本發(fā)明涉及一種吡唑醚菌酯中間體溴化物監(jiān)控的分析方法，屬于農(nóng)藥分析領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)又名唑菌胺酯，是德國巴斯夫公司于1993年發(fā)現(xiàn)的一種兼具吡唑結(jié)構(gòu)的甲氧丙烯酸甲酯類廣譜殺菌劑。該藥具有廣譜的殺菌活性，適用作物廣泛，主要作物市場是大豆、谷物、玉米、葡萄和果蔬。它既能防治由子囊綱、擔子菌綱、半知菌類和卵菌綱等幾乎所有類型的真菌病原體引起的植物病害，又是一種激素型殺菌劑。它具有毒性低、對非靶標生物安全、對使用者和環(huán)境均安全友好的特點。

目前國內(nèi)外測定吡唑醚菌酯中間體的分析方法有：氣相色譜法，液相色譜法，化學(xué)分析法等。液相色譜法大都采用面積歸一法，但由于波長，流動相的選擇不同造成面積歸一的不同。

吡唑醚菌酯中間體的轉(zhuǎn)化率和純度對提高吡唑醚菌酯的純度和收率起到至關(guān)重要的作用。針對此現(xiàn)狀本發(fā)明提供了一種吡唑醚菌酯中間體溴化物監(jiān)控的分析方法以解決面積歸一法的誤差。從而提高了吡唑醚菌酯中間體的轉(zhuǎn)化率和純度。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供了一種吡唑醚菌酯中間體溴化物監(jiān)控的分析方法從而獲得反應(yīng)液中溴化物和鄰硝基甲苯的質(zhì)量比。本發(fā)明的方法具有分析時間短、樣品用量少、選擇性好、靈敏度高、檢測限低、易實現(xiàn)自動化，減少原料監(jiān)控面積歸一法誤差的優(yōu)點。并且準確度和精密度均可得到滿意的結(jié)果。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的吡唑醚菌酯中間體溴化物監(jiān)控的分析方法，包括以下步驟：

(1)吡唑醚菌酯中間體溴化物監(jiān)控標準溶液的制備；

(2)吡唑醚菌酯中間體溴化物監(jiān)控反應(yīng)液的制備；

(3)進行高效液相色譜分析，獲得吡唑醚菌酯中間體溴化物監(jiān)控標準溶液和反應(yīng)液中溴化物和鄰硝基甲苯的峰面積比；

(4)繪制標準溶液中溴化物和鄰硝基甲苯質(zhì)量比與峰值面積比的線性圖，得到相應(yīng)的標準線性方程；

(5)根據(jù)標準線性方程，獲得吡唑醚菌酯中間體溴化物監(jiān)控反應(yīng)液中溴化物和鄰硝基甲苯的質(zhì)量比。

進一步地，所述吡唑醚菌酯中間體溴化物監(jiān)控標準溶液，其溴化物和鄰硝基甲苯的質(zhì)量比為0.2～5.0。

進一步地，所述吡唑醚菌酯中間體溴化物監(jiān)控標準溶液，其配置方法包括如下步驟：稱取鄰硝基甲苯和溴化物標樣，稱取鄰硝基甲苯和溴化物標樣，放到容量瓶中，加入甲醇后振動；用甲醇定容，搖勻；用甲醇稀釋、過濾。

進一步地，所述步驟(2)包括進一步包括以下步驟：

將不同反應(yīng)時間的反應(yīng)液加入水和堿溶液中和，調(diào)節(jié)ph值為中性；用甲醇稀釋、溶解后，過濾。

其中反應(yīng)液的制備方法為向反應(yīng)瓶中加入適量溶劑(如四氯化碳)然后加入1:1.05摩爾的鄰硝基甲苯和溴化氫攪拌升溫至35℃緩慢滴加雙氧水，待滴加完畢后升溫至50-90℃保溫0.5-8小時。制得反應(yīng)液。

