檢測肼含量的試劑盒及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及高選擇性檢測阱含量的試劑盒及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 阱（NH2NH2)作為一個(gè)重要的工業(yè)化學(xué)品，在很多領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用，如醫(yī)藥、乳 化劑，染料和紡織，軍事、航空航天、工農(nóng)業(yè)設(shè)及的催化劑、腐蝕抑制劑和農(nóng)藥。阱具有易燃、 易爆的特點(diǎn)，因?yàn)樵诨鸺七M(jìn)系統(tǒng)中作為高能燃料而非常出名。阱具有較強(qiáng)的還原能力，也 應(yīng)用于金屬的防腐蝕。在提取領(lǐng)域，阱也可作為植物生長調(diào)節(jié)劑。在制藥領(lǐng)域，阱作為抗 菌藥物。然而，阱也具有毒理性，隨著阱在各個(gè)領(lǐng)域中的廣泛應(yīng)用，在生產(chǎn)、使用、運(yùn)輸及處 置過程中很容易引起環(huán)境污染。阱容易被皮膚吸收、口腔吸入，運(yùn)可能導(dǎo)致基因突變和癌 癥。近年來，發(fā)現(xiàn)阱對肺、腎臟、肝臟和中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有很嚴(yán)重的破壞性。美國環(huán)境保護(hù) 署巧PA)提出，阱會提高曬齒類動(dòng)物的肺癌、鼻炎，W及肝腫瘤的發(fā)病率。阱已被美國環(huán)保 署和世界衛(wèi)生組織列為人類一個(gè)潛在的致癌物質(zhì)，并且建議較低的闊限值（TLV)l化pb。很 多國家在飲用水中嚴(yán)格管制阱的濃度，要求在低的微摩爾水平。因此，開發(fā)高選擇靈敏檢測 阱的方法是必要的。
[0003] 用于檢測阱的傳統(tǒng)分析技術(shù)包括庫侖滴定法、電位滴定法、比色法、色譜法、電化 學(xué)W及化學(xué)發(fā)光方法。近年來，巧光法因其具有高的選擇性和靈敏度、操作簡單、費(fèi)用低、W 及實(shí)時(shí)檢測的特點(diǎn)，已被廣泛用于各種分析物的檢測。雖然用于檢測阱的巧光探針已有所 報(bào)道，但它們大多都是基于單波長強(qiáng)度下巧光強(qiáng)度的變化來實(shí)現(xiàn)定性和定量分析的，運(yùn)樣 的檢測方法易于受到探針的分布情況、檢測環(huán)境W及儀器的穩(wěn)定性等因素的影響。然而基 于雙波長強(qiáng)度比值的變化來實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物的定性和定量分析能夠有效避免W上因素的干擾。 因此，制備高選擇靈敏分析阱的比率巧光探針是本發(fā)明的創(chuàng)新之處。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本領(lǐng)域急需一種制備簡單的高選擇阱比率巧光探針，從而能夠有效檢測阱。為此， 本發(fā)明合成了一類新穎的阱比率巧光探針，其合成簡單、穩(wěn)定性高、和/或選擇性高，和/或 能夠識別阱。 陽0化]具體而言，本發(fā)明合成了一種阱比率巧光探針，其為4-漠下酸醋糞酷亞胺類化合 物。
[0006] 另一方面，本發(fā)明提供了一種檢測樣本中阱含量的試劑盒，其中所述試劑盒含有 本發(fā)明的阱比率巧光探針。本發(fā)明的試劑盒可與阱進(jìn)行作用，產(chǎn)生巧光光譜的變化，從而實(shí) 現(xiàn)對阱的定性和定量檢測。
