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新的床旁檢測系統(tǒng)和方法_3

文檔序號:9278098閱讀:來源:國知局
是單獨地或是在穩(wěn)定化基材中,或者作 為凍干產物來施加并且在表面潤濕時溶解。所述固定還可以透過充分利用非共價相互作用 來實現,就像其例如存在于抗體和蛋白質A之間,在生物素和抗生蛋白鏈菌素之間,在六組 氨酸和鎳-NTA之間或者在DNA的堿基對中。而且,受體分子的單元可以被共價結合到第一 表面。在一個優(yōu)選實施方式中,受體分子在潤濕時基本上保持固定在第一表面上,尤其是達 到超過50%。
[0072] 本發(fā)明意義上的樣液可以是任何來源的任何物質或混合物,或許連帶有溶劑,但 優(yōu)選生物液。樣液尤其可以源自植物或動物,尤其來自哺乳動物,尤其來自人類。樣液例如 可以不是最終的:全血、混血、血清、唾液、淚液、尿、分泌液、腦液、這些液體的處理后形式或 包含前述液體的這些液體。樣液也可以稀釋存在。樣液包含至少一種待檢物,其被定位在 至少一個受體分子上或者造成可檢驗的相互作用。
[0073] 樣液還可以包含試劑如配合基、競爭物、抗體且尤其是與地谷新配基共軛的抗體, 多達100個抗地谷新配基抗體作為副抗體能結合至其上,因此造成信號加強,或者標記抗 體、酶或酶底物,尤其是造成顏色突變或熒光的標記抗體、酶或酶底物,并且可以包含第二 有機樣液,其例如包含另一抗體并且造成顏色突變?yōu)榱硪活伾?br>[0074] 另外,樣液可以包含有穩(wěn)定劑或阻凝劑如EDTA、肝素或檸檬酸。
[0075] 另一種溶液還可以包含洗滌劑、用于結合未被結合到受體分子上的自由物質的捕 獲劑分子或者酶抑制劑,從而溶液適用于沖洗或阻斷反應。
[0076] -種溶液可包含具有或不具有其它物質的二次蒸餾水、蒸餾水或自來水,其可附 加流過離子交換器。而且,它可以包含常用于穩(wěn)定pH值或穩(wěn)定樣液組成的緩沖劑成分。
[0077] 該樣室是支架所在的空腔并且包括兩個開口(入口,出口)。該樣室可以具有針對 手動操作優(yōu)化的形狀,例如呈可單手握持的扁平長方體狀。該長方體最好小于lcm厚。該液 體可以先后利用可用另一手操作的注射器被注入樣室中。該樣室的頂側可以包含透明蓋, 其至少可讓人看到支架局部并且允許快速目測分析根據本發(fā)明方法的檢測。另外,可以如 此設計該樣室,即它可被置入讀取器中,其包括用于樣室填充的裝置或包含檢測結果讀取。 尤其呈微型化形式的這種裝置能被集成在另一殼體等中。
[0078] 樣液借以經開口流入樣室的壓力優(yōu)選可以通過注射器來手動產生,其中,該注射 器最好具有這樣的容積,其不小于樣室容積的十分之一且不大于其十倍。還優(yōu)選的是,該注 射器具有魯爾接頭。利用注射器,液體可以先被抽走且隨后被注入樣室。
[0079] 用于壓力生成的注射器也可以利用注射泵來驅動。此時有利的是,該壓力可重現 且均勻地生成。在此實施方式中,在注射泵和樣室之間的軟管連接件可能是有利的,其盒側 末端能作為魯爾接頭來構成。還可能優(yōu)選的是,設置具有至少兩通的閥門,從而試劑/樣液 可從一個或多個儲藏容器被抽出并隨后被輸出到樣室中。
[0080] 該壓力也能以其它方式人工或用機器來產生,例如做法是該試劑/樣液在帶有開 口的可壓縮的儲藏容器內來提供。該開口可以有利地配設有魯爾適配接頭。通過人工施壓 于儲藏容器,檢測溶液從儲藏容器進入樣室。作用于儲藏容器的壓力也可以用機器產生,例 如做法是活塞、桿或擠壓裝置施壓于儲藏容器,它又能利用馬達、以氣壓方式或液壓方式被 驅動。
[0081] 在所有的方法和裝置中,壓力施加能作為正壓出現在入口或作為負壓出現在出
[0082] 儲藏容器可以被構造用于一次性用途,作為囊或泡,尤其以預填充的封閉形式。由 塑料或膜構成的囊或泡是有利的,尤其是一次性安瓿。可能優(yōu)選的是,泡或一次性安瓿被集 成到試盒中,從而它們在相同工序中被共同制造并且儲藏容器在第二步驟中被預填充。 [0083] 在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方式中采用了泵,其泵送所述溶液/樣液并且由此供 給樣室。所述泵可以位于儲藏容器和樣室之間并直接泵送該溶液/樣液,或者將空氣或液 體泵入帶有兩個開口的儲藏容器中,從而位于其內的液體被排擠并泵入該樣室中。另外可 以規(guī)定,采用能向前和向后泵送的泵和具有至少兩通的閥門,從而檢測試劑可以從一個或 多個儲藏容器被泵送出并借著被輸出到樣室。所述泵也可位于樣室后面并且在樣室內產生 負壓,從而液體從位于樣室前的可壓縮的儲藏容器被負壓吸入該樣室,并且或許進一步被 吸入廢液容器。在此實施方式中特別有利的是,該泵不被溶液/樣液弄臟,因此可無需清洗 而繼續(xù)使用。微型泵是很合適的,例如德國格雷菲爾芬的PARItec有限公司的0-run100 或 0-run200。另外,隔膜泵和微型隔膜泵、軟管泵和齒環(huán)泵非常適用。
