本發(fā)明涉及牛奶檢測技術(shù)領(lǐng)域，是一種基于背景熒光猝滅-免疫層析測定牛奶中林可霉素的方法。

背景技術(shù)：

林可霉素(linconycin，lin)屬于林可胺類抗生素，對于革蘭氏陽性菌有較強(qiáng)抗菌作用，對支原體也有抑菌作用，但對革蘭氏陰性菌無效。臨床上主要應(yīng)用于葡萄球菌、化膿性鏈球菌、肺炎球菌及厭氧菌所致的呼吸道感染、皮膚軟組織感染、女性生殖道及盆腔感染和厭氧菌所致的腹腔感染等。還可用于鏈球菌和葡萄球菌所致的敗血癥、骨和關(guān)節(jié)感染、慢性骨和關(guān)節(jié)感染的外科輔助治療、葡萄球菌所致的急性血源性骨髓炎等。作為獸藥，常被添加在飼料中或直接乳房注射治療奶牛的乳房炎，但殘留在乳腺管中的林可霉素，會(huì)經(jīng)乳汁排出，導(dǎo)致生鮮乳中抗生素殘留，對消費(fèi)者引起機(jī)體的過敏反應(yīng)或抗藥性。各國都對其有限量要求，中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第253號-2002牛奶中最高殘留限量為100ng/ml。

在進(jìn)出口動(dòng)物源性食品snt2218-2008中林可胺類藥物殘留量檢測方法中林可霉素的檢測方法為液相色譜-串質(zhì)譜法和質(zhì)譜法。在中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)gb/t4789.27-2008規(guī)定鮮乳中林可霉素殘留的檢驗(yàn)方法為嗜熱鏈球菌抑制法和嗜熱脂肪芽孢桿菌抑制法。文獻(xiàn)報(bào)道有酶聯(lián)免疫吸附法(elisa)、高效液相色譜法、膠體金免疫層析法等。嗜熱鏈球菌抑制法和嗜熱脂肪芽孢桿菌抑制法試驗(yàn)價(jià)格低廉，但樣品前處理過程繁瑣，重現(xiàn)性差；高效液相色譜法、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法等，這類方法靈敏度高，特異性好，但是此類儀器沒有便攜性，價(jià)格昂貴，樣品前處理復(fù)雜；elisa方法靈敏度較高、快速、經(jīng)濟(jì)，但在檢測實(shí)驗(yàn)過程需多次洗板，重復(fù)性較差，試劑需低溫保存等，適用于實(shí)驗(yàn)室大量樣本初篩，不適合現(xiàn)場快速檢測；膠體金免疫層析因快速、簡便且經(jīng)濟(jì)實(shí)用，在食品檢測的大量樣本篩查中表現(xiàn)出較強(qiáng)的優(yōu)勢，但只能用于定性檢測，而不能進(jìn)行定量，篩選后的陽性樣本需送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行進(jìn)一步定量分析。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種基于背景熒光猝滅-免疫層析測定牛奶中林可霉素的方法，克服了上述現(xiàn)有技術(shù)之不足，其能有效解決現(xiàn)有鮮乳中林可霉素殘留的檢驗(yàn)方法存在樣品前處理過程繁瑣、重現(xiàn)性差、不適合現(xiàn)場快速檢測和不能進(jìn)行定量分析的問題。

本發(fā)明的技術(shù)方案是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的：一種基于背景熒光猝滅-免疫層析測定牛奶中林可霉素的方法，按下述步驟進(jìn)行：第一步，將林可霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程和名稱輸入二維碼制碼器，制成林可霉素二維碼，然后把林可霉素二維碼粘貼在林可霉素試紙條上的二維碼粘貼處，得到林可霉素檢測卡；第二步，取待檢測樣品200μl至固定有金標(biāo)抗體的小試杯中，充分混勻后吸取100μl滴加至林可霉素檢測卡上的加樣孔內(nèi)，室溫下層析10min；第三步，層析后將林可霉素檢測卡插入熒光免疫分析儀的插卡口，點(diǎn)擊測樣，熒光免疫分析儀的顯示屏上就會(huì)顯示出待檢測樣品名稱和待檢測樣品中林可霉素的濃度。

