一種粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮殺菌劑及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮殺菌劑及其制備方法，配方按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)如下：粉紅粘帚菌分生孢子粉5～30％、潤(rùn)濕分散劑8～20％、紫外保護(hù)劑0.1～1％、崩解劑2～20％、粘結(jié)劑1.0～10％和載體19～83.9％。粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮殺菌劑作為防治農(nóng)林致病性蘋果輪紋病和油菜菌核病的病害的應(yīng)用。本發(fā)明為粉紅粘帚菌干懸浮劑，提高了分生孢子的萌發(fā)率和懸浮率，潤(rùn)濕和崩解速度快，分散性和熱貯穩(wěn)定性優(yōu)良。具有分生孢子成活率高(80.16％)、保存期長(zhǎng)、崩解快，懸浮率高、粒徑細(xì)，附著力強(qiáng)、耐沖刷等優(yōu)點(diǎn)，是一種優(yōu)良的綠色農(nóng)藥。
【專利說(shuō)明】一種粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮殺菌劑及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種微生物農(nóng)藥，具體地說(shuō)是一種粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮殺菌劑其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]粉紅粘帚菌(Clonostachys rosea),隸屬絲孢菌,是一類廣泛存在于土壤中的植物病原真菌的重寄生菌。T.Yh-Mattila等研究發(fā)現(xiàn)其在含有機(jī)肥的土壤中分布廣泛?？杉纳喾N植物病原真菌的菌絲和菌核，同時(shí)還具有促進(jìn)植物生長(zhǎng)的作用。
[0003]粉紅粘帚菌可寄生核盤菌屬(Sclerotinia)、腐霉菌(Pythium debaryanum)、立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)和齊整小核菌(Sclerotium rolfsii)等多種植物病原菌。粘帚菌對(duì)植物病原菌具有產(chǎn)生抗菌素及毒素、重寄生、產(chǎn)生細(xì)胞壁降解酶以及協(xié)同作用等多重作用機(jī)制，可以有效抑制植物真菌病害的的發(fā)生。國(guó)外已有商品化粘帚菌顆粒劑的報(bào)道，并將不同菌株制成生物制劑，用于防治豌豆、大豆、向日葵、油菜、萵苣等菌核病及其它多種溫室和大田作物土傳病害。干懸浮劑，是20世紀(jì)80年代國(guó)際上開始研發(fā)的農(nóng)藥新劑型和新制劑加工技術(shù)。該劑型具有入水迅速崩解分散成高懸浮的固液分散體系的顆粒狀劑型，不含有機(jī)溶劑，懸浮穩(wěn)定性好、懸浮率高，無(wú)粉塵，包裝、運(yùn)輸、使用方便。干懸浮劑被認(rèn)為既具有粒劑的優(yōu)點(diǎn)，又具 懸浮劑高分散性能的理想農(nóng)藥劑型，已成為新劑型開發(fā)的熱點(diǎn)。由于粉紅粘帚菌菌株對(duì)助劑的生物相容性較差，其商品制劑至今未見(jiàn)市場(chǎng)銷售和田間大量應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0004]針對(duì)目前粘帚菌劑型缺乏，本發(fā)明提供了一種粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮殺菌劑其應(yīng)用。本發(fā)明利用其分生孢子粉制作水懸浮液，水懸浮液經(jīng)瞬間噴霧造粒制備成干懸浮劑。
[0005]本發(fā)明所采用的技術(shù)如下:一種粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮殺菌劑，配方按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)如下:粉紅粘帚菌分生孢子粉5~30%、潤(rùn)濕分散劑8~20%、紫外保護(hù)劑0.1~I %、崩解劑2~20%、粘結(jié)劑1.0~10%和載體19~83.9%0
[0006]本發(fā)明還具有如下技術(shù)特征:
[0007]1.所述載體為凹凸棒土、高嶺土、硅藻土、膨潤(rùn)土、白炭黑中的一種或其組合物。
[0008]2.所選潤(rùn)濕分散劑為 Morwet EFW、kl2、MF-5、TERffET 1010, WLN0、木質(zhì)素磺酸鈣、TERSPERSE2700、TERSPERSE2020、Morwet D425、ΝΝ0, T36 中的一種或其組合物。
[0009]3.所選崩解劑為交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮、尿素、硫酸銨、淀粉中的一種或其組合物。
