本發(fā)明屬于分析化學領域，具體涉及一種反相高效液相色譜分離鹽酸帕洛諾司瓊注射液有關(guān)物質(zhì)的方法。
背景技術(shù)：
：鹽酸帕洛諾司瓊(palonosetronhydrochloride)，商品名為：aloxi，化學名為2-(1-氮雜雙環(huán)[2,2,2]辛-3s-基-2,3,3as,4,5,6-六氫-1h-苯并[de]異喹啉-1-酮鹽酸鹽，是由瑞士helsinn公司研制開發(fā)的一種高效、選擇性、競爭性5-羥色胺3受體拮抗劑。獲fda批準用于預防中、高度致吐性化療(ct)開始和重復療程中相關(guān)的急性和遲發(fā)性惡心和嘔吐，也是唯一用于遲發(fā)性cina(化療引發(fā)的惡心嘔吐)的選擇性5-羥色胺受體阻斷劑。鹽酸帕洛諾司瓊的結(jié)構(gòu)式如下：根據(jù)美國藥典usp39發(fā)布的鹽酸帕洛諾司瓊標準，其含有a、b、e、對映異構(gòu)體及非對映異構(gòu)體幾個特定雜質(zhì)。usp39藥典方法中，進樣濃度為0.7mg/ml，大大高于鹽酸帕洛諾司瓊注射液（1.5ml：0.075mg、5ml：0.25mg）的濃度（0.05mg/ml），因此不適用于鹽酸帕洛諾司瓊注射液的有關(guān)物質(zhì)檢測。中國專利cn104764840a公開了雜質(zhì)a、非對映異構(gòu)體、對映異構(gòu)體的分離方法，但未涉及到雜質(zhì)b、e，沒有達到一次分離的效果，且該方法中采用離子對試劑作為流動相用梯度運行，一般離子對試劑對儀器及色譜柱都有不可逆的損傷，不適于實際操作。專利cn102207494b僅報道了鹽酸帕洛諾司瓊與對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體的分離方法，未涉及雜質(zhì)a、b、e，且其采用正相體系，顯然不適用于鹽酸帕洛諾司瓊注射液有關(guān)物質(zhì)的檢測。目前尚無一種能同時完全分離鹽酸帕洛諾司瓊注射液上述a、b、e、對映異構(gòu)體及非對映異構(gòu)體雜質(zhì)的文獻方法報道。因此現(xiàn)有技術(shù)沒有解決鹽酸帕洛諾司瓊注射液雜質(zhì)難檢測分離的問題，所以，研究開發(fā)一種快速有效分離鹽酸帕洛諾司瓊注射液上述特定雜質(zhì)的分析方法，對藥物產(chǎn)品的質(zhì)量控制具有非常重要的意義。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種簡單準確、能同時有效分離鹽酸帕洛諾司瓊注射液及其特定雜質(zhì)的方法。為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用技術(shù)方案如下：一種反相色譜分離鹽酸帕洛諾司瓊注射液及其特定雜質(zhì)的方法，所述雜質(zhì)結(jié)構(gòu)如分子式a、分子式b、分子式e、對映異構(gòu)體及非對映異構(gòu)體，其特征在于：反相高效液相色譜條件為：色譜柱：chirobiotict柱，規(guī)格為4.6×250mm，5.0μm；檢測波長：238nm；柱溫：35~40℃；流速：0.8~1.2ml/min；進樣量：100μl；流動相：流動相a：流動相b=40:60~50:50，其中流動相a為甲醇：乙腈=90:10，流動相b為0.5%二乙胺水溶液；且所述0.5%二乙胺水溶液用冰乙酸調(diào)ph至5.0~5.5；。其中，所述流動相a(甲醇：乙腈=90:10)與流動相b（0.5%二乙胺水溶液）的體積比為40:60。流動相b用冰乙酸調(diào)ph至5.0。流速為1.0ml/min，樣品用流動相溶解，該方法可應用于鹽酸帕洛諾司瓊注射液的有關(guān)物質(zhì)檢測。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：本發(fā)明方法簡單方便、重現(xiàn)性好、靈敏度高，可用于鹽酸帕洛諾司瓊注射液生產(chǎn)過程中有關(guān)物質(zhì)的檢測控制。附圖說明圖1：系統(tǒng)適用性溶液的分離色譜圖。圖2：帕洛諾司瓊及各雜質(zhì)的lod圖。