下面是對上述發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步優(yōu)化或/和改進(jìn)：

上述林可霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程按下述方法得到：第一步，林可霉素儲(chǔ)備液的配置，取林可霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用pbs配成1μg/ml的林可霉素溶液，得到林可霉素儲(chǔ)備液；第二步，林可霉素系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置，將林可霉素儲(chǔ)備液用標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣依次配成10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml、40ng/ml和60ng/ml的林可霉素系列溶液，得到林可霉素系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液；第三步，取標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣200μl、林可霉素系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液各200μl至固定有金標(biāo)抗體的小試杯中，充分混勻后吸取100μl滴加至林可霉素試紙條上的加樣孔內(nèi)，室溫下層析10min；第四步，層析后將林可霉素試紙條插入熒光免疫分析儀的插卡口，點(diǎn)擊測樣，熒光免疫分析儀掃描林可霉素試紙條上的t線和c線，獲得樣品f1/f0的比值；第五步，以溶液中林可霉素的濃度為橫坐標(biāo)，相對應(yīng)的f1/f0為縱坐標(biāo)，得到林可霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程y＝-5×10^-6x³+0.0004x²+0.0016x+0.4892。

上述標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣為經(jīng)檢測不含有林可霉素的牛奶樣。

上述待檢測樣品為待檢測牛奶。

本發(fā)明測定牛奶中林可霉素的檢測限為0.088μg/kg，最優(yōu)加樣量為100μl，最優(yōu)層析時(shí)間為10min；本發(fā)明較現(xiàn)有方法靈敏度高、反應(yīng)時(shí)間短、操作簡便，可實(shí)現(xiàn)牛奶中林可霉素現(xiàn)場快速定量檢測，為廣泛應(yīng)用于食品安全領(lǐng)域奠定了基礎(chǔ)。

附圖說明

附圖1為現(xiàn)有林可霉素試紙條的背景熒光猝滅-免疫層析檢測示意圖。

附圖2為本發(fā)明林可霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線。

附圖3為本發(fā)明林可霉素檢測卡和熒光免疫分析儀的立體結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明不受下述實(shí)施例的限制，可根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案與實(shí)際情況來確定具體的實(shí)施方式。

實(shí)施例1，該基于背景熒光猝滅-免疫層析測定牛奶中林可霉素的方法，按下述步驟進(jìn)行：第一步，將林可霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程和名稱輸入二維碼制碼器，制成林可霉素二維碼，然后把林可霉素二維碼粘貼在林可霉素試紙條上的二維碼粘貼處，得到林可霉素檢測卡；第二步，取待檢測樣品200μl至固定有金標(biāo)抗體的小試杯中，充分混勻后吸取100μl滴加至林可霉素檢測卡上的加樣孔內(nèi)，室溫下層析10min；第三步，層析后將林可霉素檢測卡插入熒光免疫分析儀的插卡口，點(diǎn)擊測樣，熒光免疫分析儀的顯示屏上就會(huì)顯示出待檢測樣品名稱和待檢測樣品中林可霉素的濃度。

實(shí)施例2，林可霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程按下述方法得到：第一步，林可霉素儲(chǔ)備液的配置，取林可霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用pbs配成1μg/ml的林可霉素溶液，得到林可霉素儲(chǔ)備液；第二步，林可霉素系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置，將林可霉素儲(chǔ)備液用標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣依次配成10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml、40ng/ml和60ng/ml的林可霉素系列溶液，得到林可霉素系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液；第三步，取標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣200μl、林可霉素系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液各200μl至固定有金標(biāo)抗體的小試杯中，充分混勻后吸取100μl滴加至林可霉素試紙條上的加樣孔內(nèi)，室溫下層析10min；第四步，層析后將林可霉素試紙條插入熒光免疫分析儀的插卡口，點(diǎn)擊測樣，熒光免疫分析儀掃描林可霉素試紙條上的t線和c線，獲得樣品f1/f0的比值；第五步，以溶液中林可霉素的濃度為橫坐標(biāo)，相對應(yīng)的f1/f0為縱坐標(biāo)，得到林可霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程y＝-5×10^-6x³+0.0004x²+0.0016x+0.4892。

