檢測(cè)免疫球蛋白d含量的試劑盒、方法及用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于檢測(cè)免疫球蛋白D含量的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)免疫球蛋白D的 試劑盒、方法及用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 免疫球蛋白0(1臟皿(^1〇13111丨11〇，18〇)分子量為1851(0，半衰期為2.8天，人血清中 的含量很低，主要由扁桃體、脾等處漿細(xì)胞產(chǎn)生，免疫球蛋白D(IgD)是重鏈類型為S(delta) 的免疫球蛋白，含量小于總免疫球蛋白的1%，穩(wěn)定性差，易被熱和血液中的蛋白水解酶所 降解。免疫球蛋白D始終處于B細(xì)胞表面，在早期B細(xì)胞應(yīng)答的初始階段起關(guān)鍵作用。
[0003] IgD升高主要見于慢性骨髓炎、皮膚感染、流行性出血熱、膠原性疾病和吸煙者； IgD降低見于原發(fā)性無(wú)丙種球蛋白血癥、硅沉著病、細(xì)胞毒藥物治療后。
[0004] 目前檢測(cè)IgD的方法主要是酶聯(lián)免疫法(ELISA)、單項(xiàng)免疫擴(kuò)散法(SIRD)和免疫比 濁法。酶聯(lián)免疫法該方法為非均相免疫檢測(cè)系統(tǒng)，測(cè)定過(guò)程較為繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，缺少單位測(cè) 試運(yùn)行時(shí)間，自動(dòng)化程度不高，批間差和重復(fù)性相對(duì)較大，需要配備多種專門設(shè)備，一定程 度上增加了成本。單項(xiàng)免疫擴(kuò)散法靈敏度相對(duì)較高，方法較簡(jiǎn)便，不易受干擾，但精確度以 及特異性較差。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明實(shí)施例的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種檢測(cè)免疫球蛋白D 含量的試劑盒，可以簡(jiǎn)潔快速地檢測(cè)樣本中免疫球蛋白D的含量，具有較高的準(zhǔn)確度和很好 的特異性。
[0006] 本發(fā)明實(shí)施例的另一目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種上述的檢測(cè)免 疫球蛋白D含量的試劑盒的在檢測(cè)免疫球蛋白D含量中的用途，可用于簡(jiǎn)潔快速地檢測(cè)樣本 中免疫球蛋白D的含量，具有較高的準(zhǔn)確度和很好的特異性。
[0007] 本發(fā)明實(shí)施例的再一目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種采用上述的檢 測(cè)免疫球蛋白D含量的試劑盒檢測(cè)免疫球蛋白D含量的方法，可以簡(jiǎn)潔快速地檢測(cè)樣本中免 疫球蛋白D的含量，具有較高的準(zhǔn)確度和很好的特異性。
[0008] 為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案如下：
[0009] -種檢測(cè)免疫球蛋白D含量的試劑盒，包括:試劑R1、試劑R2和免疫球蛋白D校準(zhǔn) 品；所述試劑R1包括:第一緩沖液10~500mmol/L、第一電解質(zhì)5~50g/L、表面活性劑0.5~ 50g/L、第一穩(wěn)定劑0.5~10g/L、高分子促進(jìn)劑1~100g/L和第一防腐劑1~10g/L;所述試劑 R2包括:第二緩沖液10~500mmol/L、抗人免疫球蛋白D抗體5~50%w/v、第二電解質(zhì)5~ 50g/L、第二穩(wěn)定劑0.5~10g/L和第二防腐劑1~10g/L;所述免疫球蛋白D校準(zhǔn)品包括:第三 緩沖液10~500mmol/L、第三穩(wěn)定劑5~50g/L、第三防腐劑1~10g/L、抗氧化劑0.01~10g/L 和抗人免疫球蛋白D抗原。
[0010] 進(jìn)一步:所述試劑R1的pH為6~9。
[0011] 進(jìn)一步:所述試劑R2的pH為6~9。
[0012] 進(jìn)一步:所述第一緩沖液、所述第二緩沖液和所述第三緩沖液均選自醋酸鹽緩沖 液、氯化銨緩沖液、磷酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷TRIS緩沖液、硼砂-氫氧化鈉緩沖液、 甘氨酸緩沖液、3-(N-嗎啉）丙磺酸MOPS緩沖液、3-(環(huán)己胺）-2-羥基-1-丙磺酸CAPS0緩沖 液、4-羥乙基哌嗪乙磺酸HEPES緩沖液中的一種或幾種；和/或，所述第一穩(wěn)定劑、所述第二 穩(wěn)定劑和所述第三穩(wěn)定劑均選自亞氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸鈉、乙二胺四乙酸 二鈉、二乙烯三胺五乙酸鈉、1，2_環(huán)己二醇縮水甘油、甘露糖、葡萄糖、殼聚糖、山梨醇和牛 血清蛋白中的一種或幾種;和/或，所述第一防腐劑、所述第二防腐劑和所述第三防腐劑均 選自疊氮鈉、苯酚、對(duì)羥基苯甲酸、對(duì)羥基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸鈉中的一種或幾 種;和/或，所述第一電解質(zhì)和所述第二電解質(zhì)均選自氯化鈉、硫酸鎂、氯化鎂和氯化鉀中的 一種或幾種；和/或，所述表面活性劑選自Triton系列表面活性劑、Tween系列表面活性劑、 聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一種或幾種；和/或， 所述高分子促進(jìn)劑選自脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸鈉、乙二醇聚氧乙烯 醚、羥丙基甲基纖維素和羥甲基纖維素鈉中的一種或幾種;和/或，所述抗人免疫球蛋白D抗 體選自鼠抗人、雞抗人、兔抗人、羊抗人或?？谷嗣庖咔虻鞍譊抗體;和/或，所述抗氧化劑選 自丁基羥基茴香醚、沒(méi)食子酸丙酯、二丁基羥基甲苯、苯多酚、磷脂、甘草抗氧化物、硫代二 丙酸二月桂酯、特丁基對(duì)苯二酚和維生素系列中的一種或幾種。
