新的床旁檢測(cè)系統(tǒng)和方法
【專利說(shuō)明】新的床旁檢測(cè)系統(tǒng)和方法
[0001] 本發(fā)明涉及最好應(yīng)用在床旁領(lǐng)域中的檢測(cè)系統(tǒng)或測(cè)定系統(tǒng)（檢驗(yàn)系統(tǒng)）和檢測(cè)方 法。
[0002] 在人類、獸醫(yī)、食品或許多其它應(yīng)用領(lǐng)域內(nèi)的研宄和體外診斷學(xué)中，分析檢測(cè)用于 定性或/和定量確定分子、待檢物或其活性或組成。檢測(cè)結(jié)果提供不同的結(jié)論（例如診斷 參數(shù)），以鑒定疾病、食品來(lái)源或藥品有效性。
[0003] 當(dāng)今，DNA和蛋白質(zhì)分析學(xué)的已知方法在可供使用的檢測(cè)中占主導(dǎo)地位。尤其是 免疫測(cè)定體現(xiàn)為下述方法：抗體被用于專門結(jié)合所選出的、足夠大的幾乎任何類型的靶分 子（如生物標(biāo)記）。
[0004] 在檢測(cè)開始后的幾分鐘或幾小時(shí)內(nèi)并且在取樣地點(diǎn)旁邊，快速檢測(cè)提供測(cè)量值， 而不需要送出試樣（床旁（P〇C))。
[0005]已知的標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)方法是側(cè)流檢測(cè)（LFT)、流過(guò)檢測(cè)（FTT)、凝結(jié)檢測(cè)（AT)或固相 檢測(cè)（SPT)。所有這些方法直接目測(cè)檢驗(yàn)待檢物。對(duì)于這些檢測(cè)，附加存在緊湊的讀取儀 器，其也提供定量結(jié)果。
[0006] 體外診斷學(xué)的已知測(cè)定方法是免疫測(cè)定（IA)，尤其是酶聯(lián)免疫測(cè)定（EIA)，或者 "結(jié)合測(cè)定（夾心）"（例如見 EP0171150B1、EP0063810B1)。另外，參見 Roger P.Ekins(尤 其如W08401031)的資料。
[0007] 尤其是血液的過(guò)敏源IgE的膜輔助型結(jié)合測(cè)定從二十世紀(jì)八十年代末起就是已 知的，比如由以下公開：CHEMICAL ABSTRACTS (第25期第101卷，1984年12月17日，第 578頁(yè)，摘要號(hào)228190b，美國(guó)俄亥俄州哥倫布斯）；B.J. WALSH等人的"Allergen discs prepared from nitrocellulose:detection of IgE binding to soluble and insoluble allergens" 和 J. IMMUNOL. METHODS (1984, 73(1)，139-45)。一些基于側(cè)流原理的檢測(cè)系統(tǒng) 可作為過(guò)敏快速檢測(cè)而在商業(yè)上獲得。
[0008] 對(duì)于床旁領(lǐng)域，例如描述了本申請(qǐng)人的可商業(yè)購(gòu)得的床旁快速檢查（參見 EP1718970)，其可以基于用膜輔助的結(jié)合測(cè)定被用于全血過(guò)敏檢驗(yàn)。
[0009] 另外，在W02011/000959中描述了本申請(qǐng)人的快速檢測(cè)，在這里，一個(gè)膜有目的地 在檢驗(yàn)位置之間被潤(rùn)濕，以便將檢測(cè)試劑非常有效地平行加入"此前帶有待分析的全血的 膜的特定區(qū)域"中。
[0010] 本申請(qǐng)人的另一種快速檢測(cè)在2013年2月28日的W02013026808A1中有描述，在 此，膜從兩側(cè)被環(huán)繞沖洗。為此，該膜在縱向側(cè)被固定在一個(gè)裝置內(nèi)，從而在其頂面和底面 出現(xiàn)自由容積，液體可通過(guò)該自由容積在該膜旁流過(guò)。
