本發(fā)明屬于藥物中間體含量的檢測(cè)方法技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種(r)-硫辛酸的光學(xué)異構(gòu)體含量的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

r-(+)-硫辛酸氨基丁三醇鹽具有消炎和保護(hù)細(xì)胞的活性(ep427247)，用于治療糖尿病和抗胰島素性(de4，343，593)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(zns)的葡萄糖的代謝紊亂(de4，343，592)和作為食欲抑制劑(de19，818，563)，因而具有良好的醫(yī)學(xué)用途(參見ep702953)。

(r)-硫辛酸是合成r-(+)-硫辛酸氨基丁三醇鹽的關(guān)鍵中間體，控制(r)-硫辛酸中光學(xué)異構(gòu)體的含量，對(duì)控制最終產(chǎn)品r-(+)-硫辛酸氨基丁三醇鹽的光學(xué)異構(gòu)體有重要意義。

r-(+)-硫辛酸氨基丁三醇鹽是手性純藥物，其分子式c8h14o2s2.c4h11no3.分子量為327.46，其分子中有1個(gè)手性中心，存在2個(gè)光學(xué)異構(gòu)體，即r-(+)-硫辛酸氨基丁三醇鹽和s-(-)-硫辛酸氨基丁三醇鹽，其結(jié)構(gòu)式分別如下所示：

其關(guān)鍵在于，(r)-硫辛酸同樣存在2個(gè)光學(xué)異構(gòu)體，即(r)-硫辛酸和(s)-硫辛酸，其結(jié)構(gòu)式分別如下所示：

由于人體內(nèi)的生物大分子如藥酶、蛋白質(zhì)和受體等具有不對(duì)稱的性質(zhì)，所以對(duì)于手性藥物而言，各光學(xué)異構(gòu)體的體內(nèi)藥理活性和藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)通常具有較大的差異。對(duì)手性藥物中光學(xué)異構(gòu)體含量的分析和控制是手性藥物質(zhì)量研究和質(zhì)量保證中非常重要的項(xiàng)目。

目前，國內(nèi)外有關(guān)(r)-硫辛酸的光學(xué)異構(gòu)體含量的分析檢測(cè)方法未見有報(bào)道，而是通過比旋度表征其光學(xué)純度，但比旋度測(cè)定受溫度、雜質(zhì)等影響較大，準(zhǔn)確度不高。這就給(r)-硫辛酸的光學(xué)異構(gòu)體的分析檢測(cè)帶來障礙，影響對(duì)該藥品的質(zhì)量分析和質(zhì)量控制，進(jìn)而影響該藥品的安全有效性。

因此，提供一種準(zhǔn)確可靠、靈敏度高的(r)-硫辛酸的光學(xué)異構(gòu)體含量的檢測(cè)方法具有積極意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種(r)-硫辛酸的光學(xué)異構(gòu)體含量的檢測(cè)方法，該方法有助于對(duì)r-(+)-硫辛酸氨基丁三醇鹽原料藥及其制劑的研究及生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制并且該方法能有效地分離(r)-硫辛酸的2個(gè)光學(xué)異構(gòu)體而藉以準(zhǔn)確地測(cè)定(r)-硫辛酸中各光學(xué)異構(gòu)體的含量以及該方法穩(wěn)定可靠且靈敏度高。

本發(fā)明的任務(wù)是這樣來完成的，一種(r)-硫辛酸的光學(xué)異構(gòu)體含量的檢測(cè)方法，該方法采用直鏈淀粉-三-((s)-α-甲基苯基氨基甲酸酯)涂布的硅膠手性色譜柱，以烷烴類溶劑、醇類溶劑和有機(jī)酸類調(diào)節(jié)劑相混合的混合溶劑為流動(dòng)相，并且在控制流速和控制硅膠手性色譜柱的柱溫下將光學(xué)異構(gòu)體進(jìn)行分離并由紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，控制紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)，得到r-硫辛酸的光學(xué)異構(gòu)體含量。

