定區(qū)結(jié)合，因此不是特異于一種單一抗體，而是對(duì)所 有的、或至少眾多的具有一定的靶特異性的抗體具有特異性。
[0032] 在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，關(guān)聯(lián)抗體或其片段為關(guān)聯(lián)單克隆抗體或其片段。
[0033] 在一個(gè)實(shí)施方式中，所述關(guān)聯(lián)單克隆抗體或其片段是人抗體或人源化抗體。在一 個(gè)實(shí)施方式中，所述關(guān)聯(lián)單克隆抗體或其片段是嵌合抗體。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述關(guān)聯(lián) 單克隆抗體或其片段包括人重鏈恒定區(qū)和人輕鏈恒定區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述關(guān)聯(lián)單 克隆抗體為IgG同種型。在另一個(gè)實(shí)施方式中，關(guān)聯(lián)抗體可為任意同種型（例如IgG、IgE、 IgM、IgD 和 IgA)、類（例如 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 和 IgA2)或其衍生物（例如 IgGlf LALA)。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述抗體為IgGlf LALA同種型。
[0034] 在一個(gè)實(shí)施方式中，所述關(guān)聯(lián)單克隆抗體或其片段選自Fab、F(ab2)'、F(ab)2'或 scFV。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述關(guān)聯(lián)單克隆抗體或其片段選自單克隆抗體、多克隆抗體、嵌 合抗體、人源化抗體和合成抗體。在一個(gè)實(shí)施方式中，關(guān)聯(lián)抗體或其片段為人抗體或人源化 抗體。
[0035] 在一個(gè)方面，本公開涉及一種分離的單克隆抗體或其片段，其特異性地結(jié)合至關(guān) 聯(lián)抗原結(jié)合部分與其抗原、或特異性關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分與其抗原的復(fù)合物，其中關(guān)聯(lián)抗原 結(jié)合部分為抗體衍生的支架。在一個(gè)實(shí)施方式中，抗體衍生的支架選自scFv、四價(jià)抗體、交 聯(lián)的Fab或IgG。在一個(gè)實(shí)施方式中，關(guān)聯(lián)抗體或其片段為單鏈抗體。
[0036] 在一個(gè)方面，本公開涉及一種分離的單克隆抗體或其片段，其特異性地結(jié)合 至關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分與其抗原的復(fù)合物、或特異性關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分與其抗原的復(fù) 合物，其中關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分選自單域抗體（single domain antibodies)、巨型抗體 (maxibodies)、微型抗體（minibodies)、胞內(nèi)抗體、雙抗體、三鏈抗體（triabodies)、 四鏈抗體（tetrabodies)、v_NAR、駱蛇抗體（camelid antibodies)、銷蛋白、結(jié)構(gòu) 域抗體（domain antibodies)、脂質(zhì)運(yùn)載蛋白、小模塊免疫藥物（small modular immune-pharmaceuticals)、maxybodies、蛋白質(zhì) A 和 affilins。
[0037] 在一個(gè)方面，本公開涉及一種分離的單克隆抗體或其片段，其特異性地結(jié)合至關(guān) 聯(lián)抗原結(jié)合部分與其抗原的復(fù)合物、或關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分與其抗原的復(fù)合物，其中關(guān)聯(lián) 抗原結(jié)合部分選自由以下組成的列表，但不限于其：阿達(dá)木單抗（Adalimumab)、M0R103、 利妥昔單抗（Rituximab)、曲妥珠單抗（Trastuzumab)、阿侖單抗（Alemtuzumab)、貝伐 單抗（Bevacizumab)、西妥昔單抗（Cetuximab)、吉妥珠單抗（Gemtuzumab)、英夫利昔 單抗（Infliximab)、蘭尼單抗（Ranibizumab)、優(yōu)特克單抗（Ustekinumab)、戈利木單 抗（Golimumba)、那他珠單抗（Natalizumab)、奧法木單抗（Ofatumumab)、奧馬珠單抗 (Omalizumab)、帕尼單抗（Panitumumab)。
[0038] 抗原