[0011] 但是，對(duì)改善的快速檢測(cè)的呼聲很高。
[0012] 尤其是均勻一致地給各個(gè)檢驗(yàn)位置加載樣液（待檢物）是有改善空間的，同樣還 有高效沖洗所有檢驗(yàn)位置以及液體的可再現(xiàn)的流動(dòng)引導(dǎo)（其公差由加工誤差決定的膜性 能變化而定）。但是，所有這些性能是可再現(xiàn)的高品質(zhì)結(jié)果的前提。
[0013] 因而，針對(duì)床旁檢測(cè)系統(tǒng)的本發(fā)明任務(wù)是提供一種改善的且可更好再現(xiàn)的方法， 用于給支架加載樣液，以便借助于受體分子檢驗(yàn)待檢物。
[0014] 出人意料地，該任務(wù)通過(guò)權(quán)利要求1來(lái)完成。根據(jù)本發(fā)明，規(guī)定一種用于檢驗(yàn)來(lái)自 樣液的至少一種待檢物的檢測(cè)方法，其由兩個(gè)樣室構(gòu)成，它們優(yōu)選通過(guò)允許樣液部分透過(guò) 的由至少兩個(gè)表面構(gòu)成的支架被分開，其中，該支架的正面朝向第一樣室，該支架的背面朝 向第二樣室，并且
[0015] a)至少一個(gè)受體分子被固定在該支架的正面上，
[0016] b)通過(guò)支架的正面和背面分別構(gòu)成至少一個(gè)由室壁限定的自由容積，
[0017] c)第一樣室具有至少兩個(gè)開口，其中，樣液通過(guò)第一開口沿流動(dòng)梯度經(jīng)支架正面 流向與支架間隔的第二開口，
[0018] d)第二樣室具有至少兩個(gè)開口，其中，樣液通過(guò)第一開口從第一樣室沿流動(dòng)梯度 經(jīng)支架背面且優(yōu)選與在支架正面的流動(dòng)反向地流向第二開口，
[0019] e)第一樣室的第二開口和第二樣室的第一開口通過(guò)流道相互連通，
[0020] f)第二樣室的第二開口允許液體流出，
[0021] g)來(lái)自b)的自由容積至少部分被構(gòu)造有液柱，
[0022] h)其中，該流動(dòng)梯度沿支架的正面和背面借助壓力施加來(lái)實(shí)現(xiàn)并且攜帶來(lái)自g) 的液柱。
[0023] 以下稱為"本發(fā)明的方法"。
[0024] 本發(fā)明的方法尤其有利地允許可重現(xiàn)地給支架加載樣液和沖洗支架，以檢驗(yàn)待檢 物。在此情況下，通過(guò)在支架上方沿流動(dòng)梯度暫時(shí)形成液柱和形成帶有受體分子的相關(guān)檢 驗(yàn)位置而獲得了質(zhì)的改善。
[0025] 本發(fā)明優(yōu)選的是：該支架分開兩個(gè)樣室，從而近似所有樣液流在兩個(gè)樣室之間流 過(guò)支架或流過(guò)樣室之間的流道，但優(yōu)選沒有經(jīng)過(guò)支架邊緣。由此保證了尺寸變化的支架也 能在頂面和底面被樣液以相似程度流過(guò)。也優(yōu)選的是：可能有的支架沿橫向呈柱形的隆起 (從一開始就有或只在被樣液潤(rùn)濕后才存在或出現(xiàn)的）通過(guò)將支架固定在樣室之間而被減 小，或甚至被抵消。根據(jù)本發(fā)明的此方案，也導(dǎo)致了所期望的均勻而可再現(xiàn)的圍繞支架流 動(dòng)。
[0026] 根據(jù)本發(fā)明，流道從第一樣室的第二開口延伸向第二樣室的第一開口。該流道首 先允許該樣室借助支架被分開，而且還從第一樣室向第二樣室引導(dǎo)液流，從而支架的正面 和背面可以均勻地被流過(guò)。令人吃驚的是，該流道沒有影響沖洗作用，雖然它就像節(jié)流閥那 樣作用于流動(dòng)。