在本發(fā)明的一個(gè)具體的實(shí)施例中，所述的硅膠手性色譜柱的型號(hào)為色譜柱，所述的硅膠手性色譜柱的長(zhǎng)度為250mm或150mm，直徑為4.6mm，硅膠的粒徑為5um。

在本發(fā)明的另一個(gè)具體的實(shí)施例中，所述的烷烴類溶劑、醇類溶劑和有機(jī)酸類調(diào)節(jié)劑的體積比98～85∶2～15∶0.1～0.5。

在本發(fā)明的又一個(gè)具體的實(shí)施例中，所述的烷烴類溶劑為正庚烷、正己烷或正辛烷；所述醇類溶劑為甲醇、異丙醇或乙醇；所述有機(jī)酸類調(diào)節(jié)劑為甲酸、乙酸或三氟乙酸。

在本發(fā)明的再一個(gè)具體的實(shí)施例中，所述的控制流速是將流速控制為0.8～1.2ml/min；所述的控制硅膠手性色譜柱的柱溫是將柱溫控制為30～35℃。

在本發(fā)明的還有一個(gè)具體的實(shí)施例中，所述的控制紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)是將紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)控制為220nm。

本發(fā)明提供的技術(shù)方案能夠有效地將(r)-硫辛酸的2個(gè)光學(xué)異構(gòu)體進(jìn)行分離，并準(zhǔn)確地測(cè)定出(r)-硫辛酸各光學(xué)異構(gòu)體的含量，解決了r-(+)-硫辛酸氨基丁三醇鹽原料藥及制劑中光學(xué)異構(gòu)體的含量測(cè)定的問題，為r-(+)-硫辛酸氨基丁三醇鹽原料藥及其制劑的質(zhì)量分析和質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)，保證了該藥品的安全有效性。

附圖說明

圖1為本發(fā)明方法的實(shí)施例1的色譜分析圖譜。

圖2為本發(fā)明方法的實(shí)施例2的色譜分析圖譜。

圖3為本發(fā)明方法的實(shí)施例3的色譜分析圖譜。

圖4為本發(fā)明方法的實(shí)施例4的色譜分析圖譜。

圖5為本發(fā)明方法的實(shí)施例5的色譜分析圖譜。

圖6為本發(fā)明方法的實(shí)施例6的色譜分析圖譜。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1；

儀器與條件：

高效液相色譜儀：島津lc-10，包括輸液泵lc-10atvp、紫外檢測(cè)器spd-10avp，手動(dòng)進(jìn)樣器、ht-230柱溫箱。

色譜柱：chiralpakas-h250mm×4.6mm，5um

檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm

流速：1.2ml/min

柱溫：25℃

進(jìn)樣量：10μl

流動(dòng)相：正己烷∶甲醇∶三氟乙酸＝98∶2∶0.1

實(shí)驗(yàn)步驟：

分別取供試品(r)硫辛酸、對(duì)照品(s)-硫辛酸各10mg，分別用乙醇定溶成1.0mg/ml的溶液；取上述溶液，用乙醇溶解稀釋成含(r)-硫辛酸為1.0mg/ml及含(s)-硫辛酸5ug/ml的系統(tǒng)適用性溶液。按上述條件進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。

圖1中保留時(shí)間18.507分鐘的色譜峰為(s)-硫辛酸，保留時(shí)間15.824分鐘的色譜峰為(r)-硫辛酸，(s)-硫辛酸與(r)-硫辛酸的出峰分離度為2.09，(s)-硫辛酸出峰信噪比大于3。在上述條件下關(guān)鍵(r)-硫辛酸的2個(gè)光學(xué)異構(gòu)體可以完全分離，本方法可有效應(yīng)用于(r)-硫辛酸光學(xué)異構(gòu)體的質(zhì)量控制。本實(shí)施例的檢測(cè)分析結(jié)果如下表所示：