[0007] 具體而言，本發(fā)明的試劑盒中的阱比率巧光探針分別與其他分析物進(jìn)行作用均不 能導(dǎo)致巧光光譜的明顯改變，從而實(shí)現(xiàn)對阱的選擇性識別，進(jìn)而可任選地用于排除其他分 析物的存在對阱的定性和定量測定的干擾。
[0008] 可選擇地，本發(fā)明的試劑盒中的阱比率巧光探針的穩(wěn)定性好，進(jìn)而能夠長期保存 使用。
[0009] 進(jìn)一步的，本發(fā)明的試劑盒中的阱比率巧光探針是高選擇阱比率巧光探針，且合 成簡單，有利于商業(yè)化的推廣應(yīng)用。
【附圖說明】
[0010] 圖1是不同濃度阱（0~100μM)對探針巧μM)巧光光譜的影響。 1] 圖2是不同分析物巧0μΜ)對探針巧μΜ)巧光光譜的影響。 陽01引圖3是不同分析物巧0μΜ)對探針巧μΜ)巧光光譜法定量分析阱巧0μΜ)的影 響。 陽01引 圖4是探針巧μΜ)對100μΜ濃度阱響應(yīng)時(shí)間的測試結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】：
[0014] 本發(fā)明提出了上述高選擇性阱比率巧光探針的合成路線、方法及其光譜性能。
[0015] 本發(fā)明的阱比率巧光探針是一類4-漠下酸醋糞酷亞胺類化合物，其具有W下結(jié) 構(gòu)通式
[0016]
陽017] 上式中：Ri，R2,Rs，R"Rs，Re為氨原子，直鏈或支鏈烷基，直鏈或支鏈烷氧基，橫酸 基，醋基，簇基；Ri，Rz，R3,R4,Rs，Re可W相同或不同。
[001引該類阱比率巧光探針的合成路線和方法如下：
[0019]
[0020] 本發(fā)明的高選擇性識別阱比率巧光探針的顯著特征是能夠高選擇性地識別阱，和 /或在其他高濃度分析物的存在下能夠準(zhǔn)確對阱進(jìn)行定性和定量分析。重要的是，本發(fā)明的 阱比率巧光探針還能夠用比率巧光法進(jìn)行定性和定量分析。
[0021] 下面將通過借助W下實(shí)施例來更詳細(xì)地說明本發(fā)明。W下實(shí)施例僅是說明性的， 應(yīng)該明白，本發(fā)明并不受下述實(shí)施例的限制。 陽0巧實(shí)施例1
[0023]
[0024] (方案 1)將 4-徑基-1，8-糞酷亞胺（269mg，1.Ommol)、4-漠下酸（166mg， 1.0mmol)、4-二甲氨基R比晚（122mg，1.0mmol)和二環(huán)己基碳二亞胺（412mg，2.Ommol)溶于 20mL干燥的二氯甲燒中，室溫反應(yīng)化后，減壓蒸發(fā)得到粗產(chǎn)品，然后使用二氯甲燒進(jìn)行柱 色譜分離，得到淡黃色純凈產(chǎn)品179mg，產(chǎn)率為43 %。 陽0巧](方案。將4-徑基-1，8-糞酷亞胺（269mg，1.Ommol)、4-漠下酸（332mg， 2.Ommol)、4-二甲氨基R比晚（244mg，2.Ommol)和二環(huán)己基碳二亞胺巧18mg，3.Ommol)溶于 20mL干燥的二氯甲燒中，室溫反應(yīng)化后，減壓蒸發(fā)得到粗產(chǎn)品，然后使用二氯甲燒進(jìn)行柱 色譜分離，得到淡黃色純凈產(chǎn)品283mg，產(chǎn)率為68 %。 陽0%](方案扣將4-徑基-1，8-糞酷亞胺（269mg，1.Ommol)、4-漠下酸（498mg， 3.Ommol)、4-二甲氨基R比晚（366mg，3.Ommol)和二環(huán)己基碳二亞胺巧27mg，4. 5mmol)溶于 25mL干燥的二氯甲燒中，室溫反應(yīng)化后，減壓蒸發(fā)得到粗產(chǎn)品，然后使用二氯甲燒進(jìn)行柱 色譜分離，得到淡黃色純凈產(chǎn)品338mg，產(chǎn)率為81 %。