實(shí)施例3，作為上述實(shí)施例的優(yōu)化，標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣為經(jīng)檢測不含有林可霉素的牛奶樣。

實(shí)施例4，作為上述實(shí)施例的優(yōu)化，待檢測樣品為待檢測牛奶。

現(xiàn)有林可霉素試紙條的背景熒光猝滅-免疫層析檢測示意圖見圖1所示，圖1中，1.小試杯底部固定有膠體金標(biāo)記的目標(biāo)物抗體(金標(biāo)抗體)和膠體金標(biāo)記的羊抗鼠抗體，2.供試品溶液進(jìn)行層析的樣品墊，3.包被有“目標(biāo)物抗原-牛血清白蛋白(bsa)偶聯(lián)物”的測試線(t線)，4.包被有“羊抗鼠抗原-牛血清白蛋白(bsa)偶聯(lián)物”控制線(c線)，5.帶有背景熒光f0的硝酸纖維素膜；圖1中，底部固定有膠體金標(biāo)記的目標(biāo)物抗體(金標(biāo)抗體)和膠體金標(biāo)記的羊抗鼠抗體的小試杯，固定有熒光試劑的硝酸纖維素膜熒光區(qū)(可產(chǎn)生背景熒光f0)，在熒光區(qū)包被有“目標(biāo)物抗原-牛血清白蛋白偶聯(lián)物”的測試線(t線)，包被有“羊抗鼠抗原-牛血清白蛋白偶聯(lián)物”的控制線(c線)。樣品檢測原理為：將一定量樣品溶液，加入固定有金標(biāo)抗體小試杯中，混勻(樣品溶液中的待測目標(biāo)物-林可霉素抗原與金標(biāo)抗體特異性結(jié)合)，吸取一定量的混勻溶液滴加至樣品墊上，通過毛細(xì)管作用進(jìn)行層析。當(dāng)混合溶液到達(dá)t線處，剩余的金標(biāo)抗體與t線處的目標(biāo)物-林可霉素抗原結(jié)合，形成抗原-金標(biāo)抗體復(fù)合物，被截留在t線上，使背景熒光猝滅，以t線處熒光強(qiáng)度的測量值記為f1，熒光猝滅程度(f1/f0)與供試品中待測目標(biāo)物含量有關(guān)。當(dāng)供試品中目標(biāo)物濃度大時(shí)，結(jié)合小試杯中金標(biāo)抗體的量就多，小試杯中剩余的金標(biāo)抗體與t線處“目標(biāo)物抗原-牛血清白蛋白偶聯(lián)物”結(jié)合的就少，猝滅程度就弱，f1/f0的值就大。f1/f0隨待測物濃度增大而增大，零值樣本f1/f0值最小。為對試紙條進(jìn)行質(zhì)控，在具有背景熒光的硝酸纖維素膜上還固定了“羊抗鼠抗原-牛血清白蛋白偶聯(lián)物”(c線)，用于對試紙條進(jìn)行質(zhì)控，當(dāng)上述混合溶液繼續(xù)前行到達(dá)c線處，金標(biāo)羊抗鼠抗體與c線處的“羊抗鼠抗原-牛血清白蛋白偶聯(lián)物”結(jié)合，使c線處的背景熒光發(fā)生猝滅。說明試紙條質(zhì)量合格。

本發(fā)明試驗(yàn)如下：

1.實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與材料

熒光免疫分析儀(zc2015-0797，上海鑫譜生物科技有限公司)；

林可霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(lin，10ppm，上海鑫譜生物科技有限公司，批號：20160911)；林可霉素試紙條、固定有林可霉素金標(biāo)抗體的小試杯(上海鑫譜生物科技有限公司，批號：20160926)；

標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣(經(jīng)檢測沒有林可霉素，上海榮輝生物科技有限公司)；