實(shí)施例2：

儀器與條件：

高效液相色譜儀：島津lc-10，包括輸液泵lc-10atvp、紫外檢測(cè)器spd-10avp，手動(dòng)進(jìn)樣器、ht-230柱溫箱。

色譜柱：chiralpakas-h150mm×4.6mm，5um

檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm

流速：0.8ml/min

柱溫：40℃

進(jìn)樣量：10μl

流動(dòng)相：正庚烷∶異丙醇∶乙酸＝85∶15∶0.5

實(shí)驗(yàn)步驟：

分別取供試品(r)-硫辛酸、對(duì)照品(s)-硫辛酸各10mg，分別用乙醇定溶成1.0mg/ml的溶液；取上述溶液，用乙醇溶解稀釋成含(r)-硫辛酸為1.0mg/ml及含(s)-硫辛酸5ug/m1的系統(tǒng)適用性溶液。按上述條件進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見圖2。

圖2中保留時(shí)間34.938分鐘的色譜峰為(s)-硫辛酸，保留時(shí)間28.016分鐘的色譜峰為(r)-硫辛酸，(s)-硫辛酸與(r)-硫辛酸的出峰分離度為4.194，(s)-硫辛酸出峰信噪比大于3。在上述條件下關(guān)鍵(r)-硫辛酸的2個(gè)光學(xué)異構(gòu)體可以完全分離，本方法可有效應(yīng)用于(r)-硫辛酸光學(xué)異構(gòu)體的質(zhì)量控制。本實(shí)施例的檢測(cè)分析結(jié)果如下表所示：

實(shí)施例3：

儀器與條件：

高效液相色譜儀：島津lc-10，包括輸液泵lc-10atvp、紫外檢測(cè)器spd-10avp，手動(dòng)進(jìn)樣器、ht-230柱溫箱。

色譜柱：chiralpakas-h150mm×4.6mm，5um

檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm

流速：0.8ml/min

柱溫：35℃

進(jìn)樣量：10μl

流動(dòng)相：正庚烷∶異丙醇∶乙酸＝85∶15∶0.5

實(shí)驗(yàn)步驟：

分別取供試品(r)-硫辛酸、對(duì)照品(s)-硫辛酸各10mg，分別用乙醇定溶成1.0mg/ml的溶液；取上述溶液，用乙醇溶解稀釋成含(r)-硫辛酸為1.0mg/ml及含(s)-硫辛酸5ug/ml的系統(tǒng)適用性溶液。按上述條件進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見圖3。

圖3中保留時(shí)間37.023分鐘的色譜峰為(s)-硫辛酸，保留時(shí)間29.562分鐘的色譜峰為(r)-硫辛酸，(s)-硫辛酸與(r)-硫辛酸的出峰分離度為4.01，(s)-硫辛酸出峰信噪比大于3。在上述條件下關(guān)鍵(r)-硫辛酸的2個(gè)光學(xué)異構(gòu)體可以完全分離，本方法可有效應(yīng)用于(r)-硫辛酸光學(xué)異構(gòu)體的質(zhì)量控制。本實(shí)施例的檢測(cè)分析結(jié)果如下表所示：

實(shí)施例4：

儀器與條件：

高效液相色譜儀：島津lc-10，包括輸液泵lc-10atvp、紫外檢測(cè)器spd-10avp，

動(dòng)進(jìn)樣器、ht-230柱溫箱。

色譜柱：chiralomixsc250mm×4.6mm，5um

檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm

流速：1ml/min

柱溫：30℃

進(jìn)樣量：10μl

流動(dòng)相：正辛烷∶乙醇∶三氟乙酸＝95∶10∶0.2

實(shí)驗(yàn)步驟：

分別取供試品(r)-硫辛酸、對(duì)照品(s)-硫辛酸各10mg，分別用乙醇定溶成1.0mg/ml的溶液；取上述溶液，用乙醇溶解稀釋成含(r)-硫辛酸為1.0mg/ml及含(s)-硫辛酸5ug/ml的系統(tǒng)適用性溶液。按上述條件進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見圖4。

