一種載有鏡檢浮載劑的線蟲玻片的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種載有鏡檢浮載劑的線蟲玻片制備方法，通過本方法制備的線蟲玻片中加載有由二甲基亞砜、甘油、氫氧化甲、三乙醇胺、96％體積百分比濃度的酒精、40％體積百分比濃度的甲醛溶液、無菌蒸餾水配制的浮載液，由于所載浮載液的滲透，提高了蟲體的膨脹度，由于相比蒸餾水作為鏡檢介質(zhì)的浮載液的折射率更高且更接近線蟲蟲體自身的折射率，增加了顯微鏡的分辨率和線蟲蟲體的透明度，從而改善了對線蟲細微特征的觀察效果。
【專利說明】
一種載有鏡檢浮載劑的線蟲玻片的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及線蟲玻片的制作方法，具體涉及一種載有鏡檢浮載劑的線蟲玻片制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]線蟲(nematode)是一種低等無脊椎動物，廣泛分布于陸地、海洋和湖泊之中。據(jù)保守估計，全世界線蟲種類超過50萬種，線蟲中的一些種類具有寄生性，按照寄主種類可分為動物寄生類和植物寄生類。線蟲通過其對寄主的危害，從而引起經(jīng)濟損失，有些種類則直接危害人類。近年來，隨著國際間貿(mào)易往來的日益頻繁，線蟲病害傳播的機會大大增加，使得線蟲成為世界各國廣泛關(guān)注的對象。如我國2007年公布的對外植物檢疫性有害生物名錄中，有20種(屬)的線蟲為檢疫性線蟲。對線蟲進行分類鑒定是研究其致病機理的基礎(chǔ)，目前在線蟲分類鑒定領(lǐng)域使用的線蟲鑒定方法主要有形態(tài)學鑒定方法和分子生物學鑒定方法。雖然近些年來分子生物學的蓬勃發(fā)展使線蟲分類鑒定進入了新的層次，但分子鑒定發(fā)展歷史還不長，其鑒定體系尚未完善，同時分子生物學鑒定需要的技術(shù)要求較高，需要特定的儀器設(shè)備才能開展。因此可預見的一段時期內(nèi)，利用顯微鏡等簡單儀器進行的形態(tài)學鑒定依然是線蟲分類鑒定的主要技術(shù)手段。利用顯微鏡對線蟲分類鑒定和形態(tài)研究，一般首先要制作線蟲玻片，目前線蟲臨時玻片制作一般直接用水做浮載劑。在利用顯微鏡進行線蟲分類鑒定時的一般方法是，將線蟲蟲體置放于載玻片中央的浮載劑中，加蓋蓋玻片后進行顯微鏡鏡檢觀察。觀察的要點是線蟲蟲體各種微小特征機構(gòu)，包括消化系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)和體表系統(tǒng)的各結(jié)構(gòu)形狀、大小、數(shù)量等。其中部分結(jié)構(gòu)特征大小僅2 μ m-10 μ m，觀察時受到顯微鏡分辨率和樣品自身結(jié)構(gòu)的影響，這些構(gòu)造點的觀察較為困難，從而影響鑒定的準確性。解決的辦法通常是提高顯微鏡的分辨率及降低樣品自身結(jié)構(gòu)的影響兩種途徑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種載有浮載劑的線蟲玻片制備方法。通過增加顯微鏡鏡檢時介質(zhì)的折射率，從而提高分辨率，同時增加線蟲蟲體自身透明度和膨脹度，從而改善鏡檢時對線蟲細微特征的觀察效果。
[0004]本發(fā)明解決的技術(shù)問題是一種載有鏡檢浮載劑的線蟲玻片的制備方法，步驟如下:
[0005]a、量取50ml無菌蒸懼水倒入容器,放置于加熱板上，加熱至60°C保持5分鐘；
[0006]b、向步驟a所述無菌蒸餾水中加入0.4mL 二甲基亞砜溶液，攪拌溶解；
[0007]C、向步驟b所述溶液中加入20mg氫氧化甲，攪拌至全部溶解；
[0008]d、向步驟c所述溶液中加入3.5mL三乙醇胺，攪拌至全部溶解；
[0009]e、向步驟d所述溶液中加入1mL甘油溶液,攪拌至全部溶解；
[0010]f、向步驟e所述溶液在加熱板上保溫10分鐘后，關(guān)閉加熱板，冷卻30分鐘；
[0011 ] g、向步驟f所述溶液中加入4mL96%的乙醇溶液，攪拌至全部溶解；
[0012]h、向步驟g所述溶液中加入加入3mL 4%的甲醛溶液，即得到浮載液；
[0013]g、用移液槍將10 μ L步驟g所述溶液滴加于載玻片中央；
