檢測kappa輕鏈含量的試劑盒、方法及用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明屬于檢測KAPPA輕鏈含量的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測KAPPA輕鏈含量的 試劑盒、方法及用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 輕鏈(Light chain，L)大約由214個(gè)氨基酸殘基組成，通常不含碳水化合物，分子 量約為24kD。每條輕鏈含有兩個(gè)由鏈內(nèi)二硫鍵所組成的環(huán)肽。L鏈共有兩種類型:ΚΑΡΡΑ( κ) 與Lambda(A)，同一個(gè)天然免疫球蛋白分子上L鏈的類型總是相同的。正常人血清中的κ:λ約 為2:1〇
[0003] 細(xì)胞克隆的異常增生將導(dǎo)致單克隆球蛋白或游離免疫球蛋白片段(游離的輕鏈） 的增加，這將造成κ與λ鏈的比例失衡，κ與λ的比值失常預(yù)示了單克隆Υ球蛋白血癥。在生成 增加的情況下，游離輕鏈的濾過也增加，當(dāng)超出腎小管的重吸收能力時(shí)，該測試可以定量檢 測結(jié)合及游離免疫球蛋白中的輕鏈。
[0004] 定量檢測不同種類的輕鏈含量有助于診斷巨球蛋白血癥（巨型球蛋白生成增多） 及結(jié)締組織病(如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡)等疾病。
[0005] 此外，感染、急慢性肝炎、肝硬化等血中輕鏈也可增多，但一般均表現(xiàn)為κ、λ同時(shí)增 多；腎病、糖尿病等患者尿也可出現(xiàn)κ、λ同時(shí)增多。
[0006] 現(xiàn)有的KAPPA輕鏈檢測技術(shù)存在諸多不足:如需要特殊的設(shè)備，樣本需要預(yù)處理， 不能上全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行批量檢測分析等。酶聯(lián)免疫法應(yīng)用比較普遍，其原理是將特 異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體;洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)；加待測樣品，使 之與固相抗體反應(yīng)一段時(shí)間，讓樣品中抗原與固相載體上的抗體結(jié)合;洗滌除去未結(jié)合的 物質(zhì);加酶標(biāo)抗體，使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合;洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)抗 體;此時(shí)固相載體上的酶量與樣品中的待測物質(zhì)的量正相關(guān);加入底物反應(yīng)顯色。根據(jù)顏色 反應(yīng)的程度對測定物質(zhì)進(jìn)行定性或定量測定。該方法為非均相免疫檢測系統(tǒng)，測定過程較 為繁瑣，耗時(shí)長，缺少單位測試運(yùn)行時(shí)間；自動(dòng)化程度不高，批間差和重復(fù)性相對較大;需要 配備多種專門設(shè)備，一定程度上增加了成本。
[0007] 隨著樣本檢驗(yàn)數(shù)量的不斷增加，臨床上迫切需要一種更為簡便、快捷的方法來進(jìn) 行規(guī)?；坎僮?。免疫比濁法檢測KAPPA輕鏈濃度可直接在全自動(dòng)生化分析儀上完成批 量樣本分析，操作簡單、可實(shí)現(xiàn)快速、高通量樣本的檢測。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明實(shí)施例的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種檢測KAPPA輕鏈含 量的試劑盒，可以簡潔快速地檢測樣本中KAPPA輕鏈的含量，具有較高的準(zhǔn)確度和很好的特 異性。
