一種glp-1衍生物dlg3312及其固相化學合成方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物、化學工程【技術領域】，公開了一種GLP-1衍生物DLG3312，包括其互變異構體、溶劑化物和藥物學可接受鹽，其結構為X-Y-X；其中，X表示的序列為H-X8-EGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG，其中：X8是A、G、dA或V中的任意一個；Y表示二氨基羧酸，包括Lys、Orn、2，4-DAB或2，6-DAP。本發(fā)明還公開了所述GLP-1衍生物DLG3312的固相化學合成方法。本發(fā)明制備的DLG3312具有長于天然GLP-1的體內(nèi)降血糖時間；本發(fā)明固相化學合成的制備方法生產(chǎn)步驟少，生產(chǎn)成本低，特別適于在制備治療糖尿病的藥物中作該藥物的活性成分。
【專利說明】-種GLP-1衍生物DLG3312及其固相化學合成方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物、化學工程【技術領域】，具體地涉及一種具有人胰高血糖素樣 肽-1 (GLP-1)活性的GLP-1衍生物DLG3312及其固相化學合成方法。

【背景技術】
[0002] 1929年，Zunz和Labbare將-類從腸道中分離出來的、可以促進葡萄糖刺激胰島 素分泌的體液因子命名為腸降糖素（incretin)，GLP-1是其中的主要成分。GLP-1是由腸 道L細胞分泌的胰高血糖素前原基因的產(chǎn)物，其在食物攝入后分泌。體內(nèi)主要存在兩種生 物活性形式：GLP-1 (7?36) amide和GLP-1 (7?37)，GLP-1約80%的循環(huán)活性來自前者。 GLP-1作為一種激素，通過刺激分泌胰島素降低餐后血糖，同時抑制胰高血糖素的分泌。并 且，其具有抑制胃腸道食物的清空和食物的攝入，此外，其能夠引起胰島β細胞的增殖。
[0003] GLP-1適用于II型糖尿病的治療，其降低血糖的效應是血糖依賴性的，當血糖濃 度高于6mmol/L時，GLP-1顯著促進胰島素分泌，而一旦血糖恢復至正常值則不再繼續(xù)發(fā)揮 降糖作用，所以在用藥過程中不會出現(xiàn)低血糖。通過長期治療，能夠有效改善Π 型糖尿病 患者的糖化血紅蛋白量，對II型糖尿病的預防和治療具有良好的應用前景。
[0004] 在實際應用中，根據(jù)以往研究結果，GLP-1進入體內(nèi)后的半衰期為2min，其原因在 于體內(nèi)的多種蛋白酶對GLP-1的降解，目前DPP-4是其中最主要關注的酶。為抵抗此酶對 GLP-1的降解，延長在體內(nèi)的藥效時間，已有多種方法，如氨基酸的定點突變、分子修飾等。 如GLP-1衍生物CJC-1131在動物體內(nèi)有效降糖時間為10?12h，其通過化學合成利用接 頭分子將多肽與血漿蛋白相連接并于8位替換為D-Ala而大大延長半衰期；LY315902是在 GLP-1上連接1個8C脂肪鏈，在狗體內(nèi)半衰期為3-6h ;利拉魯肽（Liraglutide)，其于GLP-1 的26位的賴氨酸處連接1個16C脂肪酸側鏈，并將34位突變?yōu)橘嚢彼?，皮下注射在人體內(nèi) 血漿中半衰期為12?13h ;PEG修飾過的GLP-1其有效降糖時間是天然GLP-1血漿半衰期 的12倍左右等等。
[0005] 雖然通過對GLP-1的序列進行改造能夠延長藥效時間，但是由于改造后的分子與 天然GLP-1的同源率低，差異較大導致不同程度的副作用，如過敏、嘔吐、胃腸不適等。
[0006] 現(xiàn)有技術中已有采用DNA重組技術制備GLP-1衍生物，名稱為"一種人胰高血糖素 樣肽-1衍生物及其制備和應用"發(fā)明專利（200610024355. X)中存在以下缺點：利用大腸 桿菌作為GLP-1衍生物表達的宿主菌，在后續(xù)純化過程中，需要檢測和控制大腸桿菌內(nèi)毒 素以及大腸桿菌DNA的殘留量，增加了生產(chǎn)步驟和成本。
[0007] GLP-1在體內(nèi)有兩種形式，一種為GLP-1 (7?36)amide，由30個氨基酸殘基組 成，另一種為GLP-1 (7-37)，由31個氨基酸殘基組成，二者均有生物學活性。本發(fā)明涉及的 GLP-1 指 GLP-1 (7-37)，其序列如下：HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG。
[0008] 本發(fā)明改進了 GLP-1序列及結構，提出了一種GLP-1衍生物DLG3312及其固相化 學合成方法。本發(fā)明提出的GLP-1衍生物DLG3312在保留良好的體內(nèi)降糖活性的基礎上解 決了天然GLP-1體內(nèi)降糖時間短的問題，其原因主要在于：本發(fā)明GLP-1衍生物DLG3312的 結構X-Y-X中，X與Y的連接方式為2個X的碳端羧基分別與Y的2個氨基縮合連接，形成 由2個X與1個Υ構成的特定結構的為尾-尾同源二聚體。本發(fā)明中，二聚體的激動活性 相對于單體有較大提高，從而能夠更有效地增加胰島素分泌的總量；二聚體中包含突變的 氨基酸，同時，二聚結構就其本身而言，能阻礙與體內(nèi)多種酶與其的結合，從而降低對其的 降解速率；二聚體與單體相比，具有相對較大的分子量，由此相對延長因腎小球濾過作用對 其清除的時間，使之在體內(nèi)停留時間增加，延長藥效時間。