[0039] 在一個(gè)方面，本公開涉及一種分離的單克隆抗體或其片段，其特異性地結(jié)合至特 異性關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分與其抗原的復(fù)合物，其中抗原為蛋白質(zhì)。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述 蛋白質(zhì)為人蛋白質(zhì)。
[0040] 本發(fā)明的分離的單克隆抗體或片段的表位包括特異性關(guān)聯(lián)抗體的可變區(qū)的一個(gè) 或多個(gè)氨基酸。因此，在某些方面，本公開涉及一種分離的單克隆抗體或其片段，其中所述 分離的單克隆抗體或其片段的表位包括特異性關(guān)聯(lián)抗體的可變區(qū)的一個(gè)或多個(gè)氨基酸。在 其它方面，本公開涉及一種分離的單克隆抗體或其片段，其中所述分離的單克隆抗體或其 片段的表位包括特異性關(guān)聯(lián)抗體的可變區(qū)的一個(gè)或多個(gè)氨基酸，以及所述特異性關(guān)聯(lián)抗體 的抗原的一個(gè)或多個(gè)氨基酸。
[0041] 在其它方面，本公開涉及一種分離的單克隆抗體或其片段，其中所述分離的單克 隆抗體或其片段的表位包括來自特異性關(guān)聯(lián)抗體和所述特異性關(guān)聯(lián)抗體的抗原二者的序 列段（stretches)。
[0042] 在一個(gè)實(shí)施方式中，所述蛋白質(zhì)與特定病癥相關(guān)。在一個(gè)實(shí)施方式中，蛋白質(zhì)是特 定病癥中的特定生物療法的有用靶標(biāo)。在一個(gè)實(shí)施方式中，蛋白質(zhì)是特定藥物的有用靶標(biāo)。 在一個(gè)實(shí)施方式中，蛋白質(zhì)是治療性抗體或其片段的有用靶標(biāo)。在一個(gè)實(shí)施方式中，蛋白質(zhì) 是診斷性抗體或其片段的有用靶標(biāo)。在一個(gè)實(shí)施方式中，蛋白質(zhì)是細(xì)胞因子。在一個(gè)實(shí)施 方式中，蛋白質(zhì)為受體。
[0043] 在一個(gè)實(shí)施方式中，蛋白質(zhì)與炎性疾病、自身免疫性疾病、病毒、細(xì)菌和寄身蟲感 染、惡性腫瘤、神經(jīng)變性疾病或任何腫瘤相關(guān)的疾病相關(guān)聯(lián)。在一個(gè)實(shí)施方式中，蛋白質(zhì)與 癌癥相關(guān)。
[0044]在一個(gè)實(shí)施方式中，蛋白質(zhì)選自由以下組成的列表，但不限于其：TNF_a、TNF_f3、 VEGF-A、a 4-整聯(lián)蛋白、CD20、IgE(Fc 區(qū)）、EGFR、GM-CSF、CD19、M-CSF、CD38、MIF、DDT、 IL-17A、IL-17C、IL-1a、IL1-0、IL-6、IL-12、IL-23、Her2/c-neu、CD52、CD33〇
[0045] 在一個(gè)方面，本公開涉及一種分離的單克隆抗體或其片段，其特異性地結(jié)合至關(guān) 聯(lián)抗原結(jié)合部分與其抗原的復(fù)合物，其中所述復(fù)合物選自，但不限于阿達(dá)木單抗/TNF-a、 M0R103/GM-CSF、曲妥珠單抗/Her2/c-neu、阿侖單抗/CD52、貝伐單抗/VEGF-A、西妥昔單抗 /EGF-R、吉妥珠單抗/CD33、英夫利昔單抗/TNF- a、蘭尼單抗/VEGF-A，優(yōu)特克單抗/IL-12、 優(yōu)特克單抗/IL-23、戈利木單抗/TNF- a、那他珠單抗/ a 4-整聯(lián)蛋白、奧法木單抗/⑶20、 利妥昔單抗/CD20、奧馬珠單抗/IgE(Fc區(qū)）、帕尼單抗/EGFR。
[0046] 分離的單克隆抗體或其片段的用途
[0047] 在一個(gè)方面，本公開涉及分離的抗體或其片段用于檢測(cè)樣品中的關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部 分與其抗原的復(fù)合物、或特異性關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分與其抗原的復(fù)合物的用途，其中所述分 離的抗體或其片段特異性地結(jié)合至關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分與其抗原的復(fù)合物、或特異性關(guān)聯(lián)抗 原結(jié)合部分與其抗原的復(fù)合物，且不單獨(dú)結(jié)合所述關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分或所述抗原。
[0048] 在另一方面，本公開涉及使用分離的抗體或其片段檢測(cè)樣品中的關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部 分與其抗原的復(fù)合物、或特異性關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分與其抗原的復(fù)合物的方法，所述分離的 抗體或其片段特異性地結(jié)合至關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分與其抗原的復(fù)合物、或特異性關(guān)聯(lián)抗原結(jié) 合部分與其抗原的復(fù)合物，且不單獨(dú)結(jié)合所述關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分或所述抗原。
