本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種thbs2蛋白檢測物在制備肝細(xì)胞癌診斷試劑盒中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

肝細(xì)胞癌(hepatocellularcarcinoma,hcc)是常見的惡性腫瘤之一，有較高的發(fā)病率和死亡率，每年約650000人死于hcc，且其發(fā)病率有增高的趨勢。該病多發(fā)于東南亞，其中約有50％以上發(fā)生于中國。目前肝切除術(shù)等外科手術(shù)仍是肝細(xì)胞癌的主要治療方法，但術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率高，5年生存率較差，個(gè)體差異大。早發(fā)現(xiàn)、早治療可提高肝細(xì)胞癌患者的生存率。

目前hcc臨床診斷與病情監(jiān)測等仍主要依賴于b超等影像學(xué)檢查聯(lián)合血清標(biāo)志物甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,afp)水平的檢測。而afp作為目前hcc診斷和病情監(jiān)測一個(gè)最主要的生物標(biāo)志物，其靈敏度仍不理想。所以，尋找靈敏的肝細(xì)胞癌血清生物標(biāo)記物，尤其可應(yīng)用于afp陰性的肝癌患者，對于診斷肝細(xì)胞癌非常重要。

為了尋找肝細(xì)胞癌血清生物標(biāo)記物，本實(shí)驗(yàn)室對afp陰性肝癌患者的配對的腫瘤與癌旁組織間隙液進(jìn)行鑒定，發(fā)現(xiàn)thbs2蛋白在肝癌患者腫瘤組織間隙液中顯著上調(diào)。因?yàn)榻M織間隙液是連接細(xì)胞內(nèi)液和循環(huán)體液的接口，該結(jié)果提示thbs2蛋白非常有可能從肝癌組織中通過組織間隙液分泌到血液中去。我們進(jìn)而檢測了該蛋白在臨床血清樣本中的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)其血清濃度在肝癌患者中顯著增高，提出thbs2蛋白可作為afp陰性肝癌患者的血清診斷標(biāo)志物，且可與afp聯(lián)合診斷肝癌。

thrombospondin-2(thbs2)是一種介導(dǎo)細(xì)胞-細(xì)胞和細(xì)胞-基質(zhì)間相互作用的糖蛋白。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供檢測待測人thbs2蛋白含量的物質(zhì)的用途。

本發(fā)明提供的檢測待測人thbs2蛋白含量的物質(zhì)在制備篩查或輔助診斷肝細(xì)胞癌產(chǎn)品中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供的檢測待測人thbs2蛋白含量的物質(zhì)在制備篩查或輔助診斷甲胎蛋白陰性肝細(xì)胞癌產(chǎn)品中的應(yīng)用。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述肝細(xì)胞癌具體為繼發(fā)于hbv感染的有肝硬化背景的肝細(xì)胞癌。

本發(fā)明第二個(gè)目的是提供檢測待測人thbs2蛋白含量的物質(zhì)和檢測待測人甲胎蛋白含量的物質(zhì)的用途。

本發(fā)明提供了檢測待測人thbs2蛋白含量的物質(zhì)和檢測待測人甲胎蛋白含量的物質(zhì)在制備診斷或輔助診斷所述待測人是否患有肝細(xì)胞癌產(chǎn)品中的應(yīng)用；

或，檢測待測人thbs2蛋白含量的物質(zhì)和檢測待測人中甲胎蛋白含量的物質(zhì)在制備篩查或輔助篩查所述待測人是否患有肝細(xì)胞癌產(chǎn)品中的應(yīng)用。

本發(fā)明第3個(gè)目的是提供檢測待測人thbs2蛋白含量的物質(zhì)和檢測待測人sparc蛋白含量的物質(zhì)的用途。

本發(fā)明提供了檢測待測人thbs2蛋白含量的物質(zhì)和檢測待測人sparc蛋白含量的物質(zhì)在制備診斷或輔助診斷所述待測人是否患有肝細(xì)胞癌產(chǎn)品中的應(yīng)用；