進一步地，所述過濾是采用0.45μ尼龍膜進行過濾；所述水為所述實驗用水為市銷的注有hplc專用的蒸餾水。

進一步地，所述步驟(3)進一步包括以下步驟：采用zorbaxextend-c18柱，以醇和緩沖溶液的混合溶液為流動相，ph值為9.1，在設(shè)定的流速柱溫及檢測波長下進行監(jiān)控；對所述吡唑醚菌酯中間體溴化物監(jiān)控標準溶液和反應(yīng)液進行液相色譜分析，得到色譜圖，獲得所述吡唑醚菌酯中間體溴化物監(jiān)控標準溶液和反應(yīng)液中溴化物和鄰硝基甲苯的峰面積比。

進一步地，所述步驟(4)，是以溴化物和鄰硝基甲苯的質(zhì)量比為縱坐標，溴化物和鄰硝基甲苯峰面積比為橫坐標繪制線性圖，得到在相應(yīng)色譜條件下的標準線性方程。

進一步地，所述繪制線性圖，是在zorbaxextend-c18色譜柱，流動相：甲醇與緩沖溶液體積百分比為20-80％的溶液，流速為0.8-2.0ml/min，柱溫：25℃～40℃，進樣量為20μl；吸收波長：190-300nm的條件下，注入溴化物和鄰硝基甲苯的質(zhì)量比為0.2～5.0的吡唑醚菌酯中間體溴化物監(jiān)控標準溶液直至相鄰兩針峰面積之比小于0.5％為止，得到相應(yīng)的線性方程。

進一步地，所述線性方程為：y＝ax+b，

式中：y為反應(yīng)液中溴化物與鄰硝基甲苯質(zhì)量比的平均值；

a、b分別為常數(shù)；

x為反應(yīng)液中溴化物與鄰硝基甲苯的峰面積比。

更進一步地，所述溴化物的分子式為：

本發(fā)明吡唑醚菌酯中間體溴化物監(jiān)控的分析方法，具有如下的有益效果：

1、解決了中間體溴化物監(jiān)控的分析方法中由于面積歸一法對反應(yīng)液中原料所占比例與實際所占比例的偏差。

2、分析時間短、樣品用量少、選擇性好、靈敏度高、檢測限低、易實現(xiàn)自動化,減少原料監(jiān)控面積歸一法誤差的優(yōu)點。并且準確度和精密度均可得到滿意的結(jié)果。

本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點將在隨后的說明書中闡述，并且，部分地從說明書中變得顯而易見，或者通過實施本發(fā)明而了解。

附圖說明

附圖用來提供對本發(fā)明的進一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，并與本發(fā)明的實施例一起，用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。在附圖中：

圖1為根據(jù)本發(fā)明的吡唑醚菌酯中間體溴化物監(jiān)控的分析方法流程圖；

圖2為吸收波長為220nm時的線性關(guān)系圖；

圖3為吸收波長為230nm時的線性關(guān)系圖；

圖4為吸收波長為240nm時的線性關(guān)系圖；

圖5為吸收波長為254nm時的線性關(guān)系圖；

圖6為吸收波長為260nm時的線性關(guān)系圖；

圖7為吸收波長為270nm時的線性關(guān)系圖；

圖8為吸收波長為210nm時的線性關(guān)系圖；

圖9為吸收波長為290nm時的線性關(guān)系圖；

圖10為吸收波長為265nm時的線性關(guān)系圖；

圖11為吸收波長為280nm時的線性關(guān)系圖；

圖12為吸收波長為285nm時的線性關(guān)系圖。

具體實施方式

以下對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進行說明，應(yīng)當理解，此處所描述的優(yōu)選實施例僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

為了更好的解釋本發(fā)明，下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。

本發(fā)明中，采用的溴化物，其分子式為：

圖1為根據(jù)本發(fā)明的吡唑醚菌酯中間體溴化物監(jiān)控的分析方法流程圖，下面將參考圖1對本發(fā)明的吡唑醚菌酯中間體溴化物監(jiān)控的分析方法進行詳細描述。