同時，本研究的DLG3312還解決 了安全性問題：避免了目前所使用的多種糖尿病藥物具有的副作用--造成低血糖、體重 增加，引起胰島素抵抗、胰島β細胞衰竭等等，DLG3312具備改善胰島素抵抗和抑制胰島β 細胞凋亡的功能，從根本改善Π 型糖尿病患者的糖代謝能力；此外，在成本和產(chǎn)品質(zhì)控也 體現(xiàn)出極大優(yōu)勢：本發(fā)明提出的制備方法具有生產(chǎn)步驟少、操作簡便、成本低廉的優(yōu)勢，具 有更大的應用潛力。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明提出了一種GLP-1衍生物DLG3312,包括其互變異構體、溶劑化物和藥物學 可接受鹽；所述GLP-1衍生物DLG3312的結構為Χ-Υ-Χ ;其中，X表示的序列為H-X8-EGTFTS DVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG，其中：Χ8 是 A、G、dA 或 V 中的任意一個，dA 表示 D-Ala ;Υ 表示 二氨基羧酸，包括Lys、0rn、2,4-DAB或2,6-DAP ;所述GLP-1衍生物DLG3312通過所述X的 碳端羧基與所述Y的氨基縮合連接成同源二聚體。
[0010] 其中，2,4-DAB是2,4-二氨基丁酸，結構如以下式（I)所示：
[0011]

【權利要求】
1. 一種GLP-1衍生物DLG3312,其特征在于，所述GLP-1衍生物DLG3312包括其互變異 構體、溶劑化物和藥物學可接受鹽；所述GLP-1衍生物DLG3312的結構為X-Y-X ;其中，X表 示的序列為 H-X8-EGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG，其中：X8 是 A、G、dA 或 V 中的任意一 個，dA 是 D_Ala ; Y表示二氨基羧酸，包括Lys、Orn、2,4-DAB或2,6-DAP ; 所述GLP-1衍生物DLG3312通過所述2個X的碳端羧基與所述Y的氨基縮合連接成同 源二聚體。
2. 如權利要求1所述的GLP-1衍生物DLG3312,其特征在于， 當X8為A，則序列X為Seq ID No. 1 ; 當X8為G，則序列X為Seq ID No. 2 ; 當X8為dA，則序列X為Seq ID No. 3 ; 當X8為V，則序列X為Seq ID No. 4。
3. 如權利要求1所述的GLP-1衍生物DLG3312,其特征在于， 序列X為Seq ID No. 1時，當Y為Lys，所述的GLP-1衍生物為DLG3312-1如下結構 式（1)所示，當Y為〇rn，所述的GLP-1衍生物為DLG3312-5如下結構式（5)所示，當Y為 2,4-DAB，所述的GLP-1衍生物為DLG3312-9如下結構式（9)所示，當Y為2,6-DAP，所述的 GLP-1衍生物為DLG3312-10如下結構式（10)所示： HAEGTFTSD￥SSYLEGQAAKEFIAWL￥KGRG HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEF1AWLVKGRG I I Lys Om I I HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKCiRCi (1) (5) HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWU'KGRG HAECjIFTSDVSS'iXEGQAAKEFIAWLVKGRG i I 2.4-DAB 2,6-DAP I I HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG m (10) 序列X為Seq ID No. 2時，當Y為Lys，所述的GLP-1衍生物為DLG3312-2如下結構式 (2)所示，當Y為Orn，所述的GLP-1衍生物為DLG3312-6如下結構式（6)所示，當Y為2， 4-DAB，所述的GLP-1衍生物為DLG3312-11如下結構式（11)所示，當Y為2,6-DAP，所述的 GLP-1衍生物為DLG3312-12如下結構式（12)所示： l!(il￡OTFTSDVSSYLEGQAAKEFlA\VLVK_(m(i HGifOTFrSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG I I Lys (>m i i 1Ι(Η?(?ΤΙ·ΤΗ1)ν88Υ?Η(ι〇ΛΛΚΙ·；Ι?Λ\ν?νΚ(Η?ι Π(ι1'ΧΠ1·'ΤΗΙ3νΗ^ΥΙΙ·；(?〇ΛΛΚΙ*；Ι'ΙΛν￥?νΚΙιΜι (2) (6) 1IG EGTFTSD VSSY LEGQAAKEFIAWLVKG RG HGEGTFTSDVSSYLEC.QAAKEFiAWLVKGRG I i 2,4-DAB 2,6-DAP ! 1 HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLA'KGRG HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG (11) (12) 序列X為Seq ID No. 3時，當Y為Lys，所述的GLP-1衍生物為DLG3312-3如下結構式 (3)所示，當Y為Orn，所述的GLP-1衍生物為DLG3312-7如下結構式（7)所示，當Y為2， 4-DAB，所述的GLP-1衍生物為DLG3312-13如下結構式（13)所示，當Y為2,6-DAP，所述的 GLP-1衍生物為DLG3312-14如下結構式（14)所示： HdAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFlAWLVKGRG Lys HdA HG 丁 FTSDVSSY LHGQA ΛΚ HF1 AWLVICCiRG (3) UdAHCiTFTSDVSSYLHCiQAAKHFlAWLVKCiRCi Oni i 1 IdAI-XJTFTSDVSSYl J-XJQAAK HFlAWLVK(jR(j (7) [IdA !