[0010]4.所選粘結(jié)劑為CMC、木質(zhì)素磺酸鈉、PEG、草酸、糊精中的一種或其組合物。
[0011]5.所選的紫外保護(hù)劑為糊精、黃原膠、熒光素鈉、維生素C、納米氧化鋅的一種或其組合物。
[0012]6.所述的粉紅粘帚菌孢子粉含孢量≥I XlOltl個(gè)/g。[0013]7.優(yōu)選配方按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)配比如下:粉紅粘帚菌分生孢子粉5%、MorwetEFW與木質(zhì)素磺酸鈣的混合物12%、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮3%、納米氧化鋅0.2%, PEG4%和白炭黑75.8%，其中，Morwet EFW與木質(zhì)素磺酸鈣的混合物質(zhì)量比為1: 5。
[0014]8.優(yōu)選配方按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)配比如下:粉紅粘帚菌分生孢子粉20%、TERWET1010和TERSPERSE2700的混合物15%、交聯(lián)聚維酮4%，維生素C0.3%，木質(zhì)素磺酸鈉5%和硅藻土55.7%，其中TERffETlOlO和TERSPERSE2700的混合物質(zhì)量比為1: 4。
[0015]9、所述的一種粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮殺菌劑作為防治農(nóng)林致病性蘋果輪紋病和油菜菌核病的病害的應(yīng)用。
[0016]本發(fā)明為粉紅粘帚菌干懸浮劑，提高了分生孢子的萌發(fā)率和懸浮率，潤(rùn)濕和崩解速度快，分散性和熱貯穩(wěn)定性優(yōu)良，為植物病害防治提供了新材料。具有分生孢子成活率高(80.16% )、保存期長(zhǎng)、崩解快，懸浮率高、粒徑細(xì)，附著力強(qiáng)、耐沖刷等優(yōu)點(diǎn)，是一種優(yōu)良的綠色農(nóng)藥。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0017]圖1粉紅粘帚菌分生孢子圖；
[0018]圖2:粉紅粘帚菌干懸浮劑的粒徑分布圖。
【具體實(shí)施方式】
[0019]本試驗(yàn)中粉紅粘帚菌(Clonostachysrosea)通過(guò)形態(tài)學(xué)和ITS_rDNA序列鑒定為粉紅粘帚菌，登錄號(hào):KJ941018。來(lái)源于國(guó)家林業(yè)局948項(xiàng)目，課題名稱:灰霉病拮抗微生物生產(chǎn)技術(shù)引進(jìn)。
[0020]實(shí)施例1
[0021 ] 粉紅粘帚菌孢子粉5 %, Morwet EFff和木質(zhì)素磺酸韓混合物12 %,交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮3%，PEG4%，納米氧化鋅0.2%，白炭黑75.8%，其中，Morwet EFW和木質(zhì)素磺酸鈣混合物質(zhì)量比為1:5;
[0022]實(shí)施例2
[0023]粉紅粘帚菌孢子粉20 %，TERffETlOlO和TERSPERSE2700混合物15 %，交聯(lián)聚維酮4%，木質(zhì)素磺酸鈉 5%，維生素 C0.3%，硅藻土 55.7%，其中，TERffETlOlO 和 TERSPERSE2700混合物質(zhì)量比為1:4;
[0024]實(shí)施例3
[0025]粉紅粘帚菌孢子粉25 %，TERWET1010、TERSPERSE2020和T36混合物18 %，硫酸銨5%, CMC6%，納米氧化鋅 0.4%，膨潤(rùn)土 45.6%，其中，TERffET 1010, TERSPERSE2020 和 T36混合物質(zhì)量比為1:3:2;
[0026]實(shí)施例4
[0027]粉紅粘帚菌孢子粉7 %, Morwet EFff和木質(zhì)素磺酸韓混合物10 %,尿素2 %,草酸1%，黃原膠0.3%，高嶺土和白炭黑混合物79.7%，其中，Morwet EFW和木質(zhì)素磺酸鈣混合物質(zhì)量比為1: 4，高嶺土和白炭黑混合物質(zhì)量比為1: 4;
[0028]實(shí)施例5
[0029] 粉紅粘帚菌孢子粉28%，TERffET 1010, TERSPERSE2020和T36混合物16%，交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮和交聯(lián)聚維酮混合物20 %，木質(zhì)素磺酸鈉和PEG混合物10 %，熒光素鈉
0.6%，硅藻土和白炭黑混合物25.4%，其中，TERWET1010、TERSPERSE2020、T36混合物質(zhì)量比為1:1: 2，交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮和交聯(lián)聚維酮混合物質(zhì)量比為1: 3，木質(zhì)素磺酸鈉和PEG混合物質(zhì)量比為1: 4，硅藻土和白炭黑混合物質(zhì)量比為1:1;