或，檢測待測人thbs2蛋白含量的物質(zhì)和檢測待測人sparc蛋白含量的物質(zhì)在制備篩查或輔助篩查所述待測人是否患有肝細(xì)胞癌產(chǎn)品中的應(yīng)用。

本發(fā)明第4個(gè)目的是提供檢測待測人thbs2蛋白含量的物質(zhì)和檢測待測人sparc蛋白含量的物質(zhì)的用途。

本發(fā)明提供了檢測待測人thbs2蛋白含量的物質(zhì)和檢測待測人sparc蛋白含量的物質(zhì)

在制備診斷或輔助診斷所述待測人是否患有甲胎蛋白陰性肝細(xì)胞癌產(chǎn)品中的應(yīng)用；

或，檢測待測人thbs2蛋白含量的物質(zhì)和檢測待測人sparc蛋白含量的物質(zhì)在制備篩查或輔助篩查所述待測人是否患有甲胎蛋白陰性肝細(xì)胞癌產(chǎn)品中的應(yīng)用。

上述應(yīng)用中，所述檢測待測人thbs2蛋白含量的物質(zhì)為所述檢測待測人血清或血漿中thbs2蛋白含量的物質(zhì)；

或所述檢測待測人甲胎蛋白含量的物質(zhì)為所述檢測待測人血清或血漿中甲胎蛋白含量的物質(zhì)；

或所述檢測待測人sparc蛋白含量的物質(zhì)為所述檢測待測人血清或血漿中sparc蛋白含量的物質(zhì)；

或所述檢測待測人血清或血漿中thbs2蛋白含量的物質(zhì)包括thbs2蛋白elisa檢測試劑盒；

或，所述檢測待測人血清或血漿中甲胎蛋白含量的物質(zhì)包括afp化學(xué)發(fā)光法試劑盒；

或，所述檢測待測人血清或血漿中sparc蛋白含量的物質(zhì)包括sparcelisa檢測試劑盒。

上述物質(zhì)還包括檢測所需儀器。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，檢測血清或血漿中甲胎蛋白濃度所需的試劑為afp化學(xué)發(fā)光法試劑盒，儀器為羅氏全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述用于檢測sparc蛋白濃度的物質(zhì)為sparc蛋白抗體，具體為elisa所用sparc抗體(r&dsystems公司，貨號：dsp00)。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述用于檢測thbs2蛋白濃度的物質(zhì)為thbs2蛋白抗體，具體為elisa所用thbs2抗體(r&dsystems公司，貨號：dy1635)。當(dāng)然，也可以為其它類型的抗體或是其它可用于檢測thbs2蛋白濃度的物質(zhì)。

