本發(fā)明涉及物質檢測
技術領域：
，具體涉及皮革中有機氯類化合物的檢測方法。
背景技術：
：皮革是由動物生皮和表皮鞣制而成的耐用柔軟材料，他們可以是牛皮、豬皮、羊皮、馬、驢和袋鼠皮等。為獲得高質量的皮革，人們可能會在不同階段使用殺菌殺蟲化合物(即有機氯類化合物)，如在動物生長過程中為驅逐寄生蟲而使用殺蟲化合物，在儲存運輸過程中為防止生皮衰變而使用殺菌防腐劑。持久性有機污染物(pops)等化合物可從動物的食物鏈遷移濃縮到皮革中。所以皮革中的化合物可能來源于家畜繁育過程、動物的食物鏈遷移、存儲、運輸或處理過程。有機氯類化合物的殘留不易降解，容易聚集，進入人體后對皮膚、臟器、組織、神經系統(tǒng)等有很大的傷害作用。部分為有機氯類持久性有機污染物(pops)，如滴滴涕(5種同系物)、林丹、艾氏劑、狄氏劑、滅蟻靈等，在自然環(huán)境中滯留時間長，極難降解，毒性極強，能導致全球性的傳播。被生物體攝入后不易分解，并沿著食物鏈濃縮放大，對人類和動物危害巨大。很多持久性有機污染物不僅具有致癌、致畸、致突變性，而且還具有內分泌干擾作用。cn201410820726.x提供了一種柱前衍生-氣相色譜-質譜聯(lián)用法同時測定產品中殘留甲苯2,4-二異氰酸酯(2,4-tdi)、甲苯2,6-二異氰酸酯(2,6-tdi)和二苯甲烷二異氰酸酯(mdi)的檢測方法。其具體步驟包括：樣品超聲提取，提取液旋轉蒸發(fā)濃縮，酸性水溶液反應，堿液中和，有機溶劑萃取，取有機相衍生化，緩沖溶液除去過量衍生化試劑，分液后取有機相為待測液，用氣相色譜-質譜儀進行測定和確證，空白實驗，然后用外標法定量，樣液目標化合物測定等步驟。該方法檢測物種少，且沒有對有機氯類化合物的檢測提供相關的方法。皮革中有機氯類化合物殘留檢測目前國內外都沒有相關的檢測報道，也沒有相對應的檢測方法和檢測標準。技術實現(xiàn)要素：針對現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明提供皮革中有機氯類化合物的檢測方法，該方法簡便，步驟少，測試結果準確，能快速的檢測出有機氯類化合物的含量，方法穩(wěn)定可靠，適用于皮革中19種有機氯類化合物的同時檢測。為解決上述技術問題，本發(fā)明提供如下技術方案：皮革中有機氯類化合物的檢測方法，具體檢測步驟為：1)樣品液的制備：稱取樣品，置于離心管中，加入提取劑，振蕩后，超聲提取，離心分離，取上層清液；殘渣再次進行提取、離心，取上層清液，將上層清液合并后濃縮；殘余物用第一溶劑溶解后作為提取液；用第二溶劑預淋洗固相萃取柱后，將提取液注入，再用第二溶劑進行洗脫，收集全部洗脫液并濃縮，加入第三溶劑溶解并過有機濾膜，待用；2)檢測：運用氣相色譜-質譜聯(lián)用技術對步驟1)制備的樣品液中所提取的有機氯類化合物進行檢測，氣相色譜-質譜工作條件如下：進樣口溫度：250～290℃；載氣：氮氣，純度≥99.9％，流速：1～1.5ml/min；進樣量:1～2μl；進樣方式：無分流進樣，1～2min后打開閥；色譜柱升溫程序：初始溫度50℃保持1～3min，以5～30℃/min程序升溫至120～190℃保持1～5min，再以4℃/min升溫至170～250℃，然后20℃/min程序升溫至250～280℃保持3～7min；280～300℃后運行1～5min；質譜條件：接口溫度：260～300℃；電離方式：ei；離子源溫度：220～250℃；掃描方式：sim；溶劑延遲：6～9min。進一步地，所述有機氯類化合物包括六六六同系物、滴滴涕同系物、滴滴伊、林丹、甲氧滴滴涕、艾氏劑、狄氏劑、滅蟻靈、環(huán)氧七氯、五氯苯甲醚、百菌清、α-硫丹、β-硫丹。進一步地，所述六六六同系物包括α‐六六六、β‐六六六、δ‐六六六等。進一步地，所述滴滴涕同系物包括p，p′‐滴滴涕、p，p′‐滴滴滴、o，p′‐滴滴涕、o，p′‐滴滴滴等。進一步地，所述固相萃取柱為c18柱、tpt柱、carb柱、carb-psa柱、carb-nh2柱、弗羅里硅土柱中的一種。進一步地，所述提取劑和第三溶劑各自獨立地為正己烷、乙酸乙酯、體積比為5:1～1:5的正己烷和乙酸乙酯混合物；所述第一溶劑和第二溶劑各自獨立地為乙腈、甲苯、體積比為5:1～1:5的乙腈和甲苯混合物。