[0030]實(shí)施例6
[0031]粉紅粘帚菌孢子粉30%，TERWET1010.TERSPERSE2020和T36混合物20%，交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮和交聯(lián)甲基纖維素鈉混合物18%，糊精和草酸混合物9%，納米氧化鋅和黃原膠混合物1%，膨潤(rùn)土和白炭黑混合物22%，其中，TERWET1010、TERSPERSE2020和T36混合物質(zhì)量比為2: 3: 5，交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮和交聯(lián)甲基纖維素鈉混合物質(zhì)量比為1: 2，糊精和草酸混合物質(zhì)量比為2: 1，納米氧化鋅和黃原膠混合物質(zhì)量比為2: 3，膨潤(rùn)土和白炭黑混合物質(zhì)量比為1:3;
[0032]實(shí)施例7
[0033]按上述組分及配比經(jīng)萬(wàn)能粉碎機(jī)機(jī)械混合均勻(分生孢子粉除外)后，加入適量的水，經(jīng)均質(zhì)機(jī)或砂磨機(jī)進(jìn)行超細(xì)處理，加入分生孢子粉，經(jīng)高速剪切機(jī)剪切使分生孢子粉均勻分散于上述組分的水溶液中，然后進(jìn)行噴霧造粒。
[0034]步驟一:按照重量百分比計(jì)，各助劑和載體經(jīng)萬(wàn)能粉碎機(jī)預(yù)混，加入適量的水后，再經(jīng)加拿大ATS高壓均質(zhì)機(jī)(型號(hào)AH100B)或砂磨機(jī)超細(xì)處理，工作壓力500~1200bar，粒徑控制在25 μ m ;
[0035]步驟二:將步驟一得到樣品與粉紅粘帚菌分生孢子粉按照比例混合后于高速剪切機(jī)，8000~15000r/min，20~60min，混合均勻后立即進(jìn)行噴霧造粒，即得到粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮劑。
[0036]實(shí)施例8
[0037]本發(fā)明同時(shí)提供了分生孢子粉制備方法，將保存的菌種25°C和12L:12D條件下活化培養(yǎng)至產(chǎn)孢，將分生孢子配制成3 X 18個(gè)孢子/ml濃度的懸液，接種于培養(yǎng)瓶振蕩培養(yǎng)48h(25土rC，180r/min)后，轉(zhuǎn)接入大型培養(yǎng)瓶擴(kuò)大培養(yǎng)液24h即為接種液。大米(g):水(ml)按1: 0.5混合后浸泡20min,洗凈浙干后濕熱滅菌至米粒六成熟,冷卻后按15%接種液拌入接種，25 ± I °C和12L:12D的條件下培養(yǎng)5~7d。將大米培養(yǎng)物經(jīng)冷凍真空干燥處理后收集粉紅粘帚菌分生孢子粉，使其含水率降至4%以下，利用振動(dòng)篩使孢子與大米基質(zhì)分開，測(cè)其含孢量、活孢率，置在4°C條件備用。
[0038]所述助劑的篩選主要針對(duì)生物相容性進(jìn)行，將各助劑(潤(rùn)濕分散劑、紫外保護(hù)劑、崩解劑、粘結(jié)劑)及載體分別按比例加入營(yíng)養(yǎng)液中，接種16個(gè)孢子/ml分生孢子懸浮液，25±11:、1801'/1^11振蕩培養(yǎng)1611，抽樣鏡檢萌發(fā)率(活孢率)。以萌發(fā)率高低判定各助劑的影響，芽管長(zhǎng)度等于或大于孢子直徑的孢子視為萌發(fā)，以孢子水懸液作為對(duì)照。
[0039]所述制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸劑中活孢率> 80.00% (圖1)，水分≤1.63%, pH值為6.5，孢子懸浮率≥82.12%，潤(rùn)濕時(shí)間為15s，崩解時(shí)間為78s，90%的粒度< 25 μ m，平均粒度為10.84μπι(圖2)，熱貯穩(wěn)定性30°C，60d ;為合格的粉紅粘帚菌干懸浮劑。
[0040]實(shí)施例9
[0041 ] 粉紅粘帚菌干懸浮劑的應(yīng)用[0042]I材料與方法
[0043]1.1供試材料
[0044]1.1.1 蘋果輪紋病菌(Physalosporapiricola Nose)
[0045]1.1.2 油菜菌核菌(Sclerotinia scIerot1rum)
[0046]1.1.3供試藥劑
[0047]本實(shí)施方式的干懸劑為5%粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮劑、20%粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮劑和25%粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮劑，對(duì)照分別為70%百菌清可濕性粉劑和25%嘧菌酯水懸浮劑。
[0048]1.2 方法
