專利名稱：：一種用于殺滅蚊蟲的蘇云金桿菌懸浮劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及生物源性殺蟲劑
技術(shù)領(lǐng)域：
，更具體地說是涉及一種能有效控制蚊蟲的危害，且對環(huán)境無污染，對人、畜、禽、魚等均無毒性的獸用高科技生物殺蚊制劑。
背景技術(shù)：
：蛟蟲是重要的醫(yī)學(xué)昆蟲，與人畜疾病的關(guān)系極為密切。在集約化養(yǎng)殖場，蚊蟲不僅騷擾和叮刺人畜，出現(xiàn)瘙癢、皮疹、皮炎，影響動物休息外，還能影響公畜精液質(zhì)量，并能傳播各種嚴(yán)重蚊媒疾病，被稱為畜牧場"三害"之一，對人類和動物健康危害很大。長期以來，應(yīng)用化學(xué)藥物進(jìn)行防制是主要的蚊蟲控制措施。但隨著化學(xué)殺蟲劑的種類不斷增多，應(yīng)用范圍逐漸擴(kuò)大，致使蚊蟲發(fā)生抗性的程度與范圍亦逐年發(fā)展。長期大量使用化學(xué)殺蟲劑，不僅導(dǎo)致蚊蟲抗藥性的出現(xiàn)和擴(kuò)散，還威脅非目標(biāo)生物的生存，破壞生態(tài)平衡，嚴(yán)重污染養(yǎng)殖場環(huán)境，威脅到畜產(chǎn)品安全。隨著人們對自身生存環(huán)境質(zhì)量的要求越來越高，高毒、高殘留、易產(chǎn)生抗性、易污染環(huán)境的化學(xué)殺蟲劑正逐漸被更新或淘汰，探討有效的蚊蟲防制措施尤其是生物防制措施日漸受到世界各國的高度重視。蛟蟲生物控制是指人為地增加蚊蟲天敵的種類和數(shù)量，包括細(xì)菌、捕食性天敵和寄生物等，以打破自然界中蚊蟲與自然天敵之間的相對平衡，從而有效地控制蚊蟲的孳生，其特點(diǎn)包括作用特異性強(qiáng)、對非目標(biāo)生物和有益生物無害、不造成環(huán)境污染、不易產(chǎn)生抗性、藥物持續(xù)時間較長、大量節(jié)約施藥所需的人力物力。生物防制蚊蟲措施在醫(yī)學(xué)昆蟲方面的研究和應(yīng)用較多，并取得了一定的成效，但在集約化養(yǎng)殖場的應(yīng)用尚未有報道。蘇云金桿菌(bacillusthuringiensis,Bt)，是包括許多變種的一類產(chǎn)菌體的芽孢桿菌，是一種生物源性殺蟲劑，在自然界水體和土壤中廣泛存在，從自然界即可分離到對不同蚊類幼蟲有效的菌株，是單基因表達(dá)的產(chǎn)物，能產(chǎn)生內(nèi)毒素伴孢晶體，通過胃毒作用，可用于防治直翅目、鞘翅目、膜翅目，特別是鱗翅目的多種幼蟲。為此，如何將蘇云金桿菌與對各類蚊幼蟲速殺和持效作用相結(jié)合，提供一種無刺激性，對人、畜禽、魚類安全的滅蚊藥劑已成為人們所探討的課題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的就是為了解決現(xiàn)有技術(shù)之不足而提供的一種不僅殺蚊譜廣、安全高效、使用便捷，而且對環(huán)境友好的用于殺滅蚊蟲的蘇云金桿菌懸浮劑。本發(fā)明是采用如下技術(shù)解決方案來實(shí)現(xiàn)上述目的一種用于殺滅蚊蟲的蘇云金桿菌懸浮劑，其特征在于，它是以蘇云金桿菌為有效成分，經(jīng)生物發(fā)酵的發(fā)酵液，測定效價后，配制而成的一定濃度的混懸液，該混懸液的蘇云金桿菌百分比濃度為0.251.5%。作為上述方案的進(jìn)一步說明，所述蘇云金桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)基采用下列重量百分比的各組分配置而成玉米淀粉3~4%、黃豆餅粉3.5~4.5%，酵母粉0.7~0.8%，蛋白胨0.3~0.5%，魚粉1.01.2%，其余為水。