進一步地，所述提取劑、第一溶劑、第二溶劑和第三溶劑的體積為5～50ml。進一步地，所述提取劑、第一溶劑、第二溶劑和第三溶劑的體積為5、10、15、20、30、50ml。更進一步地，所述正己烷和乙酸乙酯混合物的體積比為5:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:5；所述乙腈和甲苯混合物的體積比為5:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:5。更進一步地，所述提取劑為體積比為1:1的正己烷和乙酸乙酯混合物；所述第三溶劑為正己烷；所述第一溶劑和第二溶劑各自獨立地為體積比為3:1的乙腈和甲苯混合物。進一步地，所述上層清液合并后濃縮在30～40℃進行。進一步地，所述全部洗脫液的濃縮在30～40℃進行。進一步地，所述超聲波提取的時間為2～50分鐘。進一步地，所述振蕩的時間為2～50分鐘。進一步地，所述離心分離的時間為1～5分鐘。進一步地，所述超聲波提取的時間為20分鐘。進一步地，所述振蕩的時間為10分鐘。進一步地，所述離心分離的時間為5分鐘。進一步地，所述步驟2)中檢測使用的氣相色譜-質譜聯(lián)用技術中的色譜柱為(i)hp-5ms，30m×0.25mm,0.25μm、(ii)db-1ms，30m×0.25mm,0.25μm、(iii)db-35ms，30m×0.25mm,0.25μm、(iv)db-1701，30m×0.25mm,0.25μm中的一種。進一步地，所述步驟2)中檢測使用的氣相色譜-質譜聯(lián)用技術中的工作條件如下：進樣口溫度：270℃；載氣：氮氣，純度≥99.999％，流速：1.2ml/min；進樣量:1μl；進樣方式：無分流進樣，1.5min后打開閥；色譜柱升溫程序：初始溫度50℃保持2min，以30℃/min程序升溫至185℃保持1min，再以4℃/min升溫至240℃，然后20℃/min程序升溫至270℃保持5min；280℃后運行2min；質譜條件：接口溫度：280℃；電離方式：ei；離子源溫度：230℃；掃描方式：sim；溶劑延遲：8min。進一步地，所述氣相色譜-質譜聯(lián)用儀分析檢測，采用全掃描模式定性，選擇離子模式定量，所述質譜條件中，每種有機氯類化合物分別選擇一個定量例子，2～3個定性離子，具體定量和定性離子及其離子豐度比值如下表1：表1化合物名稱、定量和定性離子及其離子豐度比值表進一步地，本發(fā)明所述的皮革是指牛皮、豬皮、羊皮等不同類型的皮革。本發(fā)明通過渦旋振蕩、超聲波提取和有機溶劑相結合的方法，將皮革樣品中的有機氯類化合物提取出來，有機溶劑可以溶解皮革中的有機氯類化合物，渦旋振蕩和超聲波加速溶解和萃取，該方法操作簡單，快速。采用氣相色譜-質譜聯(lián)用進行測試，采用選擇離子掃描檢測定量，全掃描模式定性，可以實現(xiàn)皮革中19個物質同時檢測，目標物之間互不干擾，實現(xiàn)一次處理出全部結果，精度高，檢測限低。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明提供皮革中有機氯類化合物的檢測方法，該方法采用正己烷-乙酸乙酯混合液超聲提取，固相萃取柱凈化，洗脫液濃縮定容后，經db-1701石英毛細管柱分離，進行氣相色譜-質譜聯(lián)用儀分析，全掃描模式定性，選擇離子模式定量，所測19種有機氯類化合物線性范圍為10～1000ng/ml，相關系數(shù)r2≥0.9981，檢出限為0.1mg/kg，回收率為74.1％～116.4％，rsd≤7.3％(n＝6)。方法簡便、快速、準確，穩(wěn)定可靠，適用于皮革中19種有機氯類化合物的同時檢測，各項技術指標均滿足檢測需要。采用渦旋振蕩提取加超聲波提取的方式，提取效率高。采用carb柱對去除皮革中的色素和脂類雜質效果較好。將19中有機氯類化合物在db-1701柱上分離完全，且峰形尖銳，分析時間較短；而db-1ms柱分析時間較長，db-35ms柱的峰形不尖銳，分離效果不好；db-5ms柱對其他農藥的分離效果良好，但對同分異構體p,p’-滴滴滴和o,p’-滴滴涕的分離效果較db-1701差，兩者的保留時間相差0.03分鐘，并且兩種物質的定性定量離子完全相同，容易形成互相干擾，毛細管柱經過長期使用，柱效降低，柱長變短后，二者的分離效果更差，幾乎合并為同一個峰。