[0049]盆栽試驗(yàn):分別將各種病原菌轉(zhuǎn)至PDA平板活化3d，再轉(zhuǎn)至H)液體培養(yǎng)基中，每瓶轉(zhuǎn)5塊，培養(yǎng)6d，打菌絲，測(cè)透光率噴霧接種，保濕培養(yǎng)黃瓜苗至發(fā)病，三種病原菌透光率分別為1.3%,3.6%和9.8% ;將粉紅粘帚菌干懸浮劑分別采取稀釋400倍、800倍和1600倍液，噴霧防治病原菌，15d后檢查防治效果，根據(jù)病級(jí)指數(shù)劃分標(biāo)準(zhǔn)(表1)，按照以下公式計(jì)算防治效果。
[0050]表1病級(jí)指數(shù)劃分標(biāo)準(zhǔn)
[0051]
【權(quán)利要求】
1.一種粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮殺菌劑，其特征在于，配方按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)如下:粉紅粘帚菌分生孢子粉5~30%、潤(rùn)濕分散劑8~20%、紫外保護(hù)劑0.1~I %、崩解劑2~20%、粘結(jié)劑1.0~10%和載體19~83.9%?
2.如權(quán)利要求1所述的一種粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮殺菌劑，其特征在于:所述載體為凹凸棒土、高嶺土、硅藻土、膨潤(rùn)土、白炭黑中的一種或其組合物。
3.如權(quán)利要求1所述的一種粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮殺菌劑，其特征在于:所選潤(rùn)濕分散劑為 Morwet EFW、kl2、MF_5、TERffET 1010, WLN0、木質(zhì)素磺酸鈣、TERSPERSE2700、TERSPERSE2020、Morwet D425、ΝΝ0, T36 中的一種或其組合物。
4.如權(quán)利要求1所述的一種粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮殺菌劑，其特征在于:所選崩解劑為交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮、尿素、硫酸銨、淀粉中的一種或其組合物。
5.如權(quán)利要求1所述的一種粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮殺菌劑，其特征在于:所選粘結(jié)劑為CMC、木質(zhì)素磺酸鈉、PEG、草酸、糊精中的一種或其組合物。
6.如權(quán)利要求1所述的一種粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮殺菌劑，其特征在于:所選的紫外保護(hù)劑為糊精、黃原膠、熒光素鈉、維生素C、納米氧化鋅的一種或其組合物。
7.如權(quán)利要求1所述的一種粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮殺菌劑，其特征在于:所述的粉紅粘帚菌孢子粉含孢量> IX101°個(gè)/g。
8.如權(quán)利要求1所述的一種粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮殺菌劑，其特征在于，優(yōu)選配方按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)配比如 下:粉紅粘帚菌分生孢子粉5%、Morwet EFff與木質(zhì)素磺酸鈣的混合物12%、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮3%、納米氧化鋅0.2%、PEG4%和白炭黑75.8%，其中，Morwet EFW與木質(zhì)素磺酸鈣的混合物質(zhì)量比為1: 5。
9.如權(quán)利要求1所述的一種粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮殺菌劑，其特征在于，優(yōu)選配方按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)配比如下:粉紅粘帚菌分生孢子粉20%、TERffETlOlO和TERSPERSE2700的混合物15%、交聯(lián)聚維酮4%，維生素C0.3%，木質(zhì)素磺酸鈉5%和硅藻土 55.7%，其中TERWET1010和TERSPERSE2700的混合物質(zhì)量比為1: 4。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的一種粉紅粘帚菌分生孢子粉干懸浮殺菌劑作為防治農(nóng)林致病性蘋果輪紋病和油菜菌核病的病害的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A01N25/14GK104026154SQ201410300518
【公開日】2014年9月10日 申請(qǐng)日期:2014年6月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月19日
【發(fā)明者】王志英, 孫麗麗, 曹傳旺, 景天忠, 王超, 董瀛謙 申請(qǐng)人:東北林業(yè)大學(xué)