[0009] 本發(fā)明實(shí)施例的另一目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種上述的檢測 KAPPA輕鏈含量的試劑盒在檢測KAPPA輕鏈含量中的用途，可用于簡潔快速地檢測樣本中 KAPPA輕鏈的含量，具有較高的準(zhǔn)確度和很好的特異性。
[0010] 本發(fā)明實(shí)施例的再一目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種采用上述的檢 測KAPPA輕鏈含量的試劑盒檢測KAPPA輕鏈含量的方法，可以簡潔快速地檢測樣本中KAPPA 輕鏈的含量，具有較高的準(zhǔn)確度和很好的特異性。
[0011] 為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案如下：
[0012] -種檢測KAPPA輕鏈含量的試劑盒，包括:試劑R1、試劑R2和KAPPA輕鏈校準(zhǔn)品；所 述試劑R1包括:第一緩沖液5~600mmol/L、第一電解質(zhì)5~60g/L、表面活性劑1~200g/L、第 一穩(wěn)定劑2~50g/L、高分子加速劑1~100g/L和第一防腐劑0.5~15g/L;所述試劑R2包括： 第二緩沖液5~600mmol/L、抗人KAPPA輕鏈抗體0.1~20%w/v、第二電解質(zhì)5~60g/L和第二 防腐劑〇. 5~15g/L;所述KAPPA輕鏈校準(zhǔn)品包括:第三緩沖液10~600mmo 1 /L、第三穩(wěn)定劑2 ~50g/L、第三防腐劑0 · 5~15g/L、抗氧化劑0 · 01~1 Og/L和KAPPA輕鏈抗原。
[0013]進(jìn)一步:所述第一緩沖液、所述第二緩沖液和所述第三緩沖液均選自磷酸鹽PBS緩 沖液、三羥甲基氨基甲烷TRIS緩沖液、硼酸緩沖液、甘氨酸緩沖液、3-(環(huán)己胺)-2-羥基-1-丙磺酸CAPS0緩沖液、4-羥乙基哌嗪乙磺酸HEPES緩沖液中的一種或幾種；和/或，所述第一 防腐劑、所述第二防腐劑和所述第三防腐劑均選自疊氮鈉、苯酚、對羥基苯甲酸、對羥基苯 甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸鈉中的一種或幾種;和/或，所述第一電解質(zhì)和所述第二電解質(zhì) 均選自氯化鈉、硫酸鎂、氯化鎂和氯化鉀中的一種或幾種;和/或，所述第一穩(wěn)定劑和所述第 三穩(wěn)定劑均選自乙二胺四乙酸二鈉、甘露糖醇、葡萄糖、海藻糖和牛血清蛋白中的一種或幾 種;和/或，所述表面活性劑選自Triton系列表面活性劑、Tween系列表面活性劑、月桂醚系 列表面活性劑、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一種 或幾種;和/或，所述高分子加速劑選自聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和聚乙 二醇8000中的一種或幾種;和/或，所述抗人KAPPA輕鏈抗體選自鼠抗人、兔抗人、羊抗人、雞 抗人和鴨抗人KAPPA輕鏈抗體中的一種或幾種;所述抗氧化劑選自丁基羥基茴香醚、二丁基 羥基甲苯、苯多酚、甘草抗氧化物和硫代二丙酸二月桂酯中的一種或幾種。
[0014] 進(jìn)一步:所述抗人KAPPA輕鏈抗體為單克隆抗體和/或多克隆抗體。
[0015] 進(jìn)一步:所述第一緩沖液、所述第二緩沖液和所述第三緩沖液均為磷酸鹽緩沖液； 和/或，所述第一防腐劑、所述第二防腐劑和所述第三防腐劑均為疊氮鈉;和/或，所述第一 電解質(zhì)和所述第二電解質(zhì)均為氯化鈉;和/或，所述第一穩(wěn)定劑和所述第三穩(wěn)定劑均為乙二 胺四乙酸二鈉;和/或，所述表面活性劑為聚氧乙烯月桂醚;和/或，所述高分子加速劑為聚 乙二醇6000;和/或，所述抗人KAPPA輕鏈抗體為羊抗人KAPPA輕鏈單克隆抗體;和/或，所述 抗氧化劑為丁基羥基茴香醚。