上述應(yīng)用中，所述檢測血清或血漿中thbs2蛋白濃度所需的試劑包括thbs2蛋白抗體。

本發(fā)明第5個(gè)目的是提供一種產(chǎn)品。

本發(fā)明提供的產(chǎn)品，為如下1)-3)中任意一種：

1)包括檢測待測人中thbs2蛋白含量的物質(zhì)；

2)包括檢測待測人中thbs2蛋白含量的物質(zhì)和檢測待測人甲胎蛋白含量的物質(zhì)；

3)包括檢測待測人中thbs2蛋白含量的物質(zhì)和檢測待測人sparc含量的物質(zhì)。

上述產(chǎn)品中，所述檢測待測人thbs2蛋白含量的物質(zhì)為所述檢測待測人血清或血漿中thbs2蛋白含量的物質(zhì)；

或所述檢測待測人甲胎蛋白含量的物質(zhì)為所述檢測待測人血清或血漿中甲胎蛋白含量的物質(zhì)；

或所述檢測待測人sparc蛋白含量的物質(zhì)為所述檢測待測人血清或血漿中sparc蛋白含量的物質(zhì)；

或所述檢測待測人血清或血漿中thbs2蛋白含量的物質(zhì)包括thbs2蛋白elisa檢測試劑盒；

或，所述檢測待測人血清或血漿中甲胎蛋白含量的物質(zhì)包括afp化學(xué)發(fā)光法試劑盒；

或，所述檢測待測人血清或血漿中sparc蛋白含量的物質(zhì)包括sparcelisa檢測試劑盒。

上述產(chǎn)品具有如下a或b功能：

a、診斷或輔助診斷或篩查或輔助篩查待測人是否患有肝細(xì)胞癌；

b、診斷或輔助診斷或篩查或輔助篩查待測人是否患有甲胎蛋白陰性肝細(xì)胞癌。

人血清或血漿中thbs2蛋白作為肝細(xì)胞癌診斷標(biāo)記物或甲胎蛋白陰性肝細(xì)胞癌診斷標(biāo)記物中的應(yīng)用也是本發(fā)明保護(hù)的范圍。

血清或血漿為離體血清或血漿。

所述thbs2蛋白為人thbs2蛋白。

在本發(fā)明中，所述產(chǎn)品的篩查或診斷對象是正常人。

所述檢測thbs2蛋白濃度具體可為檢測人血清或血漿中的thbs2蛋白濃度。

上述產(chǎn)品中，所述產(chǎn)品為試劑盒。

實(shí)驗(yàn)證明，血清thbs2蛋白可作為肝細(xì)胞癌(hcc)的腫瘤標(biāo)志物。當(dāng)以無癥狀的正常人作為篩查對象時(shí)，受試者工作特征曲線(receiveroperatingcharacteristiccurve,roc)分析結(jié)果表明曲線下面積(areaunderroccurve,auc)達(dá)到0.92，靈敏度為82％、特異度為93％；thbs2蛋白用于診斷afp陰性肝癌患者時(shí)，以正常人為篩查對象，auc＝0.90，靈敏度為87％，特異度為87％；thbs2蛋白可與afp聯(lián)合用于在正常人中篩查或輔助診斷hcc。thbs2蛋白還可與sparc蛋白聯(lián)合用于在正常人中篩查或輔助診斷hcc。

附圖說明

圖1為正常組(n)和肝癌患者組(hcc)血清中thbs2蛋白水平散點(diǎn)圖。

圖2為正常組(n)和肝癌患者組(hcc)血清中thbs2蛋白水平的roc曲線分析結(jié)果。

圖3為正常組(n)和afp陰性肝癌患者組(hcc)血清中thbs2蛋白水平的roc曲線分析結(jié)果。

圖4為thbs2與afp聯(lián)合診斷的roc曲線分析結(jié)果。

圖5為thbs2與sparc在正常組、肝癌患者組和afp陰性肝癌患者診斷的roc曲線分析；a為thbs2與sparc在正常組和肝癌患者組聯(lián)合診斷的roc曲線分析結(jié)果；b為thbs2與sparc在正常組和afp陰性肝癌患者組聯(lián)合診斷的roc曲線分析結(jié)果。

具體實(shí)施方式

下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。

下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。

下述實(shí)施例中所涉及的名詞解釋：

受試者工作特征(receiver(relative)operatingcharacteristic,roc)曲線反映了靈敏度與特異度間的平衡，roc曲線下面積是重要的試驗(yàn)準(zhǔn)確度指標(biāo)。分別計(jì)算各個(gè)試驗(yàn)的roc曲線下的面積(auc)進(jìn)行比較，面積大者，試驗(yàn)的診斷價(jià)值大。

靈敏度(真陽性率)：實(shí)際有病而按試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)被正確判斷為有病的百分率，靈敏度越大越好，理想靈敏度為100％。

特異度(真陰性率)：實(shí)際無病而按試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)被正確判斷為無病的百分率，特異度越大越好，理想特異度100％。

下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明，實(shí)施例僅用于解釋本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。

下述實(shí)施例中的患者及正常對照的血清均來自于全血，使用前-80℃冷凍保存。

實(shí)施例1、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)測定血清中thbs2蛋白豐度

一、實(shí)驗(yàn)材料

血清樣本來自：正常人(n)30例；有hbv慢性感染背景的肝細(xì)胞癌患者(hcc)50例(其中23例為afp陰性，1例afp未知)。肝細(xì)胞癌患者為臨床確診病人的血清樣本，由北京腫瘤醫(yī)院提供，且患者知情。30例正常的正常人來自于常規(guī)正常體檢人群，無hbv感染史，未發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞癌。