[0084] 液體(可以是樣液或溶液)流入該樣室,其具有平行于該支架的第一和第二表面 的流動分量。如果可結合到至少一個受體分子上的待檢物位于該液體內,則一旦該液體接 觸到受體分子就使之成為可能。此時可能優(yōu)選的是,在加入液體之后使壓力降低到近似大 氣壓,從而該液體呆在支架上,沒有或幾乎沒有流動,并且受體分子和待檢物能溫育和結 合,而無需加入新液體。還可能優(yōu)選的是,壓力狀況顛倒一段時間,從而液體反向運動,或者 壓力狀況交替變化一段時間,從而液體在支架上來回運動。因此,相比于不動的液體,可以 實現在液體和支架之間的更好的物質交換,而無需很多液體。
[0085] 另一液體/溶液可以被用于支架沖洗。沖洗時也可以優(yōu)選該液體有一段時間不動 或微弱運動地呆在支架上,以便使用較少液體就夠了。在沖洗時也可以交替施加壓力。 [0086] 出乎意料的是,檢測方案能提供像例子1所述的結果,其用肉眼就可與例如從現 有技術中已知的側流測定中那樣差不多一樣清楚地被讀取。不過在側流測定中,該液體 通過毛細管力流過支架并平行于其表面、且隨后繞受體分子流動或完全流過檢測區(qū)/檢驗 區(qū)。
[0087] 另外,本發(fā)明方法的一個優(yōu)點在于:不會受到當兩個位于不同檢測區(qū)的受體分子 結合到相同的待檢物時在側流測定中會出現的困擾。
[0088] 在本發(fā)明方法中,支架的流過是足夠快速地實現的,因而在接觸到第一檢測試劑 時沒有出現來自液體的待檢物的使數值失真的耗盡并且沒有影響到與第二受體分子的相 互作用。
[0089] 本發(fā)明方法的另一優(yōu)點在于,許多液體可以先后簡單地以任意時隔、幾乎沒有混 合地被添加。而在側流測定中存在有限制條件的可能性,這是因為只借助檢測條或芯吸墊 的毛細管作用使液體不利地運動。一旦施加上之后,液體連續(xù)朝向尚未被潤濕的支架或芯 吸墊流動。這種毛細管作用的特點還在于,同時或先后施加到支架上的液體交融流動并且 混合。因此,只能有限地執(zhí)行此時出現所期望的信號加強(例如關于辣根過氧化物酶或堿 性磷酸酶)的很敏感的酶檢測方法,如通過干燥。實際上,商業(yè)上所提供的側流檢測只基于 以下檢測方案,在此沒有顯露酶級且不再作為液體試劑添加至試樣。
[0090] 相對于敞露執(zhí)行的、檢測溶液高出膜上方的檢測也有優(yōu)點。在此檢測中,自由的膜 或在框架內被固定的膜在槽盆內被手動搖晃,就像在本申請人的EP1718970中所述那樣, 或者利用機械晃動裝置或搖擺裝置使槽盆連續(xù)運動。通過晃動,引起高出部分相對于膜的 運動,因此獲得用于結合反應以及也用于沖洗反應的改善的物質交換,其導致與本發(fā)明方 法幾乎一樣好的結果。但完整閉合結構的優(yōu)點在于避免了試樣被弄臟,保護使用者免于樣 液的噴濺和接觸,以及工作參數如晃動裝置的晃動頻率的獨立性。因此,根據本發(fā)明的方 法,改善了可再現性。
[0091] 還出乎意料的是,當支架的兩個表面都接觸液體時,結果得到了顯著改善。這是令 人吃驚的,因為第二表面在兩種情況下接觸比例相似的流動、物質量和檢測液、試劑和沖洗 液的濃度。但在試驗對比中,在支架的第二表面或背面被固定在空腔底面上時看到明顯減 弱的沖洗作用。
[0092] 檢測結果的讀取可以如此實現,即試盒具有透明的蓋,可以透過該蓋觀察檢測試 劑并且目測讀取顏色值變化或灰度變化。這種布置結構也允許檢測方法的拍照讀取,尤其 在采用了把檢測結果成像到圖像傳感器上的光學鏡頭時。圖像傳感器優(yōu)選是CCD傳感器或 CMOS傳感器。來自就像用在照相機、網絡攝像頭和手機中的消費者領域的光學鏡頭是非常 廉價但還是高效率的。在伴隨顏色突變或熒光變化的檢測中可能優(yōu)選的是,采用濾色鏡或 帶有色敏光電傳感器的顏色傳感器。當采用熒光時,熒光的激發(fā)可以利用燈、激光或發(fā)光二 極管來實現。
[0093] 在另一個實施方式中,就像在近幾年一般針對診斷法所研發(fā)出來的機電探測方 法被用于讀取,因此例如有 Dionex ED 40 Electrical De
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