如可用作穿透促進(jìn)劑、乳化劑、潤濕劑等。

如本文所用，術(shù)語“小檗堿”指5，6-二氫-9，10-二甲氧基苯并(g)-1，3-苯并二氧雜環(huán)戊烯并(5，6-a)喹嗪鎓。本發(fā)明還考慮使用小檗堿的類似物，包括但不限于：藥根堿(jatrorrhizine)、巴馬亭、黃連堿、9-去甲基小檗堿、9-去甲基巴馬亭、13-羥基小檗堿、小檗紅堿(berberrubine)、巴馬亭紅堿(palmatrubine)、9-O-乙基小檗紅堿、9-O-乙基-13-乙基小檗紅堿、13-甲基二氫小檗堿N-甲基鹽、四氫原小檗堿及其N-甲基鹽、9-月桂?；￠藜t堿氯化物及所有這些化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。

如本文所用，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”包括酸性或堿性基團(tuán)的鹽。藥學(xué)上可接受的鹽的例子包括衍生自無機(jī)酸，例如鹽酸、氫溴酸、硝酸、碳酸、單氫碳酸、磷酸、單氫磷酸、二氫磷酸、硫酸、單氫硫酸、氫碘酸或亞磷酸等的那些鹽；以及衍生自相對無毒性的有機(jī)酸，例如乙酸、丙酸、異丁酸、順丁烯二酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、扁桃酸、鄰苯二甲酸、苯磺酸、甲苯磺酸(包括對甲苯磺酸、間甲苯磺酸及鄰甲苯磺酸)、檸檬酸、酒石酸及甲磺酸等的鹽。還包括氨基酸的鹽，例如精氨酸鹽等，以及有機(jī)酸，例如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸等的鹽。

如本文所用，術(shù)語“治療”包括抑制疾病或病況、使癥狀的嚴(yán)重性和/或頻率降低、消除癥狀和/或潛在病因、防止癥狀和/或其潛在病因發(fā)生、減輕和/或改善患者病況。因此，使用所述本發(fā)明組合物“治療”患者包括在易患病個體中預(yù)防特定病癥，以及處理有臨床癥狀的個體以抑制病癥或疾病或使其消退，和維持現(xiàn)有狀態(tài)和/或防止病癥或疾病的進(jìn)展。治療可包括預(yù)防、治療或治愈。

如本文所用，關(guān)于本發(fā)明的化合物和/或藥物組合物的術(shù)語“藥學(xué)有效量”是指足以治療、抑制、減輕或預(yù)防高尿酸血癥或與高尿酸血癥相關(guān)的代謝病癥(以任何醫(yī)療上適用的合理的效益/風(fēng)險比率)的化合物和/或組合物的量。但是，應(yīng)了解，本發(fā)明的化合物和/或組合物的每日總用量由主治醫(yī)師于合理的醫(yī)療判斷的范疇內(nèi)來決定。任何特定患者的具體有效劑量水平取決于不同因素，包括進(jìn)行治療的病癥及病癥的嚴(yán)重性；所使用的具體化合物的活性；所使用的具體組合物；患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別及飲食；施用時間、施用途徑、所使用的具體化合物的排泄速率；治療的持續(xù)時間；與所使用的具體化合物組合使用或同時使用的藥物；及醫(yī)療領(lǐng)域中所熟知的類似因素。例如，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠以低于實現(xiàn)預(yù)期治療效果所需的水平的組合物的劑量起始，并逐漸增加劑量直到實現(xiàn)所預(yù)期的效果。

該藥物組合物可進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的載體，且可為固體或液體形式，包括但不限于：片劑、粉末、膠囊、小丸、溶液、懸浮液、酏劑、乳劑、凝膠、乳霜、貼劑或栓劑(包括直腸栓劑及尿道栓劑)。

如本文所用，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”是指藥學(xué)上可接受的材料、組合物或媒介物，例如液體或固體填料、稀釋劑、賦形劑、溶劑或包封材料。藥學(xué)上可接受的載體與組合物的其它成分相容，并與施用方式相容，且不會對患者造成傷害。藥學(xué)上可接受的載體可以是水性或非水性的。藥學(xué)上可接受的載體包括樹膠(gum)、淀粉、糖類、纖維素材料及其混合物?？捎米魉帉W(xué)上可接受的載體的材料的一些例子包括但不限于：(a)糖類，如乳糖、葡萄糖及蔗糖；(b)淀粉，如玉米淀粉及馬鈴薯淀粉；(c)纖維素及其衍生物，如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及醋酸纖維素；(d)粉末狀黃蓍膠；(e)麥芽；(f)明膠；(g)滑石；(h)賦形劑，如可可脂及栓劑蠟；(i)油類，如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；(j)二醇類，如丙二醇；(k)多元醇類，如甘油、山梨醇、甘露醇及聚乙二醇；(1)酯類，如油酸乙酯及月桂酸乙酯；(m)瓊脂；(n)緩沖劑，如氫氧化鎂、氫氧化鋁、硼酸和硼酸鈉及磷酸鹽緩沖劑；(o)海藻酸；(p)無熱原水；(q)等滲鹽水；(r)林格氏液(Ringer′s solution)；(s)乙醇；(t)磷酸鹽緩沖溶液；及(u)其它適用于藥物組合物的非毒性相容性物質(zhì)。