因此選擇db-1701柱進行分離。本發(fā)明提供的操作方法簡單，可操作性強，精密度高，重現(xiàn)性好，有效保證數(shù)據(jù)的準確性，成本低，適合工業(yè)應用。附圖說明圖1是本發(fā)明19有機氯類化合物標準溶液的氣相色譜-質譜選擇離子色譜圖。圖中，1-五氯苯甲醚2-α-六六六3-γ-六六六4-艾氏劑5-百菌清6-β-六六六7-δ-六六六8-環(huán)氧七氯9-o,p`-滴滴伊10-α-硫丹11-p,p`-滴滴伊12-狄氏劑13-o,p`-滴滴滴14-o,p`-滴滴涕15-p,p`-滴滴滴16-β-硫丹17-p,p`-滴滴涕18-滅蟻靈19-甲氧滴滴涕圖2是本發(fā)明所檢測的牛皮樣品的19種有機氯類化合物的氣相色譜-質譜選擇離子色譜圖；其中牛皮樣品中進行加標600μg/kg。圖3是本發(fā)明所檢測的羊皮樣品的19種有機氯類化合物的氣相色譜-質譜選擇離子色譜圖；其中羊皮樣品中進行加標600μg/kg。圖4是本發(fā)明所檢測的豬皮樣品的19種有機氯類化合物的氣相色譜-質譜選擇離子色譜圖；其中羊豬樣品中進行加標600μg/kg。具體實施方式簡要說明：氣相色譜-質譜儀，帶有電子轟擊源(ei)，安捷倫公司。分析天平，感量0.1mg和0.01g。旋渦振蕩器，超聲波清洗器，旋轉蒸發(fā)儀，固相萃取裝置，微量移液器：1ml～5ml，100μl～1000μl。離心機，雞心瓶：棕色，100ml。具塞聚丙烯離心管：50ml。六六六同系物、滴滴涕同系物、滴滴伊、林丹、甲氧滴滴涕、艾氏劑、狄氏劑、滅蟻靈、環(huán)氧七氯、五氯苯甲醚、百菌清、α-硫丹、β-硫丹等19種有機氯類化合物標準品，100μg/ml，購自農業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所，正已烷，乙酸乙酯，乙腈，甲苯均為色譜純。無水硫酸鈉：650℃灼燒3h，冷卻后貯于干燥器中備用。正己烷-乙酸乙酯(1/1，體積比)，乙腈-甲苯(3/1，體積比)。石墨化碳黑-乙二胺基-n-丙基(carb-psa)固相萃取柱：1.0g，6ml，安捷倫公司。有機相濾膜(0.22μm)。為使本領域技術人員更好地理解本發(fā)明的技術方案，下面結合附圖和具體實施方式對本發(fā)明作進一步描述。實施例11)樣品液的制備：取皮革樣品，將其剪碎至5mm×5mm以下，混勻，稱取2.0g(精確至0.01g)試樣，置于50ml具塞聚丙烯離心管中，加入20ml正己烷-乙酸乙酯(1/1,v/v)溶液，渦旋振蕩10min后，于超聲波發(fā)生器中輔助超聲提取20min，5000r/min離心機離心分離5min，上清液移至雞心瓶中。殘渣再用20ml正己烷-乙酸乙酯(1/1,v/v)溶液超聲提取10min，5000r/min離心機離心分離5min，合并上清液移至雞心瓶中，將合并后的提取液于40℃濃縮，用5ml乙腈-甲苯(3/1,v/v)溶液溶解殘留物后作為提取液。先用5ml乙腈-甲苯(3/1,v/v)溶液預淋洗carb(石墨化碳黑)固相萃取柱，將提取液注入萃取柱中，用(2×3ml)乙腈-甲苯(3/1,v/v)洗滌雞心瓶并入萃取柱中，再用15ml乙腈-甲苯(3/1,v/v)進行洗脫，收集全部洗脫液于另一只雞心瓶中，于40℃濃縮，加入2.0ml正己烷溶解并過0.22μm有機濾膜，待用；2)標準溶液的制備：混合標準工作液制備：取100μg/ml各有機氯類化合物標準品溶液，將其進行混合后用正己烷稀釋成濃度為5μg/ml的混合標準中間工作液；用正己烷將混合標準中間工作液稀釋成濃度為10、20、50、100、200、500、1000ng/ml的混合標準工作液；待用；有機氯類化合物標準溶液的制備：取100μg/ml各有機氯類化合物標準品溶液，用正己烷稀釋成濃度為5μg/ml的標準中間工作液；用正己烷將標準中間工作液稀釋成濃度為10、20、50、100、200、500、1000ng/ml的有機氯類化合物標準溶液；待用；3)氣相色譜-質譜聯(lián)用技術中的工作條件如下：進樣口溫度：270℃；載氣：氮氣，純度≥99.999％，流速：1.2ml/min；進樣量:1μl；進樣方式：無分流進樣，1.5min后打開閥；色譜柱升溫程序：初始溫度50℃保持2min，以20℃/min程序升溫至170℃保持2min，再以1.5℃/min升溫至190℃，然后15℃/min程序升溫至270℃保持5min；300℃后運行2min；質譜條件：接口溫度：280℃；電離方式：ei；離子源溫度：230℃；掃描方式：sim；溶劑延遲：8min。