首先，在步驟101，制備標準溶液。標準溶液的制備：配制數(shù)個質(zhì)量比不同的溴化物和鄰硝基甲苯標準溶液：(例：0.2；0.5；1.0；3.0；5.0作為縱坐標)。

1)準確稱取約30mg鄰硝基甲苯和130mg溴化物標樣(精確到±0.2mg)，放到50ml容量瓶中，加入5ml甲醇，超聲波下振動1min，然后用甲醇定容，搖勻。移取1.0ml置入25ml容量瓶中，然后用甲醇稀釋至刻度，過濾(0.45μ尼龍膜)，濾液備用。移取1.0ml上述樣品溶液放入25ml容量瓶中，然后用甲醇稀釋至刻度，過濾(0.45μ尼龍膜)，濾液備用。

2)準確稱取約30mg鄰硝基甲苯和100mg溴化物標樣(精確到±0.2mg)，放到50ml容量瓶中，加入5ml甲醇，超聲波下振動1min，然后用甲醇定容，搖勻。移取1.0ml置入25ml容量瓶中，然后用甲醇稀釋至刻度，過濾(0.45μ尼龍膜)，濾液備用。移取1.0ml上述樣品溶液放入25ml容量瓶中，然后用甲醇稀釋至刻度，過濾(0.45μ尼龍膜)，濾液備用。

3)準確稱取約50mg鄰硝基甲苯和50mg溴化物標樣(精確到±0.2mg)，放到50ml容量瓶中，加入5ml甲醇，超聲波下振動1min，然后用甲醇定容，搖勻。移取1.0ml置入25ml容量瓶中，然后用甲醇稀釋至刻度，過濾(0.45μ尼龍膜)，濾液備用。移取1.0ml上述樣品溶液放入25ml容量瓶中，然后用甲醇稀釋至刻度，過濾(0.45μ尼龍膜)，濾液備用。

4)準確稱取約100mg鄰硝基甲苯和40mg溴化物標樣(精確到±0.2mg)，放到50ml容量瓶中，加入5ml甲醇，超聲波下振動1min，然后用甲醇定容，搖勻。移取1.0ml置入25ml容量瓶中，然后用甲醇稀釋至刻度，過濾(0.45μ尼龍膜)，濾液備用。

5)準確稱取約160mg鄰硝基甲苯和100mg溴化物標樣(精確到±0.2mg)，放到50ml容量瓶中，加入5ml甲醇，超聲波下振動1min，然后用甲醇定容，搖勻。移取1.0ml置入25ml容量瓶中，然后用甲醇稀釋至刻度，過濾(0.45μ尼龍膜)，濾液備用。移取1.0ml上述樣品溶液放入25ml容量瓶中，然后用甲醇稀釋至刻度，過濾(0.45μ尼龍膜)，濾液備用。

在步驟102，制備反應(yīng)液。其中反應(yīng)液的制備方法為向反應(yīng)瓶中加入適量溶劑(如四氯化碳)然后加入1:1.05摩爾的鄰硝基甲苯和溴化氫攪拌升溫至35℃緩慢滴加雙氧水，待滴加完畢后升溫至50-90℃保溫0.5-8小時。制得反應(yīng)液。

取不同反應(yīng)時間的反應(yīng)液1ml置于10ml磨口三角瓶加入適量水和適量的堿溶液中和，調(diào)節(jié)ph值為中性。然后取2滴下層有機層用2-3ml甲醇稀釋，均勻溶解后，過濾(0.45μ尼龍膜)，備用。