二、血清中thbs2蛋白與hcc病人的關(guān)系

對血清樣本中的thbs2蛋白水平進(jìn)行elisa檢測，所用試劑盒為r&dsystems公司thbs2elisa檢測試劑盒(貨號：dy1635)，具體方法如下：

1、用pbs稀釋捕獲抗體(試劑盒配備)至4μg/ml，向96孔酶標(biāo)板中每孔加入100μl捕獲抗體，室溫孵育過夜，得到thbs2捕獲抗體包被的酶標(biāo)板a；

2、用pbst(pbs中包含0.05％20)洗3次，每次1min；

3、酶標(biāo)板a中每孔加入300μl1％bsa，室溫孵育2小時(shí)；

4、用pbst洗3次，每次1min；

5、用1％bsa稀釋待測血清樣本(1：40)，thbs2蛋白標(biāo)準(zhǔn)品(試劑盒自帶)稀釋梯度10000pg/ml、5000pg/ml、2500pg/ml、1250pg/ml、625pg/ml、313pg/ml、156pg/ml、0pg/ml，稀釋后的血清樣本和標(biāo)準(zhǔn)品各100ul加入到封閉后的酶標(biāo)板a，室溫孵育2小時(shí)；

6、用pbst洗3次，每次1min；

7、用1％bsa稀釋thbs2檢測抗體(試劑盒配備)至200ng/ml，向結(jié)合有抗原的酶標(biāo)板a中每孔加100μl檢測抗體，室溫孵育2小時(shí)；

8、用pbst洗3次，每次1min；

9、用1％bsa水溶液1:200稀釋加辣根過氧化物酶(horseradishperoxidase，hrp)標(biāo)記的鏈霉素(streptavidin-hrp，試劑盒配備)，每孔加入100μl，室溫避光孵育20分鐘；

10、用pbst洗3次，每次1min；

11、向鏈霉素反應(yīng)后的酶標(biāo)板a中每孔加入100μltmb底物(試劑盒配備)，室溫避光反應(yīng)20分鐘，反應(yīng)結(jié)束后，向酶標(biāo)板的每孔中加入50μl終止液(試劑盒配備)，得到顯色后的酶標(biāo)板，在450nm波長讀數(shù)。

通過thbs2標(biāo)準(zhǔn)蛋白濃度和其對應(yīng)的od值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(四參數(shù)logistic曲線擬合方程：y＝(3.44684-0.02660)/[1+(x/5453.48934)^-1.¹²⁴⁴⁸]+0.02660)。通過各孔血清樣本所測得的od值，利用elisacalc軟件對thbs2的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行四參數(shù)擬合，計(jì)算各血清樣本中thbs2蛋白的含量。結(jié)果顯示，正常組thbs2蛋白的濃度平均值±標(biāo)準(zhǔn)差為13.85±6.34ng/ml，hcc患者組為45.81±30.40ng/ml。對各組樣本中thbs2蛋白含量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(mann-whitneytest)，發(fā)現(xiàn)血清thbs2蛋白在hcc患者組的豐度顯著高于正常對照組(p<0.0001)(圖1)。

用spss16.0軟件以正常組為對照組，肝細(xì)胞癌患者組為疾病組，對血清thbs2蛋白水平進(jìn)行roc曲線分析，曲線下面積auc＝0.92，靈敏度為82％、特異度為93％(如圖2所示)。說明thbs2可用作正常人與hcc患者進(jìn)行判別診斷的潛在標(biāo)志物。