本發(fā)明的組合物可以使用本領(lǐng)域已知的任何方式來施用，包括但不限于口服、經(jīng)鼻、胃腸外、局部(topical)、經(jīng)皮或經(jīng)直腸的施用途徑。優(yōu)選地，該組合物適用于口服或局部施用。例如，組合物的活性成分可與適當(dāng)?shù)馁x形劑一同配制以制備片劑、膠囊、小丸、藥片(troches)、錠劑、溶液、粉末或顆粒、懸浮液、硬膠囊或軟膠囊、貼劑及任何其它適合形式。

以下實施例例示本發(fā)明的某些方面。所述實施例并非意圖以任何方式限制本發(fā)明。

實施例1

小檗堿制劑的小鼠皮膚穿透研究

比較以下6種小檗堿制劑：C8、0.125％、0.3％、G22、G23及G24。

制劑

制劑如下：

C8(以乳霜為基質(zhì)的制劑)：

水相

小檗堿(0.12％)、(1％)、甘油(3％)、對羥基苯甲酸甲酯(0.1％)、對羥基苯甲酸丙酯(0.02％)、NaOH(調(diào)整pH值至5.5)及EDTA(0.02％)。

油相

硬脂酸(7.5％)、菎麻油(8％)、白礦脂(6％)及SPAN 60(2％)。

0.125％(以凝膠為基質(zhì)的制劑)：

小檗堿(0.125％)、乙醇(2.5％)、甘油(10％)、苯氧乙醇(0.3％)、卡波姆。

0.3％(以凝膠為基質(zhì)的制劑)：

小檗堿(0.3％)、丙二醇(9.25％)、PEG 400(5.03％)、對羥基苯甲酸甲酯(0.1％)、對羥基苯甲酸丙酯(0.02％)、NaOH(0.4％)、EDTA(0.02％)、卡波姆934P(1％)。

G22(以凝膠為基質(zhì)的制劑)：

小檗堿(0.1％)、SDS(0.086％)、甘油(10％)、(0.5％)、對羥基苯甲酸甲酯(0.1％)、對羥基苯甲酸丙酯(0.02％)、檸檬酸(0.033％)、檸檬酸鈉二水合物(0.115％)、NaOH，EDTA(0.02％)、卡波姆934P(0.3％)、HEC 250HHX(1.2％)。粒徑分布：3.83/11.34/27.24(以D10/D50/D90的格式，其中各值是指相應(yīng)百分比的顆粒小于所規(guī)定的尺寸，即，10％的顆粒小于3.83，依此類推)。

G23(以凝膠為基質(zhì)的制劑)：

小檗堿(0.1％)、SDS(0.086％)、甘油(10％)、(0.5％)、對羥基苯甲酸甲酯(0.1％)、對羥基苯甲酸丙酯(0.02％)、檸檬酸(0.033％)、檸檬酸鈉二水合物(0.115％)、NaOH，EDTA(0.02％)、卡波姆934P(0.3％)、HEC 250HHX(1.2％)。粒徑分布：1.45/2.85/9.30。

G24(以凝膠為基質(zhì)的制劑)：

小檗堿(0.1％)、SDS(0.043％)、甘油(10％)、(0.5％)、對羥基苯甲酸甲酯(0.1％)、對羥基苯甲酸丙酯(0.02％)、檸檬酸(0.033％)、檸檬酸鈉二水合物(0.115％)、NaOH，EDTA(0.02％)、卡波姆934P(0.3％)、HEC 250HHX(1.2％)。粒徑分布：1.55/2.86/5.44。

G22、G23及G24制劑的粒徑如下測定。

制備經(jīng)純化的水，接著加入氯化小檗堿、及十二烷基硫酸鈉(SDS)。充分分散后，使混合物微粉化(micronize)。之后，通過衍射分析儀測量粒徑。

實驗條件

經(jīng)由頸脫位法處死小鼠。移除全層側(cè)腹皮膚，并置于與接收相(為0.01MPBS(pH 7.4，37℃))相接觸的擴(kuò)散池上。以3-4毫升/小時的流速將緩沖液抽吸通過接收器隔室。將300微升制劑添加到供給隔室內(nèi)的皮膚表面上。于第0、1、2、3、4、6、8、10及12小時收集接收器溶液，以用于HPLC分析。由氯化小檗堿的累積穿透量vs時間曲線的線性部分的斜率來計算皮膚通量(skin flux)。