供試品，為了驗(yàn)證背景熒光猝滅-免疫層析法和國標(biāo)規(guī)定方法的差異，本實(shí)驗(yàn)在標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣中人為添加一定量的林可霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，制成含林可霉素300ng/ml、220ng/ml和50ng/ml的供試品004、005、006。

1.2溶液的配制

林可霉素儲(chǔ)備液的制備：將林可霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(10ppm)，用pbs配成1μg/ml的溶液，得到林可霉素儲(chǔ)備液。

林可霉素系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液：將1μg/ml的林可霉素儲(chǔ)備液，用標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣配成10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml、40ng/ml和60ng/ml的林可霉素系列溶液，得到林可霉素系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.方法與結(jié)果

2.1反應(yīng)時(shí)間與加樣量的確定

2.1.1反應(yīng)時(shí)間的選擇

取200μl標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣，加到固定有金標(biāo)抗體的小試杯中，混勻后吸120μl加入林可霉素試紙條上的加樣孔中，分別層析8min和10min，用熒光免疫分析儀檢測，記錄f1/f0的值見表1所示。

從表1可以看出，層析時(shí)間為8min時(shí)，rsd值為6.12％，層析時(shí)間為10min時(shí)，rsd值為4.30％；說明層析時(shí)間為10min時(shí)的rsd值小，所以選擇層析10min。

2.1.2加樣量的選擇

取三份標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣，每份200μl，分別加到固定有金標(biāo)抗體的小試杯中，混勻后依次從三個(gè)固定有金標(biāo)抗體的小試杯中吸80μl、100μl、120μl分別加入三個(gè)林可霉素試紙條上的加樣孔中，層析10min，層析后將林可霉素試紙條插入熒光免疫分析儀的插卡口，點(diǎn)擊測樣，記錄f1/f0的值，見表2所示。

從表2可以看出，當(dāng)加樣量為80μl、100μl和120μl時(shí)，rsd值依次為6.35％、1.41％、3.68％；說明當(dāng)加樣量為100μl時(shí)，rsd值最小，所以選擇100μl加樣量。

2.2方法學(xué)驗(yàn)證

2.2.1曲線方程與范圍

分別取標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣200μl、1.2項(xiàng)下的10ng/ml的林可霉素系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液200μl、20ng/ml的林可霉素系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液200μl、30ng/ml的林可霉素系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液200μl、40ng/ml的林可霉素系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液200μl、60ng/ml的林可霉素系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液200μl，分別加到固定有金標(biāo)抗體的小試杯中，混勻后各吸100μl分別加入林可霉素試紙條上的加樣孔中，層析10min，用熒光免疫分析儀檢測，記錄f1/f0，見表3所示；以溶液中林可霉素的濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的f1/f0為縱坐標(biāo)，進(jìn)行回歸，得到林可霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y＝-5×10^-6x³+0.0004x²+0.0016x+0.4892，林可霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2所示；從表3和圖2可以看出，林可霉素在0.102ng/ml至60ng/ml之間呈良好的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)為r＝0.9923。取標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣200μl，加到固定有金標(biāo)抗體的小試杯中，混勻后吸100μl加入林可霉素試紙條上的加樣孔中，層析10min，用熒光免疫分析儀檢測，記錄f1/f0，重復(fù)操作20次，計(jì)算20次的均值和標(biāo)準(zhǔn)差(sd)，以均值+2sd計(jì)算檢出限為0.088ng/ml。

2.2.2精密度實(shí)驗(yàn)

取10ng/ml、30ng/ml、40ng/ml三個(gè)濃度的林可霉素系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，各取200μl，加到固定有金標(biāo)抗體的小試杯中，混勻后各吸100μl分別加入林可霉素試紙條上的加樣孔中，層析10min，用熒光免疫分析儀檢測，記錄f1/f0，見表4所示；從表4可以看出，10ng/ml、30ng/ml、40ng/ml三個(gè)濃度的林可霉素系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的f1/f0值的rsd依次為1.2％，0.6％，1.1％，精密度的rsd小于5％，符合要求。

