檢測(cè)c1抑制劑含量的試劑盒、方法及用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于檢測(cè)C1抑制劑含量的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)C1抑制劑含量的試 劑盒、方法及用途。
【背景技術(shù)】
[0002] C1抑制劑(ClInhibitor，Cl-INH)又稱C1酯酶抑制劑，C1-INH為單肽鏈糖蛋白，由 478個(gè)氨基酸殘基組成，完整的C1-INH分子量為104KD，等電點(diǎn)為pH 2.7-2.8，血漿中C1-INH 的含量約為220mg/L<Xl-INH主要是在肝臟合成，纖維母細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨核細(xì)胞等多種肝 細(xì)胞具有合成C1-INH的能力。C1抑制劑不僅是補(bǔ)體抑制因子，而且是血漿中多種特異性蛋 白酶的抑制劑，對(duì)血液凝固系統(tǒng)、纖溶系統(tǒng)和激肽系統(tǒng)具有控制和調(diào)節(jié)作用。
[0003] C1抑制劑升高常見于心肌梗塞、慢性腎炎、肺炎、胰腺炎；降低則常見于血管神經(jīng) 性水腫、B細(xì)胞系統(tǒng)疾病。
[0004] C1抑制劑檢測(cè)的臨床意義主要表現(xiàn)在：
[0005] C1-INH對(duì)于血管神經(jīng)性水腫(Angioeurotic Edema，AE)的診斷具有重要意義。血 管神經(jīng)性水腫是因血漿中血管滲透活性增強(qiáng)所致，這與補(bǔ)體系統(tǒng)或接觸系統(tǒng)的激活產(chǎn)生與 血管滲透性有關(guān)的激肽類物質(zhì)有關(guān)。C1-INH作為補(bǔ)體組分唯一的抑制劑，F(xiàn)Ma的主要抑制 劑，其缺乏將導(dǎo)致補(bǔ)體系統(tǒng)或接觸系統(tǒng)活化的調(diào)節(jié)失衡，使激肽濃度增高，血管滲透性增 強(qiáng)，從而表現(xiàn)出血管神經(jīng)性水腫的臨床癥狀。
[0006] 目前檢測(cè)C1-INH的方法主要是酶聯(lián)免疫法(ELISA)、單項(xiàng)免疫擴(kuò)散法(SIRD)和免 疫比濁法。酶聯(lián)免疫法(ELISA)為非均相免疫檢測(cè)系統(tǒng)，測(cè)定過程較為繁瑣，耗時(shí)長，缺少單 位測(cè)試運(yùn)行時(shí)間，自動(dòng)化程度不高，批間差大，重復(fù)性不穩(wěn)定，需要配備多種專門設(shè)備，一定 程度上增加了成本。單項(xiàng)免疫擴(kuò)散法靈敏度相對(duì)較高，方法較簡(jiǎn)便，不易受干擾，但精確度 以及特異性較差。免疫比濁法具有快速簡(jiǎn)便、自動(dòng)化程度高，易于操作等優(yōu)點(diǎn)，使得其具有 較好的臨床應(yīng)用市場(chǎng)前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明實(shí)施例的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種檢測(cè)C1抑制劑含量 的試劑盒，可以簡(jiǎn)潔快速地檢測(cè)樣本中C1抑制劑的含量，具有較高的準(zhǔn)確度和很好的特異 性。
[0008] 本發(fā)明實(shí)施例的另一目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種上述的檢測(cè)C1 抑制劑含量的試劑盒的在檢測(cè)C1抑制劑含量中的用途，可用于簡(jiǎn)潔快速地檢測(cè)樣本中C1抑 制劑的含量，具有較高的準(zhǔn)確度和很好的特異性。
[0009] 本發(fā)明實(shí)施例的再一目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種采用上述的檢 測(cè)C1抑制劑含量的試劑盒檢測(cè)C1抑制劑含量的方法，可以簡(jiǎn)潔快速地檢測(cè)樣本中C1抑制劑 的含量，具有較高的準(zhǔn)確度和很好的特異性。
[0010]為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案如下：
[0011] -種檢測(cè)Cl抑制劑含量的試劑盒，包括:試劑R1、試劑R2和Cl抑制劑校準(zhǔn)品；所述 試劑R1包括:第一緩沖液10~500mmol/L、第一電解質(zhì)5~50g/L、表面活性劑0.5~50g/L、第 一穩(wěn)定劑0.5~10g/L、高分子促進(jìn)劑1~100g/L和第一防腐劑1~10g/L;所述試劑R2包括： 第二緩沖液10~500mmol/L、抗人C1抑制劑抗體5~50%w/v、第二電解質(zhì)5~50g/L、第二穩(wěn) 定劑0.5~10g/L和第二防腐劑1~10g/L;所述C1抑制劑校準(zhǔn)品包括：第三緩沖液10~ 500mmol/L、第三穩(wěn)定劑5~50g/L、第三防腐劑1~10g/L、抗氧化劑0.01~10g/L和C1抑制劑 抗原。
[0012] 進(jìn)一步:所述試劑R1的pH為5~9,所述試劑R2的pH為5~9。