[0013] 進(jìn)一步:所述第一緩沖液和所述第二緩沖液的成分相同。
[0014]進(jìn)一步:所述第三緩沖液為甘氨酸緩沖液。
[0015] 進(jìn)一步，所述試劑R1包括:磷酸鹽緩沖液10~500mmol/L、氯化鈉5~50g/L、Triton X 1000.5~50g/L、牛血清蛋白0.5~10g/L、乙二醇聚氧乙稀醚1~100g/L和疊氮鈉1~10g/ L，所述試劑R1的pH為6~9;所述試劑R2包括:磷酸鹽緩沖液10~500mmol/L、抗人免疫球蛋 白D抗體5~50%w/v、氯化鈉5~50g/L、牛血清蛋白0 · 5~10g/L和疊氮鈉1~10g/L，所述試 劑R2的pH為6~9;所述免疫球蛋白D校準(zhǔn)品包括:甘氨酸緩沖液10~500mmol/L、牛血清蛋白 5~50g/L、疊氮鈉1~10g/L、二丁基羥基甲苯0.01~10g/L和免疫球蛋白D抗原。
[0016] -種如上所述的檢測(cè)免疫球蛋白D含量的試劑盒在檢測(cè)免疫球蛋白D含量中的用 途。
[0017] 以及，一種采用如上所述的檢測(cè)免疫球蛋白D含量的試劑盒檢測(cè)免疫球蛋白D含量 的方法，包括：向待測(cè)樣品中加入所述試劑R1，所述待測(cè)樣品的體積為4yL，所述試劑R1的體 積為250yL，得到第一混合液，并得到所述第一混合液的吸光度0D1;向所述第一混合液中加 入所述試劑R2，所述試劑R2的體積為50yL，得到第二混合液，并得到所述第二混合液的吸光 度0D2;使用所述免疫球蛋白D校準(zhǔn)品得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)所述吸光度0D1和所述吸光度0D2 在所述標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到所述待測(cè)樣品中免疫球蛋白D的含量。
[0018] 本發(fā)明實(shí)施例的有益效果如下：
[0019] 1、本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)免疫球蛋白D含量的試劑盒，使用簡(jiǎn)便快速，可簡(jiǎn)潔快速地 檢測(cè)樣本中免疫球蛋白D的含量。
[0020] 2、本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)免疫球蛋白D含量的試劑盒，與進(jìn)口對(duì)比試劑實(shí)驗(yàn)表明，本 發(fā)明的試劑盒中的試劑具有較高的準(zhǔn)確度和很好的特異性，能夠滿足臨床快速高通量檢測(cè) 樣本的要求，檢測(cè)效率明顯提尚。
[0021] 3、本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)免疫球蛋白D含量的試劑盒，使用了經(jīng)過(guò)篩選后的最優(yōu)化 的試劑組合，使得試劑的穩(wěn)定性大大提高，在2~8°C的環(huán)境下，可以穩(wěn)定存放一年以上，因 此在臨床應(yīng)用上具有廣闊的前景。
[0022] 4、本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)免疫球蛋白D含量的試劑盒，還具有靈敏度高，可自動(dòng)化等 特點(diǎn)。
[0023] 5、本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)免疫球蛋白D含量的試劑盒使其具有檢測(cè)免疫球蛋白D的 用途。
[0024] 6、本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)免疫球蛋白D含量的試劑盒檢測(cè)免疫球蛋白D含量的方法， 簡(jiǎn)潔快速地檢測(cè)樣本中免疫球蛋白D的含量，檢測(cè)效率較高，在臨床應(yīng)用上具有廣闊的前 景。
【附圖說(shuō)明】
[0025] 圖1是本發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)免疫球蛋白D含量的方法的流程圖；
[0026] 圖2是本發(fā)明的實(shí)施例1的免疫球蛋白D含量的檢測(cè)方法的流程示意圖；
[0027] 圖3是本發(fā)明的實(shí)施例1的檢測(cè)免疫球蛋白D含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0028] 圖4是本發(fā)明的實(shí)施例8的檢測(cè)免疫球蛋白D含量的試劑盒與國(guó)外對(duì)比試劑的比較 結(jié)果示意圖。
【具體實(shí)施方式】
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