2.2.3加標(biāo)回收率

取3份標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣分別置ep管中，每份1ml，依次在3份標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣中加入林可霉素儲(chǔ)備液20μl、30μl和40μl，依次配成低、中和高三個(gè)濃度，每個(gè)濃度平行3份，各取200μl，加到固定有金標(biāo)抗體的小試杯中，混勻后各吸100μl分別加入林可霉素試紙條上的加樣孔中，層析10min，用熒光免疫分析儀檢測，記錄各樣本中林可霉素的檢測濃度，見表5所示；從表5可以看出，標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣中高、中、低林可霉素測定的平均加標(biāo)回收率分別為103.4％，99.7％，98.5％，rsd為2.46％，rsd小于5％，符合要求。

2.2.4重復(fù)性試驗(yàn)

取標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣995μl于ep管中，再加入林可霉素儲(chǔ)備液5μl，混勻，配成5ng/ml的樣品。取200μl加到固定有金標(biāo)抗體的小試杯中，混勻，再吸100μl加入林可霉素試紙條上的加樣孔中，層析10min，用熒光免疫分析儀檢測，記錄供試品中林可霉素檢測值的f1/f0，見表6所示；從表6可以看出，林可霉素重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中，f1/f0測定值的rsd為0.82％，濃度測定值的rsd為1.25％，rsd小于5％，符合要求。

2.2.5長期重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批次林可霉素試紙條、標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣200μl和1.2項(xiàng)下的林可霉素系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液各200μl，分別加到固定有金標(biāo)抗體的小試杯中，混勻后各吸100μl分別加入林可霉素試紙條上的加樣孔中，層析10min，用熒光免疫分析儀檢測，每個(gè)月重復(fù)一次林可霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線，連續(xù)做5個(gè)月，林可霉素長期重復(fù)性實(shí)驗(yàn)考查測定結(jié)果見表7所示；從表7可以看出，5個(gè)月內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)牛奶樣、林可霉素系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml、40ng/ml和60ng/ml，對應(yīng)的rsd為依次為0.42％、0.35％、0.39％、0.27％、0.24％和0.31％；rsd小于5％，符合要求。

2.3二維碼的制作

以上經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，林可霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程符合要求，將獲得的林可霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程和對應(yīng)林可霉素名稱輸入二維碼制碼器，制成林可霉素二維碼，貼在林可霉素試紙條上，得到林可霉素檢測卡。

2.4樣品測定

分別取供試品004、005和006各200μl至固定有金標(biāo)抗體的小試杯中，充分混勻后吸取100μl滴加至林可霉素檢測卡上的加樣孔內(nèi)，室溫下層析10min；層析后將林可霉素檢測卡插入熒光免疫分析儀的插卡口，點(diǎn)擊測樣，熒光免疫分析儀先掃描林可霉素二維碼，獲得二維碼中儲(chǔ)存的林可霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，再依次掃描林可霉素檢測卡上的t線和c線，獲得樣品f1/f0的比值，熒光免疫分析儀中的simple1軟件將f1/f0的比值代入林可霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程進(jìn)行計(jì)算，計(jì)算后顯示屏將顯示待檢測樣品名稱和待檢測樣品的濃度。再分別取供試品004、005和006按國標(biāo)(gb29685-2013)進(jìn)行測定；采用spss17.0軟件，對本發(fā)明和國標(biāo)法測定后測定值作t檢驗(yàn)分析；供試品中林可霉素測定結(jié)果(n＝3)見表8所示，從表8可以看出，t檢驗(yàn)結(jié)果p>0.05，說明采用本發(fā)明bfqica法和國標(biāo)法沒有顯著性差異。

本發(fā)明應(yīng)用的背景熒光猝滅-免疫層析法(backgroundfluorescencequenchingimmunochromatographicassay,bfqica)主要包括林可霉素檢測卡和熒光免疫分析儀，本發(fā)明林可霉素檢測卡和熒光免疫分析儀的立體結(jié)構(gòu)示意圖見圖3所示；熒光免疫分析儀安裝有simple1軟件系統(tǒng)。