所述蘇云金桿菌的發(fā)酵溫度為2633-C,通風(fēng)量為1:1.2~1.6，壓強(qiáng)為0.02~0.06pa/cm2，攪拌速度為18~22轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵時間為30~45小時。蘇云金桿菌細(xì)菌原液用于防治蚊蟲的幼蟲及蛹，該蚊蟲包括淡色庫蚊、三帶喙庫蚊、白紋伊蚊和中華按蚊，蘇云金芽孢桿菌細(xì)菌原液中活菌數(shù)為8xl06CFU/ml。本發(fā)明采用上述技術(shù)解決方案所能達(dá)到的有益效果是-1、本發(fā)明采用把蘇云金芽孢桿菌制成細(xì)菌原液，通過對不同齡期的幾種蚊蟲幼蟲進(jìn)行敏感性測定表明此種Bt細(xì)菌原液對各類蚊幼蟲有著較好的速殺和持效作用，無刺激性，對人、畜禽、魚類安全，成本較低，操作方法簡單，節(jié)省人力物力。2、Bt適合工廠化規(guī)模生產(chǎn)，使用安全，不污染環(huán)境和對非靶標(biāo)生物無毒，與集約化養(yǎng)殖場現(xiàn)用防蚊制劑相比，它是一種殺蚊譜廣、安全高效、使用便捷、環(huán)境友好的高科技生物殺蚊制劑。具體實(shí)施例方式本發(fā)明一種用于殺滅蚊蟲的蘇云金桿菌懸浮劑，它是以蘇云金桿菌為有效成分，經(jīng)生物發(fā)酵的發(fā)酵液，測定效價后，配制成一定濃度的混懸液，是一種純生物農(nóng)藥，蘇云金桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)基包括淀粉、植物蛋白、植物脂肪、粗纖維。其中，培養(yǎng)基采用下列重量百分比的各組分配置而成玉米淀粉34%、黃豆餅粉3.5~4.5%，酵母粉0.70.8%，蛋白胨0.3~0.5°/。，魚粉1.0~1.2%，其余為水。一般優(yōu)選玉米淀粉3.3%、黃豆餅粉4%，酵母粉0.725%,蛋白胨0.4%，魚粉1.05%，其余為水。蘇云金桿菌的發(fā)酵溫度為26~33°C，通風(fēng)量為1:1.2~1.6，壓強(qiáng)為0.02-0.06pa/cm2，攪拌速度為18~22轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵時間為30~45小時。以下是蘇云金芽孢桿菌細(xì)菌原液對蚊幼蟲和蛹的敏感性測定-1、準(zhǔn)備供試蚊蟲和藥劑蚊卵、幼蟲和蛹均采集自自然環(huán)境積水中，室溫條件下在非專業(yè)實(shí)驗(yàn)室中分類飼養(yǎng)，飼以酵母片，適應(yīng)生長環(huán)境后隨機(jī)分組進(jìn)行試驗(yàn)；而白紋伊蚊則采用黑色具粗糙面的容器盛放一定量自來水放置在蚊蟲出沒較多的草叢中，進(jìn)行誘蚊，每天觀察一次，當(dāng)出現(xiàn)幼蟲時，吸取幼蟲至白瓷盆中詞養(yǎng)，喂給酵母粉，從形態(tài)學(xué)方面鑒定幼蟲為白紋伊蚊幼蟲，備用。供試藥物為蘇云金芽孢桿菌細(xì)菌原液，活菌數(shù)為8xl06CFU/ml。2、對蚊卵孵化影響的情況觀察將潔凈自來水在戶外放置24h后去氯，加入Bt細(xì)菌原液配制成不同濃度的藥液，然后將所采集的卵筏(包括淡色庫蚊卵筏、三帶喙庫蚊卵筏和褐尾庫蚊卵筏)置于藥液中，觀察制劑對卵筏孵化情況的影響。用電動吸蚊器捕捉已經(jīng)吸血的騷擾阿蚊和白紋伊蚊分別放入50cmx33cmx30cm成蚊吸血籠中，用平皿盛少量的10%葡萄糖水放入籠中，并放入滅菌的紗布，供成蚊吸取水份，在另一個平皿中放置濕潤的滅菌紗布，供雌蛟產(chǎn)卵。同時設(shè)立空白對照組，提供新鮮的10%葡萄糖水和產(chǎn)卵平皿。3、對白紋伊蚊誘蚊誘卵效果觀察將3個黑色具粗糙內(nèi)面的容器盛放相同量自來水放置于較陰涼地方，其中2個容器中分別加入0.1%、0.05%藥液，另外l個容器中不加入任何東西，進(jìn)行誘蚊，每天觀察一次。設(shè)立空白對照組。