[0049] 在一個(gè)方面，本公開涉及檢測(cè)樣品中的關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分與其抗原的復(fù)合物、或 特異性關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分與其抗原的復(fù)合物的方法，所述方法包括以下步驟：
[0050] a)將所述樣品與分離的抗體或其片段接觸，其中所述分離的抗體或其片段特異地 與所述復(fù)合物結(jié)合，且不單獨(dú)與所述關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分或所述抗原結(jié)合，
[0051] b)檢測(cè)與所述復(fù)合物結(jié)合的所述分離的抗體或片段。
[0052] 在另一方面，本公開涉及檢測(cè)樣品中的關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分與其抗原的復(fù)合物、或 特異性關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分與其抗原的復(fù)合物的方法，所述方法包括以下步驟：
[0053] a)將所述樣品與分離的抗體或其片段接觸，其中所述分離的抗體或其片段特異地 與所述復(fù)合物結(jié)合，且不單獨(dú)與所述關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分或所述抗原結(jié)合，
[0054] b)檢測(cè)與所述復(fù)合物結(jié)合的所述分離的抗體或片段，和
[0055] c)將與所述復(fù)合物結(jié)合的所述分離的抗體或片段與結(jié)合抗原的關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部 分的濃度相關(guān)聯(lián)。
[0056] 在另一方面，本公開涉及檢測(cè)樣品中的關(guān)聯(lián)抗體與其抗原的復(fù)合物、或特異性關(guān) 聯(lián)抗體與其抗原的復(fù)合物的方法，所述方法包括以下步驟：
[0057] a)提供待分析樣品，
[0058] b)將所述樣品與分離的抗體或其片段接觸，其中所述分離的抗體或其片段特異地 與所述復(fù)合物結(jié)合，且不單獨(dú)與所述關(guān)聯(lián)抗體或所述抗原結(jié)合，
[0059] c)檢測(cè)與所述復(fù)合物結(jié)合的所述分離的抗體或片段，和
[0060]d)將與所述復(fù)合物結(jié)合的所述分離的抗體或片段與結(jié)合抗原的關(guān)聯(lián)抗體的濃度 相關(guān)聯(lián)。
[0061] 在一個(gè)實(shí)施方式中，所述關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分為關(guān)聯(lián)抗體或其片段。在一個(gè)優(yōu)選的 實(shí)施方式中，所述關(guān)聯(lián)抗體或其片段為關(guān)聯(lián)單克隆抗體或其片段。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述 關(guān)聯(lián)單克隆抗體或其片段為人抗體或人源化抗體。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述關(guān)聯(lián)單克隆抗 體或其片段是嵌合抗體。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述關(guān)聯(lián)單克隆抗體或其片段含有人重鏈恒 定區(qū)和人輕鏈恒定區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述關(guān)聯(lián)單克隆抗體為IgG同種型。在另一個(gè) 實(shí)施方式中，關(guān)聯(lián)抗體可為任意同種型（例如IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)、類（例如IgGl、 IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2)或其衍生物（例如IgGlf LALA)。在一個(gè)實(shí)施方式中，關(guān) 聯(lián)抗體為IgGlf LALA同種型。
[0062] 在一個(gè)實(shí)施方式中，所述關(guān)聯(lián)單克隆抗體或其片段選自Fab、F(ab2)'、F(ab)2'或 scFV。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述關(guān)聯(lián)單克隆抗體或其片段選自單克隆抗體、多克隆抗體、嵌 合抗體、人源化抗體和合成抗體。在一個(gè)實(shí)施方式中，關(guān)聯(lián)抗體或其片段為人抗體或人源化 抗體。
