精確稱取一定量的超純水 和草本組合物放置于相同溫度的恒溫水槽中作為水相。在使用IKARW20digital機械攬拌 器進行高速攬拌狀態(tài)下，向油相中緩慢加入同溫水相，繼續(xù)攬拌并冷卻至室溫即得草本組 合物脂質(zhì)體。
[0101] 本草紀合物水溶液的制備方法
[0102] 將本草組合物和水按質(zhì)量比為1 :70-90混合，攬拌均勻，即得到本草組合物水溶 液。 ?！?精華液配方及其制備方法
[0104] 本草組合物亞微米脂質(zhì)載體精華液配方：
[0105] 本草組合物亞微米脂質(zhì)載體 60wt% 1, 3-r 'J串 3wt% ：；'義牛.膠 0.1wt% 水 36.4wt% 防腐劑 0.5wt% 。…引方法與巧驟
[0107] 分別稱取30g超純水、0.Ig漢生膠和3g1，3-下二醇，混合均勻，W1000化pm高剪 切Imin,同時將60g本草組合物亞微米脂質(zhì)載體與6. 4g超純水混合均勻。然后將兩者攬 拌，混合均勻，再向混合物中加入防腐劑。
[0108] 本草組合物脂質(zhì)體精華液、本草組合物水溶液精華液的配方與制備方法和本草組 合物亞微米脂質(zhì)載體精華液的相同，且得到的精華液中本草組合物的成分相同，含量相等。 ?！?本草紀合物對成纖維細胸蠟裙活忡的作用測試 陽110] 材料與試劑
[0111] 細胞培養(yǎng)液 験蛋白酶 PBS緩沖液 巧蒸水 96孔細胞培養(yǎng)板 化m細胞培養(yǎng)板 離必機 細胞培養(yǎng)箱 酶綺儀 CCK8試劑盒 。…]方法與巧驟
[0113] 用膜蛋白酶消化對數(shù)期的單層細胞，將細胞收集至細胞培養(yǎng)液中。
[0114] 1000巧m，離屯、2min，棄上清。用培養(yǎng)液重新懸浮細胞，計數(shù)。調(diào)整細胞懸液的濃度 至2. 5X103至50X103個/mU具體W細胞系的生長速度而定。
[0115] 鋪96孔板，每孔細胞懸液135yL。最終所鋪的細胞孔數(shù)取決于樣品數(shù)，每個樣品 3個復孔。最后留下3個孔不鋪細胞，作為空白對照。
[0116] 將96孔板置于37°C含有5%C02的細胞培養(yǎng)箱中解育24h。
[0117] 用培養(yǎng)基將待測樣品稀釋加入后，繼續(xù)培養(yǎng)4她。
[0118] 每孔加入20yL的CCK8，繼續(xù)培養(yǎng)0. 5至4h。
[0119] 輕輕搖晃96孔板，用酶標儀于450nm下測定吸光度。 陽120] 郷I試結(jié)果
[0121] 表1，天口冬、地黃、人參提取物及其組合物對成纖細胞增殖效果
[012引參照圖1和表1可W看出，0.Img/ml的天口冬提取物和地黃提取物都能夠促進成 纖維細胞的增殖，人參提取物成纖維細胞增殖幾乎沒有作用。同時，天口冬、地黃、人參提取 物的組合物能夠促進成纖維細胞的增殖。 。124] 本草紀合物對巧膚成纖維細胸中SOD水平的影響 陽1巧]材料與試劑
[0126] 細胞培養(yǎng)液 膜蛋白酶 PBS緩沖液 雙蒸水 96微化板 24孔細胞培養(yǎng)板 離必機 細胞培養(yǎng)箱 酶標儀 RNA提取試劑盆
[0127] qPCR測定試劑盒 陽12引 方法與巧驟
[0129] 鋪板種細胞：用膜蛋白酶消化對數(shù)期的單層細胞，將細胞收集至細胞培養(yǎng)液中。用 培養(yǎng)液重新懸浮細胞，計數(shù)。調(diào)整細胞懸液的濃度至5X104個/mU具體W細胞系的生長速 度而定。鋪24孔板，每孔細胞懸液0.9mL。最終所鋪的細胞孔數(shù)取決于樣品數(shù)，每個樣品4 個復孔。
[0130] 加待測物：加入待測物后繼續(xù)培養(yǎng)12h。
[0131] 提取細胞RNA，提取樣本總RNA用超純RNA提取試劑盒，每孔加150微升裂解液裂 解細胞2分鐘，結(jié)合RNA5分鐘，用Washbuffer1洗涂一次，WashBuffers洗涂2次，最后 用30微升無RNA酶水洗脫。
[0132]CDNA反轉(zhuǎn)錄，取40化gRNA，3. 5微升緩沖液，10微升體系反轉(zhuǎn)錄。
[013引 AB口500檢測實時巧光定量。
[0134] WGAPDH為內(nèi)參計算調(diào)節(jié)倍數(shù)，采用2-AACT法進行數(shù)據(jù)的相對定量分析。SOD 水平F計算公式為：
[0135] F= 2X待測組目的祀標平均Ct值一待測組管家內(nèi)參[平均Ct值]-對照組目 的祀標平均Ct值一對照組管家內(nèi)參{[平均Ct值]} 陽13引 郷I試結(jié)果
[0137] 表2,天口冬、地黃、人參提取物及其組合物對皮膚成纖細胞內(nèi)SOD水平影響