[0014]1、用線蟲挑針挑取線蟲若干條，置于步驟g所述液滴中；
[0015]k、在步驟i所述溶滴上加蓋蓋玻片，并使用凡士林封閉蓋玻片四周，得到載有浮載劑的線蟲玻片。
[0016]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明優(yōu)點在于:
[0017](I)由于甘油等物質(zhì)的高折射率，加入甘油后的浮載液折射率高于蒸餾水，增加了作為顯微鏡鏡檢時介質(zhì)的浮載液的折射率，從而提高了顯微鏡觀察時的分辨率，可以分辨更為細微的蟲體特征；
[0018](2)由于相比蒸餾水作為鏡檢介質(zhì)的浮載液的折射率更高且更接近線蟲蟲體自身的折射率，增加了線蟲蟲體的透明性，降低了線蟲自身結(jié)構(gòu)對觀察效果的影響，浮載液的滲透提高了線蟲蟲體的膨脹率，從而增強對細微特征的辨識。
【附圖說明】
[0019]圖1為本發(fā)明一種載有鏡檢浮載劑的線蟲玻片制備方法的流程圖；
[0020]圖示中標識 slOU sl02、sl03、sl04、sl05、sl06、sl07、、sl08、sl09、sllO 為流程的各步驟。
【具體實施方式】
[0021]下面結(jié)合附圖和具體實施例對本發(fā)明的具體技術(shù)方案做進一步的詳細描述。
[0022]圖1為本發(fā)明的一種載有鏡檢浮載劑的線蟲玻片制備方法的流程圖，如圖所示，本發(fā)明包括以下步驟:
[0023]步驟SlOl，量取50ml無菌蒸餾水倒入容器，放置于加熱板上，加熱至60°C保持5分鐘；
[0024]步驟S102，向無菌蒸餾水中加入0.4mL 二甲基亞砜溶液，并攪拌至全部溶解；
[0025]步驟sl03，向加入二甲基亞砜溶液的無菌蒸餾水中加入20mg氫氧化甲，并攪拌至全部溶解；
[0026]步驟S104，向加入氫氧化甲的二甲基亞砜水溶液中加入3.5mL三乙醇胺，并攪拌至全部溶解；
[0027]步驟sl05，量取1mL甘油溶液，加入sl04步驟所述的溶液中，并攪拌至全部溶解；
[0028]步驟sl06，將sl05步驟所述的溶液在加熱板上保溫10分鐘后，關(guān)閉加熱板，冷卻30分鐘；
[0029]步驟sl07，在sl06步驟所述的溶液中加入4mL96%體積濃度百分比的乙醇溶液，攪拌至全部溶解；
[0030]步驟sl08，在sl07步驟所述的溶液中加入3mL 40%體積濃度百分比的甲醛溶液，即得到浮載液；
[0031]步驟sl09，用移液槍將10 μ L所述浮載液滴加于載玻片中央；用線蟲挑針挑取線蟲若干條，置于液滴中；
[0032]步驟sllO，在步驟sl09所述液滴上加蓋蓋玻片，并用凡士林封閉蓋玻片四周，得到載有浮載劑的線蟲玻片。
[0033]以上所述，僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并非用于限定本發(fā)明的保護范圍。
【主權(quán)項】
1.一種載有鏡檢浮載劑的線蟲玻片的制備方法，其特征在于步驟如下: a、量取50ml無菌蒸餾水倒入容器，放置于加熱板上，加熱至60°C保持5分鐘； b、向步驟a所述無菌蒸餾水中加入0.4mL 二甲基亞砜溶液，攪拌溶解； C、向步驟b所述溶液中加入20mg氣氧化甲，攪拌至全部溶解； d、向步驟c所述溶液中加入3.5mL三乙醇胺,攪拌至全部溶解； e、向步驟d所述溶液中加入1mL甘油溶液,攪拌至全部溶解； f、向步驟e所述溶液在加熱板上保溫10分鐘后，關(guān)閉加熱板，冷卻30分鐘； g、向步驟f所述溶液中加入4mL96%的乙醇溶液，攪拌至全部溶解； h、向步驟g所述溶液中加入加入3mL4%的甲醛溶液，即得到浮載液； g、用移液槍將10 μ L步驟g所述溶液滴加于載玻片中央； 1、用線蟲挑針挑取線蟲若干條，置于步驟g所述液滴中； k、在步驟i所述溶滴上加蓋蓋玻片，并使用凡士林封閉蓋玻片四周，得到載有浮載劑的線蟲玻片。
【文檔編號】G01N1/30GK105890957SQ201410535886
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2014年10月13日
【發(fā)明人】邊勇, 劉若思, 鄭春生, 汪萬春, 高文娜, 呂玉峰, 江麗輝
【申請人】中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局