結(jié)果

圖1顯示所有6種經(jīng)測試制劑的累積小檗堿穿透量(ng/cm²)vs時間的繪圖。如圖所示，相比于其它制劑，C8(乳霜制劑)及G23(以凝膠為基質(zhì)的制劑)的穿透最好。這是無法預(yù)期的，因為理論上所有6種制劑由于小檗堿在水相中的物理特性而應(yīng)以類似速率穿透。

圖2顯示3種凝膠懸浮制劑(G22、G23及G24)的累積小檗堿穿透量(ng/cm²)vs時間的繪圖。如圖所示，穿透率與穿透促進(jìn)劑(SDS)呈正相關(guān)，但與小檗堿尺寸呈負(fù)相關(guān)。相比于D90大于10微米的G22，具有D90小于10微米的小檗堿尺寸的G23及G24具有較高的穿透率。

實施例2

小檗堿制劑的迷你豬穿透研究

比較以下小檗堿制劑：1)C8、G22及G23；和2)0.125％、0.30％及G23。

皮膚：以大于10千歐姆的電阻(Millicell-ERS，Millipore)將迷你豬(Lanyu豬或Lee sung豬)的皮膚進(jìn)行皮板解剖(dermatome)至700微米。

穿透實驗

將豬皮膚置于擴(kuò)散池上，皮膚側(cè)與接收相(裝有PBS(pH 7.4，37℃))接觸。將20微升制劑添加到供給隔室內(nèi)的皮膚表面上。8小時后，使用三個干棉簽移除皮膚表面上的殘留制劑。在用制劑處理的第12及24小時結(jié)束時，自擴(kuò)散池卸下皮膚，并再次用三個水浸濕的棉簽仔細(xì)清理皮膚表面。采用10次膠帶剝離法(tape-stripping)移除角質(zhì)層。接著將皮膚置于玻璃盤上，并以60℃水浴經(jīng)90秒，使其熱分離成表皮層及真皮層。秤重并切碎經(jīng)分離的表皮層與真皮層，并用0.5毫升稀釋劑(1％H₃PO₄∶CH₃OH(1∶1))進(jìn)行萃取。以14,500轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心皮膚萃取物20分鐘。通過HPLC測定接收器溶液及皮膚萃取物的上清液中的氯化小檗堿的濃度。氯化小檗堿自皮膚中的回收率通過將已知量的該藥物加入皮膚組織中、再如上處理來測定。

結(jié)果

表2概括了該實驗的結(jié)果。

表2

第1回合(比較C8、G22、G23)

第2回合(比較0.125％、0.30％、G23)

迷你豬皮膚穿透結(jié)果表明：a)C8(乳霜制劑)令人驚訝地穿透良好；b)含有小檗堿顆粒的制劑經(jīng)24小時連續(xù)釋放(G22、G23vs C8、0.125％及0.3％)；c)相比于C8(乳霜制劑)，G22及G23(含有小檗堿顆粒的制劑)在24小時后于表皮層及真皮層中保留較多的小檗堿；d)含有小檗堿顆粒的制劑比小檗堿在溶液中的制劑穿透更好(G23vs 0.3％)；e)相比于0.3％制劑，盡管G23僅含有0.1％小檗堿，但于24小時后，G23在表皮層中保留大致相等量的小檗堿，而在真皮層中則保留更多的小檗堿；以及f)相比于其它穿透促進(jìn)劑(0.125％制劑中為乙醇及甘油；0.3％制劑中為丙二醇及PEG 400)，在G23中添加SDS導(dǎo)致穿透率增強(qiáng)及小檗堿在表皮層與真皮層中的局部濃度增加。

實施例3

含有小檗堿的局部用制劑治療的患者的皮膚活組織切片結(jié)果

受測對象為一位56歲的男性，其接受阿法替尼(afatinib，一種EGFRI抑制劑)以治療非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)。在接受阿法替尼后，該對象開始每日一次在其一側(cè)臉頰上施用G23制劑的局部凝膠，并于另一側(cè)臉頰上施用媒介物凝膠(不含小檗堿的G23)。

在完成二周的局部治療后，自該對象收集鼻唇溝(鼻子兩側(cè))的兩側(cè)皮膚活組織切片。經(jīng)由切開式活組織切片(incisional biopsy)取得1.0cm X 0.5cm的皮膚樣本，然后使用蘇木素-曙紅(H&E)染色進(jìn)行組織處理。由受過訓(xùn)練的皮膚病理學(xué)家進(jìn)行評估。

H&E染色結(jié)果(圖3及圖4)顯示，對于G23治療的皮膚區(qū)域，毛囊(follicular)結(jié)構(gòu)保持完整，且沒有炎性細(xì)胞浸潤(圖3)，但對于媒介物凝膠處理的皮膚，毛囊結(jié)構(gòu)受損，毛囊周圍區(qū)域炎性細(xì)胞大量浸潤，毛囊上皮的真皮層表皮層接合處空泡變化(vacuolar change)(圖4)，表明G23具有潛在抗炎作用，可用于治療與EGFR抑制劑相關(guān)的皮膚毒性。