在上述計(jì)算過程中，會(huì)得到判別診斷的濃度閾值，為roc曲線的最大約登指數(shù)對應(yīng)的閾值，約登指數(shù)(靈敏度+特異度-1)及對應(yīng)閾值詳見表1(最大約登指數(shù)及對應(yīng)閾值粗體標(biāo)注)。針對本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，在進(jìn)行正常人和hcc患者的判別診斷時(shí)，若待測人血清中thbs2蛋白表達(dá)量大于等于閾值濃度21.74ng/ml，則該待測人為或候選為hcc患者。

表1.thbs2判別診斷正常人和hcc患者的閾值及約登指數(shù)

三、血清中thbs2蛋白在檢測甲胎蛋白(afp)陰性的hcc患者中的應(yīng)用

將上述一中的30例正常人和23例afp陰性的肝細(xì)胞癌(hcc)患者血清樣本按照上述二的方法檢測。

結(jié)果正常組thbs2蛋白的血清濃度平均值±標(biāo)準(zhǔn)差為13.85±6.34ng/ml，23例afp陰性的hcc患者組為36.74±20.94ng/ml。

以afp陰性(afp<20ng/ml)的hcc患者組為疾病組，正常組為對照組，對血清中thbs2蛋白水平進(jìn)行roc曲線分析，曲線下面積auc＝0.90(圖3)，靈敏度為87％，特異度為87％。說明thbs2蛋白可用于判別診斷afp陰性的肝癌患者。

進(jìn)行正常人和afp陰性的hcc患者的判別診斷時(shí)，若待測人血清中thbs2蛋白濃度大于等于20.34ng/ml，則該待測人為或候選為hcc患者。判別診斷的濃度閾值為roc曲線的最大約登指數(shù)對應(yīng)的閾值。

四、thbs2蛋白和afp蛋白在檢測hcc患者中的應(yīng)用

afp血清蛋白濃度檢測方法：使用羅氏全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，利用afp化學(xué)發(fā)光法試劑盒檢測，詳細(xì)步驟參照儀器說明書。

正常組血清中afp蛋白濃度均小于20ng/ml，hcc患者組血清中afp蛋白濃度為13626.6±47251.9ng/ml。

thbs2蛋白濃度在正常組和hcc患者組的血清樣本中的elisa檢測結(jié)果：正常組血清中thbs2蛋白的濃度平均值±標(biāo)準(zhǔn)差為13.85±6.34ng/ml，hcc患者組中血清中thbs2蛋白的濃度為45.81±30.40ng/ml。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(mann-whitneytest)，發(fā)現(xiàn)血清thbs2蛋白和afp蛋白濃度在正常組和hcc患者組間均有顯著性差異(p<0.0001)。

共同判斷thbs2蛋白和afp蛋白的標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)二元logistic回歸計(jì)算結(jié)果，區(qū)分hcc與正常組具體計(jì)算公式為：p＝1/(1+e^{-(-3.882+0.18*thbs2+0.005*afp)})，當(dāng)p大于等于0.533時(shí)，判斷為hcc患者。

用spss16.0軟件對正常人(n)和肝細(xì)胞癌患者(hcc)進(jìn)行afp與thbs2聯(lián)合使用診斷hcc的roc曲線分析。以正常組為對照組，hcc患者組為疾病組，血清thbs2蛋白與afp蛋白聯(lián)合使用判別診斷hcc患者的曲線下面積auc＝0.94(圖4)，靈敏度為88％、特異度為93％。

由上述結(jié)果可知，血清中thbs2蛋白和afp蛋白可用作正常人與hcc患者判別診斷的潛在標(biāo)志物。

上述結(jié)果匯總于表2，展示了thbs2蛋白、afp蛋白及其聯(lián)合應(yīng)用用于肝細(xì)胞癌患者與正常人鑒別診斷的效果。

表2thbs2蛋白和afp蛋白判別診斷正常人和肝細(xì)胞癌患者效果比較(thbs2或thbs2與afp聯(lián)合使用效果優(yōu)于afp)

五、thbs2蛋白和sparc蛋白在檢測hcc患者及afp陰性hcc患者中的應(yīng)用

對上述一的血清樣本中的sparc蛋白水平進(jìn)行elisa檢測，所用試劑盒為r&dsystems公司sparcelisa檢測試劑盒(貨號：dsp00)，詳細(xì)步驟參照檢測試劑盒說明書。