[0016] 進(jìn)一步，所述試劑R1包括:第一緩沖液30~400mmol/L、第一電解質(zhì)6~45g/L、表面 活性劑3~70g/L、第一穩(wěn)定劑3~35g/L、高分子加速劑3~70 g//L和第一防腐劑1.5~9g/L; 所述試劑R2包括:第二緩沖液20~450mmol/L、抗人KAPPA輕鏈抗體0.1~20%w/v、第二電解 質(zhì)6~50g/L和第二防腐劑1.5~9g/L;所述KAPPA輕鏈校準(zhǔn)品包括：第三緩沖液15~ 100mmol/L、第三穩(wěn)定劑3~50g/L、第三防腐劑4~9g/L、抗氧化劑0.4~10g/L和KAPPA輕鏈 抗原。
[0017] 進(jìn)一步，所述試劑R1包括:第一緩沖液10~100mm〇l/L、第一電解質(zhì)5~15g/L、表面 活性劑1~50g/L、第一穩(wěn)定劑5~15g/L、高分子加速劑50~100g/L和第一防腐劑1~5g/L; 和/或，所述試劑R2包括:第二緩沖液10~100mmol/L、抗人KAPPA輕鏈抗體0.5~10 % w/v、第 二電解質(zhì)5~15g//L和第二防腐劑1~5g/L;和/或，所述KAPPA輕鏈校準(zhǔn)品包括:第三緩沖液 10~100mmol/L、第三穩(wěn)定劑5~15g/L、第三防腐劑1~5g/L、抗氧化劑0 · 01~0 · 8g/L和 KAPPA輕鏈抗原。
[0018] 進(jìn)一步，所述KAPPA輕鏈校準(zhǔn)品包括：第三緩沖液5~600mmol/L、第三穩(wěn)定劑2~ 50g/L、第三防腐劑0 · 5~15g/L、抗氧化劑0 · 01~10g/L和KAPPA輕鏈抗原0~1600mg/L。 [0019] 進(jìn)一步:所述KAPPA輕鏈校準(zhǔn)品中，所述KAPPA輕鏈抗原的濃度為0~1200mg/L。
[0020] -種如上所述的檢測KAPPA輕鏈含量的試劑盒在檢測KAPPA輕鏈含量中的用途。
[0021 ]以及，一種采用如上所述的檢測KAPPA輕鏈含量的試劑盒檢測KAPPA輕鏈含量的方 法，包括：向待測樣品中加入所述試劑R1，所述待測樣品的體積為5yL，所述試劑R1的體積為 250yL，得到第一混合液，并得到所述第一混合液的吸光度0D1;向所述第一混合液中加入所 述試劑R2,所述試劑R2的體積為50yL，得到第二混合液，并得到所述第二混合液的吸光度 0D2;使用所述KAPPA輕鏈校準(zhǔn)品得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)所述吸光度0D1和所述吸光度0D2在所 述標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到所述待測樣品中KAPPA輕鏈的含量。
[0022]本發(fā)明實(shí)施例的有益效果如下：
[0023] 1、本發(fā)明實(shí)施例的檢測KAPPA輕鏈含量的試劑盒，操作簡單，使用簡便快速，可簡 潔快速地檢測樣本中KAPPA輕鏈的含量。
[0024] 2、本發(fā)明實(shí)施例的檢測KAPPA輕鏈含量的試劑盒，能夠滿足臨床快速高通量檢測 樣本的要求，檢測效率明顯提高，在臨床應(yīng)用上具有廣闊的前景。
[0025] 3、本發(fā)明實(shí)施例的檢測KAPPA輕鏈含量的試劑盒，還具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、重 復(fù)性好、批間差異小、試劑穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。
[0026] 3、本發(fā)明實(shí)施例的檢測KAPPA輕鏈含量的試劑盒使其具有檢測KAPPA輕鏈含量的 用途。
[0027] 4、本發(fā)明實(shí)施例的檢測KAPPA輕鏈含量的試劑盒檢測KAPPA輕鏈含量的方法，簡潔 快速地檢測樣本中KAPPA輕鏈的含量，檢測效率較高，在臨床應(yīng)用上具有廣闊的前景。
【附圖說明】
[0028] 圖1是本發(fā)明的檢測KAPPA輕鏈含量的方法的流程圖；
[0029] 圖2是本發(fā)明的實(shí)施例3的KAPPA輕鏈含量的檢測方法的流程示意圖；
[0030] 圖3是本發(fā)明的實(shí)施例3的檢測KAPPA輕鏈含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0031 ]圖4是本發(fā)明的實(shí)施例4的檢測KAPPA輕鏈含量試劑盒與國外對比試劑盒的