圖4中保留時(shí)間17.341分鐘的色譜峰為(s)-硫辛酸，保留時(shí)間15.017分鐘的色譜峰為(r)-硫辛酸，(s)-硫辛酸與(r)-硫辛酸的出峰分離度為2.53，(s)-硫辛酸出峰信噪比大于3。在上述條件下關(guān)鍵(r)-硫辛酸的2個(gè)光學(xué)異構(gòu)體可以完全分離，本方法可有效應(yīng)用于(r)-硫辛酸光學(xué)異構(gòu)體的質(zhì)量控制。本實(shí)施例的檢測(cè)分析結(jié)果如下表所示：

實(shí)施例5：

儀器與條件：

高效液相色譜儀：島津lc-10，包括輸液泵lc-10atvp、紫外檢測(cè)器spd-10avp，手動(dòng)進(jìn)樣器、ht-230柱溫箱。

色譜柱：chiralpakas-h250mm×4.6mm，5um

檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm

流速：0.8ml/min

柱溫：33℃

進(jìn)樣量：10μl

流動(dòng)相：正己烷∶甲醇∶三氟乙酸＝90∶7∶0.4

實(shí)驗(yàn)步驟：

分別取供試品(r)-硫辛酸、對(duì)照品(s)-硫辛酸各10mg，分別用乙醇定溶成1.0mg/ml的溶液；取上述溶液，用乙醇溶解稀釋成含(r)-硫辛酸為1.0mg/ml及含(s)-硫辛酸5ug/ml的系統(tǒng)適用性溶液。按上述條件進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見圖5。

圖5中保留時(shí)間13.637分鐘的色譜峰為(s)-硫辛酸，保留時(shí)間12.216分鐘的色譜峰為(r)-硫辛酸，(s)-硫辛酸與(r)-硫辛酸的出峰分離度為2.134，(s)-硫辛酸出峰信噪比大于3。在上述條件下關(guān)鍵(r)-硫辛酸的2個(gè)光學(xué)異構(gòu)體可以完全分離，本方法可有效應(yīng)用于(r)-硫辛酸光學(xué)異構(gòu)體的質(zhì)量控制。本實(shí)施例的檢測(cè)分析結(jié)果如下表所示：

實(shí)施例6：

儀器與條件：

高效液相色譜儀：島津lc-10，包括輸液泵lc-10atvp、紫外檢測(cè)器spd-10avp，手動(dòng)進(jìn)樣器、ht-230柱溫箱。

色譜柱：chiralpakas-h150mm×4.6mm，5um

檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm

流速：1.1ml/min

柱溫：35℃

進(jìn)樣量：10μl

流動(dòng)相：正庚烷∶甲醇∶三氟乙酸＝92∶15∶0.5

實(shí)驗(yàn)步驟：

分別取供試品(r)-硫辛酸、對(duì)照品(s)-硫辛酸各10mg，分別用乙醇定溶成1.0mg/ml的溶液；取上述溶液，用乙醇溶解稀釋成含(r)-硫辛酸為1.0mg/ml及含(s)-硫辛酸5ug/ml的系統(tǒng)適用性溶液。按上述條件進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結(jié)果見圖6。

圖6中保留時(shí)間27.400分鐘的色譜峰為(s)-硫辛酸，保留時(shí)間22.853分鐘的色譜峰為(r)-硫辛酸，(s)-硫辛酸與(r)-硫辛酸的出峰分離度為3.969，(s)-硫辛酸出峰信噪比大于3。在上述條件下關(guān)鍵(r)-硫辛酸的2個(gè)光學(xué)異構(gòu)體可以完全分離，本方法可有效應(yīng)用于(r)-硫辛酸光學(xué)異構(gòu)體的質(zhì)量控制。本實(shí)施例的檢測(cè)分析結(jié)果如下表所示：