4、對不同發(fā)育齡期蛟幼蟲和蛹敏感性測定用去氯水將Bt細(xì)菌原液稀釋成一系列濃度，然后將100ml藥液倒入透明膠杯中，再用小網(wǎng)兜分別隨機(jī)撈取發(fā)育情況基本相同的I、II、III、IV齡幼蟲或蛹放入其中，每組20頭。共設(shè)3個濃度，分別為1.0%、0.5%、0.25%，同時設(shè)立空白對照組，每隔12h檢査幼蟲或蛹死亡情況。每個處理設(shè)46個重復(fù)，取其平均死亡率。5、測定結(jié)果與分析a、Bt細(xì)菌原液對蚊卵的孵化影響結(jié)果測定結(jié)果表明，在藥液中淡色庫蚊、三帶喙庫蚊和褐尾庫蚊卵筏均不能正常孵化出幼蟲，藥液在液面形成一層吹不散的混濁的膜，水質(zhì)變差，有發(fā)酵酸味，而在清水中卵筏均能正常孵化出I齡幼蟲。在吸血籠內(nèi)的已吸血的騷擾阿蚊和白紋伊蚊在紗布上產(chǎn)卵后，將卵粒放入清水中孵化，結(jié)果表明沾有藥液的紗布上卵粒較少，放入水中后不能孵化成幼蟲，而空白對照組紗布上所產(chǎn)卵粒較多，放入水中后第二天即孵化出幼蟲。b、Bt細(xì)菌原液對白紋伊蛟誘蚊誘卵效果影響經(jīng)觀察，用藥組容器內(nèi)可見死亡成蚊，容器壁可見卵粒，但卵粒無法正常孵化出幼蟲，而不加藥組容器內(nèi)誘到大量的蚊幼蟲。另外，加藥組容器繼續(xù)放置長時間，均無蚊幼蟲孳生現(xiàn)象。c、不同蚊種I齡幼蟲對Bt細(xì)菌原液的敏感性詳細(xì)結(jié)果如表1所示。從表1可以看出，在Bt細(xì)菌原液藥液中處理12h后各類蚊幼蟲的半數(shù)致死濃度(LC50)均為0.25%。處理12h后蚊幼蟲對0.25%Bt藥物的敏感性為中華按蚊>淡色庫蚊>三帶喙庫蚊〉白紋伊蚊。測定結(jié)果表明，Bt細(xì)菌原液對中華按蚊I齡幼蟲的敏感性最強(qiáng)，在給藥lh后即開始出現(xiàn)幼蟲死亡。表l不同濃度Bt(細(xì)菌原液)處理后不同時間內(nèi)各類蚊I齡幼蟲平均死亡率<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注以上數(shù)據(jù)為3次重復(fù)的平均值。d、從表2可以看出，在Bt細(xì)菌原液藥液中處理12h后淡色庫蚊、白紋伊蚊和中華按蚊幼蟲的半數(shù)致死濃度(LC50)均為0.25%,而三帶喙庫蚊幼蟲的半數(shù)致死濃度則為1.0%。在0.5%藥物濃度下處理12h后三帶喙庫蚊幼蟲的平均死亡率較低，但隨著處理時間的延長，幼蟲的平均死亡率逐漸升高。測定結(jié)果表明，在處理12h后幼蟲對Bt細(xì)菌原液的敏感性為中華按蚊>淡色庫蚊>三帶喙庫蛟〉白紋伊蚊。表2不同濃度Bt(細(xì)菌原液)處理后不同時間內(nèi)各類蚊II齡幼蟲平均死亡率<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注以上數(shù)據(jù)為3次重復(fù)的平均值。e、不同蚊種in齡幼蟲對Bt細(xì)菌原液的敏感性從表3可以看出，隨著幼蟲齡期的增大，對同樣濃度藥物的敏感性逐漸下降。測定結(jié)果表明，中華按蚊III齡幼蟲對Bt很敏感，處理12h后中華按蛟幼蟲的半數(shù)致死濃度為0.25%，平均死亡率達(dá)到100%。淡色庫蚊幼蟲的半數(shù)致死濃度(LC50)為0.5%，而三帶喙庫蚊和白紋伊蚊幼蟲對藥物的敏感性降低，半數(shù)致死濃度為1.0%，幼蟲平均死亡率較低，但隨著處理時間的延長，幼蟲的平均死亡率逐漸升高。表3不同濃度Bt(細(xì)菌原液)處理后不同時間內(nèi)各類蚊m齡幼蟲平均死亡率<table>complextableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>f、不同蚊種IV齡幼蟲對Bt細(xì)菌原液的敏感性從表4測定結(jié)果表明，隨著幼蟲齡期的增長，在同樣的濃度作用下，除中華按蚊幼蟲外，其余IV齡幼蟲對同樣濃度藥物的敏感性降低。