·；( JTFTSOVSS Y LHC JQAA K HF1AWLVKC ? 1? ? 2,4-?)ΛΒ HdA !·：( HTTSD VSSY LHC ?〇Λ Λ K BF1 AWLVKCiRC ? (13) IldAKGTFTSDVSSYIJ￡(i〇AAKHF!AWLVI<(lR(i i 2.6-DAP HdA HGTFTSD VSS Y LI-GQA AK E FI AWLVKO RG (14) 序列X為Seq ID No. 4時，當Y為Lys，所述的GLP-1衍生物為DLG3312-4如下結構式 (4)所示，當Y為Orn，所述的GLP-1衍生物為DLG3312-8如下結構式（8)所示，當Y為2， 4-DAB，所述的GLP-1衍生物為DLG3312-15如下結構式（15)所示，當Y為2,6-DAP，所述的 GLP-1衍生物為DLG3312-16如下結構式（16)所示： HVEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG HVEGTFTSDVSSYLEGQAAKEF1AWLVKGRG 1 I Lys Om i 1 HVHcrri-TSDVssYLi-XiQAAKHMAWLVKiiRCi ιινι·:(Π?Γ：Β?)ν--γυ':(κ}ΑΑ?α':ι·?Α\ντνκ(Η?(ι (4) (Η) HVEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG H\'EGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVK.GRG 1 I 2,4-DAB 2,6-DAP ! 1 HVEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRti HVEGTF 丁 SDVSSYLEGQAAKEHAWLVKGRG (15) (16)"
4. 一種如權利要求1-3所述的GLP-1衍生物DLG3312的固相化學合成方法，其 特征在于，先將樹脂置入多肽合成儀，將帶保護基的二氨基羧酸Y與所述樹脂結合，再 將帶保護基的氨基酸單體按照權利要求1或2所述X序列，從C端向N端排列在多肽 合成儀中，合成帶側鏈保護基的多肽樹脂，再經(jīng)脫保護基、切斷樹脂、HPLC純化、冷凍 干燥，得到所述的GLP-1衍生物DLG3312 ;其中，所述帶保護基的二氨基羧酸Y包括： Fmoc-L-Lys (Fmoc)-〇H> Fmoc-L-〇rn (Fmoc)-〇H> Fmoc-2,4-DAB (Fmoc)-〇H> DI-Fmoc-2, 6-Diaminoheptanedioic Acid，所述帶保護基的氨基酸單體包括：Fmoc-L-Ala-〇H、 Fmoc-D-Ala-〇H> Fmoc-L-Arg (Pbf) -〇H> Fmoc-L-Asp (OtBu)-〇H> Fmoc-L-Gln (Trt)-〇H> Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H> Fmoc-L-Gly-〇H> Fmoc-L-His(Trt)-〇H> Fmoc-L-I1e-〇H> Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Trp-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Val-〇H 〇
5. 如權利要求4所述的GLP-1衍生物DLG3312的固相化學合成方法，其特征在于，當序 列 X 為 Seq ID No. 1， 所述帶保護基的氨基酸單體依次為：Fmoc-L_Lys (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Arg(Pbf)-〇H> Fmoc-L-Gly-〇H> Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H> Fmoc-L-Val-〇H> Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc_L-Phe-〇H、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H> Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H> Fmoc-L-Ala-〇H> Fmoc-L-Ala-〇H> Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 時，所得 GLP-1 衍生物為 DLG3312-1 ; 所述帶保護基的氨基酸單體依次為：Fmoc-L-〇rn (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 時，所得 GLP-1 衍生物為 DLG3312-5 ; 所述帶保護基的氨基酸單體依次為：Fmoc_2,4-DAB (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 時，所得 GLP-1 衍生物為 DLG3312-9 ; 所述帶保護基的氨基酸單體依次為：DI-Fmoc_2,6-Diaminoheptanedioic Acid、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Ala-〇H、Fmoc-L-His(Trt)-〇H 時，所得 GLP-1 衍生物為 DLG3312-10。