在步驟103，進行高效液相色譜分析，采用zorbaxextend-c18色譜柱，流動相：甲醇與緩沖溶液體積百分比為20-80％的溶液，緩沖液為50mmol/l硼酸鈉并用氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph值為9.1，流速為0.8-2.0ml/min，柱溫25-40℃，進樣量：20μl。分別取步驟(1)和(2)溶液進行色譜分析，得到標準溶液和反應(yīng)液中鄰硝基甲苯和溴化物的色譜圖，得出標準溶液和反應(yīng)液中溴化物和鄰硝基甲苯的峰面積比。

在步驟104，以溴化物和鄰硝基甲苯的質(zhì)量比為縱坐標溴化物和鄰硝基甲苯峰面積比為橫坐標繪制在不同波長下的線性圖從而的到相應(yīng)的標準線性方程。

在步驟105，在確定好標準線性方程后重復(fù)進樣反應(yīng)液得到的溴化物和鄰硝基甲苯的峰面積比代入標準線性方程進而得到反應(yīng)液中溴化物和鄰硝基甲苯質(zhì)量比。

下面結(jié)合改變分析條件的具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。

改變分析條件標準線性方程的確定

下列實施例中使用的儀器為：日本島津液相色譜儀lc-20at，檢測器：光電二極管陣列，工作站：lcsolution，色譜柱：zorbaxextend-c18。

實施例一

采用zorbaxextend-c18色譜柱，流動相：甲醇與緩沖溶液體積百分比為20-80％的溶液，流速為1.0ml/min，柱溫：35℃，進樣量為20μl；吸收波長：220nm。圖2為吸收波長為220nm時的線性關(guān)系圖，如圖2所示，在上述條件下進入標準溶液，重復(fù)進樣直至相鄰兩針峰面積之比小于0.5％為止得到相應(yīng)的線性方程：y＝1.262x+0.1576r²＝0.9984。

實施例二

采用zorbaxextend-c18色譜柱，流動相：甲醇與緩沖溶液體積百分比為20-80％的溶液，流速為0.8ml/min，柱溫：35℃，進樣量為20μl；吸收波長：230nm。圖3為吸收波長為230nm時的線性關(guān)系圖，如圖3所示，在上述條件下進入標準溶液，重復(fù)進樣直至相鄰兩針峰面積之比小于0.5％為止得到相應(yīng)的線性方程：y＝1.5405x-0.0576r²＝0.9994。

實施例三

采用zorbaxextend-c18色譜柱，流動相：甲醇與緩沖溶液體積百分比為20-80％的溶液，流速為1.0ml/min，柱溫：25℃，進樣量為20μl；吸收波長：240nm。圖4為吸收波長為240nm時的線性關(guān)系圖，如圖4所示，在上述條件下進入標準溶液，重復(fù)進樣直至相鄰兩針峰面積之比小于0.5％為止得到相應(yīng)的線性方程：y＝0.9672x+0.0122r²＝0.9999。

實施例四

采用zorbaxextend-c18色譜柱，流動相：甲醇與緩沖溶液體積百分比為20-80％的溶液，流速為0.9ml/min，柱溫：35℃，進樣量為20μl；吸收波長：254nm。圖5為吸收波長為254nm時的線性關(guān)系圖，如圖5所示，在上述條件下進入標準溶液，重復(fù)進樣直至相鄰兩針峰面積之比小于0.5％為止得到相應(yīng)的線性方程：y＝0.6299x+0.0135r²＝0.9999。

實施例五

采用zorbaxextend-c18色譜柱，流動相：甲醇與緩沖溶液體積百分比為20-80％的溶液，流速為1.2ml/min，柱溫：35℃，進樣量為20μl；吸收波長：260nm。圖6為吸收波長為260nm時的線性關(guān)系圖，如圖6所示，在上述條件下進入標準溶液，重復(fù)進樣直至相鄰兩針峰面積之比小于0.5％為止得到相應(yīng)的線性方程：y＝0.6085x+0.0147r²＝0.9999。