[0139] 通過圖2和表2可W看出，0.Img/ml的天口冬提取物、地黃提取物、人參提取物W 及本發(fā)明中草藥組合物都能顯著提高皮膚成纖維細胞中SOD水平，其中本發(fā)明中草藥提取 物組合活性最高，顯示了較強的配伍協(xié)同作用。
[0140] 綜合W上測試結(jié)果可得出，本發(fā)明中草藥組合物在促進皮膚成纖維細胞增殖和提 高SOD水平方面有顯著效果，因此，將本發(fā)明中草藥組合物添加到護膚品中可發(fā)揮抗衰老 的效果。 陽1川本草紀合物保術效果測試（巧膚巧巧質(zhì)酸合成酶HAS3水平測試） 陽14引材料與試劑
[0143] 麵胞黯謙緻 騰靈首酶
[0144] PBS緩沖液 雙蒸水 96微孔板 24孔細胞巧養(yǎng)板 離必機 細胞培養(yǎng)箱 酶標儀 RNA提取試劑盒
[0145] qPCR測定試劑盒 。"引方法與巧驟
[0147] 鋪板種細胞：用膜蛋白酶消化對數(shù)期的單層細胞，將細胞收集至細胞培養(yǎng)液中。用 培養(yǎng)液重新懸浮細胞，計數(shù)。調(diào)整細胞懸液的濃度至5X104個/mU具體W細胞系的生長速 度而定。鋪24孔板，每孔細胞懸液0.9mL。最終所鋪的細胞孔數(shù)取決于樣品數(shù)，每個樣品4 個復孔。
[014引加待測物：加入待測物后繼續(xù)培養(yǎng)12h。
[0149] 提取細胞RNA，提取樣本總RNA用超純RNA提取試劑盒，每孔加150微升裂解液裂 解細胞2分鐘，結(jié)合RNA5分鐘，用Washbuffer1洗涂一次，WashBuffers洗涂2次，最后 用30微升無RNA酶水洗脫。
[0150] CDNA反轉(zhuǎn)錄，取40化gRNA，3. 5微升緩沖液，10微升體系反轉(zhuǎn)錄。
[015。 AB口500檢測實時巧光定量。
[0152] WGAPDH為內(nèi)參計算調(diào)節(jié)倍數(shù)，采用2-AACT法進行數(shù)據(jù)的相對定量分析。 HAS3水平（巧計算公式為：
[0153] F= 2X待測組目的祀標平均Ct值一待測組管家內(nèi)參[平均Ct值]-對照組目 的祀標平均Ct值一對照組管家內(nèi)參{[平均Ct值]}
[0154] 結(jié)果
[0155] 表3,天口冬、地黃、人參提取物及其組合物對皮膚成纖細胞內(nèi)HAS3水平影響
[0157] 通過圖3和表3可W看出，0.Img/ml的天口冬提取物W及本發(fā)明組合物都能顯著 提高皮膚成纖維細胞中透明質(zhì)酸合成酶的水平，保水作用是透明質(zhì)酸在人體內(nèi)最重要的功 能之一，因此，本發(fā)明組合物能夠?qū)崿F(xiàn)良好的皮膚保濕效果。而且，相比于單獨=種組分，本 發(fā)明組合物在提高皮膚成纖細胞服A3水平能力方面，大于=種組分單獨使用時效果的簡 單疊加，即獲得了協(xié)同效果。
[0158] 綜上所述，本發(fā)明提供的本草組合物可W通過提高皮膚成纖細胞中SOD活性來達 到良好的抗氧化和抗衰老效果，同時提升皮膚細胞本身透明質(zhì)酸酶水平，具有良好的生物 活性保濕效果，添加到化妝品/護膚品中可W達到抗氧化抗衰老和保濕的雙重效果。 陽15引 胎質(zhì)裁體穩(wěn)定忡試輪
[0160] 為了考察本發(fā)明提供的本草組合物亞微米脂質(zhì)載體的穩(wěn)定性，取本發(fā)明提供的亞 微米脂質(zhì)載體，分別在-20°(：、4°(：、25°(：、40°(：、50°(：、光照和高低溫循環(huán)等條件下放置90 天，分別在第3天、第7天、第15天、第30天、第60天和第90天考察樣品的性狀，結(jié)果如表 1所示。
[0161] 由表4結(jié)果可知，只有在較苛刻條件下，本發(fā)明提供的本草組合物亞微米脂質(zhì)載 體的性狀才會發(fā)生輕微變化，而在常溫或較低溫度下，放置90天，產(chǎn)品的性狀無明顯變化， 因此，本發(fā)明提供的本草組合物亞微米脂質(zhì)載體總體上穩(wěn)定性較好。
[0162] 表4,本草組合物亞微米脂質(zhì)載體的穩(wěn)定性試驗
[0165] 其中"V"表示性狀無明顯變化。 陽16引 胎質(zhì)裁體緩釋功效評價
[0167] 為了考察本發(fā)明提供的本草組合物亞微米脂質(zhì)載體的緩釋功效，本實施例采取實 驗組和對照組，實驗組一為本發(fā)明提供的本草組合物亞微米脂質(zhì)載體精華液，實驗組二為 本草組合物脂質(zhì)體精華液，對照組為本草組合物水溶液精華液，各精華液的制備方法如前 所述。
[0168] 采用透析袋法評價各本草組合物的緩釋功效，模擬釋放環(huán)境，W生理鹽水為釋放 介質(zhì)，保持37°C水浴環(huán)境，定時檢測透析袋外面的溶液。向=個透析袋中分別加入SmL待測 液，作為實驗組一、實驗組