[0027](方案 4)將 4-徑基-1，8-糞酷亞胺（269mg，1.Ommol)、4-漠下酸（498mg， 3.Ommol)、4-二甲氨基R比晚（366mg，3.Ommol)和二環(huán)己基碳二亞胺巧27mg，4. 5mmol)溶于 25mL干燥的二氯甲燒中，室溫反應(yīng)1化后，減壓蒸發(fā)得到粗產(chǎn)品，然后使用二氯甲燒進(jìn)行柱 色譜分離，得到淡黃色純凈產(chǎn)品367mg，產(chǎn)率為88 %。 陽0巧]1h-NMIU400MHz，CDC!3)δ(*1〇 6) : 1. 04 (S, 9H)，6. 77 化J= 8.OHz, 2H)，7. 29-7. 4 1 (m, 8H)，7. 63 (d,J= 8.OHz, 4H)，7. 72-7. 77 (m, 3H)，7. 94 (d,J= 8.OHz, 1H)，7. 98 (S, 1H); 口C-NMR(100MHz,CDCI3)δ(*l〇 6) : 18. 51，25. 44, 101. 43, 116. 01，119. 70, 120. 61，122. 36, 1 24. 58, 124. 73, 125. 83, 126. 76, 127. 05, 129. 33, 130. 97, 131. 54, 133. 78, 134. 43, 145. 57, 1 52. 62, 158. 56, 162. 43.
[0029] 實(shí)施例2
[0030] 本發(fā)明的發(fā)明人進(jìn)行了如下測試：（a)不同濃度阱（0~100μM)對探針巧μM)巧 光光譜的影響；插入圖是547nm處巧光強(qiáng)度與452nm處巧光強(qiáng)度的比值與加入的阱濃度之 間的線性關(guān)系。上述測定是在乙醇和水（3:7,V/V)含有5mM憐酸鹽緩沖溶液（PBS)，抑值 7. 4的體系中，且所有光譜測試都是在25°C下阱加入作用15min后測得的。結(jié)果參見圖1。
[0031] 從圖1可W看出，伴隨著探針溶液中阱濃度的增加，452nm處的巧光發(fā)射峰逐漸降 低，同時(shí)547皿處產(chǎn)生新的發(fā)射峰并逐漸升高，且在0~50μΜ阱濃度范圍內(nèi)和547皿處巧 光強(qiáng)度與452nm處巧光強(qiáng)度的比值成良好的線性關(guān)系。因此，本發(fā)明的探針能較精確地確 定待測樣本中阱的含量。 陽0巧實(shí)施例3 陽03引不同分析物（50μM)對探針巧μM)巧光光譜的影響。分析物包括：乙二胺邸A、 二甲胺DMA、S乙胺TEA、正下胺ηΒΑ、乙酸錠ΑΑ、硫離子S2、氯離子C1、漠離子化、艦離子 I、硫酸根離子S〇42、硫氯酸根離子SCN、谷脫甘膚G甜和阱，它們的濃度均為50μΜ。所有 測試條件是在乙醇和水（3:7,V/V)含有5mM憐酸鹽緩沖溶液（PBS)，pH值7. 4的體系中完 成，且所有光譜都是在25°C下分析物加入作用15min后測得的。移取25μΙ的探針儲備液 (ImM)放進(jìn)5血比色管中，然后加入1.5血乙醇，250μΙlOOmMPBS，再移取25μΙ上述分 析物儲備液（lOmM)加入比色管內(nèi)，然后用超純水定容至5血。搖勻，靜置15min，即可測定。 結(jié)果如圖2所示。
[0034] 從圖2可W看出，探針對阱具有很高的選擇性，能夠?qū)Ｒ恍缘睾挖暹M(jìn)行反應(yīng)。其原 因可能是臘首先與漠原子發(fā)生分子間的親核取代反應(yīng)，然后阱上的另外一個(gè)氮原子又發(fā)生 了分子內(nèi)親核取代反應(yīng)胺解掉了醋基導(dǎo)致的。 陽0對實(shí)施例4