本發(fā)明基于背景熒光猝滅-免疫層析技術(shù)，建立檢測牛奶中林可霉素的方法學(xué)，本發(fā)明將林可霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程和名稱輸入二維碼制碼器，制成林可霉素二維碼，然后把林可霉素二維碼粘貼在林可霉素試紙條上的二維碼粘貼處，得到林可霉素檢測卡；林可霉素檢測卡與熒光免疫分析儀配合使用，用于實(shí)際樣品的快速測定，與國標(biāo)法比較沒有顯著性差異。

3.小結(jié)

本發(fā)明應(yīng)用已研制的林可霉素檢測卡，建立了檢測牛奶中林可霉素的檢測方法。本發(fā)明測定牛奶中林可霉素的濃度范圍為0.102ng/ml至60.0ng/ml，最低檢測限為0.088ng/ml。本發(fā)明牛奶樣品中高、中、低林可霉素測定的平均加標(biāo)回收率分別為103.4％，99.7％，98.5％，rsd為2.46％(n＝9)。

用本發(fā)明測定牛奶中的林可霉素與國標(biāo)方法(gb29685-2013)測定牛奶中林可霉素的方法相比，本發(fā)明是基于抗原、抗體的反應(yīng)，所以專屬性強(qiáng)；本發(fā)明中的硝酸纖維素膜上標(biāo)記有背景熒光，膠體金猝滅劑與抗體結(jié)合，硝酸纖維素膜上的t線處固定有對應(yīng)的抗原，當(dāng)液體在試紙條上流動(dòng)，t線處抗原-抗體-膠體金結(jié)合，引起t線處背景熒光猝滅，猝滅的程度用f1/f0表示，進(jìn)行定量分析，所以檢測靈敏度高。用本發(fā)明測定牛奶中林可霉素的檢測限是0.088μg/kg，國標(biāo)方法(gb29685-2013)中的液質(zhì)聯(lián)用測定牛奶中林可霉素的檢測限是8μg/kg；用本發(fā)明測定牛奶中的林可霉素，不需要樣品前處理，且本發(fā)明將檢測牛奶中林可霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線的信息，儲(chǔ)存在林可霉素二維碼中，檢測人員不用現(xiàn)場做標(biāo)曲，使檢測變的方便、快捷，每份樣本僅需10min。而國標(biāo)方法(gb29685-2013)中的液質(zhì)聯(lián)用測定牛奶中林可霉素不僅需要樣品前處理，還需要檢測人員現(xiàn)場做標(biāo)曲，每份樣本的檢測需要55min；本發(fā)明與gica方法相比較，gica只能進(jìn)行定性分析，適合大量樣本的最初篩選，篩選出的樣本還需要采用定量的方法再檢測。而本發(fā)明不僅可以根據(jù)t線處抗原-抗體-膠體金結(jié)合引起的顏色變化進(jìn)行定性分析，還可進(jìn)行定量分析。

綜上所述，本發(fā)明測定牛奶中林可霉素的檢測限為0.088μg/kg，最優(yōu)加樣量為100μl，最優(yōu)層析時(shí)間為10min；本發(fā)明較現(xiàn)有方法靈敏度高、反應(yīng)時(shí)間短、操作簡便，可實(shí)現(xiàn)牛奶中林可霉素現(xiàn)場快速定量檢測，為廣泛應(yīng)用于食品安全領(lǐng)域奠定了基礎(chǔ)。

以上技術(shù)特征構(gòu)成了本發(fā)明的實(shí)施例，其具有較強(qiáng)的適應(yīng)性和實(shí)施效果，可根據(jù)實(shí)際需要增減非必要的技術(shù)特征，來滿足不同情況的需求。

表1不同反應(yīng)時(shí)間的選擇

表2不同加樣量的選擇

表3牛奶中林可霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)

表4精密度試驗(yàn)(n＝6)

表5牛奶中林可霉素加標(biāo)回收率

表6林可霉素的重復(fù)性試驗(yàn)

表7林可霉素長期重復(fù)性實(shí)驗(yàn)考查測定結(jié)果

表8供試品中林可霉素測定結(jié)果(n＝3)