[0013] 進(jìn)一步:所述第一緩沖液、所述第二緩沖液和所述第三緩沖液均選自醋酸鹽緩沖 液、氯化銨緩沖液、磷酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷TRIS緩沖液、硼砂-氫氧化鈉緩沖液、 甘氨酸緩沖液、3-(N-嗎啉)丙磺酸M0PS、3-(環(huán)己胺)-2-羥基-1-丙磺酸CAPS0、HEPES緩沖液 中的一種或幾種;和/或，所述第一穩(wěn)定劑、所述第二穩(wěn)定劑和所述第三穩(wěn)定劑均選自亞氨 基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸鈉、乙二胺四乙酸二鈉、二乙烯三胺五乙酸鈉、1，2_環(huán)己 二醇縮水甘油、甘露糖、葡萄糖、殼聚糖、山梨醇和牛血清蛋白中的一種或幾種;和/或，所述 第一防腐劑、所述第二防腐劑和所述第三防腐劑均選自疊氮鈉、苯酚、對(duì)羥基苯甲酸、對(duì)羥 基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸鈉中的一種或幾種;和/或，所述第一電解質(zhì)和所述第二電 解質(zhì)均選自氯化鈉、硫酸鎂、氯化鎂和氯化鉀中的一種或幾種;和/或，所述表面活性劑選自 Triton系列表面活性劑、Tween系列表面活性劑、聚氧乙稀烷基苯基醚、月桂醚、聚氧乙稀壬 基苯基醚、聚氧乙烯辛基苯醚中的一種或幾種;和/或，所述高分子促進(jìn)劑選自脂肪醇聚氧 乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸鈉、乙二醇聚氧乙烯醚、羥丙基甲基纖維素和羥甲基纖 維素鈉中的一種或幾種;和/或，所述抗人C1抑制劑抗體選自鼠抗人、雞抗人、兔抗人、羊抗 人或?？谷薈1抑制劑抗體;和/或，所述抗氧化劑選自丁基羥基茴香醚、沒食子酸丙酯、二丁 基羥基甲苯、苯多酚、磷脂、甘草抗氧化物、硫代二丙酸二月桂酯、特丁基對(duì)苯二酚、維生素 系列中的一種或幾種。
[0014] 進(jìn)一步:所述第一緩沖液和所述第二緩沖液的成分相同。
[0015] 進(jìn)一步:所述第三緩沖液為甘氨酸緩沖液。
[0016] 進(jìn)一步，所述試劑R1包括:磷酸鹽緩沖液10~500mmol/L、氯化鈉5~50g/L、Triton X 100 0.5~50g/L、牛血清蛋白0.5~10g/L、乙二醇聚氧乙稀醚1~100g/L和疊氮鈉1~ l〇g/L，所述試劑R1的pH為5~9;所述試劑R2包括:磷酸鹽緩沖液10~500mmol/L、抗人C1抑 制劑抗體5~50%w/v、氯化鈉5~50g/L、牛血清蛋白0.5~10g/L和疊氮鈉1~10g/L，所述試 劑R2的pH為5~9;所述C1抑制劑校準(zhǔn)品包括:甘氨酸緩沖液10~500mmol/L、牛血清蛋白5~ 50g/L、疊氮鈉1~10g/L、二丁基羥基甲苯0 · 01~10g/L和C1抑制劑抗原。
[0017] -種如上所述的檢測(cè)C1抑制劑含量的試劑盒的在檢測(cè)C1抑制劑含量中的用途。
[0018] 以及，一種采用如上所述的檢測(cè)C1抑制劑含量的試劑盒檢測(cè)C1抑制劑含量的方 法，包括:按待測(cè)樣品和所述試劑R1的體積比為1~10:250,向所述待測(cè)樣品中加入所述試 劑R1，得到第一混合液，并得到所述第一混合液的吸光度0D1;按所述試劑R2與所述試劑R1 體積比為1:1~7,向所述第一混合液中加入所述試劑R2,得到第二混合液，并得到所述第二 混合液的吸光度0D2;使用所述C1抑制劑校準(zhǔn)品得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)所述吸光度0D1和所述 吸光度0D2在所述標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到所述待測(cè)樣品中C1抑制劑的含量。
[0019] 進(jìn)一步:所述試劑R2與所述試劑R1體積比為1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6或1:7。 [0020] 進(jìn)一步，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合模式包括：Spline、二次方程、logit-log3p、logi t-log4p、logit_log5p或Polygonal〇 [0021 ]本發(fā)明實(shí)施例的有益效果如下：
[0022] 1、本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)C1抑制劑含量的試劑盒，使用簡(jiǎn)便快速，可簡(jiǎn)潔快速地檢 測(cè)樣本中C1抑制劑的含量。
[0023] 2、本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)C1抑制劑含量的試劑盒，與進(jìn)口對(duì)比試劑實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā) 明的試劑盒中的試劑具有較高的準(zhǔn)確度和很好的特異性，能夠滿足臨床快速高通量檢測(cè)樣 本的要求，檢測(cè)效率明顯提尚。
[0024] 3、本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)C1抑制劑含量的試劑盒，使用了經(jīng)過篩選后的最優(yōu)化的試 劑組合，使得