[0036] 不同分析物（50μM)對探針巧μM)巧光光譜法定量分析阱（50μM)的影響。分 析物包括：乙二胺邸Α、二甲胺DMA、Ξ乙胺TEA、正下胺ηΒΑ、乙酸錠ΑΑ、硫離子S2、氯離子 C1、漠離子化、艦離子I、硫酸根離子S〇42、硫氯酸根離子SCN、谷脫甘膚G甜和阱，它們的 濃度均為50μM。所有測試條件是在乙醇和水（3:7,V/V)含有5mM憐酸鹽緩沖溶液（PBS)， pH值7. 4的體系中完成，且所有光譜都是在25°C下分析物加入作用15min后測得的。結(jié)果 如圖3所示。
[0037] 從圖3可W看出，生物體內(nèi)存在的其他常見分析物不會明顯干擾探針對阱的定性 與定量檢測。 陽0測 實(shí)施例5
[0039] 探針巧μM)對100μΜ濃度阱響應(yīng)時(shí)間的測試結(jié)果。首先，移取25μL的探針儲 備液（ImM)放進(jìn)5血比色管中，然后加入1.5血乙醇，250μΙlOOmMPBS，再移取50μΙ阱 儲備液（lOmM)加入比色管內(nèi)，然后用超純水定容至5mlV陜速搖勻，計(jì)時(shí)測定。結(jié)果如圖4 所示。
[0040] 從圖4中可W看出，當(dāng)阱加入探針溶液反應(yīng)后，其巧光光譜即發(fā)生明顯變化，15分 鐘后巧光光譜趨于穩(wěn)定。運(yùn)種巧光光譜變化的快速性與明顯性說明此探針完全可W用于阱 的即時(shí)檢測。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 用于檢測樣本中阱含量的試劑盒，其中所述的試劑盒含有具有如下結(jié)構(gòu)的化合物：其中：Ri，R2,R3,R4,Rs，Re為獨(dú)立地選自由氨原子、直鏈或支鏈烷基、直鏈或支鏈烷氧基、 橫酸基、醋基和徑基組成的組；且其中的Ri，R2,R3,R4,Rs和Re可W相同或不同。2. 根據(jù)權(quán)利要求1的試劑盒，其中的試劑盒含有具有如下結(jié)構(gòu)的化合物：3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的試劑盒，其中所述的樣本為血液。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的試劑盒，其中所述的試劑盒還包括使用說明書。5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的試劑盒，其中所述試劑盒還包括用于檢測樣本中阱含量的緩 沖劑。6. 權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)中所定義的化合物在制備用于檢測樣品中阱含量的試劑盒 中的用途。7. 根據(jù)權(quán)利要求6的用途，其中所述的樣品為血液。8. 根據(jù)權(quán)利要求6的用途，其中所述的試劑盒還包括使用說明書。9. 根據(jù)權(quán)利要求6-8中任一項(xiàng)的用途，其中所述試劑盒還包括用于檢測樣本中阱含量 的緩沖劑。10. 用于檢測血液中阱含量的制劑，其包含具有W下結(jié)構(gòu)的化合物：
【專利摘要】本發(fā)明涉及高選擇性檢測肼含量的試劑盒及其應(yīng)用。這類探針不僅能夠高選擇性地識別肼而且能夠用熒光法對肼進(jìn)行靈敏的定量和定性分析。這類探針可以快速對肼實(shí)現(xiàn)響應(yīng)，可以實(shí)現(xiàn)對肼的即時(shí)檢測。這類探針性質(zhì)穩(wěn)定，可以長期保存使用。此外，這類探針還能夠使用比率熒光法對肼進(jìn)行準(zhǔn)確的定量分析，且具有較強(qiáng)的抗干擾能力。這類探針的合成條件相對溫和，只需一步反應(yīng)，合成簡單。
【IPC分類】G01N21/64
【公開號】CN105403546
【申請?zhí)枴緾N201510755955
【發(fā)明人】葉龍武, 張艷
【申請人】晉江尚京富本環(huán)保科技有限公司
【公開日】2016年3月16日
【申請日】2015年11月9日