圖3：帕洛諾司瓊及各雜質(zhì)的loq圖。圖4：鹽酸帕洛諾司瓊注射液的30%h2o2氧化破壞24h的色譜圖。圖5：鹽酸帕洛諾司瓊注射液(1.5ml:0.075mg)有關(guān)物質(zhì)檢測色譜圖。具體實施方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行進一步描述，但本發(fā)明的保護范圍并不僅限于此。實施例1：1.儀器與試劑：安捷倫1260液相色譜儀及配置的g1314f紫外檢測器以及分析儀器配置的hplc色譜工作站。乙腈（色譜級）、甲醇（色譜級）、二乙胺（分析級）、冰乙酸（分析級）、純化水。2.色譜條件：色譜柱：chirobiotict柱(4.6×250mm，5.0μm)檢測波長：238nm柱溫：40℃流速：1.0ml/min進樣量：100μl流動相：流動相a：流動相b=40：60，其中流動相a為甲醇：乙腈=90：10，流動相b為0.5%二乙胺水溶液(用冰乙酸調(diào)ph至5.0)。稀釋劑：流動相3.溶液的制備配制系統(tǒng)適用性溶液：(1)雜質(zhì)a溶液：稱取雜質(zhì)a約25mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加稀釋劑使溶解并定容至刻度，搖勻(濃度：0.5mg/ml)；(2)雜質(zhì)b溶液：稱取雜質(zhì)b約25mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加稀釋劑使溶解并定容至刻度，搖勻(濃度：0.5mg/ml)；(3)雜質(zhì)e溶液：稱取雜質(zhì)e約25mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加稀釋劑使溶解并定容至刻度，搖勻(濃度：0.5mg/ml)；(4)對映異構(gòu)體溶液：稱取對映異構(gòu)體約25mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加稀釋劑使溶解并定容至刻度，搖勻(濃度：0.5mg/ml)；(5)非對映異構(gòu)體溶液：稱取非對映異構(gòu)體約25mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加稀釋劑使溶解并定容至刻度，搖勻(濃度：0.5mg/ml)；(6)帕洛諾司瓊?cè)芤海悍Q取鹽酸帕洛諾司瓊工作對照品約28.1mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加稀釋劑使溶解并定容至刻度，搖勻(濃度：0.5mg/ml)；(7)系統(tǒng)適用性溶液：取鹽酸帕洛諾司瓊工作對照品約56.2mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加適量稀釋劑使溶解，分別精密量取上述雜質(zhì)溶液(1)~(5)貯備液各0.5ml至同一量瓶中，用稀釋劑稀釋并定容至刻度，搖勻，精密量取該溶液1ml置10ml量瓶，用稀釋劑稀釋并定容至刻度，搖勻(帕洛諾司瓊濃度：0.05mg/ml；各雜質(zhì)濃度：0.25μg/ml)。(8)鹽酸帕洛諾司瓊注射液(1.5ml:0.075mg)(濃度：0.05mg/ml)。3.方法驗證：3.1分離度試驗精密量取上述系統(tǒng)適用性溶液(7)100μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。測定結(jié)果見表1，色譜圖如圖1所示。表1分離度試驗結(jié)果名稱相對保留時間分離度理論塔板數(shù)雜質(zhì)a0.66——5691雜質(zhì)b0.711.525022帕洛諾司瓊1.06.707886非對映異構(gòu)體1.122.436961對映異構(gòu)體1.181.5610087雜質(zhì)e1.281.958965上述檢測結(jié)果顯示主峰與相鄰雜質(zhì)峰間分離度大于1.5，各相鄰雜質(zhì)峰之間的分離度也均大于1.5，表明該方法專屬性好。