實施例六

采用zorbaxextend-c18色譜柱，流動相：甲醇與緩沖溶液體積百分比為20-80％的溶液，流速為1.0ml/min；柱溫：40℃，進樣量為20μl；吸收波長：270nm。圖7為吸收波長為270nm時的線性關(guān)系圖，如圖7所示，在上述條件下進入標準溶液，重復(fù)進樣直至相鄰兩針峰面積之比小于0.5％為止得到相應(yīng)的線性方程：y＝0.6467x+0.0116r²＝0.9999。

實施例七

采用zorbaxextend-c18色譜柱，流動相：甲醇與緩沖溶液體積百分比為20-80％的溶液，流速為1.1ml/min，柱溫：40℃，進樣量為20μl；吸收波長：210nm。圖8為吸收波長為210nm時的線性關(guān)系圖，如圖8所示，在上述條件下進入標準溶液，重復(fù)進樣直至相鄰兩針峰面積之比小于0.5％為止得到相應(yīng)的線性方程：y＝1.0322x-0.0299r²＝0.9988

實施例八

采用zorbaxextend-c18色譜柱，流動相：甲醇與緩沖溶液體積百分比為20-80％的溶液，流速為1.1ml/min，柱溫：30℃，進樣量為20μl；吸收波長：290nm。圖9為吸收波長為290nm時的線性關(guān)系圖，如圖9所示，在上述條件下進入標準溶液，重復(fù)進樣直至相鄰兩針峰面積之比小于0.5％為止得到相應(yīng)的線性方程：y＝0.7456x+0.0125r²＝0.9999。

實施例九

采用zorbaxextend-c18色譜柱，流動相：甲醇與緩沖溶液體積百分比為20-80％的溶液，流速為0.9ml/min，柱溫：25℃，進樣量為20μl；吸收波長：265nm。圖10為吸收波長為265nm時的線性關(guān)系圖，如圖10所示，在上述條件下進入標準溶液，重復(fù)進樣直至相鄰兩針峰面積之比小于0.5％為止得到相應(yīng)的線性方程：y＝0.6233x+0.01r²＝0.9999。

實施例十

采用zorbaxextend-c18色譜柱，流動相：甲醇與緩沖溶液體積百分比為20-80％的溶液，流速為1.3ml/min，柱溫：30℃，進樣量為20μl；吸收波長：280nm。圖11為吸收波長為280nm時的線性關(guān)系圖，如圖11所示，在上述條件下進入標準溶液，重復(fù)進樣直至相鄰兩針峰面積之比小于0.5％為止得到相應(yīng)的線性方程：y＝0.6987x+0.0117r²＝0.9999。

實施例十一

采用zorbaxextend-c18色譜柱，流動相：甲醇與緩沖溶液體積百分比為20-80％的溶液，流速為1.4ml/min，柱溫：25℃，進樣量為20μl；吸收波長：285nm。圖12為吸收波長為285nm時的線性關(guān)系圖，如圖12所示，在上述條件下進入標準溶液，重復(fù)進樣直至相鄰兩針峰面積之比小于0.5％為止得到相應(yīng)的線性方程：y＝0.7227x+0.0127r²＝0.9999。

(二)準確度實驗

采用標準加入法，在已知鄰硝基甲苯含量的反應(yīng)液樣品中加入一定量的鄰硝基甲苯標準品，在上述色譜操作條件下和不同分析條件下的相應(yīng)的標準線性方程測定鄰硝基甲苯的含量，測得其平均回收率為99.98％，方法準確度好，如表1所示。

(三)精密度實驗

用上述方法對反應(yīng)液樣品進行分析測定，在測定范圍內(nèi)線性關(guān)系很好，標準偏差為0.00659，變異系數(shù)為0.22％，回收率99.98％，簡便、快速、準確度好、精密度高，是一種比較理想的分析方法。

本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以理解：以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實施例對本發(fā)明進行了詳細的說明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可以對前述各實施例記載的技術(shù)方案進行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。