正常組sparc蛋白的血清濃度72.77±51.79ng/ml，hcc患者組319.00±192.66ng/ml，afp陰性hcc患者組為308.62±196.04ng/ml。正常組thbs2蛋白的濃度為13.85±6.34ng/ml，hcc患者組為45.81±30.40ng/ml，afp陰性hcc患者為36.74±20.94ng/ml。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(mann-whitneytest)，發(fā)現(xiàn)血清thbs2蛋白和sparc蛋白濃度在正常組和hcc患者組以及正常組和afp陰性患者組均有顯著性差異(p<0.0001)。

共同判斷thbs2蛋白和sparc蛋白的標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)二元logistic回歸計(jì)算結(jié)果，區(qū)分hcc與正常組具體計(jì)算公式為：p＝1/(1+e^-(-5.959+0.^174*thbs2+0.^019*sparc))，當(dāng)p大于等于0.775時(shí)，判斷為hcc患者；區(qū)分afp陰性hcc患者和正常組的計(jì)算公式為p＝1/(1+e^-(-6.122+0.^174*thbs2+0.^016*sparc))，當(dāng)p大于等于0.285時(shí)，判斷為hcc。

用spss16.0軟件對正常人(n)和肝細(xì)胞癌患者(hcc)、正常人和afp陰性的肝細(xì)胞癌進(jìn)行thbs2與sparc聯(lián)合使用診斷hcc的roc曲線分析。以正常組為對照組，hcc患者組為疾病組，血清thbs2蛋白與sparc蛋白聯(lián)合使用判別診斷hcc患者的曲線下面積auc＝0.97(圖5a)，靈敏度為88％、特異度為100％；以正常組為對照組，afp陰性的hcc患者組為疾病組，血清thbs2蛋白與sparc蛋白聯(lián)合使用判別診斷hcc患者的曲線下面積auc＝0.95(圖5b)，靈敏度為91％、特異度為93％；

由上述結(jié)果可知，血清中thbs2蛋白和sparc蛋白可用作正常人與hcc患者以及正常人與afp陰性的hcc患者判別診斷的潛在標(biāo)志物。

上述結(jié)果匯總于表3和表4，展示了thbs2蛋白、sparc蛋白及其聯(lián)合應(yīng)用用于肝細(xì)胞癌患者與正常人以及afp陰性的肝癌患者于正常人的鑒別診斷的效果。

表3thbs2蛋白和sparc蛋白判別診斷正常人和肝細(xì)胞癌患者效果比較(thbs2與sparc聯(lián)合使用效果優(yōu)于各自單獨(dú)診斷)

表4thbs2蛋白和sparc蛋白判別診斷正常人和afp陰性的肝細(xì)胞癌患者效果比較(thbs2與sparc聯(lián)合使用效果優(yōu)于各自單獨(dú)診斷)

上述實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行具體描述，并不用于限制本發(fā)明。在不脫離本發(fā)明原理的前提下，對本發(fā)明的修飾、改動(dòng)均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

序列表

<110>北京蛋白質(zhì)組研究中心中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所

<120>thbs2蛋白檢測物在制備肝細(xì)胞癌診斷試劑盒中的應(yīng)用

<160>1

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>1172

<212>prt

<213>1

<400>1

metvaltrpargleuvalleuleualaleutrpvaltrpproserthr

151015

glnalaglyhisglnasplysaspthrthrpheaspleupheserile

202530

serasnileasnarglysthrileglyalalysglnpheargglypro

354045

aspproglyvalproalatyrargphevalargpheasptyrilepro

505560

provalasnalaaspaspleuserlysilethrlysilemetarggln

65707580

lysgluglyphepheleuthralaglnleulysglnaspglylysser

859095

argglythrleuleualaleugluglyproglyleuserglnarggln

100105110

phegluilevalserasnglyproalaaspthrleuaspleuthrtyr

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