選擇離子模式定量，每種有機氯類化合物分別選擇一個定量例子，2～3個定性離子，具體如表1所示的化合物名稱、定量和定性離子及其離子豐度比值表；4)有機氯類化合物標準溶液的氣相色譜-質譜選擇離子色譜圖制作有機氯類化合物混合標準工作液采用步驟3)所述的條件進行檢測，在測定過程中，數(shù)據(jù)采集方式為全掃描模式，掃描范圍m/z45～500amu，選用選擇離子掃描模式測定，具體如圖1所示，可見，被測的有機氯類化合物在同一進樣系統(tǒng)中可以得到有效的分離，且出峰較快，峰型較好。19種物質的參考保留時間如下表3所示：表3序號化合物保留時間序號化合物保留時間1五氯苯甲醚10.52min11p,p`-滴滴伊17.95min2α-六六六11.26min12狄氏劑18.53min3林丹12.40min13o,p`-滴滴滴19.20min4艾氏劑13.77min14o,p`-滴滴涕19.70min5百菌清14.63min15p,p`-滴滴滴21.08min6β-六六六14.85min16β-硫丹21.28min7δ-六六六15.64min17p,p`-滴滴涕21.67min8環(huán)氧七氯16.35min18滅蟻靈22.84min9o,p`-滴滴伊16.73min19甲氧滴滴涕23.40min10α-硫丹17.14min5)在氣相色譜-質譜中得出各有機氯類化合物的線性方程將步驟2)配制的有機氯類化合物標準溶液采用步驟3)所述的條件進行測定，得到以峰面積為縱坐標，質量濃度為橫坐標進行線性回歸方程。分析可知，19種有機氯類化合物在0.01～1mg/l之間呈現(xiàn)良好的線性關系，相關系數(shù)r2均大于0.99。逐級稀釋混合標準溶液，以3倍信噪比計算檢出限，19種化合物的檢出限如表2所示；以10倍信噪比計算測定下限，19種化合物的測定下限如表2所示。表26)檢測樣品按照步驟3)所述的氣相色譜-質譜條件對步驟1)方法制備的羊皮、牛皮和豬皮樣品液進行測定，對樣品液進行加標檢測分析，得到檢測結果如表5～7所示。表5羊皮樣品中加標19種有機氯類化合物進行檢測結果表6豬皮樣品中加標19種有機氯類化合物進行檢測結果7)回收率和精密度實驗取空白皮革樣品基質，添加三個濃度水平100、300、600μg/kg的添加回收試驗，每個濃度水平進行六次重復實驗，測得19種有機氯類化合物的回收率和精密度匯總于表4。方法的平均回收率為：75.49％～131％，室內相對標準偏差(rsd)：1.14％～14.37％，本方法的平均回收率符合《基本規(guī)定》的要求。表4牛皮樣品中加標19種有機氯類化合物進行檢測結果本發(fā)明建立了氣相色譜‐質譜法測定皮革中19種有機氯類化合物殘留的方法。該法可以滿足檢測的要求，且方法靈敏度高、選擇性好、定量準確、線性范圍寬、重現(xiàn)性好、適用性強，可作為皮革樣品中19種有機氯類化合物殘留的檢測方法，能夠為皮革的檢驗工作和產品質量控制提供科學依據(jù)和技術支持。如果檢測出樣品液中與標準溶液中在相同的保留時間內有峰出現(xiàn)，確證分析被測物質的色譜保留時間與標準品一致，并扣除背景后的樣品色譜圖中選擇的離子均出現(xiàn)，同時選擇離子的豐度比與標準樣品物質中相關離子的相對豐度一致，相似度在允許的偏差內，被確證的樣品則判定為被檢出?？梢岳斫獾氖?，以上實施方式僅僅是為了說明本發(fā)明的原理而采用的示例性實施方式，然而本發(fā)明并不局限于此。對于本領域內的普通技術人員而言，在不脫離本發(fā)明的精神和實質的情況下，可以做出各種變型和改進，這些變型和改進也視為被包含在本發(fā)明的保護范圍內。當前第1頁12