3.2檢測限和定量限：精密量取上述溶液(1)~(6)各1ml置10ml量瓶，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻；精密量取1ml置100ml量瓶，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。檢測限溶液：精密量取上述貯備液1ml置50ml量瓶，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，(濃度：0.07μg/ml，相當于供試品溶液濃度的0.02%)定量限溶液：精密量取上述貯備液1ml置20ml量瓶，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，(濃度：0.175μg/ml，相當于供試品溶液濃度的0.05%)精密量取檢測限溶液、定量限溶液各100μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。測定結(jié)果見表2和圖2及圖3。表2定量限和檢測限的測定結(jié)果雜質(zhì)名稱信噪比(s/n)檢測限的檢出量(ng)信噪比(s/n)定量限的檢出量(ng)雜質(zhì)a5.21.2114.52.52雜質(zhì)b6.51.1215.12.48帕洛諾司瓊4.81.2016.62.56非對映異構(gòu)體5.41.1713.62.42對映異構(gòu)體4.61.2612.62.59雜質(zhì)e5.81.2414.62.61上述結(jié)果表明：各雜質(zhì)的最低檢出濃度均為0.02%，各雜質(zhì)的定量限檢出濃度均為0.05%。能夠滿足鹽酸帕洛諾司瓊注射液進樣體積100μl的檢測。3.3破壞試驗3.3.1酸破壞試驗取上述溶液（8）（鹽酸帕洛諾司瓊注射液1.5ml:0.075mg）21支，平均分成3份，分別置50ml量瓶中，各加入6mol/l的鹽酸溶液2ml，分別放置2h、1天、2天，取出用堿中和后，用上述稀釋劑稀釋至刻度，搖勻。取100μl進樣測定，結(jié)果：與未破壞的樣品比較，除樣品中特定檢測出的雜質(zhì)峰，色譜圖中均未見其他雜質(zhì)峰。3.3.2堿破壞試驗取上述溶液（8）（鹽酸帕洛諾司瓊注射液1.5ml:0.075mg）21支，平均分成3份，分別置50ml量瓶中，各加入6mol/l的氫氧化鈉溶液2ml，分別放置2h、1天、2天，取出用酸中和后，用上述稀釋劑稀釋至刻度，搖勻。取100μl進樣測定，結(jié)果：與未破壞的樣品比較，除樣品中特定檢測出的雜質(zhì)峰，色譜圖中均未見其他雜質(zhì)峰。3.3.3光照破壞取上述溶液（8）（鹽酸帕洛諾司瓊注射液1.5ml:0.075mg）21支，平均分成3份，分別在4500lx±500lx條件下照射1天、2天、4天；分別置50ml量瓶中，用上述稀釋劑稀釋至刻度，搖勻。取100μl進樣測定，結(jié)果：與未破壞的樣品比較，除樣品中特定檢測出的雜質(zhì)峰，色譜圖中均未見其他雜質(zhì)峰。3.3.4高溫破壞取上述溶液（8）（鹽酸帕洛諾司瓊注射液1.5ml:0.075mg）21支，平均分成3份，在105℃條件下分別放置1天、2天、4天。分別置50ml量瓶中，用上述稀釋劑稀釋至刻度，搖勻。取10μl進樣測定，結(jié)果：與未破壞的樣品比較，除樣品中特定檢測出的雜質(zhì)峰，色譜圖中均未見其他雜質(zhì)峰。3.3.5氧化破壞取上述溶液（8）（鹽酸帕洛諾司瓊注射液1.5ml:0.075mg）14支，平均分成2份，分別置50ml量瓶中，各量取30%h2o2溶液2ml，分別放置2h、24h，用上述稀釋劑稀釋至刻度，搖勻。取10μl進樣測定，結(jié)果：與未破壞的樣品比較，色譜圖中出現(xiàn)氮氧化物雜質(zhì)a，破壞24h降解9.6%，達到物料平衡，見圖4。且主峰與雜質(zhì)峰達到分離，不干擾檢測，表明此檢測方法穩(wěn)定。4．樣品檢測取上述溶液（8）（鹽酸帕洛諾司瓊注射液1.5ml:0.075mg）100μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。色譜圖如圖5所示。當前第1頁12