[0027] 該實(shí)施方式的根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于，通過(guò)該流道阻止在被施加于樣室的 壓力被減小情況下的樣液回流。
[0028] 在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，從第一樣室的第二開口至第二樣室的第一開口的該流道 具有如下直徑，該直徑大致等于試樣供應(yīng)通道和用于廢料（廢液）的流道的直徑。還優(yōu)選 的是，該流道的直徑小于樣室的或自由容積的直徑。還優(yōu)選的是，該流道包圍支架的固定件 (尤其是橫撐桿）并且具有圓孔。
[0029] 通過(guò)該方案保證了，雖然有支架加工誤差，仍可再現(xiàn)地出現(xiàn)就兩個(gè)支架表面（即 正面和背面）而言的足夠大的流動(dòng)梯度，在這里，可以有利地做到在支架之外輸送樣液的 主要部分（但至少是一半樣液）。這尤其適用于以下支架區(qū)域：其在樣液流入時(shí)是首先到 達(dá)的或被潤(rùn)濕的并且在其上有至少一個(gè)受體分子位于檢驗(yàn)位置。其它溶液如沖洗液也最好 基本在支架之外被輸送。
[0030] 根據(jù)本發(fā)明，液柱是從支架的正面或背面至各樣室的對(duì)置室壁（室頂面或室底 面）形成的。
[0031] 在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，該支架的第一或第二表面至室壁的距離為l〇ym及以 上，其中，一旦出現(xiàn)了流動(dòng)梯度，則在該正面和/或背面上在自由容積內(nèi)存在液柱。
[0032] 但優(yōu)選在正面或背面分別相對(duì)于室壁的10-1500ym(l. 5mm)距離，在此可以有利 地沒有進(jìn)行流動(dòng)梯度中斷，還優(yōu)選80ym-350ym的距離，尤其優(yōu)選120ym-200ym的距離。
[0033] 還可能優(yōu)選的是，該支架的各正面或背面的兩個(gè)距離是彼此不同的并且尤其是距 室頂面（上室壁）距離是例如170ym，至室底面（下室壁）的距離例如是150ym。變化取 決于與樣液有關(guān)的所需流動(dòng)梯度。
[0034] 還優(yōu)選的是，該支架被裁切成長(zhǎng)條形并且在所有邊側(cè)被牢固固定在該樣室上。優(yōu) 選的是，這些長(zhǎng)邊側(cè)被夾在半殼的兩個(gè)邊緣之間，它們構(gòu)成樣室以及在該膜上方和下方的 所述自由空間或者說(shuō)自由容積。還優(yōu)選的是，支架的一個(gè)端面或兩個(gè)端面處于例如一個(gè)接 片的強(qiáng)制導(dǎo)槽中，以避免支架在試盒安裝時(shí)滑動(dòng)并簡(jiǎn)化加工。支架也可以被粘接在縱向側(cè) 或端側(cè)上。夾緊和粘接的組合也是可行的。其它可行的支架固定方法包括將邊緣澆注入聚 合物基材中，溶劑粘接、超聲焊、激光焊和熱焊、激光掩模焊、機(jī)械固定例如夾緊或（塑料） 鉚接或3d打印技術(shù)，此時(shí)支架的固定通過(guò)成型來(lái)做到。
[0035] 在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，該檢測(cè)裝置除了兩個(gè)樣室外還包括第三室， 第三室與第二樣室的第二開口流體連通，并且所加入的液體（樣液、沖洗液、溶液等）在流 過(guò)所述兩個(gè)樣室之后匯集在該第三室內(nèi)。第三（副）室可以按照已知方式配備有吸收性材 料例如棉、纖維素、聚丙烯酸酯或者功能化聚丙烯酸酯（例如見圖3)。優(yōu)選至少1. 0ml且尤 其是5-10ml的室體積。
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