6.如權利要求4所述的GLP-1衍生物DLG3312的固相化學合成方法，其特征在于，當序 列 X 為 Seq ID No. 2， 所述帶保護基的氨基酸單體依次為：Fmoc-L_Lys (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 時，所得 GLP-1 衍生物為 DLG3312-2 ; 所述帶保護基的氨基酸單體依次為：Fmoc-L-〇rn (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 時，所得 GLP-1 衍生物為 DLG3312-6 ; 所述帶保護基的氨基酸單體依次為：Fmoc_2,4-DAB (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 時，所得 GLP-1 衍生物為 DLG3312-11 ; 所述帶保護基的氨基酸單體依次為：DI-Fmoc_2,6-Diaminoheptanedioic Acid、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-〇H、Fmoc-L-His(Trt)-〇H 時，所得 GLP-1 衍生物為 DLG3312-12。
7.如權利要求4所述的GLP-1衍生物DLG3312的固相化學合成方法，其特征在于，當序 列 X 為 Seq ID No. 3， 所述帶保護基的氨基酸單體依次為：Fmoc-L_Lys (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-D-Ala-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 時，所得 GLP-1 衍生物為 DLG3312-3 ; 所述帶保護基的氨基酸單體依次為：Fmoc-L-〇rn (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-D-Ala-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 時，所得 GLP-1 衍生物為 DLG3312-7 ; 所述帶保護基的氨基酸單體依次為：Fmoc_2,4-DAB (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-D-Ala-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 時，所得 GLP-1 衍生物為 DLG3312-13 ; 所述帶保護基的氨基酸單體依次為：DI-Fmoc_2,6-Diaminoheptanedioic Acid、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Gln(Trt)-〇H、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-D-Ala-〇H、Fmoc-L-His(Trt)-〇H 時，所得 GLP-1 衍生物為 DLG3312-14。
8.如權利要求4所述的GLP-1衍生物DLG3312的固相化學合成方法，其特征在于，當序 列 X 為 Seq ID No. 4， 所述帶保護基的氨基酸單體依次為：Fmoc-L_Lys (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 時，所得 GLP-1 衍生物為 DLG3312-4 ; 所述帶保護基的氨基酸單體依次為：Fmoc-L-〇rn (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 時，所得 GLP-1 衍生物為 DLG3312-8 ; 所述帶保護基的氨基酸單體依次為：Fmoc_2,4-DAB (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 時，所得 GLP-1 衍生物為 DLG3312-15 ; 所述帶保護基的氨基酸單體依次為：DI-Fmoc_2,6-Diaminoheptanedioic Acid、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L-His(Trt)-〇H 時，所得 GLP-1 衍生物為 DLG3312-16。
9. 一種藥物組合物，其特征在于，包括如權利要求1-3所述GLP-1衍生物DLG3312和藥 學上可接受的賦形劑。
10. 如權利要求1-3所述的GLP-1衍生物DLG3312在制備治療糖尿病及肥胖癥的藥物 中的應用。
【文檔編號】A61P3/10GK104098689SQ201310226925
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2013年6月7日 優(yōu)先權日:2013年4月12日
【發(fā)明者】張金龍, 勞勛, 吳自榮, 黃靜, 張利, 韋云平 申請人:華東師范大學