Bt細(xì)菌原液對中華按蚊幼蟲的半數(shù)致死濃度為0.25%。淡色庫蚊幼蟲的半數(shù)致死濃度為0.5%，三帶喙庫蚊和白紋伊蚊幼蟲的半數(shù)致死濃度為1.0%。隨著處理時間的延長，幼蟲的平均死亡率逐漸升高。表4不同濃度Bt(細(xì)菌原液)處理后不同時間內(nèi)各類蚊IV齡幼蟲平均死亡率<table>complextableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>g、不同蛟種蛹對Bt細(xì)菌原液的敏感性從表5測定結(jié)果表明，三帶喙庫蚊、白紋伊蚊和中華按蚊蛹對藥物的敏感性較淡色庫蚊蛹高；在處理12h后三帶喙庫蚊、白紋伊蚊和中華按蚊蛹半數(shù)致死濃度均為0.25%，而淡色庫蚊蛹則為0.5%。隨著處理時間的延長，蛹的死亡率逐漸升高。表5各類蚊蛹處理24h后對Bt細(xì)菌原液的敏感性<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注以上數(shù)據(jù)為6次重復(fù)的平均值。本發(fā)明并不局限于上述實(shí)施例，以上所顯示的僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，不能以此來限定本發(fā)明之權(quán)利范圍，因此依本發(fā)明申請專利范圍所作的等同變化，仍屬本發(fā)明所涵蓋的范圍。權(quán)利要求1、一種用于殺滅蚊蟲的蘇云金桿菌懸浮劑，其特征在于，它是以蘇云金桿菌為有效成分，經(jīng)生物發(fā)酵的發(fā)酵液，測定效價后，配制而成的一定濃度的混懸液，該混懸液的蘇云金桿菌重量百分比濃度為0.25～1.5％。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于殺滅蚊蟲的蘇云金桿菌懸浮劑，其特征在于所述蘇云金芽孢桿菌細(xì)菌原液的活菌數(shù)為(7~9)xl06CFU/ml。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于殺滅蚊蟲的蘇云金桿菌懸浮劑，其特征在于所述蘇云金桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)基采用下列重量百分比的各組分配置而成玉米淀粉3~4%、黃豆餅粉3.5~4.5%,酵母粉0.70.8%，蛋白胨0.30.5%，魚粉1.0-1.2°/。，其余為水。4、根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的一種用于殺滅蚊蟲的蘇云金桿菌懸浮劑，其特征在于所述蘇云金桿菌的發(fā)酵溫度為2633t,通風(fēng)量為1:1.21.6，壓強(qiáng)為0.02~0.06pa/cm2，攪拌速度為1822轉(zhuǎn)/分，發(fā)酵時間為30-45小時。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于殺滅蚊蟲的蘇云金桿菌懸浮劑，其特征在于它用于防治蚊蟲的幼蟲及蛹，該蚊蟲包括淡色庫蛟、三帶喙庫蚊、白紋伊蚊和中華按蛟。全文摘要本發(fā)明公開了一種用于殺滅蚊蟲的蘇云金桿菌懸浮劑，其特征在于，它是以蘇云金桿菌為有效成分，經(jīng)生物發(fā)酵的發(fā)酵液，測定效價后，配制而成的一定濃度的混懸液，該混懸液的蘇云金桿菌百分比濃度為0.25～1.5％。本發(fā)明是一種高科技生物殺蚊制劑，達(dá)到快速簡便殺滅蚊幼蟲、有效保護(hù)環(huán)境和畜群、保障食品安全的控蚊效果，解決養(yǎng)殖場中蚊患流行的困擾。文檔編號A01N63/02GK101347129SQ20081019822公開日2009年1月21日申請日期2008年9月1日優(yōu)先權(quán)日2008年9月1日發(fā)明者譚志堅申請人:佛山市正典生物技術(shù)有限公司