[0063] 在一個(gè)實(shí)施方式中，所述特異性關(guān)聯(lián)抗體與其抗原的復(fù)合物選自，但不限于阿達(dá) 木單抗/TNF-a、M0R103/GM-CSF、曲妥珠單抗/Her2/c-neu、阿侖單抗/CD52、貝伐單抗/ VEGF-A、西妥昔單抗/EGF-R、吉妥珠單抗/CD33、英夫利昔單抗/TNF- a、蘭尼單抗/VEGF-A， 優(yōu)特克單抗/11-12、優(yōu)特克單抗/11-23、戈利木單抗八即-(1、那他珠單抗/(14-整聯(lián)蛋白、 奧法木單抗/CD20、利妥昔單抗/CD20、奧馬珠單抗/IgE(Fc區(qū)）、帕尼單抗/EGFR。
[0064] 在一個(gè)方面，本公開涉及檢測(cè)樣品中的抗原結(jié)合部分的方法，所述方法包括以下 步驟：
[0065] a)將關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分的抗原固定化，
[0066] b)將所述樣品與所述固定化的抗原接觸，
[0067] c)使用分離的抗體或其片段來檢測(cè)所述關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分與其抗原之間所形成 的復(fù)合物，所述分離的抗體或其片段特異性地與所述復(fù)合物結(jié)合，且不單獨(dú)與所述關(guān)聯(lián)抗 原結(jié)合部分或所述抗原結(jié)合。
[0068] 在另一方面，本公開涉及檢測(cè)樣品中的未結(jié)合的關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分的方法，所述 方法包括以下步驟：
[0069] a)將關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分的抗原固定化，
[0070] b)將所述樣品與所述固定化的抗原接觸，
[0071] c)使用分離的抗體或其片段來檢測(cè)所述關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分與其抗原之間所形成 的復(fù)合物，所述分離的抗體或其片段特異性地與所述復(fù)合物結(jié)合，且不單獨(dú)與所述關(guān)聯(lián)抗 原結(jié)合部分或所述抗原結(jié)合。
[0072] 在另一方面，本公開涉及檢測(cè)樣品中的未結(jié)合的關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分的方法，所述 方法包括以下步驟：
[0073] a)將關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分的抗原固定化，
[0074] b)將所述樣品與所述固定化的抗原接觸，
[0075] c)使用分離的抗體或其片段來檢測(cè)所述關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分與其抗原之間所形成 的復(fù)合物，所述分離的抗體或其片段特異性地與所述復(fù)合物結(jié)合，且不單獨(dú)與所述關(guān)聯(lián)抗 原結(jié)合部分或所述抗原結(jié)合，
[0076] d)將b)中形成的復(fù)合物與樣品中未結(jié)合的關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分的濃度相關(guān)聯(lián)。
[0077] 在本方法的一個(gè)實(shí)施方式中，所述檢測(cè)通過選自EIA、ELISA、RIA、間接競(jìng)爭(zhēng)性免疫 測(cè)定、直接競(jìng)爭(zhēng)性免疫測(cè)定、非競(jìng)爭(zhēng)性免疫測(cè)定、夾心免疫測(cè)定（sandwich immunoassay)、 凝集分析法（agglutination assay)和 MSD(Meso Scale Discovery)的方法而實(shí)現(xiàn)。在優(yōu) 選的實(shí)施方式中，所述檢測(cè)通過夾心ELISA (sandwich ELISA)實(shí)現(xiàn)。在另一優(yōu)選的實(shí)施方 式中，所述檢測(cè)通過MSD(Meso Scale Discovery)分析法而實(shí)現(xiàn)。
[0078] 在一個(gè)實(shí)施方式中，樣品為組織或液體樣品。在另一實(shí)施方式中，液體樣品是唾 液、尿液、全血、血漿或血清。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或人中獲得樣品。在更優(yōu)選 的實(shí)施方式中，樣品是取自人的全血、血漿或血清。
[0079] 在一個(gè)方面，本公開涉及一種鑒定分離的單克隆抗體或其片段的方法，所述分離 的單克隆抗體或其片段特異性地結(jié)合至關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分與其抗原的復(fù)合物，且不單獨(dú)結(jié) 合所述關(guān)聯(lián)抗原結(jié)合部分或所述抗原，所述方法包括：
[0080] (a)在未結(jié)合的抗原和與所述關(guān)聯(lián)抗體具有相同同種型的抗體的存在下，篩選針 對(duì)關(guān)